血管内皮细胞生长因子在血管瘤中的表达

近年来随着肿瘤血管形成研究的深人,生长因子在血管形成中的作用受到重视。本研究旨在通过免疫组织化学方法测定血管内皮细胞生长因子（VEGF）在血管瘤中的表达情况,探讨其与血管瘤增生及退化的关系。材料与方法一、标本选择我院1995年9月～1998年5月经手术切除的先天性皮肤血管病变134例,男44例,女90例,手术年龄22d～12a,组织标本常规10％福尔马林固定,石蜡包埋,spin连续切片。光镜下Mulliken标准「‘’进行分类,其中血管瘤101例,血管畸形33例,并采用“0～皿”4级法［’j将其中的血管瘤进行增生级别的判定。同时采用含正常血…     

血管内皮生长因子mRNA在血管瘤中的表达

目的 检测不同时期血管瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平,探讨VEGF对血管瘤生长的影响,研究血管瘤增生退化的机制.方法 取不同时期手术切除血管瘤组织及其临近组织标本.其中增生期20例,退化期12例,正常皮肤组织8例作为对照.根据美国国立生物技术信息中心(NCBI)基因库中VEGF的cDNA序列设计引物,以β-actin作为内参照,应用半定量RT-PCR方法 测定血管瘤组织中VEGF mRNA表达水平.应用SPSS 12.0软件进行统计学分析.结果 琼脂糖凝胶电泳显示增生期血管瘤、退化期血管瘤、正常组织中VEGF mRNA电泳条带亮度依次降低;组织中表达的相对量分别为增生期血管瘤1.442 8±0.084 6、退化期血管瘤0.956 9±0.061 7、正常对照组皮肤组织0.487 2±0.035 6,两两比较均有显著性差异(Pa<0.05).结论 VEGF在增生期血管瘤组织中高水平表达,在退化期中表达减弱,在正常组织中几乎无表达,提示VEGF参与调控血管瘤的发展过程,可作为区分增生期与退化期的标志之一.     

血管内皮生长因子在血管瘤及血管畸形中的表达

血管瘤是一种良性血管增生性疾病 ,是婴儿中最常见的肿瘤。血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ)是一种多肽类血管形成因子 ,有促进内皮细胞增殖的作用。本文采用免疫组织化学方法 ,测定ＶＥＧＦ在血管瘤和血管畸形中的表达 ,探讨ＶＥＧＦ与血管瘤及血管畸形的关系。材料和方法一、标本的选择及分组92例标本选自我科近 6年经手术切除的先天性皮肤血管病变患儿。女5 2例 ,男 4 0例 ,年龄 4 0ｄ～ 13岁。组织标本常规石蜡包埋 ,5 μｍ切片 ,ＨＥ染色。同时采用含有正常血管的皮肤标本10例作对照。按照Ｍｕｌｌｉｋｅｎ标准[1] ,将标本分为血管瘤 72例…     

血管内皮生长因子在儿童血管瘤与血管畸形中的表达研究

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)在儿童血管瘤与血管畸形中的表达;为临床辨别血管瘤及血管畸形、指导血管瘤的治疗及检验治疗效果提供客观有效的指标。方法采用免疫组化S-P法检测VEGF在血管瘤不同分期、血管畸形、正常血管中的表达情况。结果VEGF在血管瘤中有高表达;在增殖期的表达率高于消退早期和消退晚期(P<0.05);患儿年龄小于等于6岁组的表达率高于年龄大于6岁组(P<0.05)。在血管畸形及正常血管中均未见阳性表达。结论VEGF在血管瘤中有高表达,且与其分期及年龄明显有关。     

血管内皮生长因子在小儿增生性血管瘤和邻近组织中的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子在小儿增生性血管瘤及其邻近组织中的表达水平和分布规律,进一步了解血管瘤的发生机制。方法取新鲜增生性血管瘤和其邻近组织标本,以同年龄非血管瘤病人同类组织作对照,提取VEGFmRNA逆转录为cDNA,进行PCR及荧光定量PCR分析。结果血管瘤组织的VEGFPCR阳性率为9/9,邻近组织为8/9,对照组为1/9,卡方检验显示血管瘤及其邻近组织与对照组有显著差异(P<0.01);荧光定量PCR显示血管瘤和其邻近组织VEGFmRNA表达量无显著差异,而两者较非血管瘤病人同类组织VEGFmRNA表达水平均有显著升高(P<0.01)。结论VEGF可以促进血管内皮细胞增生和分化成血管瘤内皮细胞,在血管瘤的发生和发展中起重要作用。     

