不同产地制何首乌HPLC指纹图谱研究及5种成分的含量测定

目的:通过测定不同产地制何首乌中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚、五没食子酰葡萄糖、没食子酸5种指标性成分的含量,建立制何首乌HPLC指纹图谱分析方法。方法:采用高效液相色谱法,Agilent Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL/min,波长254 nm,柱温30℃,对13批制何首乌药材的HPLC指纹图谱进行分析。结果:通过使用中药指纹图谱相似度评价软件分析,确定了29个共有峰,指认了五没食子酰葡萄糖、没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚5个化学成分。结论:本实验所建立的方法可为不同产地不同批次制何首乌药材质量评价提供参考。     

HPLC测定还脑益聪方及配伍前后何首乌肝毒性成分含量变化

目的:测定还脑益聪方及配伍前后何首乌肝毒性成分(二苯乙烯苷、大黄素和大黄素甲醚)含量,从化学成分角度评价复方肝毒性物质的变化。方法:采用Agilent Extend-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,分别以乙腈∶水(20:80)和甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,检测波长320 nm和254 nm,柱温30℃,流速为1 mL/min,分别检测二苯乙烯苷和大黄素、大黄素甲醚含量。结果:红参、石菖蒲、川芎分别与制何首乌配伍后,二苯乙烯苷的含量降低34.2%、34.0%、27.1%,还脑益聪方降低59.4%;大黄素含量降低36.77%、42.04%、36.24%、还脑益聪方降低80.93%,大黄素甲醚的含量降低39.44%、44.96%、39.57%、还脑益聪方降低86.90%。结论:还脑益聪方及拆方后,制何首乌肝毒性成分二苯乙烯苷、大黄素和大黄素甲醚含量显著降低,从化学成分角度证实整方配伍合理,安全性较高。     

HPLC同时测定何首乌中5种成分及指纹图谱的建立

目的建立HPLC同时测定不同产地何首乌中5种指标性成分含量的方法,并建立何首乌HPLC指纹图谱分析方法。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,测定何首乌样品中五没食子酰葡萄糖、没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚含量,用SPSS19.0统计软件对数据进行聚类分析,建立何首乌HPLC指纹图谱并进行分析。结果何首乌中5种指标性成分的进样量在线性范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999 4。安徽阜阳样品中五没食子酰葡萄糖、没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素甲醚含量最高(分别为0.048 9%、0.036 1%、3.179 9%、0.551 2%),贵州安顺样品中大黄素含量最高(0.423 8%);安徽阜阳样品中指标成分平均总含量最高(3.966 6%),其次为安徽亳州(2.769 8%)、贵州(2.469 4%)及四川(2.306 3%)。云南何首乌样品与其他产地的指纹图谱差异较大,且二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚成分未检出。14批样品指纹图谱有18个共有峰,指认了2、4、7、17、18号峰分别为五没食子酰葡萄糖、没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚。结论本试验建立的方法稳定可靠,重现性好,能有效用于何首乌的质量控制。     

制何首乌中四个有效成分含量的高效液相色谱法测定

目的建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定制何首乌中二苯乙烯苷、黄豆苷元、大黄素、大黄素甲醚的方法。方法采用高效液相色谱法;色谱柱为Diamonsil C18(5μm,250 mm×4.6 mm);柱温35℃;流速1.2 ml/min;检测波长280nm;流动相为甲醇∶0.5%醋酸溶液(42∶58)。结果被测定峰与其他组分峰完全分离。二苯乙烯苷、黄豆苷元、大黄素甲醚和大黄素的线性范围分别为0.908 4～9.084μg(R2=0.999 8),0.1236～1.236μg(R2=0.999 7),0.6048～6.048μg(R2=0.999 9),0.3648～3.648μg(R2=0.999 2);平均回收率(n=6)分别为100.2%,(RSD=1.9%),98.53%(RSD=2.0%),100.7%(RSD=2.8%)和99.95%(RSD=2.0%)。结论该方法准确、简便、重复性好,可作为制何首乌中二苯乙烯苷、黄豆苷元、大黄素、大黄素甲醚的含量测定方法,并易于推广。     

何首乌化学成分研究进展

何首乌Polygonum multiflorumThunb.为蓼科植物何首乌的块根,相传此药名为交藤。具有味苦,甘,涩,微温,补益类之药[1]。具有乌须发、悦颜色、益精血、强筋健骨,抗衰老等功效。现代研究证明其中主要含有蒽醌类、二苯乙烯苷及磷脂类等活性成分[2]。1蒽醌类研究表明何首乌中蒽醌类有效成分主要为大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄素。蒽醌类成分含量测定多以高效液相方法测定。郭青等[3]采用反相高效液相色谱法测定蒽醌类成分。采用Inertsil ODS-3柱,以甲醇∶0.1磷酸(85∶15)为流动相,检测波长为254 nm。得到大黄素、大黄素甲醚…     

