滑膜成纤维细胞在类风湿性关节炎发病中的作用

类风湿性关节炎是复杂的多系统疾病,近年来,越来越多的证据表明,滑膜成纤维细胞在类风湿性关节炎中过度增殖,介导炎症反应,造成关节结构破坏。滑膜成纤维细胞在类风湿性关节炎发病过程中具有重要的作用。     

基质金属蛋白酶与类风湿性关节炎

基质金属蛋白酶(MMPs)是一类能够联合降解细胞外基质的蛋白质家族,目前已发现20多种。生理状态下,MMPs在组织中降解和修复细胞外基质。在类风湿性关节炎(RA)过程中,一系列细胞因子、生长因子以及激素水平的变化引起MMPs水平升高,使得细胞外基质成分发生不可逆降解及关节破坏。由于MMPs在RA发病过程中起着重要作用,进一步研究MMPs与疾病的关系将为RA的预防、诊断及治疗开辟一条新的途径。     

关节腔内注射医用臭氧对兔膝骨性关节炎模型基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的观察膝关节腔内注射医用臭氧对兔膝骨性关节炎模型关节软骨中基质金属蛋白酶-13表达的影响。方法健康家兔30只,随机分为对照组(空气组)、骨性关节炎组(OA组)和医用臭氧组(25μg/ml),使用Hulth法复制出膝骨性关节炎(OA)模型。分别在造模成功时和处死前测定兔膝关节活动度,末次注射后3 d处死实验兔,免疫组化方法与Western blot方法检测关节软骨中MMP-13蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测关节软骨中MMP-13 mRNA水平的变化。结果造模成功后,OA组和医用臭氧组兔膝关节活动度均显著降低,医用臭氧组兔膝关节活动度显著升高。OA组兔关节软骨中MMP-13蛋白与mRNA的表达水平显著升高,但是采用医用臭氧治疗后,臭氧组兔膝关节MMP-13蛋白与mRNA的表达水平显著降低。结论降低关节软骨中基质金属蛋白酶-13的表达可能是医用臭氧有效治疗膝关节炎的作用机制之一。     

成纤维细胞与结肠癌细胞相互作用促进细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的表达

目的研究成纤维细胞与结肠癌细胞相互作用对二者表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）的影响,初步探讨肿瘤-基质相互作用在结肠癌侵袭转移中的作用。方法结肠癌SW480细胞与HELF成纤维细胞以RPMI1640培养液分别共培养0、12、24、48h,通过RT-PCR和免疫细胞化学方法检测SW480和HELF细胞中EMMPRIN的表达。结果共培养组SW480细胞EMMPRINmRNA和蛋白的表达均明显升高,HELF细胞本来不表达EMMPRIN,与SW480细胞共培养12、24、48h后检测到EMMPRIN表达,且随时间延长而表达增加。结论成纤维细胞与结肠癌细胞相互作用上调SW480细胞EMMPRIN的表达,并诱导HELF细胞表达EMMPRIN,有可能在结肠癌侵袭转移中发挥重要作用。     

HMGB1在类风湿性关节炎发病中的作用及其机制

高迁移率族蛋白1（HMGB1）是一种普遍存在于真核细胞中的染色体蛋白。早期研究证实,HMGB1可作为DNA结合蛋白参与维持DNA构象和核小体结构的稳定：也可作为一种非特异性的转录因子参与基因表达的调控。近期研究发现,HMGB1可于细胞外分泌释放,参与细胞的分化、迁移和再生,并可介导多种炎性和自身免疫性疾病的发病。特别在类风湿性关节炎（RA）患者及实验性关节炎动物关节局部HMGB1的表达明显上调,深入研究揭示这些异常表达的HMGB1可通过多种分子机制在关节炎发病的多个环节中发挥作用,以介导慢性炎症的持续和局部组织的侵蚀破坏,通过阻断和抑制HMGB1的作用可明显减轻和改善关节炎的症状。这为阐明RA的发病机制提供了新的思路,并为RA的治疗提供了新的靶点。     

