同步检测HCV RNA与HGV RNA的RT-PCR技术的建立与应用

我们建立了一种同步检测ＨＣＶＲＮＡ与ＨＧＶＲＮＡ的逆转录一桌式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），适用于临床诊断与分子流行病学调查。一、材料与方法１．主要试剂：ＴａｇＤＮＡ聚合酶由华美公司提供，ｄＮＴＰｓ、ＡＭＶ-ＲＴ、ＲＮａ－ｓｉｎ均为Ｐｒｏｍｅｇｓ公司产品。２．引物台成：分别在ＨＣＶ与ＨＧＶＳＪ端非编码区（５'ＵＴＲ）设计两对套式引物，委托上海Ｓａｎｇｏｎ生物公司合成。３．同步检测ＨＣＶＲＮＡ与ＨＧＶＲＮＡ的ＲＴ一ＰＣＲ反应：采用异硫氰酸肌一步法提取血清中ＨＣＶＲＮＡ与ＨＧＶＲＮＡ。以ＨＣＶ与ＨＧＶ…     

佛山市庚型肝炎病毒检测和部分基因序列分析

目的了解佛山庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染状况，分析ＨＧＶ非结构基因（ＮＳ）３区部分核苷酸序列。方法采用逆转录聚合酶链反应检测血清ＨＧＶＲＮＡ，对一例肝炎患者的ＨＧＶ（ＨＧＶＣ－ＦＳ）ＮＳ３区８１８ｂｐ片段作克隆及序列分析。结果８０例非甲－戊型肝炎患者和１０５例静脉吸毒者ＨＧＶＲＮＡ检出率分别为６．３％（５／８０）和２３．８％（２５／１０５），ＨＧＶＣ－ＦＳＮＳ３区片段核苷酸序列与ＨＧＶ－Ｕ４４４０２、Ｕ４５９６６、Ｕ３６３８０及ＨＧＶＣ９６４相同区段同源性为８５．５％、８５．６％、８８．０％、８９．２％。结论佛山存在ＨＧＶ感染，静脉吸毒者感染率较高，ＨＧＶ可能不是非甲－戊型肝炎主要致病因素。ＨＧＶＣ－ＦＳ与ＨＧＶＣ９６４同源性最高。     

慢性非甲—戊型肝炎患者血清中庚型肝炎病毒核酸的检测及部分核苷…

目的 了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在慢性非甲－戊型肝炎发病中的作用，并测定其非结构基因５（ＮＳ５）区部分核苷酸序列，方法 以逆转录－套式－聚合酶链反应法检测ＨＧＶＲＮＡ，并对阳性者血清中扩增出的９９４ｂｐ长的ｃＤＮＡ直接测序。结果 ３５例慢性非甲－戊型肝炎患者中１例血清ＨＧＶＲＮＡ阳性（２．９％）。该患者ＨＧＶＮＳ５区部分核苷酸序列与美国株ＰＮＦ２１６１及Ｒ１０２９１的同源性分别为８７．９５％及８９     

24例非甲—戊型肝炎患者血清庚肝病毒RNA检测结果分析

采用逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）技术对２４例非甲－戊（Ａ－Ｅ）型肝炎患者进行庚肝病毒ＲＮＡ（ＨＧＶ－ＲＮＡ）检测。结果：ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性６例（２５．０％），其中急性肝炎１例（１／９）、慢性肝炎２例（２／９）、肝为肝硬变３例（３／４）；１例有输血史，余５例均无输血或血浆史。提示庚肝病毒可能为非Ａ－Ｅ型肝炎的病原体之一，且存在输血外传播途径。     

30例非甲～戊型肝炎中庚型肝炎病毒感染分析

了解庚型肝炎病毒在本地区非甲－戊型肝炎中的流行情况及其临床特征。方法用ＲＴ－ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ法对３０例非甲－戊型肝炎患者的血清进行ＨＧＶ－ＲＮＡ和抗－ＨＧＶ检测。结果３０例非甲－戊型肝炎患者中检出３例,ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性,其中２例为急性肝炎,１例为慢性肝炎。     

