邯郸市乙型肝炎基因分型及其临床意义研究

目的研究不同类型乙型肝炎病毒（HBV）感染者中HBV基因型分布情况及其临床意义。方法应用基因型特异性引物聚合酶链反应法（PCR）,对180份HBV感染者血清进行基因型分型。结果180份标本中,162份（90％）可检出基因型,18份（10％）未检出基因型。162份HBV基因犁分布为：B基因型1例（0．6％）,C基因型159例（98．1％）,B＋C混合基因型2例（1．2％）,未检出A、D、E、F基因型。结论邯郸地区HBV感染者中,基因划分布较单一,C基因型占绝对优势,同时存在少量B基因型及B＋C混合基因犁,C基因型可能与较严重的肝脏病变有关。     

东莞地区乙型肝炎患者HBV基因分型研究

目的检测分析东莞地区乙型肝炎(下称乙肝)患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布及其与性别、HBV血清标志物和HBV DNA定量值的关系。方法用聚合酶链反应(PCR)-微板核酸杂交-酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测6种HBV基因型,ELISA法检测血清HBV标志物(两对半),荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测血清HBV DNA定量值,并对结果进行分析。结果东莞地区206例乙肝患者HBV基因型分布:C型为主69.42%(143/206)、B型11.17%(23/206)、D型7.28%(15/206)、B+C混合型5.83%(12/206)、C+D混合型5.34%(11/206)、B+D混合型0.97%(2/206)。基因型男、女性别检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。基因型C与其它各基因型检出率比较差异有统计学意义(P<0.01)。各基因型阳性组血清平均HBV DNA定量值大于1×106(copy/ml),各基因型阳性组与基因型阴性组血清平均HBV DNA定量值比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论东莞地区乙肝患者HBV基因型分布以C型为主。基因型阳性检出率从高到低依次为C、B、D、混合型(B+C型、C+D型、B+D型)。HBV基因型检出率与性别关系不明显,与HBV血清标志物和HBV DNA定量值有一定关系。东莞地区HBV基因型分布状况可能与本地区外来人群相关。     

桂西地区克拉霉素耐药的Hp基因分型研究

目的 研究桂西地区对克拉霉素耐药的Hp基因分型.方法 于2007年3-10月在右江民族医学院附属医院胃镜室采集就诊患者胃黏膜标本,共采集患有胃炎、消化性溃疡的患者胃黏膜标本247份,分离培养获得126株Hp,E-teat进行药敏实验,REP-PCR方法进行基因分型,并运用NTsys_2软件进行聚类分析,同时收集携带耐药菌株病例的临床资料.结果 桂西地区对克拉霉素耐药的26株Hp按照相似性78%被分成6类基因型,分别是Ⅰ-Ⅵ类,每类分别有2、11、1、8、3、1株耐药性Hp;其中Ⅱ类菌株均来自胃溃疡,而且大多数来自壮族患者;Ⅳ类菌株均来自胃炎.结论 REP-PCR可以把对克拉霉素耐药的Hp分成6大类基因型,Hp感染患者的疾病类型、民族、家族胃病史等可能与基因型有关.     

江西宜春地区慢性乙型肝炎患者病毒基因型与临床分型的关系

目的探讨宜春地区慢性乙型肝炎患者病毒基因型与临床分型的关系。方法采用PCR-微板核酸分子杂交-ELISA法检测93例慢性乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒基因型,并进行肝组织病理检查。结果93例乙型肝炎患者中B基因型63例（67.7%）,C基因型30例（32.3%）。B基因型组中慢性乙型肝炎轻度52例,中度11例,无重度、重症肝炎及肝硬化患者;C基因型组中慢性乙型肝炎轻度11例,中度8例,重度4例,重症肝炎3例,肝炎后肝硬化4例。2组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论江西宜春地区HBV以B基因型和C基因型流行为主;C基因型患者较B基因型患者临床分型严重,预后较差。     

定量聚合酶链反应在干扰素治疗慢性乙型肝炎中的应用研究

本研究试通过定量聚合酶链反应检测ＨＢＶＤＮＡ含量，探讨其与干扰素（ＩＦＮ）疗效间的关系，为临床合理用药提供依据。１资料与方法１１病例选择９５例慢性乙型肝炎均系１９９７年３月～１９９８年４月间我院住院患者，其中男５７例，女３８例，年龄１６～５７岁，平...     

