视黄酸对CDK2组成性表达HL—60细胞增殖的影响

探讨细胞周期素依赖性激酶在视黄酸对急性早幼粒细胞白血病ＨＬ－６０细胞的增殖抑制和分化调控过程中的作用。方法应用真核细胞基因转染技术将外源ＣＤＫ２基因转入人ＨＬ－６０早幼粒细胞白血病细胞中,进而以视黄酸处理１－４ｄ。结论ＣＤＫ２在视黄酸诱导的增殖抑制和分化过程中起重要作用,由于ＣＤＫ２的组成性超过表达,导致视黄酸对ＨＬ－６０细胞的增殖抑制和诱导分化作用下降。     

白血病抑制因子受体不同亚基细胞内区与HL—60细胞内STAT3激活的关系

目的　观察白血病抑制因子（LIF）受体gp190亚基和gp130亚基胞内区在人白血病细胞系HL-60中与STAT3表达及激活的关系,了解白血病抑制因子（LIF）引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。方法　用基因重组技术将gp130和gp190的细胞内区互换以构成两个嵌合体受体基因（130/190,190/130）并分别在HL-60细胞表达。用免疫组化和免疫印迹杂交方法分析形成受体亚基细胞内区同源性二聚体后的磷酸化STAT3的水平和STAT3的表达水平。结果　转染pED130/190,LIF诱导10min后,HL-60细胞内的STAT3磷酸化增加（P＜0.01）,经LIF诱导的转染pED130/190的HL-60细胞的STAT3磷酸化水平存在时间依赖性,转染pED190/130的HL-60细胞,LIF诱导6h后,STAT3的表达降低。结论　白血病抑制因子受体gp190亚基细胞内区在LIF诱导下参与HL-60细胞中STAT3的激活。     

bcl—2癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸诱导HL60细胞凋亡

目的 不同浓度ｂｃｌ－２癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸９ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）对ＨＬ６０细胞凋亡的诱导作用。方法 ＡＳＰＯ与ＨＬ６０细胞共培养后,用吖啶橙（ＡＯ）染色法,流式细胞仪ＤＮＡ倍体分析,电镜观察、ＤＮＡ片段电沪等方法进行观察。结果 ＡＳＰＯ组与正义组比较能特异诱导ＨＬ６０细胞的凋亡,且于培养２４５小时即可出现,此时ＡＳＰＯ５、１０、２０μｍｏｌ／Ｌ浓度各组的凋亡率分别为：（９．７     

γ射线诱导HL—60和K562细胞凋亡和G2期阻滞的关系

应用形态学、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等方法观察γ射线诱导辐射敏感细胞ＨＬ－６０和辐射耐受细胞Ｋ５６２细胞凋亡和细胞周期改变的关系。结果：ＨＬ－６０细胞受照后出现Ｇ２期阻滞,１２ｈ达高峰,凋亡细胞比例随作用时间和照射剂量的增加而增加,凋亡特有的梯状图谱１、５、１０Ｇｙ照后７２、２４、１２ｈ出现。Ｋ５６２细胞受照后出现Ｇ２期阻滞、５、１０、２０Ｇｙ组分别在２４、４８、７２ｈ达高峰,末观察到细胞凋亡的     

蝌蚪提取液对HL—60细胞相关癌基因表达的影响

目的：研究蝌蚪提取液（T871－3）对白血病细胞的作用机制。方法：利用细胞形态学观察,细胞化学、TUNEL法等技术,并采用原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术,观察T871－3诱导HL－60细胞分化和凋亡过程中c-myc,c-myb,bcl-2癌基因表达的变化。结果：1．T871－3能抑制TH－60细胞分裂增殖。2．T871－3在低浓度时诱导HL－60细胞向单核／巨噬样细胞方向分化,高浓度时诱导细胞凋亡。3．T871－3诱导HL－60细胞分化的过程中伴随着c-myc,c-myb癌基因表达的下调,诱导HL－60细胞凋亡的过程伴随着c-myc,bcl-2癌基因的表达的下调,结论：T871－3可能通过调节癌基因的表达发挥其诱导HL－60细胞分化和调亡的作用。     

CpG基序诱导HL60细胞分化和凋亡作用的初步研究

研究发现细菌表面的肽聚糖、脂磷壁酸等菌体成份有直接的抗肿瘤作用 ,然而源于细菌DNA的CpG基序以及含CpG基序的寡核苷酸 (CpG oligodeoxynu cletides,CpG ODN)对肿瘤细胞的直接作用如何尚不明了 ,因此 ,初步研究了CpG ODN对白血病HL6 0细胞的直接作用及其可能机制。设计合成CpG ODN序列为 5′ TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT 3′;不含CpG基序的寡核苷酸 ,即nonCpG ODN序列为 5′ TGCTGCTTCCCCCCCCCCCC 3′;含甲基化CpG基序的寡核苷酸 ,即ZpG ODN序列为 5′ TQGTQGTTTTGTQGTTTTGTQGTT 3′,该序列中Q…     

