两种分离人血清蛋白质电泳技术的比较研究

目的比较双向电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离人血清中蛋白质的效果。方法双向电泳直接分离人血清中的蛋白质；采用改进后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离去除白蛋白的人血清样品。结果双向电泳图谱显示，样品在分子量为10k-20kDa可以分离出较清晰的蛋白质点，但在8000Da以下没有分离出清晰的蛋白质点，且在20kDa以上的蛋白质点，凝胶背景模糊不清。而采用改进后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示，可有效分离10kDa以下的小分子蛋白质。结论两种电泳技术各有所长，需根据目的蛋白的特点选择适合的方法。     

大鼠胚胎小脑提取液蛋白质成分分析

为探讨不同胎龄大鼠小脑组织所含蛋白成分的差异,制备16d和18d胚胎(E16,E18)及新生1d(P1)大鼠小脑提取液(cerebellum extracts,CE),采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法鉴定CE内的蛋白成分差异。结果发现E16与E18含有P1 CE所没有的蛋白带,分子量分别约为25.8kd,45.1kd,89.1kd和179.5kd。本研究为寻找新的神经营养因子提供了线索,并为选择最佳移植物体提供了依据。     

急性淋巴细胞白血病白细胞磷酸化蛋白质分析方法的建立

目的:建立一种对急性淋巴细胞白血病白细胞磷酸化蛋白质分析方法.方法:分离人新鲜外周血白细胞,并随机分为刺激组和对照组.裂解细胞,用Bradford法测定细胞蛋白质含量,利用亲和层析富集白细胞磷酸化蛋白质,SDS-PAGE分离磷酸化蛋白质,采用Scion Image软件分析电泳结果.结果:①电泳图谱显示每条泳道中蛋白质条带清晰,其相对分子量主要介于26～36kDa以及47～65kDa之间.②EGF刺激后出现有磷酸化蛋白质条带的增减或某些磷酸化蛋白质条带灰度的增强或减弱.结论:采用本研究建立的分析磷酸化蛋白质的方法对急性淋巴细胞白血病白细胞GRK相关磷酸化蛋白质进行动态的分析,其方法较简便、结果可信,可为细胞信息传递磷酸化蛋白质组的研究奠定了基础.     

双向电泳在大鼠脊髓蛋白质组分析中的应用

“人类基因组计划”测定DNA序列工作的完成，宣告“后基因组时代”的开始。人体内蛋白质分子结构和功能异常是疾病发生和发展的主要原因。蛋白质科学与技术进步成为本世纪生命科学领域争夺最激烈的前沿。蛋白质组学被视为分子生物学的大规模筛选技术，目前双向电泳（two—dimensional electrophoresis，2-DE）技术依然是大多数蛋白质组研究中分离复杂蛋白混合物的首选技术之一。所谓双向电泳，第一向根据蛋白质的等电点不同，分离蛋白质；第二向将等电点相同的蛋白质，根据分子量不同再次得到分离。与通常的聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）相比，能获得更多的信息。     

肺炎支原体蛋白质抗原分析的研究

用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫吸印方法,分析肺炎支原体蛋白质抗原成份。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳经考马斯亮蓝染色可见多条泳带。免疫吸印法转移到硝酸纤维素膜,经酶标记染色可见12条带,其中明显可见者5条带,蛋白质分子量分别为165 000,90 000,65 000,46 000和28 000。其中有个别泳带未见报道,其意义有待进一步研究。     

慢性马兜铃酸肾病大鼠模型肾组织中蛋白质组的差异表达

目的:制备慢性马兜铃酸肾病的大鼠模型,建立马兜铃酸肾病大鼠肾组织和正常大鼠肾组织的双向电泳图谱,从而展示差异表达的蛋白质,为进一步筛选介导马兜铃酸毒性作用的蛋白质分子奠定基础. 方法:应用马兜铃酸腹腔注射制备大鼠慢性马兜铃酸肾病模型,提取其肾组织中总蛋白质,采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对模型组和正常组肾组织中蛋白质进行差异展示. 结果:成功制备了慢性马兜铃酸肾病大鼠模型,并建立了模型组和正常组大鼠肾组织的双向电泳图谱,发现了差异蛋白质. 结论:马兜铃酸导致大鼠肾组织中蛋白质差异表达,这些差异表达的蛋白质可能介导了马兜铃酸的毒性作用.     