市售生、制何首乌中主要活性成分的含量分析北大核心CSCD

目的:建立同时测定市售生、制何首乌中6种主要活性成分(二苯乙烯苷、大黄素8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)含量的方法。方法:采用Agilent Poroshell 120 EC-C18柱;以甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速1.0 m L/min;检测波长254 nm。结果:不同产地样品中6种成分含量具有较大差异,其中二苯乙烯苷含量差异最大;而二苯乙烯苷含量较高的样品,其蒽醌类衍生物的含量相对也较高,反之亦然;生、制何首乌中各活性成分平均含量对比发现生首乌各成分含量均高于制首乌。结论:该定量方法快速、简单,可为规范和控制何首乌商品质量提供科学方法和依据。     

市售生、制何首乌中主要活性成分的含量分析

目的:建立同时测定市售生、制何首乌中6种主要活性成分(二苯乙烯苷、大黄素8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)含量的方法。方法:采用Agilent Poroshell 120 EC-C18柱;以甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速1.0 m L/min;检测波长254 nm。结果:不同产地样品中6种成分含量具有较大差异,其中二苯乙烯苷含量差异最大;而二苯乙烯苷含量较高的样品,其蒽醌类衍生物的含量相对也较高,反之亦然;生、制何首乌中各活性成分平均含量对比发现生首乌各成分含量均高于制首乌。结论:该定量方法快速、简单,可为规范和控制何首乌商品质量提供科学方法和依据。     

高效液相色谱法同时测定制何首乌中多种活性成分

目的:建立对制何首乌药材中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚等3种活性成分同时测定的质量评价方法。方法:制何首乌药材利用100%甲醇超声提取3h,冷却至室温,取1mL,以14 000rpm速率离心10min,上清液用0.45μm的微孔滤膜过滤,取10μL,注入高效液相色谱仪,检测条件:色谱柱Symmetry ShieldTM C18柱(5μm,4.6mm×150mm);填充剂:十八烷基硅烷键合硅胶;流动相:乙腈-0.05%磷酸梯度洗脱;流速:1.0mL/min,检测波长:254nm;柱温:35℃。结果:经方法学考察,二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚3种活性成分在考察的浓度范围内线性关系良好(r=0.9995~0.9998),精密度RSD=2.1%~4.1%,加样回收率98.7%~101.2%,各活性成分与药材中其他成分分离良好。结论:该方法适用于制何首乌药材中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚等3种活性成分同时测定,可用于制何首乌药材的质量评价。     

制何首乌的炮制方法探索

目的:考察黑豆汁炖制时间对制何首乌外观性状及各类有效成分含量变化规律的影响。方法:采用HPLC同时测定不同炮制时间制何首乌样品中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷的含量,选择Agilent ZORBAX Extend-C_(18)色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm),甲醇(A)-水(B)为流动相梯度洗脱(0～30 min,5%～100%A; 30～40 min,100%A),流速1. 0 mL·min~(-1),柱温35℃,检测波长280 nm。结果:随炖制时间的增加,二苯乙烯苷含量逐渐降低,与8 h时相比,至64 h时含量降低76%;大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷2种蒽醌苷含量先上升后下降,至24 h时达最高值,炖制40 h时降至与8 h近似的水平,之后略有波动;大黄素、大黄素甲醚2种蒽醌苷元含量先上升后下降,炖制32 h时达最大值,之后缓慢降低并趋于稳定。结论:炖制时间对制何首乌中各类成分含量的影响显著,且变化趋势不尽相同,应规范制何首乌饮片的炮制时间;同时,仅以二苯乙烯苷及蒽醌类成分作为制何首乌的指标性成分依据不够充分,应考虑增加多糖类等质量控制指标。     

HPLC测定不同生长年限及采收期何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的含量

目的:建立HPLC同时测定何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分含量的方法,比较不同生长年限及采收期何首乌的成分动态变化。方法:采用HPLC同时测定一至四年生及7—12月采收的何首乌中的二苯乙烯苷和蒽醌类成分含量。色谱柱为C18,流动相为甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脱,检测波长320,254 nm,流速1.0 mL.min-1。结果:在一定范围内二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚进样量与峰面积积分值线性关系良好,具有良好的精密度、重复性、稳定性和良好的加样回收率。结论:样品测定结果表明该方法灵敏,准确,重复性好。何首乌中的二苯乙烯苷和蒽醌类成分在一至二年生长期间迅速积累,至三年生时达到峰值;同年生何首乌中成分含量在11月时相对高于其他月份。     

