腹膜透析液生物相容性与腹膜间皮细胞

腹膜间皮细胞是腹腔最大的细胞群落 ,有着十分重要的生理功能。腹膜透析液具有生物不相容性 ,它通过pH值、缓冲剂、渗透压、葡萄糖及其降解产物等对间皮细胞及腹膜产生损害 ,从而影响腹腔局部防御功能并导致腹膜结构的改变。了解各种腹膜透析液生物不相容性的机理 ,对于改善透析液、保护长期透析时间皮细胞及腹膜功能具有十分重要的意义。     

提高腹膜透析液生物相容性的研究进展

经过十多年的研究,腹膜透析液的生物相容性已经得到了改善,但对于新型腹膜透析液长期使用的有效性及安全性临床研究仍然不多.研究者们除了从渗透剂、缓冲剂、电解质、添加剂等方面研究改善透析液的生物相容性外,另外还有部分研究者通过病毒质粒的转染作用从基因方面去防止或减缓腹膜纤维化的发生,使患者能够延长PD治疗的时间.     

腹膜透析液诱导结缔组织生长因子在大鼠腹膜间皮细胞表达

目的 研究应用不同腹膜透析液对大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)结缔组织生长因子(CTGF)合成的影响。方法 分离培养的RPMC分为6组，分别以不同腹膜透析液[1.5% Dextrose(低糖组)、2.5% Dextrose(中糖组)、4.25% Dextrose(高糖组)、7.5% Icodextrin(糊精组) ]进行刺激培养，而无血清DMEM为阴性对照(对照组)， TGF-β1(2.5 ng/ml)为阳性对照(阳性对照组)。刺激培养24 h后，RT-PCR法检测RPMCs的CTGF mRNA、胶原Ⅰ mRNA、α-SMA mRNA表达。Western印迹法检测RPMCs的CTGF、胶原Ⅰ、α-SMA蛋白表达以及培养上清中的CTGF蛋白表达。结果 各组均见CTGF mRNA表达，高糖组、阳性对照组CTGF mRNA 表达水平显著高于中糖组、低糖组及对照组(P < 0.05)；中糖组与糊精组CTGF mRNA 表达亦显著上调(P < 0.05)。各组细胞均检测到CTGF蛋白质表达，为相对分子质量38 000及 25 000的2种亚型，与RT-PCR结果一致。高糖组、阳性对照组CTGF 蛋白表达水平显著高于糊精组、中糖组、低糖组及对照组(P < 0.05)。RPMCs培养上清液中检测出CTGF 38 000亚型的表达，其表达强弱趋势与CTGF在细胞中表达一致。高糖组、阳性对照组胶原I mRNA、蛋白质的表达水平显著高于对照组(P < 0.05)，其余各组间无显著性差异。各组α-SMA mRNA、蛋白质表达未见显著性差异(P > 0.05)。结论 正常培养的RPMCs表达低水平的CTGF。腹膜透析液、尤其是高浓度葡萄糖透析液，能明显上调CTGF表达的水平，这可能是导致长期腹膜透析过程中腹膜结构改变的机制之一。糊精腹膜透析液生物相容性可能优于高浓度葡萄糖透析液。     

腹膜透析液生物相容性的研究进展

腹膜透析液生物相容性的优劣是关系到腹膜的防御功能、使用寿命的重要课题。目前研究焦点集中在腹透液不同的pH值、缓冲剂、渗透剂和渗透压、生产工艺等对透析液品质的影响。本文将近年的主要研究方法、内容及结果进行综述。     

腹膜透析液生物相容性的评价方法

腹膜透析液生物相容性的研究得到广泛重视 ,目前研究主要从体外、体内、透出液生物相容性标志物三方面进行 ,包括腹透液所致单个核细胞、中性粒细胞、腹膜间皮细胞等功能和活性改变及透出液中CA12 5、透明质酸的水平等指标 ,本文从细胞、分子、基因三个水平对腹膜透析液生物相容性的评价方法进行综述     

腹膜透析液对腹膜间皮细胞凋亡与增殖的影响

目的　探讨PD 2腹膜透析液 (腹透液 )在体内对腹膜间皮细胞凋亡和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法　在正常二级SD大鼠上建立腹膜透析模型 ,用不同浓度的PD 2腹透液灌注腹腔 ,二次 /天 ,2 0ml/次 ,生理盐水作对照。透析第 8周后杀检 ,取腹膜用LSABkit和TUNELkit作免疫 凋亡双重染色。结果　腹透液显著诱导腹膜间皮细胞凋亡 ,以高渗糖腹透液尤为显著 ,不同浓度腹透液对PCNA影响则不同 ,透析液诱导的凋亡与PCNA表达之间无相关性 ,但与腹透液浓度正相关 ,PCNA表达则与腹透液浓度负相关。结论　腹透液可诱导腹膜间皮细胞凋亡 ,并影响PCNA表达 ,其作用与腹透液浓度不同而异。     