不同产地桔梗的聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图谱鉴别研究

目的 建立不同产地桔梗药材的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)指纹图谱鉴别方法.方法 蛋白质(Pro)、过氧化物酶同工酶(POD)、酯酶同工酶(EST)PAGE指纹图谱分析.结果 不同产地桔梗的Pro-PAGE图谱差异极小;POD-PAGE与EST-PAGE图谱在谱带分布及数量上均具有显著性差异,分别具有各自的鉴别谱带.结论 POD-PAGE与EST-PAGE指纹图谱可作为鉴别不同产地桔梗的有效方法.     

慢性马兜铃酸肾病大鼠模型肾组织中差异蛋白质的筛选

马兜铃酸肾病（aristolochic acid nephropathy,AAN）在临床上十分常见,对人们的身体健康带来极大的危害。目前马兜铃酸导致肾损害的分子机制不清楚,其早期诊断尚无法解决。更谈不上有效的药物治疗。因此,为了阐明马兜铃酸肾损害的分子机制,我们通过建立慢性马兜铃酸。肾病模型,用双向电泳技术筛选和比较模型动物肾组织中马兜铃酸诱导的差异蛋白质分子,为进一步确定马兜铃酸导致肾损害的分子靶点奠定基础。     

胃腺癌组织蛋白质双向电泳图谱分析

目的　利用蛋白质组学方法建立分辨率高和重复性好的人胃腺癌组织及其正常胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱 ,并分析其差异表达的蛋白质 ,以期用于早期诊断。方法　采用固相pH梯度(immobilizedpHgradient,IPG)双向凝胶电泳 (two -dimensionalgelelectrophoresis ,2 -DE)分离人胃腺癌组织及正常胃黏膜组织的总蛋白质 ,凝胶经银染显色后 ,ImagingMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质。结果　 ( 1 )得到了分辨率较高、重复性较好的人胃腺癌组织和正常胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱 ,癌组织和正常胃黏膜组织凝胶的平均蛋白质点数分别为 1 0 4 9± 67和 1 0 97± 73,平均匹配的点数分别为 835± 48和 95 3± 5 6,匹配率分别为 79.6%和 86.7% ;同一组织凝胶在蛋白质点位置上有较好的重复性 ,不同凝胶间蛋白质点在等电聚焦 (isoelectricfocusing ,IEF)方向的偏差是 0 .873±0 .1 2 5mm ,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (sodiumdodecylsulfate -polyacrylamidegelelectrophore sis ,SDS -PAGE)方向上的偏差为 1 .0 2 5± 0 .2 1 3mm。 ( 2 )通过比较分析 5例胃腺癌组织及正常胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱 ,得到平均匹配蛋白质点数为 769± 45 ,差异表达蛋白质点数为 81 ,其中 1 7个点仅     

基于指纹图谱的丹参药材蛋白提取方法研究

目的 :比较筛选适合于建立丹参药材蛋白指纹图谱的蛋白提取方法。方法:比较三羟基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)法、枸橼酸盐法、聚乙烯吡咯烷酮缓冲液(PVP buffer)法、改良饱和酚法、TCA-丙酮法、直接提取法(分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液、蒸馏水)、蛋白质提取液提取法等9种蛋白质提取方法,比较其聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)谱带的差异。结果:蛋白质提取液、PVP buffer提取的蛋白质杂质较多,其谱带模糊;TCA-丙酮法、分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液的背景较浅,其中分离胶缓冲液的条带最少;而浓缩胶缓冲液的条带最多,蛋白含量较高且背景清晰。结论:浓缩胶缓冲液最适合作为建立丹参药材蛋白指纹图谱的提取溶剂。     

鸡内金及其炮制品的电泳比较

目的：对鸡内金及其炮制品的电泳进行研究,测定并比较不同炮制品的电泳图的谱带数目和种类。方法：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定法。结果：鸡内金不同炮制品的电泳谱带数目和种类均不相同,以生品的谱带数目较多。结论：不同鸡内金的不同炮制品的电泳谱带存在差异。     

安徽地区猪囊尾蚴蛋白质理化学及免疫学分析

应用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胺电泳、化学染色和免疫印迹技术对安徽地区猪囊尾蚴蛋白质进行了理化学和免疫学分析。猪囊尾蚴蛋白质至少有２８条区带，其中有１２条主带，在１２条主带中有７条能被囊虫病人血清识别，其分子量分别为９２、６６、５４、５１、３４．５、３０和１２ｋＤ，其中除３４．５ｋＤ为脂蛋白，其余均为糖蛋白。３０ｋＤ囊尾蚴抗原分子与肝吸虫病和日本血吸虫病血清有交叉反应，其他６个主要血清学抗原与上述吸虫病     