HPLC测定彝肤软膏中重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ的含量

目的：建立同时测定彝肤软膏中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ高效液相色谱分析方法。方法：采用高效液相色谱法对彝肤软膏中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ同时进行含量测定：Hypersil ODS2(4.6 mm×150 mm,5 μm)；预柱：IBBM-612111,C-18柱芯；乙腈-0.02%磷酸(43∶57)为流动相,流速1 mL·min^-1,检测波长203 nm,柱温40 ℃。结果：重楼皂苷Ⅰ在0.102 4～3.2 μg线形关系良好,r=0.999 8,平均回收率97.4%,RSD 1.8%(n=6)；重楼皂苷Ⅱ在0.064～2.0 μg线形关系良好,r=0.999 9,平均回收率101.4%,RSD 1.0%(n=6)。结论：本方法准确可靠、重复性好,能有效控制该制剂的质量。     

HPLC同时测定乌灵胶囊中多组分的含量

目的:建立同时测定乌灵胶囊中5-hydroxymellein,5-carboxylmellein,金雀异黄素及5-甲基蜂蜜曲霉素含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,Kromasil KR100-5C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;流速1.0 mL·min-1;柱温30℃。结果:5-hydroxymellein在7.86～157.2 ng线性关系良好,平均回收率为101%,RSD1.3%;5-carboxylmellein在9.57～191.4 ng线性关系良好,平均回收率为98.6%,RSD 1.5%;金雀异黄素在28.80～576.0 ng线性关系良好,平均回收率为98.6%,RSD 1.8%;5-甲基蜂蜜曲霉素在21.46～429.2 ng线性关系良好,平均回收率为99.2%,RSD 1.8%。结论:该研究建立的方法可行,重复性好,可用于乌灵胶囊的质量控制。     

心迪软胶囊质量标准研究

目的：建立心迪软胶囊的质量标准。方法：采用薄层色谱法对心迪软胶囊中槲皮素、山柰素和异鼠李素在同一薄层板上进行定性鉴别：硅胶G板，以氯仿-甲酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）为展开剂进行展开；并采用高效液相色谱法对心迪软胶囊中的槲皮素、山柰素和异鼠李素同时进行含量测定: Diamonsil^TM(钻石) C₁₈（4.6 mm×250 mm，5 μm），乙腈-水-磷酸（30∶70∶0.1）为流动相，流速1 mL·min^-1，检测波长370 nm，柱温40 ℃。结果：通过薄层色谱可同时鉴别槲皮素、山柰素和异鼠李素3种黄酮苷元。槲皮素在0.412～1.648 μg线性关系良好，r=0.999 9, 平均回收率为96.8%，RSD为0.9%(n=6)；山柰素在0.021～0.083 μg线性关系良好，r=0.999 8，平均回收率为96.9%，RSD为2.0%(n=6)；异鼠李素在0.183～0.732 μg线性关系良好，r=0.999 9，平均回收率为97.1％，RSD为1.6%(n=6)。结论：所建立的心迪软胶囊质量标准研究方法可行，重复性好，能有效地控制该制剂的质量。     

HPLC法测定眼保Ⅰ号胶囊中芍药苷的含量

目的:建立HPLC测定眼保Ⅰ号胶囊中芍药苷的含量测定方法。方法:Diamonsil C18(2)(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(14:86);流速:1mL.min-1;检测波长:230nm;柱温:25℃。结果:芍药苷在0.044～0.261μg线性关系良好(r=0.9999),平均回收率97.8%,RSD=1.71%(n=6)。结论:本方法简单,准确,重现性好,可用于眼保Ⅰ号胶囊中芍药苷的含量检测。     

HPLC同时测定附子理中丸中3种单酯型生物碱含量

目的:建立附子理中丸中3种单酯型生物碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)的含量测定方法.方法:色谱柱Alltimate C18(4.6 mm ×250 mm,5μm);保护柱Alltimate C18(4.6 mm ×7.5 mm,5μm);流动相40 mmol·L-1乙酸铵(加氨水调pH 10.00 ±0.5)-乙腈梯度洗脱;流速1.0 mL· min-1,检测波长240 nm,柱温35℃.结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱分别在进样量0.212 ～1.272 μg,0.0116～0.0696 μg,1.035 ～6.210 μg线性关系良好,r分别为0.9996,0.9997,0.9996,在8h内稳定性良好.同时,针对苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱,附子理中丸(河南宛西)平均加样回收率依次为97.59％ (RSD 1.90％)、98.81％(RSD 2.00％)、98.37％(RSD 1.72％),附子理中丸(安徽东芝堂)平均加样回收率依次为98.18％ (RSD 2.39％)、103.06％(RSD 1.77％)、98.23％(RSD 2.05％),而附子理中丸(北京同仁堂)仅含苯甲酰新乌头原碱的平均加样回收率100.17％(RSD 2.29％).结论:方法结果准确可靠、快速,适用于构建附子理中丸成方制剂的多指标质量评价模式.     