膝关节软骨中基质金属蛋白酶13及其组织抑制剂1的表达

背景：基质金属蛋白酶组织抑制剂1是与基质金属蛋白酶13相对应的拮抗剂,两者间表达水平和功能活性的平衡对细胞外基质的代谢状态起着重要作用,但在DH豚鼠骨关节炎发生发展过程中,两者表达水平,尤其两者表达水平比值的变化尚不明确。 目的：探讨不同月龄DH豚鼠关节软骨中基质金属蛋白酶13、基质金属蛋白酶组织抑制剂1表达比值的变化及其与DH豚鼠增龄性原发骨性关节炎发病过程中软骨退变程度的关系。 方法：选取2,4,8,12月龄雌性DH各6只,取膝关节观察关节软骨的大体形态后常规脱钙、包埋、制作石蜡切片,用于VG染色行组织学观察,采用Mankin评分系统定量分析关节软骨退变情况,采用免疫组织化学方法检测膝关节软骨中基质金属蛋白酶13、基质金属蛋白酶组织抑制剂1表达情况,应用 Image pro-Plus 6.0软件对免疫组织化学阳性蛋白表达情况进行积分吸光度计算。线性回归分析判断Mankin评分与基质金属蛋白酶13/基质金属蛋白酶组织抑制剂1比值的相关性。 结果与结论：DH豚鼠2月龄膝关节软骨无关节炎表现,4 月龄出现轻度软骨退变,并随月龄增加进行性加重,Mankin评分随月龄增加逐渐增高,各组之间的差异均有显著性意义(P < 0.05)。基质金属蛋白酶13、基质金属蛋白酶组织抑制剂1的表达均随月龄进行性增加,两者比值与Mankin评分呈正相关性(P < 0.05)。结果提示DH豚鼠4月龄出现膝关节软骨退行性变化,随月龄增加而进行性加重,其病理改变与基质金属蛋白酶13/基质金属蛋白酶组织抑制剂1表达失衡有关。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

创伤性关节炎软骨中基质金属蛋白酶13及组织特异性抑制剂1的表达*

背景：关节软骨损伤后继发性退变机制仍不十分清楚。近年研究发现关节软骨细胞外基质合成与降解失衡是造成软骨变性的重要原因之一,其中基质金属蛋白酶可能起决定性的作用。 目的：观察基质金属蛋白酶13及其组织特异性抑制剂1在创伤性关节炎中的表达及与软骨退变的关系。 方法：将新西兰兔分别用骨水泥制作的模具从1.33 kg,46 cm高度和0.43 kg,20 cm高度进行自由落体撞击制备轻型和重型撞击创伤性关节炎兔模型。 结果与结论：苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色结果显示,基质金属蛋白酶13和组织特异性抑制剂1在两组均增高(P < 0.05)。组织特异性抑制剂1在重型撞击创伤性关节炎模型兔软骨组织中的分泌明显高于轻型撞击组(P < 0.05)。说明关节软骨在创伤后,基质金属蛋白酶13及组织特异性抑制剂1表达上调,共同作用促进了关节软骨退变,其中组织特异性抑制剂1的过量表达可能是造成关节软骨进一步损害的原因之一。     

高迁移率族蛋白1在类风湿性关节炎发生中的作用

高迁移率族蛋白1（HMGB1）是一种非组蛋白核蛋白,是一个具有双重功能的警报素,其免疫活性取决于细胞定位。在细胞内,HMGB1结合DNA调节转录;在细胞外,HMGB1具有和TNF相似的细胞因子活性。HMGB1参与许多免疫介导疾病的发病过程包括类风湿性关节炎（RA）。因而,研究炎症性关节炎新的发病机制可以提供新的治疗靶点。     

紫外线诱导人皮肤成纤维细胞形态改变及对基质金属蛋白酶表达的影响

目的研究紫外线(UVB)诱导人皮肤成纤维细胞中端粒长度及基质金属蛋白酶(MMPs)的变化,及其在UVB诱导光老化中的作用。方法原代培养人成纤维细胞,用第5代细胞进行UVB照射处理。观察细胞形态,实时定量PCR检测COL1a1和h TERT的mRNA表达细胞端粒长度,Western blot检测MMP-3和MMP-1蛋白。结果 30 m J/cm2UVB照射人成纤维细胞24 h后,细胞逐渐变圆、皱缩和排列紊乱;COL1a1和TERT的mRNA水平表达显著升高,基质金属蛋白酶MMP-3和MMP-1蛋白水平也显著升高,端粒长度显著缩短。结论 UVB可能诱导人皮肤成纤维细胞形态改变,及MMP-3和MMP-1的表达明显升高,启动了光老化的早期进程。     