胰腺丝氨酸弹力蛋白酶mRNA在正常大鼠组织器官中的表达

目的探查胰腺丝氨酸弹力蛋白酶mRNA在大鼠组织器官中的表达.方法克隆地高辛素标记的大鼠胰腺丝氨酸弹力蛋白酶Ⅱ的RNA探针,摘取Wistar雄性正常大鼠的组织器官,固定于4%多聚甲醛,进行原位杂交.结果正常大鼠腹主动脉的内皮细胞、中膜平滑肌细胞以及血管外膜成纤维细胞,血液细胞中的淋巴细胞、单核细胞,气管透明软骨细胞,胰腺的腺细胞、腮腺、颔下腺上皮细胞,肝细胞、肝窦壁的内皮细胞,小肠黏膜杯状细胞,心肌细胞,肾间质的纤维母细胞,肺泡上皮细胞,大脑胶质细胞,皮肤真皮纤维母细胞,睾丸曲精细管内的初级精母细胞、次级精母细胞以及精子,脾脏以及胸腺的淋巴细胞等,均有弹力蛋白酶mRNA的表达.结论胰腺丝氨酸弹力蛋白酶mRNA广泛表达于正常大鼠血管,气管,胰腺,肝,小肠,心,肾,脑,皮肤,睾丸,脾,胸腺等组织器官中.     

Differential analysis of two-dimensional gel electrophoresis profiles of spermatozoa protein in human normal motility sperm and idiopathic asthenospermia

Objective: To evaluate the application of two-dimensional electrophoresis in the research of differentially expressed proteins in the human asthenospermia. Methods: Two-dimensional gel electrophoresis was performed on 4 normal sperm samples from healthy men and 4 sperm samples from 4 asthenospermia patients. After silver staining, the differential expression proteins were analyzed by PDQuest 2D analysis software. Results: Six differential protein spots were identified. Four spots showed increased expression in the control gels compared with the patient gels. Conclusion: The protein profiles of differential expression between the normal spermatozoa and idiopathic asthenospermia were established and some differential proteins were found. The data of this study would establish the better fundament for further isolation and identification of differentially expressed proteins in human asthenospermia sperm.     

人支气管上皮蛋白质样品制备方法及其癌变各阶段组织2-DE图谱的建立

目的： 改良、优化支气管上皮组织的蛋白质样品制备方法,建立人支气管上皮癌变过程各阶段组织的2-DE图谱,为识别鉴定肺鳞癌癌变相关蛋白质奠定基础。方法：收集、筛选人支气管正常上皮、鳞状化生、不典型增生和上皮浸润癌组织标本。改良的脱氧胆酸-三氯醋酸(deoxycholate-trichloroaetic acid,DOC-TCA)法提纯支气管上皮总蛋白质,应用固相pH梯度双向凝胶电泳分离各阶段组织的总蛋白质,凝胶经银染显色后,用ImageMaster 2D软件分析双向电泳图谱。结果：应用改良的DOC-TCA法提纯的支气管上皮总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人支气管上皮组织的双向电泳图谱。正常上皮、鳞状化生、不典型增生和浸润癌4种组织凝胶的蛋白质点数依次为1 190±63,1 227±69,1 272±71,1 326±82。选取同例鳞状上皮化生组织进行3次重复性检测,3块凝胶的平均蛋白质点数为1 216 ±75 ,平均匹配点数为1 082±67,匹配率达 89.3% , 且3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向的偏差为（0.835±0.247） mm ,在SDS-PAGE方向上的偏差为（0.921±0.104） mm。结论：改良的DOC-TCA沉淀法是一种较好的支气管上皮组织蛋白质样品制备法,初步建立了分辨率较高且重复性好的人支气管上皮癌变各阶段组织的双向凝胶电泳图谱。     