FMLP刺激HL—60细胞NADPH氧化酶激活的信号转导途径

目的 澄清中性粒细胞中[Ca^2 ]i及某些激酶在NADPH氧化酶激活中的作用和NADPH氧化酶激活的信号转导途径。方法 利用中性粒细胞样HL-60细胞,研究[Ca^2 ]i和某些激酶对fMLP刺激NADPH氧化酶激活的影响。结果 用10umol/L BAPTA-AM去除[Ca^2 ]i后使O2^-生成明显减少;8umol/L的PKC抑制物GF109203x显著地抑制了O2^-产生;50umol/L的p38抑制物SB203580、50umol/L的ERK抑制物PD098059和0.1umol/L的PI3K抑制物Wortmannin使O2^-产生受到不同程度抑制;PKC、PI3K、p38和ERK激活对[Ca^2 ]i升高没有影响;[Ca^2 ]i、PKC和PI3K对p38激活有一定作用,而ERK和Akt激活主要受PI3-K的调控。结论 试验说明[Ca^2 ]i依赖途径（PKC）和[Ca^2 ]i非依赖途径（PI3K、p38和ERK）对NADPH氧化酶激活都起着重要作用。     

hp450RAI质粒转染对HL—60细胞功能及IFN—α表达的影响

目的探讨细胞内一种细胞色素 P45 0 (hp45 0 RAI,也称 CYP2 6 )表达、视黄酸 (RA)代谢与细胞增殖功能的相互关系。方法采用脂质体介导的质粒转染、流式细胞仪分析、逆转录 - PCR及高效液相色谱 (HPL C)分析等实验技术方法做有关分析研究。结果 12 .5× 10 - 7m ol/ L 全反式 RA(ATRA)处理 HL- 6 0细胞 3d未诱导明显的 hp45 0 RAI表达 ,脂质体介导的质粒转染可使 HL- 6 0细胞稳定表达 hp45 0 RAI;2单纯 hp45 0 RAI转染未对 HL- 6 0细胞 ATRA代谢及 ATRA诱导的 HL- 6 0细胞增殖抑制产生显著影响 ,而联合应用 P45 0酶抑制剂 Ketoconazole或 IFN- α则使 HL- 6 0细胞 ATRA代谢减慢 ,ATRA增殖抑制作用增强。结论 RA敏感 HL- 6 0细胞中影响 RA代谢的主要细胞色素 P45 0可能并非 hp45 0 RAI,P45 0酶抑制剂或IFN- α能协同 ATRA抑制细胞增殖 ,后者可能与 HL- 6 0细胞 ATRA代谢减慢及 IFN- α表达增强有关。     

抑制mel18表达增强桂皮醛诱导的HL60细胞分化

目的:研究下调mel18基因表达对桂皮醛(CA)诱导HL60细胞分化的影响。方法:用低浓度CA和反式维甲酸(ATRA)处理HL60细胞。用shRNAmel18质粒及对照质粒shRNALuc包装慢病毒,用病毒感染HL60细胞。低浓度CA和ATRA作用于病毒感染的HL60细胞,流式细胞术检测细胞周期和细胞表面分化抗原表达,Western blot法检测MEL18蛋白、cyclin D1、p27的表达和Akt的磷酸化水平。结果:低浓度CA和ATRA增加HL60细胞的粒细胞分化抗原CD11b表达,MEL18蛋白表达下降。shmel18病毒感染的HL60细胞(shmel18-HL60细胞)MEL18蛋白表达下降,而对照病毒感染的HL60细胞(sh Luc-HL60细胞)MEL18蛋白表达无明显变化。shmel18-HL60细胞的CD11b表达率明显增高,细胞阻滞于G1期;经低浓度CA处理后,shmel18-HL60细胞的CD11b表达率进一步增高。shmel18-HL60细胞Akt的磷酸化水平及cyclin D1表达明显下降,而p27表达则显著升高。结论:抑制mel18基因表达导致HL60细胞向成熟粒细胞方向分化,mel18基因可能通过PI3K/Akt信号途径调控cyclin D1和p27的表达,影响HL60细胞分化。而CA可能通过抑制mel18基因表达从而通过PI3K/Akt途径促进HL60细胞分化。     