中性粒细胞增强类风湿关节炎滑膜细胞产生基质金属蛋白酶及其细胞侵袭力

目的：研究中性粒细胞表面CD147分子对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）产生基质金属蛋白酶（MMP）及细胞侵袭力的作用。方法：取自关节镜或骨科手术治疗的RA、骨关节炎（OA）患者的滑膜组织，体外分离培养FLS，通过流式细胞术（FCM）检测细胞表面分子及形态学方法鉴定。采用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL-60细胞（人早幼粒白血病细胞株）诱导中性粒细胞分化，并用硝基蓝四氮唑（NBT）还原反应测定其分化程度。进而以FCM测定分化前后的HL-60细胞及FLS表面CD147的表达，并通过明胶酶谱和重组基质侵袭实验检测分化前后HL-60细胞对FLS MMP表达和细胞侵袭能力的作用以及CD147拮抗肽（AP-9）对这种MMP表达和细胞侵袭能力的抑制作用。结果：成功建立了FLS分离培养和HL-60细胞分化的实验体系。培养的FLS具有典型成纤维细胞的形态，均一的高度表达CD90（〉98％）而不表达CD14。分化后的HL-60细胞CD147表达上调，RAFLS细胞CD147表达水平低于分化前及分化后HL-60细胞（P〈0．05）。明胶酶谱试验显示：①与OAFLS相比，单培养的RAFLS表达较高水平的酶原及活化形式的MMP-2（P〈0．05）；②分化前／后的HL-60细胞分别与FLS共培养，酶原及活化形式的MMP-2和MMP-9的表达水平较这些细胞单独培养均显著升高（P〈0．05），且分化后的HL-60细胞与FLS共培养酶原及活化形式MMP-2表达水平较分化前HL-60细胞与FLS共培养明显升高（P〈0．05）；③AP-9显著抑制两共培养组中MMP-2和MMP-9的上调作用（P〈0．05）。侵袭实验显示：RAFLS侵袭能力高于OA FLS（P〈0．05）；分化前后的HL-60均可增加RAFLS的侵袭能力（P〈0．05），且分化后强于分化前（P〈0．05）；AP-9可抑制这一促进作用，降低FLS的侵袭能力（P〈0．05）。结论：中性粒细胞可能通过CD147促进RA患者滑膜FLS MMP-2、MMP-9的表达和活化，增强FLS的侵袭能力，这种促进作用可被CD147拈抗肽所抑制，将为RA关节软骨和骨损伤机制和治疗的进一步研究提供了重要的线索。     

种植体周围龈沟液高迁移率族蛋白B1的水平

背景：近来研究发现高迁移率族蛋白B1在各种炎症中作为一种重要的炎症因子发挥了明显作用。目的：测定种植体周围黏膜炎患者龈沟液中高迁移率族蛋白B1的水平,探讨高速泳动族蛋白B1与种植体周围黏膜炎的关系。方法：选择健康种植体(n=39)、轻度种植体周围黏膜炎(n=24)和中度种植体周围黏膜炎(n=16)患者,测定种植体周围龈沟液量、龈沟液中高速泳动族蛋白B1总量及浓度;同时检测种植体周围黏膜炎的牙龈指数、菌斑指数、探诊深度和松动度。结果与结论：轻度种植体周围黏膜炎组龈沟液量、高迁移率族蛋白B1总量和浓度高于健康种植体组(P < 0.01),但低于中度种植体周围黏膜炎组(P < 0.01)。牙龈指数与龈沟液量之间存在正相关关系(P < 0.01),牙龈指数、菌斑指数与高迁移率族蛋白B1总量及浓度存在正相关关系(P < 0.01),探诊深度、松动度与高迁移率族蛋白B1浓度及总量间无明显相关性(P > 0.05)。表明种植体周围龈沟液量及龈沟液中高迁移率族蛋白B1水平与种植体周围黏膜炎的病变程度有关,检测龈沟液中高速泳动族蛋白B1水平可作为临床诊断种植体周围黏膜炎的客观指标。     