钩端螺旋体外膜免疫生物学特性的研究

作者采用改良钩体外腹提取法,提取五株钩体外膜均获成功。电镜观察发现五株钩体外膜超微结构层数存在明显差别。豚鼠保护力试验证实赖型017株外膜对同型强毒株攻击具有明显的保护作用。SDS-PAGE和免疫印迹分析表明017株外膜蛋白具有良好的抗原性。017株和601株外膜蛋白电泳图谱及兔抗血清交叉识别图谱虽非常相似,但存在明显差别。     

白蛋白百分含量不同时两种方法测定尿总蛋白结果的差异

目的：比较尿白蛋白百分含量不同时用邻苯三酚红钼法（PRM）和苄乙氯铵法（BEC）测定尿总蛋白结果的差异。方法：利用琼脂糖凝胶普通电泳分析尿蛋白组分,然后比较PRM法和BEC法测定94例实验标本的尿总蛋白的结果;同时总结2 154例阳性尿液的白蛋白百分含量。结果：白蛋白百分含量为96%～100%、81%～95%、66%～80%、51%～65%、31%～50%、10%～30%和〈10%的7组中,两法测定结果的相对偏差分别为10.0%、4.5%、6.6%、14.9%、21.7%、53.0%和65.2%,BEC法测定结果偏低。统计显示白蛋白含量大于66%时两法测定结果无明显差异,白蛋白小于65%时差异有显著性。在所有2 154例阳性尿液中,白蛋白含量为96%～100%的病例占45.0%,白蛋白含量为66%～95%的病例占45.2%,白蛋白含量〈65%的病例占9.8%。结论：临床上约10%蛋白阳性尿液的白蛋白含量小于65%,这些尿液采用PRM法和BEC法测定总蛋白时,结果差异有显著性。     

两种不同肝转移潜能胃癌细胞株的差异蛋白分析

目的初步分析具有不同肝转移能力的胃癌细胞株XGC9811和XGC9811-L的差异蛋白质位点,为阐述与胃癌肝转移有关的差异蛋白质提供线索。方法以自发性多脏器转移胃癌细胞XGC9811和肝高转移潜能胃癌细胞XGC9811-L为实验对象,利用双向凝胶电泳技术,建立并优化两种细胞株的蛋白质表达图谱;之后利用M elan ieⅢ2-D软件分析两种蛋白质组的差异表达。结果获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱,在两组细胞所有凝胶均有相同变化的差异点19个,其中5个仅在XGC9811-L中表达,3个仅在XGC9811中表达,与XGC9811相比,有7个蛋白位点表达下调,4个蛋白位点表达上调。结论两种不同肝转移能力的胃癌细胞具有不同的蛋白位点。这些差异蛋白质位点为进一步鉴定胃癌肝转移的相关蛋白及建立胃癌肝转移性细胞株的2-DE数据库奠定基础。     

糖尿病大鼠红细胞膜Band3蛋白的变化

目的：研究糖尿病时红细胞膜蛋白的变化。方法：注射ＳＴＸ诱发大鼠糖尿病，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对糖尿病３个月大鼠红细胞膜蛋白进行电泳分析。结果：糖尿病大鼠红细胞膜Ｂａｎｄ３蛋白含量明显低于正常对照大鼠。结论：由于Ｂａｎｄ３蛋白是红细胞膜蛋白的主要成分，参与红细胞变形、物质通透等多方面的功能活动，其变化可能会直接影响红细胞的结构和功能，因此，糖尿病时Ｂａｎｄ３蛋白的变化值得进一步深入研究。     

尿道下裂大鼠与正常大鼠睾丸蛋白质二维电泳图谱分析

目的:探讨二维电泳技术在尿道下裂大鼠与正常大鼠睾丸差异表达蛋白研究中的应用.方法:孕SD大鼠10只,随机分为2组,妊娠12～19天,实验组和对照组分别予邻苯二甲酸二丁酯(DBP)500mg/(kg·d)、大豆油5 ml/d灌胃,第2l天取出仔鼠睾丸,提取总蛋白,进行二维凝胶电泳分离和图像分析.结果:按照5倍的表达量计算,发现有差异表达的蛋白质点9个,5个点在尿道下裂大鼠睾丸中高表达,而在正常大鼠睾丸为低表达;相反,在正常大鼠睾丸中高表达的4个点,在尿道下裂者为低表达.结论:初步建立了正常和尿道下裂大鼠睾丸的二维电泳图谱,并发现两者之间存在一些差异表达蛋白,为进一步进行尿道下裂大鼠睾丸差异表达蛋白的分离及鉴定奠定了良好基础.