PCR-SSP在HLA基因分型中的常见问题

目的通过对序列特异引物引导的聚合酶链反应(PCR-SSP)在人类白细胞抗原(HLA)基因分型中常见问题的分析和总结,提出解决措施,以提高HLA基因的分型质量和效率。方法对武警总医院院内2007~2009年1 298例标本的HLA-A、HLA-B、HLA-DR、HLA-DQ基因分型中出现的问题进行总结分析。结果 1 298例标本中,1 236例可以直接判读结果,一次检出成功率为95.22%;62例标本无法直接判读出结果,在这62例出现问题的标本中无反应条带标本8例(12.90%)、阳性条带弱反应标本21例(33.87%)、漏检标本9例(14.52%)、假阳性及非特异性条带标本24例(38.71%)。结论 HLA基因分型中的常见问题的主要原因:抗凝剂使用不当、蛋白质污染、DNA的浓度过高、Taq酶的含量、加样后扩增板的放置时间等。这些主要是人为因素造成的,是可以找到原因并且避免的。     

阜阳市慢性乙型肝炎病毒感染者HBV基因型调查

目的了解阜阳市慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV基因型分布状况。方法选择165例HBVDNA阳性的慢性HBV感染者,采用型特异性聚合酶链反应(PCR)检测HBV基因型。结果 165例慢性HBV感染者中HBV基因型B型46例(27.9%)、B/C混合型29例(17.6%)、C型90例(54.5%),未发现其他基因型。结论阜阳市慢性HBV感染者基因型为B、B/C和C型,其中基因C型是主要流行株。     

乙型肝炎基因分型同耐药位点突变的关系研究

目的：探讨耐药位点突变与乙型肝炎病毒(HBV)基因分型及其他临床信息的相关性。方法以358例慢性乙型肝炎(CHB)患者为研究对象,采用聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交法检测耐药位点及基因分型。收集患者血清 HBV DNA 载量、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,以及乙型肝炎病毒 e 抗原(HBeAg)、性别、年龄、核苷(酸)类似物用药时间等临床资料。结果所有标本均成功扩增阳性条带。HBV 基因型以 B 型(267例)为主,其次为 C 型(81例)、D 型(10例)。使用核苷(酸)类似物的311患者中完全野生型269例,未用药的47例患者均未见耐药突变。耐药位点突变以204及180/204位点突变为主。耐药突变与患者性别、年龄、血清 HBV DNA 载量、病毒基因型、ALT 水平及 HBeAg 无明显相关性(P >0.05);用药时间越长,耐药突变率越大(P <0.05);180位点突变与204位点突变有一定相关性(P <0.05)。结论PCR-反向点杂交技术可有效检测 HBV 基因型及突变位点,可有效指导临床用药。     

慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA定量检测的临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）的临床意义。方法选取经肝组织病理学诊断的慢性乙型肝炎患者57例,其中乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性37例,HBeAg阴性20例;肝组织炎症轻度33例,肝组织炎症中度24例。采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）同时定量检测其血清HBVDNA和cccDNA。结果HBeAg阳性组血清HBV cccDNA对数值和阳性率分别高于阴性组,8.1±1.3vs6.5±1.9,73.0%vs30.0%（均P〈0.01）。肝组织炎症轻度组（G1～G2）血清HBVcccDNA对数值低于中度组（G3）,7.1±0.4vs8.5±0.4（P〈0.01）。血清cccDNA与丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶呈正相关（r=0.612、0.632,均P〈0.05）。结论血清HBVcccDNA为病毒复制的标志物,与肝组织细胞损伤相关。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞内乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸与肝组织损伤程度相关性分析

目的研究慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)内乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)与肝组织损伤程度的相关性。方法采用聚合酶链反应方法测定119例慢性乙型肝炎患者PBMC内HBV-DNA定量,并对肝组织进行病理学诊断。结果119例乙型肝炎患者PBMC内HBV-DNA检出率为71.4%,轻度、中度、重度慢性乙型肝炎患者PBMC内HBV-DNA阳性率分别为58.1%、69.4%、84.6%;慢性乙型肝炎患者PBMC内HBV-DNA检出率与肝组织损伤程度呈正相关(rs=0.912,P<0.05)。结论PBMC中HBV-DNA阳性率随肝损害加重而升高。     

PCR-反向点杂交法检测 HBV 耐药变异与基因型的探讨

目的：探讨 PCR-反向点杂交法检测 HBV 耐药变异与基因型的相关性及 HBV 变异位点与肝功能指标、HBVDNA病毒载量的关系。方法筛选符合条件的462例服用核苷类药物治疗的慢性乙型肝炎患者血清标本,用 PCR-反向点杂交法检测 HBV 的耐药突变位点以及基因型,并对 HBV 耐药变异与基因型、肝功能检测指标、HBV DNA 病毒载量等指标进行相关性分析。结果在462例服用核苷类药物治疗的慢性乙型肝炎患者血清中检测耐药变异株45例,变异率约为9．74％;其中180M 和204I/V 突变株16例,35．5％;204V 突变株6例,13．3％;204I 突变株13例,28．9％;180V 突变株3例,6．7％;181V 突变株3例,6．7％;207I 突变株1例,2．2％,236T 突变株3例,6．7％。HBV 基因型中 B 基因型105例,C 基因型337例,B 基因型和 C 基因型联合感染4例,D 基因型0例,其他基因型2例。将检测结果与临床资料进行相关性分析：乙肝患者的耐药变异位点与基因型、肝功能指标 ALT 无相关性（P ＞0．05）,与 HBVDNA 病毒载量有一定相关性（P ＜0．05）。结论1．茂名地区的 HBV 基因型可能与其他南方地区的基因型有差异,以 HBV-C 基因型为主;2．PCR-反向点杂交法是一种快速、准确发现核苷类药物治疗后耐药位点的检测方法;3．通过临床资料分析显示乙肝患者的耐药变异位点与肝功能指标 ALT 间差异无统计学意义（P ＞0．05）,即无相关性,HBV-DNA 病毒载量间差异有统计学意义（P ＜0．05）,即有一定相关性。     