表皮生长因子在血管瘤和血管畸形中的表达

目的 了解表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)与血管瘤及血管畸形的关系.方法 标本选自1998年3月至2005年10月经手术切除的先天性皮肤血管病变92例患儿,女52例,男40例,年龄为40 d至13岁,平均年龄为1.6岁.组织标本取出后立即浸入10%的中性甲醛溶液中固定,常规石蜡包埋,5μm连续切片,HE染色,同时采用含有正常血管的皮肤标本10例作为对照.采用免疫组织化学方法,对72例血管瘤和20例血管畸形组织切片进行EGF表达的测定.结果 EGF在血管瘤组织中高表达,而在血管畸形组织中低表达(P<0.01).在血管瘤增殖期、退化早期和退化完成期三者之间,EGF的表达存在着差异.在血管瘤中EGF的表达与其内皮细胞的增生程度有关.内皮细胞增生越强,EGF的表达越高(P<0.05).结论 提示EGF与血管瘤的增生及退化有关,而与血管畸形无明显关系.     

表皮生长因子在血管瘤和血管畸形中的表达

目的 了解表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)与血管瘤及血管畸形的关系.方法 标本选自1998年3月至2005年10月经手术切除的先天性皮肤血管病变92例患儿,女52例,男40例,年龄为40 d至13岁,平均年龄为1.6岁.组织标本取出后立即浸入10%的中性甲醛溶液中固定,常规石蜡包埋,5μm连续切片,HE染色,同时采用含有正常血管的皮肤标本10例作为对照.采用免疫组织化学方法,对72例血管瘤和20例血管畸形组织切片进行EGF表达的测定.结果 EGF在血管瘤组织中高表达,而在血管畸形组织中低表达(P<0.01).在血管瘤增殖期、退化早期和退化完成期三者之间,EGF的表达存在着差异.在血管瘤中EGF的表达与其内皮细胞的增生程度有关.内皮细胞增生越强,EGF的表达越高(P<0.05).结论 提示EGF与血管瘤的增生及退化有关,而与血管畸形无明显关系.     

表皮生长因子在血管瘤和血管畸形中的表达

目的 了解表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)与血管瘤及血管畸形的关系.方法 标本选自1998年3月至2005年10月经手术切除的先天性皮肤血管病变92例患儿,女52例,男40例,年龄为40 d至13岁,平均年龄为1.6岁.组织标本取出后立即浸入10%的中性甲醛溶液中固定,常规石蜡包埋,5μm连续切片,HE染色,同时采用含有正常血管的皮肤标本10例作为对照.采用免疫组织化学方法,对72例血管瘤和20例血管畸形组织切片进行EGF表达的测定.结果 EGF在血管瘤组织中高表达,而在血管畸形组织中低表达(P<0.01).在血管瘤增殖期、退化早期和退化完成期三者之间,EGF的表达存在着差异.在血管瘤中EGF的表达与其内皮细胞的增生程度有关.内皮细胞增生越强,EGF的表达越高(P<0.05).结论 提示EGF与血管瘤的增生及退化有关,而与血管畸形无明显关系.     

血管内皮生长因子在增生性血管瘤组织和血清中表达的意义

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)在增生性血管瘤组织、邻近组织和外周血中的表达水平和分布规律 ,进一步了解血管瘤的发生机制。方法　取增生性血管瘤患儿外周血清和术中瘤组织及其邻近组织标本 ,以相同年龄非相关患儿作对照 ,用酶联免疫法测定血清VEGF水平 ;对肿瘤组织及其相邻组织行cDNA合成和PCR扩增 ,提取VEGFmRNA ,并进行定量分析。结果　血管瘤患儿血清VEGF水平明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;血管瘤组织的VEGFmRNA电泳阳性率为 10 0 % (9/ 9) ,邻近组织为 88.9% (8/ 9) ,对照组为 11.1% (1/9) ,经检验血管瘤及其邻近组织与对照组有显著性差异 (P均 <0 .0 1)。荧光定量测定mRNA在血管瘤及其邻近组织无显著差异 (P <0 .0 5 ) ,而两者与对照组均有显著差异 (P均 <0 .0 1)。结论　增生性血管瘤组织及患儿外周血VEGF明显增高 ,对血管内皮细胞增生和分化成血管瘤细胞有促进作用 ,检测血清VEGF水平有助于血管瘤分型和增生情况的监测     