Association between matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) protein level and the risk of rheumatoid arthritis and osteoarthritis: a meta-analysis

Recent publications have investigated the potential role of the protein level of matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) in the susceptibility to rheumatoid arthritis (RA) and osteoarthritis (OA). However, no unanimous conclusion was obtained. Therefore, we carried out a meta-analysis to explore the association between MMP-1 expression and these two clinical disorders. After database searching and screening, we enrolled a total of eighteen articles for the pooled analysis. We observed a significant association between RA cases and controls in the whole population [SMD (standard mean difference)=1.01, P=0.017]. There were similar positive results in the subgroup analysis of “population-based control” (SMD=1.50, P=0.032) and “synovial fluid” (SMD=1.32, P=0.049). In addition, we observed an increased risk in OA cases, compared with controls, in the overall analysis (SMD=0.47, P=0.004) and subsequent subgroup analysis of “knee OA” (SMD=0.86, P<0.001), “Asian/China” (SMD=0.76, P=0.003), “cartilage-Asian/China” (SMD=1.21, P<0.001), and “synovial fluid-Asian/China” (SMD=0.73, P=0.004). In summary, a high protein level of MMP-1 in synovial fluid may be associated with the susceptibility to RA, and the high MMP-1 level in the cartilage tissue or synovial fluid may be related to the pathogenesis of knee OA in the Chinese population. This should be confirmed by larger sample sizes.     

Histamine-stimulated production of matrix metalloproteinase 1 by human rheumatoid synovial fibroblasts is mediated by histamine H1-receptors

The purpose of this study was to investigate the role of histamine in human rheumatoid synovial fibroblasts in the production of factors responsible for tissue remodelling and cartilage breakdown in rheumatoid arthritis. We examined the effects of histamine of tritiated thymidine incorporation, production of matrix metalloproteinase-1 (MMP-1), histamine H₁-receptor expression, phosphoinositide metabolism and intracellular calcium ion concentration ([Ca²⁺] _i ) in human rheumatoid synovial fibroblasts. Tritiated thymidine incorporation studies demonstrated that histamine markedly stimulated the proliferation of rheumatoid synovial fibroblasts. Immunofluorescence and Northern blot analyses revealed that proMMP-1 production was also stimulated by histamine. The levels of inositol phosphates and [Ca²⁺] _i in the cells were elevated in response to histamine, indicating that the cells expressed histamine H₁-receptors; and Northern blot analysis indicated that these H₁-receptors were up-regulated by histamine. In in situ hybridization, large amounts of histamine H₁-receptor mRNA were also detected in rheumatoid synovial tissue. These results suggest that the interaction between H₁-receptor expression in rheumatoid synovial fibroblasts and histamine secretion by mast cells and macrophages in the affected sites is an important event responsible for tissue remodelling and joint destruction in rheumatoid arthritis.     

高迁移率族蛋白B1在风湿性疾病中的作用及机制

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种非组蛋白性核蛋白,除了能与DNA结合并调节着染色体的架构外,它还能作为一种损伤相关的分子模式(DAMP)参与风湿性疾病的病理过程.尽管HMGB1主要位于细胞核内,但它在细胞活化和细胞死亡时可以转位至细胞质以及细细胞外空间.在细胞外,HMGB1的活性随半胱氨酸残基的氧化还原状态的不同而发生改变,其中半胱氨酸残基是其与TLR4结合所必需的.HMGB1除了直接刺激细胞外,它还能通过与细胞因子以及其他内源和外源的因子形成免疫复合物而发挥作用.在类风湿性关节炎患者滑液以及该疾病的动物模型中,核外HMGB1的表达量增加.在动物模型中阻断HMGB1表达能使疾病减轻.在系统性红斑狼疮(SLE)中能与DNA相互作用的HMGB1是免疫复合物的组成部分.总之,HMGB1可以是风湿性疾病中的一个重要中介物和生物标志,有希望成为有价值的新靶点用于治疗相关疾病.     

