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反义乙肝病毒S基因真核载体构建及体外抗乙肝病毒作用 总被引:1,自引:2,他引:1
目的:探讨反义RNA抗乙肝病毒(HBV)作用。方法:构建了正,反义HBVS基因重组EB病毒载体pMEP4s,pMEP4Sas,DNA-磷酸钙共沉淀法将重组载体DNA转染2.2.15细胞,潮霉素筛选1个月得到抗性细胞克隆,ELISA,斑点杂交法分别检测抗性细胞上清HBsAg,HBeAgHBVDNA水平,结果:转染后1,2月,反义载体HBsAg,HBeAg的抑制率分别达75%,51.6%,70%,46 相似文献
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我们应用Nested-PCR法检测了45例甲到戊型标志物均阴性的肝炎患者和44例献血员血清中的TTVDNA。资料与方法:45例肝炎患者均为我院传染科或门诊病人,血清经ELISA法检测抗-HAV,HBsAg,HBcAb,抗-HCV,抗-HEV均阴性,PCR检测HBVDNA,HCVRNA均阴性。44例某院献血员检测抗-HAV,HBsAg,HBcAg,HBcAb,抗-HCV,抗-HEV为阴性,肝功能正常。抽提标本血清DNA进行Nested-PCR:以RD037和RD038为引物进行第一次PCR,再以R… 相似文献
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含日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(SjFABPc)基因DNA重组质粒 … 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 观察裸DNA重组质粒pCD-SjFABPc在体外转染HepG2细胞以及质粒DNA免疫鼠肌组织中的表达,为进一步应用该质粒进行DNA免疫实验奠定基础。方法 用脂质体介导DNA转染法将pCD-SjFABPc转染贴壁细胞HepG2,G418加压筛选获得阳性克隆细胞并传代培养,SDS-PAGE及Western-blot鉴定目的基因在HepG2细胞中的表达,将pCD-SjFABPc质粒肌注免疫BALB 相似文献
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核心蛋白聚糖真核表达载体及逆转录载体的构建及鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:通过获取核心蛋白聚糖(decorin,DCN)基因,构建DCN真核表达载体和DCN逆转病毒载体,以探索今后肾脏疾病基因治疗的途径。方法:从大鼠肾脏组织中抽取RNA,经逆转录-PCR方法,扩增核心蛋白聚糖cDNA,并经序列测定正确后,将DCN插入真核表达载体pcDNA3,应用Lipofectamine介导将pcDNA3-DCN转染真核细胞COS-7细胞,并于转染后48、72和96h用ELISA 相似文献
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目的进一步研究丙型肝炎病毒5′NCR对结构蛋白编码基因的表达调控。方法以拼接好的HCV5′NCR,C,E1和E2/NS1区基因共长2547个核苷酸片段克隆于逆转录病毒载体LNSX得重组体pLHC2547,用聚合酶链反应(PCR)及核苷酸序列分析等方法对重组体进行鉴定。通过磷酸钙-DNA共沉淀法把经鉴定的重组体转染入PA317细胞,用G418进行克隆筛选,以NIH3T3细胞测其病毒滴度。提取转染细胞DNA及培养上清RNA分别用PCR和逆转录PCR进行鉴定。结果培养上清的病毒滴度为2×105CFU/ml,PCR及逆转录PCR(RT-PCR)分别可以从转染的细胞DNA及培养上清中扩增出HCV的基因片段。结论目的基因已整合到细胞的基因组中并得以表达 相似文献
7.
以重组质粒pSj26为模板,PCR扩增出编码26kDa谷胱甘肽S-转移酶(Sj26GST)的cDNA,双酶切后克隆到pBV220DNA,构建pBV220-Sj26温控表达载体,CaCl2法转化大肠杆菌DH5α,氨苄青霉素筛选转化子,酶切图谱分析及PCR鉴定阳性克隆。阳性克隆菌在30℃培养,42℃温控表达Sj26。测定表达产物GST活性,并用rSj26抗原免疫的鼠血清及日本血吸虫感染鼠血清进行Dot 相似文献
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1.材料与方法:乳哺动物细胞表达载体pBK-CMV,长约4.5kb,带有T_7公用序列。pCP10是pBR322EcoRI位点中插入双拷贝头尾相接的HBVayw亚型全基因HBVDNA重组质粒。PCR引物XI1:1428-1448nt5'CGT CCCGTC GGCGCTGAATCC3',XI_2:1672-1653nt5'AGTCCAAGAGTCCTCTTAAG3'。人肝癌细胞系SMMC-7721,出上海细胞所提供。将EcoRI酶切后回收的全基因HBV片段。在T_4DNA连接酶作用下,与EcoRI酶切… 相似文献
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口服丙型肝炎复合多表位DNA减毒鼠伤寒沙门活菌苗的实验研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 利用减毒鼠伤寒沙门菌作为载体,探讨丙型肝炎病毒(HCV) 口服DNA 疫苗的可行性。方法 把HCV 复合多表位抗原基因PCX 克隆到真核表达载体pcDNA3(CMV 启动子) ,构建HCV 真核表达载体pcDNA3/PCX,转化减毒鼠伤寒沙门菌SL3261 ,获得HCV 重组口服DNA 活菌苗SL3261 (pcDNA3/PCX) ,免疫小鼠及家兔后,检测特异性免疫应答及安全性。结果 SL3261(pcDNA3/PCX) 在小鼠及家兔中均可诱发低水平的特异性体液免疫及细胞免疫应答,免疫动物未见明显的毒性反应。结论 HCV 口服减毒鼠伤寒沙门菌DNA 疫苗可诱发特异性的免疫应答,为HCV 疫苗的研究提供新的理论及实验依据 相似文献
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乙型肝炎病毒C基因变屉对人白细胞抗原表达的影响 总被引:5,自引:2,他引:3
目的 阐明我国常见的HBV/C变异对宿主细胞人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)表达的影响。方法 构建携带野生型和变异型HBV/C基因的真核细胞表达载体,转染HepG2细胞,鉴定目的基因在宿主细胞中的表达,检测HLA-1,HLA-DR在宿主细胞膜上的表达。结果 PCR和Wcstern blot分析能分别检测到目的DNA片段和HBcAg的表达,约100%的HepG 相似文献