血管内皮细胞定量测定在小儿血管畸形和血管瘤细胞增殖凋亡中的意义

目的探讨小儿血管畸形和血管瘤增殖凋亡及血管内皮细胞数的区别。方法共收集真性血管瘤标本37例,根据Mulliken标准分成血管瘤增生组和退化组;血管畸形14例,将标本分成血管瘤增生组和退化组。14例血管畸形标本制成单细胞悬液,加入DNA-PREPTMMLPR液和PI液后,流式细胞仪分析细胞周期,得各期细胞数S%,G2/M%及增殖指数(PI);单细胞悬液标记CD34-FITC/CD31-PE/7-AAD试剂,测定血管内皮细胞数;用AnnxinV和7-AAD双染测定早期凋亡细胞数。结果血管瘤增生组和退化组S%的细胞分别是5.99±1.85、1.92±0.65;G2/M%的细胞分别是7.46±1.82、5.94±1.63;PI分别是13.49±2.08、7.85±1.78,增生期的PI明显高于退化期(P<0.01);AV %分别是9.84±3.05、16.18±4.89。血管畸形的PI、S%分别是8.39±0.89、2.17±1.18,均比增生组低(P<0.05),与退化组比较,差异无统计学意义,G2/M%为6.23±1.64,与血管瘤的增生退化组比较均无明显差异,血管畸形AV %为12.91±4.1,高于血管瘤增生组(P<0.05),与退化组比较差异无统计学意义,细胞增生组和退化组的CD34 %各是0.915±0.33、0.36±0.12,血管畸形CD34 %为0.52±0.14,增生组较其他两组高(P<0.05),而血管畸形与退化组间差异无统计学意义。CD31 %增生组、退化组、血管畸形各是7.77±2.48、5.29±1.72、5.775±1.52,三者间差异无明显统计学意义(P>0.05)。结论流式细胞术测定PI,S%,AV %及CD34 %可以区别增生期血管瘤和血管畸形,对指导临床治疗有一定意义。     

反义Survivin对血管瘤内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨脂质体转染Survivin反义寡核苷酸(ASODN)对体外培养的增生期血管瘤内皮细胞增殖、凋亡的影响.方法 人工合成Survivin ASODN,通过脂质体转染到体外培养的增生期血管瘤内皮细胞,光镜和倒置相差显微镜观察转染后细胞形态变化;用四氮唑盐(MTT)法观察转染后48 h不同浓度Survivin ASODN对细胞生长抑制的影响;RT-PCR、Western-blot及免疫组化法检测转染后内皮细胞Survivin mRNA水平、蛋白水平表达及Caspase-3蛋白表达.结果 不同浓度的Survivin ASODN作用后内皮细胞多数变圆、变小、脱落,胞膜皱褶、卷曲,细胞核固缩、碎裂,核被染成深蓝色或蓝黑色,以600 nmol/L作用72 h改变最明显.细胞生长受到明显抑制,600 nmol/LSurvivin ASODN时细胞生长抑制率最高,可达70.5%.与对照组相比,实验组Survivin mRNA、蛋白水平表达均明显下调,Caspase-3蛋白表达明显上调.结论 在体外RNA干扰靶向抑制Survivin基因可以显著抑制增生期血管瘤内皮细胞增殖,促进细胞凋亡;Survivin可能是控制血管瘤内皮细胞增殖或凋亡的关键基因之一.