Estrogen inhibits apoptosis and promotes CC motif chemokine ligand 13 expression on synovial fibroblasts in rheumatoid arthritis

Objective: Female patients have a higher prevalence of rheumatoid arthritis (RA) than male patients, suggesting that female sex hormones contribute to the disease pathogenesis. We herein report the findings of our study, which was conducted to clarify the role of estrogen in the pathogenesis of RA.

Methods: Cultured human synovial fibroblasts from a patient with RA were treated with 17β-estradiol (E₂). The effects of E₂ against cellular activation and apoptosis were evaluated. To identify the disease-related genes altered by E₂ treatment, the changes in the gene expression of the cells stimulated with and without E₂ were evaluated using a microarray analysis.

Results: We found that E₂-mediated cellular activation signaling through extracellular signal-regulated kinase (ERK)-1/2. E₂ possessed a suppressive effect for apoptosis and a promotive effect for tumor necrosis factor (TNF)-α-induced matrix metalloproteinase (MMP)-3 production on the synovial fibroblasts. A microarray analysis revealed that E₂ profoundly upregulated CC motif chemokine ligand 13 (CCL13) gene expression.

Conclusions: E₂ could mediate cellular activation signaling through ERK-1/2 on the synovial fibroblasts. The present data suggest that E₂ has adverse effects on the pathogenesis of RA as a result of unregulated cell death, increased TNF-α-induced MMP-3 production, and CCL13 overproduction, subsequently resulting in the disease progression of RA.     

高迁移率族蛋白-1对增生性瘢痕成纤维细胞的调控作用

目的 探讨高迁移率族蛋白-1（HMGB1）对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFbs）的调控作用.方法 增生性瘢痕组织取自中山大学附属第一医院烧伤科行瘢痕整复术的患者,组织块法培养HSFbs.通过细胞增殖、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、迁移和胶原网收缩实验检测不同浓度（0～200 ng/mL） HMGB1对HSFbs的影响.结果 1.56、3.13、6.25、12.50、25.00 ng/mL HMGB1呈剂量依赖方式刺激HSFbs的增殖,HMGB1对HSFbs Toll样受体4（TLR4）、α-滑肌肌动蛋白（α-SMA）、非肌肉肌球蛋白Ⅱ（NMMⅡ）mRNA的表达有促进作用而对基质金属蛋白酶1-α （MMP1-α）无,HMGB1对HSFbs迁移及收缩有促进作用但可被TLR4阻断剂抑制.结论 HMGB1可能通过TLR4调控HSFbs而在增生性瘢痕的形成过程中起作用.     

The role of high‐mobility group box protein 1 in collagen antibody‐induced arthritis is dependent on vascular endothelial growth factor

High‐mobility group box 1 (HMGB1) has been implicated in angiogenesis and rheumatoid arthritis (RA). The aim of this study was to define more clearly the role of HMGB1 in the synovial angiogenesis and pathogenesis of an immune model of arthritis. BALB/c mice were injected with monoclonal anti‐collagen antibody cocktail followed by lipopolysaccharide to induce arthritis. HMGB1 and vascular endothelial growth factor (VEGF) were over‐expressed in the areas of the synovium where more inflammation and neoangiogenesis were present. The selective blockade of HMGB1 or VEGF resulted alternatively in a lower severity of arthritis evaluated by the arthritis index. Furthermore, exogenous HMGB1 administration caused a worsening of arthritis, associated with VEGF up‐regulation and increased synovial angiogenesis. The selective inhibition of VEGF also resulted in no induction of arthritis in mice receiving exogenous HMGB1. Cytokine enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA) analyses performed on peripheral blood and synovial fluid demonstrated a significant reduction of interleukin (IL)?1β, IL‐6 and tumour necrosis factor (TNF)‐α in mice where HMGB1 and VEGF pathways were blocked. Interestingly, the selective blockade of HMGB1 and VEGF resulted in an increase of the peripheral IL‐17A concentration. The development of arthritis mediated by HMGB1 and the synovial angiogenesis can be blocked by inhibiting the VEGF activity. The proinflammatory and proangiogenic cytokine IL‐17A was increased when HMGB1 is inhibited, but the synovial angiogenesis was nevertheless reduced in this model of arthritis. Taken together, these findings shed new light on the role of this nuclear protein in the pathogenesis of arthritis in an RA‐like model.