庚型肝炎病毒（GBV—C／HGV）与HBV和HCV联合或重叠感染的初步研究

目的 研究庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）与ＨＢＶ和ＨＣＶ联合或重叠感染的情况，方法 采用ＥＬＩＳＡ的方法检测血液制剂和血源乙肝疫苗原料血浆中的ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＣＶ；并用５′非编码区的引物，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ。结果 ＨＢｓＡｇ和抗ＨＣＶ均阴性血浆的ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ阳性率为１８．８％（１５／８０）；ＨＢｓＡｇ阳性而抗ＨＣＶ阴性血浆的ＧＢＶ－     

原发性肝癌患者血清和肝组织中庚型肝炎病毒基因的PCR检测

用逆转录－聚合酶链反应法（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了原发性肝癌（ＰＬＣ）患者血清及肝癌和癌旁肝组织中的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＲＮＡ，以ＰＣＲ－双脱氧末端终止法测定了ＰＣＲ产物的核苷酸序列。结果显示，血清和肝组织中ＨＧＶＲＮＡ的检出率分别为１９．４％（１３／６７）和２５．７％（９／３５），且ＨＧＶＲＮＡ在肝癌组织呼吕旁肝组织中同时存在，血清和肝组织中ＨＧＶ ＲＮＡ检测结果的符合率为８５％；５′非编码区（５     

静脉毒瘾者84例HGV感染状况

目的调查庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在静脉毒瘾者中的感染状况。方法采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测８４例静脉毒瘾者血浆标本。ＨＧＶＲＮＡ经热变性法提取后逆转录为ｃＤＮＡ，在ＨＧＶ５′非编码区（５′ＮＣＲ）设计两对引物进行巢式扩增，产物为２３８ｂｐ，并经限制性内切酶ＨｐａⅡ鉴定扩增产物来自ＨＧＶ。结果８４例中有１５例为ＨＧＶＲＮＡ阳性，阳性率为１７．９％。ＨＧＶＲＮＡ阳性病例中１１例合并丙型肝炎病毒感染（１１／１５）。结论静脉毒瘾者是ＨＧＶ感染的高危人群；不洁注射是获得ＨＧＶ感染的重要途径。     

HGV-RNA阳性与阴性慢性乙型肝炎患者的对比研究

目的 研究慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）患者庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染的意义。方法 ＲＴ＿ＰＣＲ法对１４６例ＣＨＢ患者血清进行了ＨＧＶ－ＲＮＡ检测,并将ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性与阴性患者进行临床与病理学对比。结果 ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性２３例（１５．７５％）。ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性与阴性２肝功能等生化指标水平,肝脏病理损害程度、ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率均无显著性差异。５例ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性、１６例ＨＧＶ－ＲＮＡ阴性ＣＨＢ患     

“急性非甲非乙型”肝炎的病原学分析

对抗－ＨＡＶ－ＩｇＭ、ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＢｃ－ＩｇＭ均（一）、临床诊断为急性非甲非乙肝炎７２例进一步病原学鉴定。以聚合酶链反应检出乙型和丙型肝炎病毒；血清学包括酶免疫法检测抗－ＨＣＶ、抗－ＨＤＶ－ＩｇＭ、抗ＨＥｖ－ＩｇＧ（Ｇｅｎｅｌａｂｓ）、抗－ＣＭＶ－ＩｇＭ和抗－ＥＢＶ－ＩｇＭ。结果诊断丙型肝炎１７例（２３．６％），戊型肝炎１４例（１９．５％），最多的竟是慢性无症状ＨＢＶ感染的急性活动（３４例，４７．２％），其中合并ＨＣＶ例、ＨＤＶｌ例、ＨＥＶ１０例和自发性活动１７例。因而，我国“急性非甲非乙”肝炎的病原学可能相当复杂。     

5'非翻译区在丙型肝炎病毒基因诊断和基因治疗中的应用

全长的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组约９．４ｋｂ，５′非翻译区（５′ＵＴＲ）仅占其中极少的一部分，约３２４～３４１个ｂｐ。对该区的结构分析提示，ＨＣＶ５′ＵＴＲ可能参与ＨＣＶ的复制和表达调控。业已发现，５′ＵＴＲ具有启动病毒多蛋白翻译的重要功能［１］，...     