常规腹膜透析液加小剂量碳酸氢钠提高透析液生物相容性

目前临床常规使用的腹膜透析液(L-PDS)含葡萄糖和高浓度的乳酸,对腹腔防御细胞和外周血白细胞有负性影响。对此一些学者提出常规L-PDS中加小剂量碳酸氢钠可以减轻腹透液对细胞的毒性作用,但增加碳酸氢钠后腹透液的pH、稳定性、以及碳酸钙沉淀问题目前并不完全清楚。因此我们探讨L-PDS加不同剂量的碳酸氢钠后,腹透液pH、渗透浓度、钙沉淀、以及对外周血中性粒细胞凋亡的影响。     

腹膜透析液生物相容性的评价方法

腹膜透析液生物相容性的研究得到广泛重视，目前研究主要从体外、体内、透出液生物相容性标志物三方面进行，包括腹透液所致单个核细胞、中性粒细胞、腹膜间皮细胞等功能和活性改变及透出液中CA125、透明质酸的水平等指标，本文从细胞、分子、基因三个水平对腹膜透析液生物相容性的评价方法进行综述。     

氨基酸腹膜透析液与传统腹膜透析液对腹膜间皮细胞功能的影响

目的通过体外实验对照观察了含氨基酸腹膜透析液(1.1%Nutrineal)和传统葡萄糖腹膜透析液(1.5%Dianeal)对正常人腹膜间皮细胞(HPMC)的生物相容性及功能的影响。方法用1.1%Nutrineal和1.5%Dianeal进行腹膜透析,4h后引流。观察两种不同透出液及不同时间对体外培养的HPMC功能的影响。采用四甲基偶氮多胍(MTT)和细胞直接计数法测定HPMC增殖程度,以测定乳酸脱氢酶(LDH)水平显示细胞损伤程度。采用ELISA法测定白细胞介素6(IL-6)水平。结果与5%葡萄糖对照组相比,1.5%Dianeal透出液可显著降低HPMC细胞增殖能力、细胞总蛋白合成、IL-6分泌水平和细胞黏附能力(P<0.001、P<0.001、P<0.0001、P<0.0001),而细胞培养液上清中的LDH分泌水平明显提高(P<0.001)。1.1%Nutrineal透出液可降低HPMC细胞增殖能力(P<0.001)和明显增加IL-6的分泌水平(P<0.0001),但对HPMC的LDH分泌水平,细胞黏附能力,蛋白总合成量无明显影响。结论与传统的葡萄糖腹膜透析液相比,氨基酸腹膜透析液能更好地维持HPMC在细胞存活能力、细胞黏附功能及蛋白合成等方面的功能。氨基酸腹膜透析液可诱导HPMC分泌IL-6水平显著升高,其机制有待进一步探讨。     

川芎嗪抗腹膜间皮细胞损伤的实验研究

目的：观察含川芎嗪腹透液体外对腹膜间皮细胞活力,细胞增殖的影响。方法：分离,培养大鼠腹膜间皮细胞,用细胞计数法,四唑氨蓝（MTT）法,乳酸脱氢酶（LDH）法检测腹膜间皮细胞活力,细胞增殖能力。结果：培养的腹膜间皮细胞暴露于常规使用的4．25％高糖透析液30min后,间皮细胞数量显降低,MTT法示OD值显低于正常对照组,LDH释放增加,提示间皮细胞活力降低,增殖受到显抑制,加入低剂量川芎嗪后,间皮细胞数,MTTOD值较之单纯高糖透析液组均显增高,LDH显降低,但随着剂量的加大,川芎嗪的上述作用减低乃至消失,结论：适当剂量的川芎嗪能对抗常规腹透液引起的间皮细胞抑制和损伤,从而具有保护间皮细胞的作用。     