Abstract：

Objective To evaluate the effects of survivin on cell proliferation and apoptosis in proliferative hemangioma endothelial cells. Methods Hemangioma endothelial cells were cultured in vitro and transfected with Survivin antisense oligonucleotides. The morphological changes were assessed with light microscopy and inverted phase contrast microscopy and electron microscopy. MTT assay was carried out to determine cell proliferation in proliferative hemangioma endothelial cells treated with antisense compounds. By using RT-PCR and Western blot, the expression levels of survivin mRNA and proteins were quantified. Active caspase-3 was evaluated by immunohistochemistry. Results Some morphological changes (e. g. round endothelial cells, reduced cell volume, folded cell membrane and condensed nuclei ) were revealed after transfection with increasing concentration of survivin ASODN, and these changes were most significant at the dose of 600nM at 72 hours. Endothelial cell growth was suppressed at the concentration of 600nmol/L Survivin ASODN. Survivin mRNA, protein were down-regulated significantly and Caspase-3 was up-regulated significantly in the experimental groups. Conclusions Down-regulation of survivin expression induced by the antisense compounds reduces cell growth potential, promotes apoptosis in proliferative hemangioma endothelial cells. Survivin protein is a key molecule associated with proliferation and apoptosis,and antisense oligonucleotides targeting survivin could be used as a potential therapy of proliferative hemangioma.     

雌激素和血管内皮细胞生长因子促进血管瘤增殖的体外实验研究

目的：研究雌二醇(E2)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在促进血管瘤血管内皮细胞(HVEC)增殖中的作用和相互关系，以及4羟基他莫昔芬(4OH—TAM)对该促进作用的影响。方法：取2例雌激素受体阳性的皮肤增生期草莓状血管瘤标本，采用组织块培养法培养HVEC。HVEC原代及传代培养在M199培养液中进行，传至第三代时改用无雌激素培养液IMEM进行干预实验，实验分5组：组1(无干预，为对照组)、组2(加E2)、组3(加VEGF)、组4(加E2和VEGF)、组5(加E，、VEGF和4OH—TAM)。分别在0、3、6、9d进行细胞计数(CC)和流式细胞仪DNA增殖指数(PI)检测。结果例1在第9d时，组2示HVEC轻微增殖，CC和PI分别为组1的1．38倍和1．61倍；组3示CC及PI明显增加，分别为组2的2．10倍和1．61倍；组4示OC及PI的增加更加显著，分别是组3的1．62倍和1．40倍；组5的OC和PI与组1相仿。例2的实验结果与例1相似。结论：体外实验显示雌激素能够轻微促进HVEC增殖；VEGF可明显促进HVEC增殖；而雌激素和VEGF同时存在时，对HVEC的促增殖作用更加显著，二者存在协同作用；他莫昔芬能抑制这种协同促增殖作用。     

循环内皮细胞和内皮祖细胞与儿童原发性高血压关系的研究进展

近年来,儿童原发性高血压患病率增加迅速.高血压可造成靶器官损害,其中包括心、脑、肾等重要脏器.血管损伤是高血压靶器官损害的核心问题,其机制涉及到肾素-血管紧张素-醛固酮系统的激活、氧化应激反应、血管慢性炎症及内皮细胞功能障碍等.血管内皮细胞损伤可引起血管内皮功能障碍,其本质是内皮损伤和修复之间动态平衡的破坏,是心血管疾病发生发展的始动环节.循环内皮细胞和内皮祖细胞被认为是血管损伤、重塑以及内皮功能障碍的非侵入性标志物.该文通过总结相关文献,阐述原发性高血压患儿血管损伤与内皮细胞损伤之间的关系,深化对儿童原发性高血压的发病机制的认识.     

mTOR/p70S6K信号通路在小儿血管瘤演变中的作用

目的 探讨mTOR/p70S6K信号通路在小儿血管瘤的发生、发展及消退过程中的作用.方法 收集未经其他治疗、单纯手术切除并经病理诊断为血管瘤的标本31例,结合Mulliken分类法与增殖细胞核抗原(PCNA)表达对血管瘤进行分类和分期,免疫组织化学检测并比较增生期血管瘤和消退期血管瘤组织中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p70S6K-a的表达水平.结果 18例增殖期血管瘤mTOR、p70S6K-a的积分光密度分别为6336.47±1655.89,588.72±223.87;13例消退期血管瘤mTOR、p70S6K-a的积分光密度分别为846.22±297.09,3235.64±947.86;血管瘤增殖期p70S6K-a的积分光密度明显低于消退期,差异有统计学意义(P＜0.01).血管瘤增殖期mTOR的积分光密度明显高于消退期,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 小儿血管瘤组织中有mTOR、p70S6K-α表达,mTOR/p70S6K信号通路可能在小儿血管瘤的病理演变中发挥作用.     