姜黄素对白血病耐药细胞HL60/ADR的抑制作用

目的：研究姜黄素对白血病耐药细胞HL60/ADR的抑制作用。方法：应用MTT法检测姜黄素对细胞的细胞毒作用，流式细胞仪、荧光显徽镜观察细胞凋亡；流式细胞仪检测bcl-2蛋白表达水平。结果：姜黄素明显抑制白血病耐药细胞HL60/ADR细胞的生长，24、48、72 h的IC50分别为8．94、5．21、3．82μg/ml，姜黄素处理 HL60 72 h的IC50为 3．99μg/ml。荧光显微镜观察见核浓缩等凋亡特征性改变。AnnexinV-FTTC/PI双染见AnnexinV-FTTC单阳性细胞高达17．8％。流式细胞仪分析显示姜黄素可下调bcl-2蛋白表达。结论：姜黄素可抑制白血病耐药细胞HL60/ADR细胞的生长，与阿霉素之间无交叉耐药。     

反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸对HL60细胞Bcl-2表达的抑制作用

目的探讨Ｂｃ１－２反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）是否抑制ＨＬ６０细胞Ｂｃ１－２的ｍＲＮＡ及其蛋白的表达,以及不同浓度ＡＳＰＯ产生抑制作用的程度、效应发生和持续时间的差异。方法应用免疫细胞化学染色、流式细胞仪和ＲＴ－ＰＣＲ半定量法对与Ｂｃ１－２的ＡＳＰＯ共培养后的ＨＬ６０细胞Ｂｃ１－２蛋白及ｍＲＮＡ表达进行检测。结果Ｂｃ１－２的ＡＳＰＯ能在ｍＲＮＡ水平产生抑制作用,并减少Ｂｃ１－２蛋白的合成,且在培养２４小时即出现效应,同时随着ＡＳＰＯ剂量的增加和作用时间的延长其抑制作用更显著,但７２小时后出现回升现象。结论Ｂｃ１－２的ＡＳＰＯ能特异抑制ＨＬ６０细胞Ｂｃ１－２的ｍＲＮＡ和蛋白表达,且具浓度和时间的依赖性,同时又存在作用暂时性的问题。     

CpG-ODN诱导白血病HL60细胞分化和凋亡的研究

目的:研究含CpG基序的寡核苷酸对白血病HL60细胞的作用。方法:设计合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)、不含CpG基序的寡核苷酸(nonCpG-ODN)和含甲基化CpG基序的寡核苷酸(ZpG-ODN)分别作用于白血病HL60细胞,MTT法测定HL60细胞抑制效应,硝基四氮唑蓝还原实验和细胞表面CD14分子表达状况分析HL60细胞诱导分化结果,流式细胞仪和透射电镜观察HL60细胞的凋亡现象,免疫组化检测HL60细胞后caspase3、Bcl-2和Bax的表达状况。结果:CpG-ODN对白血病HL60细胞有诱导分化和诱导凋亡作用,nonCpG-ODN和ZpG-ODN无此作用。结论:CpG-ODN可直接诱导白血病HL60细胞分化和凋亡,此为白血病免疫治疗提供了新的途径。     

荧光示踪PLGA纳米粒与HL60细胞间相互作用

目的 纳米粒作为药物载体在临床诊断和治疗中有着广泛的研究和应用,其跨细胞膜进入细胞内部的过程与其生物效应直接相关,研究纳米粒与细胞间相互作用可揭示其相关机制.方法 通过荧光示踪法研究荧光素标记的PLGA纳米粒与HL60细胞间相互作用,采用激光共聚焦显微镜定量分析了纳米粒的入胞进程.结果 PLGA纳米粒与HL60细胞间相互作用具有很强的温度依赖性,其中受体介导的细胞内吞机制在纳米粒的入胞过程中起到了重要作用.结论 PLGA纳米粒与HL60细胞间相互作用的研究为纳米药物的设计和应用提供了一定的理论基础.     

Effect of GINS2 on Proliferation and Apoptosis in Leukemic Cell Line

Although previous researches have demonstrated that GINS2 express abundantly and abnormally in many malignant solid tumors, such as breast cancer, melanoma and hepatic carcinoma. However, the role and precise molecular mechanism in acute promyelocytic leukemia (APL) are rarely reported. In this current study, we investigated the possible effect and particular mechanism of GINS2 in occurrence and development of APL. We synthesized interference plasmid targeted GINS2 successfully in vitro and also constructed recombinant adenovirus vector carrying GINS2 gene in order to down-regulate or up-regulate GINS2 expression from two aspects of positive and negative in APL. After siRNA were transfected into HL60 cells, both GINS2 expression level of mRNA and protein in interfering group were down-regulated when compared with control groups. Together, MTT and flow cytometry technology showed that cell growth was significantly inhibited. Moreover, the expression lever of Bax was distinctly increased whereas Bcl2 was dramatically decreased in transfected group. Further experiments revealed that down-regulation of GINS2 expression inhibited DNA replication and had a G2/M phase block in HL60 cells. What''s more, ATM, CHK2, and P53 gene could involve in the pathogenic signaling pathways of HL60 cells when GINS2 gene was down-regulated. On the contrary, after HL60 cells were infected by recombinant adenovirus vector which contained GINS2 gene, we observed that over-expression of GINS2 could promote HL-60 cell proliferation. What''s more, GINS2 might implicate a potential target for leukemia gene therapy.     