生脉液拮抗乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞的损伤

目的研究生脉液对乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)致腹膜间皮细胞增殖及损伤作用的影响.方法采用胰蛋白酶-EDTA消化法,从人腹膜组织中分离间皮细胞,并建立体外人腹膜间皮细胞(HPMC)培养模型.以四甲基偶氮多胍(MTT)法测定HPMC增殖程度,采用自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平示细胞损伤程度.以不同内容的培养液及不同时间进行观察,分为单纯培养液对照、不同浓度葡萄糖L-PDS、不同浓度生脉液加L-PDS.结果与单纯培养液对照组相比,L-PDS致HPMC培养液中LDH水平明显增高,并显著降低MTT渗入量(P＜0.01);而3种浓度(1.5%、2.5%和4.25%)葡萄糖腹膜透析液(腹透液)间差异无显著性意义.在与2.5%L-PDS作用45 min后,1 mg/ml浓度的生脉液能显著降低LDH水平[(7.21±1.32)U/L对(15.87±4.16)U/L,P＜0.05],提高MTI渗入量(吸光度A值0.201±0.053对0.123±0.036,P＜0.01);而100μg/ml浓度生脉液只能显著降低LDH水平[(8.16±2.05)U/L对(15.87±4.16)U/L,P＜0.001],对MTT渗入量无明显改变.上述作用240 min后,两种浓度生脉液引起LDH水平及MTI渗入量的变化差异均无显著性意义.结论生脉液能拮抗乳酸盐腹透液对HPMC的损伤及抑制作用.     

采用蛋白质组分析高浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞的影响

目的研究腹透液中葡萄糖对人腹膜间皮细胞（HPMCs）分泌蛋白质影响，并采用蛋白质组学方法分析其对腹膜纤维化和腹膜功能的影响。方法采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离HPMCs，第3代用于实验。实验分组：对照组（F12培养基）和高糖组（F12培养基＋4％葡萄糖），分别观察24h和48h。经二维凝胶电泳（2-DE）分离人腹膜间皮细胞总蛋白，每组重复3次，PDQuest图象分析软件比较对照组和高糖组平均凝胶，求差异蛋白质。采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定部分差异蛋白质。结果获得12块经2-DE分离的分离胶，每组3块。通过PDQuest图象分析软件发现24h高糖组与对照组比较有27种蛋白质表达有差异（P〈0．05）；48h高糖组与对照组比较有50种蛋白质的表达有差异（P〈0．05），表达上调有22个蛋白质斑点，表达下调有55个蛋白质斑点；对其中23个差异蛋白质斑点进行了肽质指纹图分析，鉴定出23种蛋白质，其中有2个点为同一蛋白质。这些蛋白质涉及到高糖对HPMCs的细胞骨架、糖代谢、黏附、细胞因子、抗氧化剂、表面活性剂等物质的调节。结论高糖导致腹膜纤维化是多因素、多途径，要防止腹膜透析腹膜纤维化保护腹膜透析效能．最好避免过多使用高糖透析液。     

神经酰胺在葡萄糖腹膜透析液诱导的腹膜间皮细胞凋亡中的作用

目的 观察葡萄糖腹膜透析液(PDS)对人腹膜间皮细胞(PMC)凋亡的影响和细胞内神经酰胺在PMC凋亡中的作用,初步探讨神经酰胺信号通路是否参与高浓度PDS诱导的PMC凋亡.方法 PMC分别在正常对照、1.5％ PDS、4.25％ PDS条件下培养,以4.25％甘露醇作为高渗对照.高压液相色谱串联质谱法(LC-MS-MS)检测细胞内神经酰胺的变化.Annexin - FITC- PI双染流式细胞术检测细胞凋亡.Western印迹法检测bax、p53、bcl-2蛋白表达.结果 (1)PDS可上调PMC细胞内神经酰胺表达,正常对照组、高渗对照组对细胞内神经酰胺均无明显影响.酸性鞘磷脂酶抑制剂地昔帕明可显著抑制高浓度PDS诱导的神经酰胺生成[(56.08±12.24)μg/L比(91.25±15.89) μg/L,P＜0.01].(2)与1.5％ PDS组相比,4.25％PDS可显著诱导PMC细胞凋亡[(26.65±6.21)％比(4.04±1.86)％,P＜0.01],上调bax、p53蛋白表达(P＜0.01),下调bcl-2蛋白表达(P＜0.05).地昔帕明可明显抑制高浓度PDS诱导的PMC细胞凋亡,bax、p53上调以及bcl-2下调(均P＜0.05),外源性神经酰胺则可明显逆转地昔帕明的此类作用(P＜0.05).正常对照组、高渗对照组对细胞内神经酰胺表达及细胞凋亡均无明显影响.结论 细胞内神经酰胺增加可能参与了高浓度PDS诱导的PMC凋亡.     