从长春分离的一株急性散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析

目的分析长春一株急性散发性戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的部分核苷酸序列。方法应用逆转录套式聚合酶链反应法检测ＨＥＶＲＮＡ；用荧光法（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）直接测序。结果被检的１４例急性散发性戊型肝炎病人中，５例ＨＥＶＲＮＡ阳性。对其中一例病人的ＨＢＶｃＤＮＡ开放读框２区进行核苷酸序列分析并与墨西哥株（Ｍ）和缅甸株（Ｂ）比较，发现长春散发性ＨＥＶｃ－１８７株与ＨＥＶ（Ｍ）核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为７９．９％和９３．１％；与ＨＥＶ（Ｂ）散发株和流行株的同源性分别为９２．３％和９６．２％及９３．９％和９７．７％；与新疆株（ＣＨ１．１）同源性分别为９６．５％和９５．４％。结论长春散发性ＨＥＶｃ－１８７株与新疆株（ＣＨ１．１）一样，可能与ＨＥＶ（Ｂ）为同一亚型。     

反义寡脱氧核苷酸对丙型肝炎病毒基因表达的抑制作用

为了解丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因调控方式、探索反义寡脱氧核苷酸对丙型肝炎病毒基因表达的体外抑制作用。构建了由ＨＣＶ５′非翻译区（５′ＵＴＲ）翻译启动报道基因－虫荧光素酶（ｌｕｃ）基因的真核表达载体；人工合成了针对ＨＣＶ５′ＵＴＲ及非结构蛋白５（ＮＳ５）区的反义寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）。借助脂质体将ＯＤＮ分别与所构建的载体一同转染人癌细胞系，短期培养后制备细胞提取液，以荧光发光法检测ｌｕｃ基因的表达．     

α干扰素对慢性丙型肝炎血清中HCVRNA水平的影响

目的：了解ＨＣＶ不同基因型对α干扰素治疗的反应。方法：采取干扰素不同治疗量和不同疗程治疗病人。血清用逆转录酶一聚台酶链反应扩增ＨＣＶＲＮＡ５－非编码区，再用Ｓｌｏｔ－ｂｌｏｔ杂交鉴定。结果：ＨＣＶＲＮＡ阴转，丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）降至正常（完全反应）占４０．０％；３ｘ１０￣６Ｕ治疗一月无反应，增量６ｘ１０￣６Ｕ出现前述结果（部分反应Ｉ）占３６．７％：增量６ｘ１０￣６Ｕ治疗一月无反应，再增量９ｘ１０￣６Ｕ出现前述完全反应结果（部分反应Ⅱ）占１５．０％；增量９×１０￣６Ｕ治疗一月无反应（无反应）占８．３％。３８．６％ＨＣＶ基因１型、４４．４％Ⅱ型、４２．９％Ⅲ型是完全反应。２４例完全反应病人中１５例治疗前ＨＣＶＲＮＡ拷贝数低于１０／ｍｌ。结论：各基因型对于扰索的治疗反应无显著性差异，肝损害轻、血清ＨＣＶＲＮＡ拷贝数低者对干扰素治疗反应较好。     

聚合酶链反应和杂交试验检测上海地区庚型肝炎病毒感染的初…

为探讨上海地区庚型肝炎病毒感染的现状，采用逆转录－套式－聚合酶链反应检测庚肝炎病毒（ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ）核酸（ＨＧＶ ＲＮＡ）。结果在各类患者和因员中ＨＣＶＲＮＡ的检出率分别是；血液透析和肾移植为１５．７％，丙型肝炎为３．３％、乙型肝炎为０、散发性非Ａ－Ｅ型肝炎为０、义务因员为７．５％。提示ＨＧＶ杂多为无闰状或亚临床型，常与ＨＣＶ重叠感染，并与输血密切相关，作者肯定了上海地区存在庚型肝炎，指出筛选     

28例HCV RNA阳性血清聚合酶链反应产物的酶切分析

为了探讨广州地区ＨＣＶ感染的基因型，作者对广州地区不同人群中１０５例抗－ＨＣＶ阳性血清用逆转录聚合酶链反应（ＴＲ－ＰＣＲ）进行了ＨＣＶ ＲＮＡ的检测，对其中８２例ＨＣＶ ＲＮＡ阳性患者血清做了ＰＣＲ产物的限制性内切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析，结果显示：ＨＣＶⅡ型感染７８例（９２．１％），ＨＣＶⅢ型１例，ＨＣＶⅡ／Ⅲ型混合感染３例，４例ＨＣＶⅢ型感染均是肝病患者，初步表明广州地区ＨＣＶ感染大多数     