硫酸软骨素对HL60细胞增殖的影响及化疗增敏作用

目的观察硫酸软骨素(ChS)对HL60细胞增殖的影响,探讨其对肿瘤生长的作用及其在恶性肿瘤化疗中的应用价值。方法应用细胞计数法进行细胞计数;用MTT法测定细胞存活率;用酶联免疫检测仪测定各组细胞的酸性磷酸酶活性。结果硫酸软骨素<50mg/L时显著促进HL60细胞增殖(P<0·01),但>50mg/L时无影响;加入阿霉素(ADR)后,ChS组的细胞生存率均有不同程度的降低,ChS浓度>25mg/L时明显降低(P<0·01);加入ChS后各组细胞的酸性磷酸酶活性明显增强,75mg/L时最为显著。结论硫酸软骨素在适当浓度时对HL60细胞的增殖有促进作用;ChS可增强ADR对HL60细胞的杀伤作用。     

慢病毒载体携带的VEGFR2 shRNA对HL60的体外杀伤作用

目的为寻找高效低毒的选择性抗白血病药物,研究慢病毒载体携带的血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)基因短发夹RNA(shRNA)对肿瘤细胞株HL60的体外杀伤作用.方法制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA,并据此设计shRNA寡核苷酸链,构建pU6/shVEGFR2入门克隆.瞬时转染细胞,采用MTT法、RT-PCR法及Western blotting测定VEGFR2表达抑制情况.构建表达克隆,与ViraPowerTM Packaging Mix共转染到293FTTM细胞中,产生携带Lenti6/shVEGFR2的慢病毒载体.将病毒上清加入HL60细胞中转导,测定HL60细胞抑制率并与pU6/shVEGFR2入门克隆脂质体转染结果比较.结果VEGFR2 siRNAc抑制HL60细胞效率最高,利用其shRNA和pENTRTM/U6构建的入门克隆转染HL60,抑制细胞效率达84.9%;显著抑制HL60细胞VEGFR2基因mRNA和蛋白的表达.pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后48 h细胞抑制率相近,48 h后入门克隆转染组细胞抑制率明显下降;而表达克隆转导组细胞抑制率变化缓慢,在96 h达高峰,120 h 稍降,变化无显著差异.结论在体外慢病毒载体携带的VEGFR2 shRNA可有效阻断HL60细胞VEGF/VEGFR2自分泌链,有效抑制白血病生长.     

PML-C与GINS2蛋白相互作用的胞内验证

目的 通过胞内实验验证PML-C与GINS2蛋白之间的相互作用.方法 将诱饵蛋白质粒pGBKT7-PML-C和文库蛋白质粒pACT2-GINS2共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建pCMV-HA-PML-C及pCMV-Myc-GINS2真核表达载体并共转染人胚肾293细胞...     

ALA-PDT对K562、HL60细胞株破坏的实验研究

探讨基于氨乙酰丙酸介导的光动力作用(ALA-PDT)对白血病细胞株HL60和K562细胞的杀伤模式及其可能机制。在ALA-PDT处理细胞的优化条件下,用透射电镜对处理细胞进行超微结构观察,选择AnnexinV-FITC/PI双标法明确ALA-PDT对两种白血病细胞的杀伤模式,PI染色流式细胞仪分析ALA-PDT后细胞周期的变化,以Fluo-3/AM为钙离子指示剂采用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度的变化。透射电镜观察发现PDT后即刻的细胞呈现典型的凋亡小体,24h后大部分发生坏死;双标法检测显示PDT后即刻及24h后细胞的死亡模式分别以凋亡和凋亡后坏死为主。光动力作用后即刻和作用后2h,K562细胞S期所占的比例分别为57.67%±1.13%和84.77%±6.20%,HL60细胞S期所占的比例分别为74.6%±7.27%和84.60%±1.74%;两种细胞内钙离子浓度的均明显升高。在最佳试验条件下,凋亡是ALA-PDT杀伤白血病细胞K562和HL60细胞的最初模式,而凋亡后坏死为其主要模式,ALA-PDT使白血病细胞株阻滞于S期,在白血病细胞株死亡的过程中,细胞内钙离子浓度的增加可能起着重要的作用。