HPLC测定齐酞酸钠含量及其有关物质

目的:用高效液相色谱法测定齐酞酸钠的含量及其有关物质。方法:采用Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150mm,5μm),以甲醇-乙腈-0.1%磷酸水溶液(80∶10∶10)为流动相,流速1.0 mL.min-1,柱温35℃,检测波长210 nm。结果:齐酞酸钠与其相邻杂质峰能完全分离,齐酞酸钠在0.052 5～0.997 5μg进样量与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9),最低检出限为3 ng;精密度良好(RSD 0.38%),平均回收率为99.53%(n=9)。结论:该方法简便、准确、专属性好、灵敏度高,可用于齐酞酸钠的含量及有关物质测定。     

HPLC测定布渣叶中牡荆苷的含量

目的:建立测定布渣叶中牡荆苷含量的高效液相色谱法.方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)柱分离,以甲醇-0.4％磷酸溶液(30∶70)为流动相,柱温为35℃,在339 nm处检测.结果:牡荆苷在88.96～2 224μg质量与峰面积呈良好的线性关系;牡荆苷的平均回收率为98.61％( RSD 1.32％).广东的布渣叶其牡荆苷含量要比广西的普遍要高,均符合现行版药典规定.结论:本法操作简便,准确度高,重复性好,可作为布渣叶质量控制方法之一.     

柱前衍生HPLC同时测定驴胶补血颗粒中6种水解氨基酸

目的:建立柱前衍生反相高效液相色谱法同时测定驴胶补血颗粒中6种水解氨基酸含量的方法.方法:采用Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm),异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长254nm,柱温30℃.结果:L-谷氨酸的线性范围0.169 ～1.014 μg(r =0.9995),平均回收率101.43％,RSD 3.20％;L-羟脯氨酸的线性范围0.178～ 1.068 μg(r =0.999 9),平均回收率101.23％,RSD 3.25％;甘氨酸的线性范围0.381～2.286 μg(r=0.9995),平均回收率102.87％,RSD 2.32％;L-丙氨酸的线性范围为0.162 ～0.972 μg(r=0.999 5),平均回收率102.37％,RSD 3.36％;L-精氨酸的线性范围0.118 ～0.708 μg(r =0.999 6),平均回收率102.73％,RSD 2.41％;L-脯氨酸的线性范围0.253 ～ 1.518 μg(r =0.9999),平均回收率98.69％,RSD 2.34％.结论:建立的方法可靠,可用于驴胶补血颗粒中氨基酸的含量检测.     

RP-HPLC法测定通脉口服液中丹参素的含量

目的:建立通脉口服液中丹参素含量的测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法,并用外标法测定丹参素的含量.色谱柱为Hypersil C18(10μm,4.6 mm×200 mm),流动相为0.5%冰醋酸-甲醇-二甲基甲酰胺(99: 0.5: 0.5),紫外检测波长为280 nm,流速为1.2 ml/min,结果:丹参素的回收率为98.31%,RSD＝2.11%(n＝6).结论:该方法快速、简便,可作为该制剂的质控方法.     

HPLC．DAD法测定银屑优化颗粒中芍药苷、甘草苷、落新妇苷、迷迭香酸和甘草酸

目的建立同时测定银屑优化颗粒中芍药苷、甘草苷、落新妇苷、迷迭香酸和甘草酸5种成分的HPLC-DAD测定方法。方法采用高效液相色谱波长切换法。Lichrospher C18色谱柱（250mm×4．6mm,5μm）;流动相为乙腈-0．1％磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长在230、254、290nm切换;体积流量为1mL／min;柱温为30℃;进样体积10μL。结果5种成分的线性关系良好。芍药苷在69．12~691．20ng线性关系良好,平均加样回收率为97．45％,RSD值为1．54％;甘草苷在39．02~390．20ng线性关系良好,平均加样回收率为97．10％,RSD值为1．90％;落新妇苷在30．03~300．30ng线性关系良好,平均加样回收率为99．98％,RSD值为1．22％;迷迭香酸在7．82~78．20ng线性关系良好,平均加样回收率为100．83％,RSD值为1．36％;甘草酸在31．09～310．90ng线性关系良好,平均加样回收率为97．52％,RSD值为1．49％。结论本方法具有方法简便、快速、准确等特点,可同时测定银屑优化颗粒中5种活性成分。