Cajal间质细胞与肠套叠关系的探讨

目的 探讨Cajal间质细胞在小儿肠套叠发生、发展中的作用.方法 应用c-kit,NSE免疫组化染色方法,分别检测肠套叠患儿套叠头端和正常对照组肠管神经丛Cajal间质细胞的分布,观察肠间质细胞的数量与分布情况.结果 肠套叠患儿套叠头端Cajal间质细胞的数量较正常对照组明显减少,且分布疏密不一,较紊乱,差异有统计学意...     

内皮祖细胞与慢性肾脏病研究进展

肾间质纤维化基本上是各种进行性肾脏疾病的共同末端通路.肾间质微血管密度的减少在肾间质纤维化中发挥重要作用.内皮祖细胞能诱导分化为成熟血管内皮细胞,参与并促进了组织血管新生和血管形成,为慢性肾脏病的治疗提供了新的且极有临床应用潜力的治疗途径.     

婴幼儿血管瘤内皮细胞的体外培养及冻存

目的 研究婴幼儿血管瘤内皮细胞的体外分离培养及进行冷冻保存,探讨建立血管瘤内皮细胞库的可能性.方法 应用胶原酶消化结合免疫磁珠法分离获得血管瘤内皮细胞,以含20%胎牛血清的EGM-2培养液进行培养.vWF免疫荧光染色鉴定所培养内皮细胞及其纯度.按慢冻速融原则对血管瘤细胞进行液氮冻存、复苏,比较未冻存和复苏血管瘤内皮细胞的活力、形态、增殖能力、低密度脂蛋白摄取能力以及细胞凋亡率.结果 CD31免疫磁珠阳性分选获得高纯度的原代血管瘤内皮细胞,复苏后细胞存活率约为未冻存细胞的94.8%,二组细胞形态学无明显差异,生长曲线相似,增殖能力差异无统计学意义,冻存内皮细胞的凋亡率较未冻存细胞高,但无统计学意义.结论 胶原酶消化结合免疫磁珠法能获得高纯度的血管瘤内皮细胞,冻存的血管瘤内皮细胞复苏后仍保持较高的活力及体外增殖能力,为血管瘤的后续实验研究提供了稳定的细胞来源.     

内皮祖细胞与慢性肾脏病研究进展

肾间质纤维化基本上是各种进行性肾脏疾病的共同末端通路.肾间质微血管密度的减少在肾间质纤维化中发挥重要作用.内皮祖细胞能诱导分化为成熟血管内皮细胞,参与并促进了组织血管新生和血管形成,为慢性肾脏病的治疗提供了新的且极有临床应用潜力的治疗途径.     

α-干扰素对血管瘤血管内皮细胞周期、凋亡的影响

目的 观察α-干扰素对体外培养血管瘤内皮细胞周期、凋亡的影响,探讨干扰素治疗血管瘤的机制.方法 用组织块法培养增生期血管瘤内皮细胞,分别用1×104U,1×105U,1×106Uα-干扰素干预,对照组不加任何药物,继续培养24h后,用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡变化.结果 α-干扰素作用24 h后血管瘤内皮细胞G1期前出现二倍体凋亡峰;1×104U、1×105U、1×106Uα-干扰素组G1期百分率分别为(63.68±0.66)%、(72.97±1.56)%、(63.27±5.64)%,对照组为(58.75±0.32)%,与对照组比较,P＜0.05;1×104U、1×105U、1×106Uα-干扰素组S期百分率分别为(32.99±2.01)%、(25.02±1.31)%、(37.93±5.31)%,对照组为(26.46±1.94)%,与对照组比较,P＞0.05;1×104U、1×105U、1×106Uα-干扰素组G2/M期百分率分别为(0.01±0.05)%、(2.43±0.27)%、(3.99±1.27)%,其百分率随α-干扰素浓度升高而增高.细胞凋亡百分率随α-干扰素浓度增加而增高,1×104U、1×105U、1×106Uα-干扰素组凋亡百分率分别为(11.89±0.56)%、(18.88±3.04)%、(31.92±1.92)%,对照组凋亡率为(3.25±0.23)%,与对照组比较,P＜0.01.结论 α-干扰素能导致血管瘤血管内皮细胞G1、G2期阻滞和凋亡,细胞凋亡率与药物浓度存在剂量依赖关系.干扰素可能通过血管内皮细胞G1、G2期阻滞,抑制血管瘤血管内皮细胞的增殖、诱导血管内皮细胞凋亡而达到治疗血管瘤的作用.