线粒体呼吸链在高糖腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞层高通透性中的作用

目的 研究线粒体呼吸链在高糖腹膜透析液（PDS）诱导人腹膜间皮细胞（HPMC）通透性升高中的作用,探讨高糖PDS导致腹膜高通透状态的分子机制。 方法 体外培养HPMC,用不同浓度葡萄糖PDS加或不加抗氧化剂谷胱甘肽,培养24 h。采用跨细胞电阻（TER）技术测定HPMC通透性的变化;免疫荧光及Western印迹观察claudin-1的表达;线粒体活性氧（ROS）荧光探针检测细胞线粒体ROS的生成;线粒体呼吸链酶复合物活性检测试剂盒检测复合物Ⅰ~Ⅳ的活性变化。 结果 各组细胞的TER值均随时间的延长而下降,4.25% PDS组TER值24 h内从（34.7±1.5） Ω&#8226;cm2下降至（4.3±1.4） Ω&#8226;cm2;高糖PDS使细胞间连接蛋白claudin-1的表达显著下调,葡萄糖浓度越高作用越明显;同时高糖PDS导致线粒体呼吸链酶复合物Ⅲ活性较对照组下降89.2%（P < 0.01）,进而使线粒体ROS产生增加。谷胱甘肽可逆转上述指标的变化。 结论 高浓度葡萄糖PDS通过抑制线粒体呼吸链酶复合物Ⅲ的活性,引起HPMC的氧化损伤,进而导致腹膜间皮细胞层的高通透性增高。     

川芎嗪对慢性腹膜透析大鼠腹膜功能及间皮细胞形态的影响

目的 探讨不同剂量的川芎嗪对高糖透析液作用下慢性大鼠腹膜透析（腹透）模型腹膜间皮细胞的形态和功能的影响及它们之间的关系。方法 ４０只ＳＤ大鼠随机分为４．２５％腹透液（ＨＧ组）、４．２５％腹透液＋４０ｍｇ／Ｌ川芎嗪（ＨＧＬ组）、４．２５％腹透液＋１６０ｍｇ／Ｌ川芎嗪（ＨＧＨ组）、对照组。除对照组外,余３组每天分别腹腔内注入２０ｍｌ含不同剂量川芎嗪的４．２５％透析液［０（ＨＧ）、４０ｍｇ／Ｌ（ＨＧＬ）     

腹膜透析液的生物相容性研究进展

腹膜透析（PD）因其具有操作简便、价格低廉、能更好保护残肾功能、血流动力学相对稳定等优点,已成为重要的肾脏替代治疗模式。PD患者最初几年的生存率至少等同甚至高于血液透析（HD）患者,但随着治疗时间的延长,几乎均不可避免地出现PD能力的下降,不得不转为HD或肾移植。     

间皮细胞在CAPD患者宿主腹膜防御中的作用

ＣＡＰＤ诱发腹膜炎是临床常见并发症，间皮细胞作为构成腹膜的主要细胞群体，在腹膜炎症时直接与细胞接触。本文针对间皮细胞参与腹膜炎症的活化、直接抗菌防御及通过抗原提呈参与腹膜抗感染免疫等功能作一综述。阐明间皮细胞在ＣＡＰＤ患者宿主腹膜防御中的作用。     

腹膜透析液渗透剂的研究进展

临床常用的葡萄糖腹透液中的高糖、高渗透压、低pH值以及葡萄糖降解产物等生物不相容性因素对机体有一定不良影响.改善腹透液的生物相容性,研发新型腹透液渗透剂是目前研究的热点之一.氨基酸、多聚糖、多肽等物质已被作为腹透液的渗透剂应用.本文就近年研发的新型腹透液渗透剂进行综述.     

高糖对人腹膜间皮细胞整合素表达的影响

目的:研究高糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)整合素表达的影响,探讨腹膜透析中腹膜间皮细胞层完整性损伤的机制.方法:采用人腹膜间皮细胞株HMrSV5为研究对象.观察高浓度葡萄糖对HPMC细胞膜表面整合素表达及基质黏附性的改变,并采用免疫荧光技术观察高糖对细胞Actin微丝骨架的影响.结果:(1)高糖致细胞脱落呈时间依赖效应;(2)高糖引起细胞膜上β1整合素的表达明显减低;(3)高糖使Actin微丝骨架解体;(4)高渗透压组未见上述效应.结论:高糖使β1整合素表达下降,微丝骨架解体,从而损害细胞-基质间黏附的形成,造成腹膜间皮完整性的损害.