丙型肝炎患者中各型肝炎病毒混合感染状况研究

１资料与方法：用ＲＴ－ＰＣＲ和ＥＩＡ（ＥＬＩＳＡ）方法对昆明地区８２例丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的肝炎患者血清中ＨＣＶＲＮＡ和抗一ＨＣＶ,并对甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）,乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）,丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）,戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）和庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的感染标志物进行了检测分析研究。２．结果：其它５型肝炎病毒均可同ＨＣＶ混合感染,并且同一患者可混合感染３种或４种其它型肝炎病毒。在这８２例患者中,２６．８％为单一ＨＣＶ感染,３２．９％为ＨＣＶ同ＨＡＶ混合感染,４５．ｌ０为ＨＣＶ同ＨＢＶ混合…     

地高辛素探针原位杂交检测非甲—非戊型肝炎肝组织中HGV RNA

目的观测ＨＧＶＲＮＡ在非甲－非戊型急慢性病毒性肝炎肝组织中的表达，对ＨＧＶ感染与急慢性病毒性肝炎发病的关系进行探讨。方法以地高辛素标记ＨＧＶｃＤＮＡ探针，对３６例血清非甲－非戊型急性和慢性病毒性肝炎患者石蜡包埋肝穿肝组织进行原位杂交，并对急性ＨＧＶ感染病例进行了随访观察。结果３６例肝病患者中，１１例（３０６％）肝组织中检出ＨＧＶＲＮＡ。其中急性重症肝炎１例（１／３），亚急性重症肝炎３例（３／６），急性轻型肝炎５例（５／１６）慢性肝炎２例（２／１１）。阳性信号表达于肝细胞胞浆及／或核内，在急性轻型肝炎，阳性信号多弥漫散在分布。而在慢性肝炎，则多呈片灶状靠近汇管区周围。在检出率和阳性细胞分布方面，原位杂交与免疫组化检测结果（３６１％，１３／３６）基本一致。８－３８个月后的急性轻型肝炎随访二次肝穿检测显示了肝组织中ＨＧＶＲＮＡ持持续存在。结论在急慢性非甲－非戊型病毒性肝炎肝组织中，ＨＧＶ感染较为常见，ＨＧＶ感染可能与急性病毒性肝炎的发病及慢性化有关。     

重庆地区HGV RNA检测及部分序列分析

目的 阐明重庆地区庚型肝炎病毒感染状况和序列特征。方法 以公布的ＨＧＶ非编码部分序列为引物，采用ＲＴ一套式ＰＣＲ技术检测ＨＧＶＲＮＡ，扩增产物序列采用ＰＣＲ片段直接循环测序法测定。结果 从７３例名种类型肝炎患者血清中检出２３例ＨＧＶ ＲＮＡ阳性，阳性率高达３７％，其中２６例非Ａ－Ｅ型肝炎中检出６例阳性（２３％），３９例乙型肝炎患者中检出１５例阳性（３８％），测序结果表明，重庆株ＨＧＶ非编码区邓列与     

慢性丙型肝炎患者血清HCVRNA定量分析：竞争性聚合酶链反应

目的：探讨ＨＣＶ复制水平与肝病进展的关系。方法：用竞争性逆转录聚合酶链反应（ＣＲＴ－ＰＣＲ）定量检测２７例慢性丙肝患者（ＣＨＣ）血清ＨＣＶＲＮＡ。结果：ＣＨＣ患者血清ＨＣＶＲＮＡ水平变化范围１０２～１０６ｃｏｐｉｅｓ／５０ｕｌｓｅｒｕｍ。１３例慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ）患者血清ＨＣＶＲＮＡ平均水平（５．０６８±１．０４，Ｌｏｇ１０ｃｏｐｉｅｓ／５０μｌｓｅｒｕｍ）明显低于１０例慢性活动性肝炎患者（ＣＡＨ）（５．７９±０．２５）和４例肝硬化（Ｃｉｒ）患者（５．８３±０．７５），Ｐ值均＜０．０５。血清ＨＣＶＲＮＡ水平同ＡＬＴ水平间呈正相关（ｒ＝０．４９９７，Ｐ值＜０．０５）。结论：表明丙肝病毒感染后病毒血症水平低，ＨＣＶ复制水平与肝损伤相关，在慢性感染中ＨＣＶ仍活跃复制，并与肝病进展相关。