慢性乙型重型肝炎HBV基因型和核苷酸多态性分析

目的探讨无锡地区慢性乙型重型肝炎HBV基因型和核苷酸多态性分布的特点。方法套式PCR扩增HBVDNAS基因后作序列分析。结果50例慢性乙型重型肝炎患者B基因型1例(2%),C基因型43例(86%),BC混合基因型6例(12%);各基因型死亡率无显著差异,P>0.05。B、BC混合基因型S基因第139位、140位、146位、167位、170位、176位、191位、248位、254位、328位、337位、377位核苷酸与C基因型S基因第145位、157位、203位核苷酸各有聚集性改变,其中139与140位、145与146位有联合改变,并导致相应氨基酸的置换。结论无锡地区慢性乙型重型肝炎多见于C、BC混合基因型,C、B、BC基因型核苷酸呈多态性改变。     

低水平乙型肝炎病毒表面抗原S区序列分析

目的对低水平乙型肝炎病毒表面抗原进行病毒S区基因分析。方法利用套式PCR法（Nested PCR）特异性扩增乙型肝炎病毒DNA的S区,对PCR扩增产物直接进行DNA序列分析,测序结果经Genotyping软件分型并与美国GeneBank中基因序列进行BLAST比对。结果 37例低水平乙型肝炎病毒表面抗原标本中,成功扩增并测序32份,其余5份扩增产物因不满足测序要求无法进行S区序列分析,32份成功测序标本经Genotyping分型,B型20例,C型12例,分别与GeneBank中收录的AF100309、AB014381同源性最高;血清学分型18例为adr,10例为adw,3例为ayw,1例为ayr,并发现21例S区核酸序列发生点突变,其中15例突变不会引起编码抗原决定簇氨基酸突变,为无义突变,而其他6例点突变均可引起抗原决定族编码的氨基酸的改变,从而导致表面抗原结构改变。结论对低水平乙型肝炎病毒表面抗原患者S区序列研究将为低水平乙型肝炎发病机制、流行病学以及个体化治疗奠定理论基础。     

甘肃地区藏族丙型肝炎患者的HCV基因分型研究

目的 了解甘肃地区藏族丙型肝炎患者的HCV基因分型特征.方法 对HCV感染的患者样本用实时荧光定量PCR进行病毒载量的确定.对病毒载量大于103 copy/mL的样本用多重PCR进行HCV基因分型.结果 通过对甘肃地区藏族HCV感染者的样本进行基因分型,发现该民族HCV感染以1b型(56.6%)为主,HCV感染2a型(23.3%)次之,再次为2c型(10.0%)和1c型(3.3%),未检测到3a型.结论 甘肃藏族HCV感染以1b型为主,该研究为临床针对不同基因型HCV感染者的治疗提供了依据.     

多对型特异性引物巢式PCR检测乙型肝炎病毒基因型分析

目的采用多对型特异性引物通过巢式PCR法检测HBeAg阳性患者血清中乙肝病毒(HBV)基因型的分布情况。方法根据从前S1基因到S基因中的保守序列设计出10条内外引物,并将其中8条内引物分成A、B两组分别扩增A、B、C和D、E、F型HBV,然后将第2轮PCR的两组产物分别用3%琼脂糖进行电泳,根据PCR产物片段大小直接判定HBV基因型。用该法检测15例慢性乙肝患者血清中HBV基因型,了解HBV基因型分布情况。结果 HBV基因分型结果为B型7例(46.7%)、C型4例(26.7%)、B+C型2例(13.3%),另有2例未能分型。结论人群HBV优势基因型以B型为主,C型次之。     

建立PCR熔解曲线法检测HBV基因型

摘要：目的：建立检测HBV基因型的PCR熔解曲线法,并验证该方法临床应用的可靠性。 方法：依据文献报道的HBV B、C型全基因组序列,分别设计B、C型的特异引物序列,建立HBV基因分型的PCR熔解曲线法。用该法检测186例HBV DNA阳性血清样本,并从中选取51例样本,用商品化的HBV基因分型试剂盒进行检测,用Kappa一致性检验对两法检测结果进行比较。 结果：186例标本中,PCR熔解曲线法检测到B型133例（71.5％）,C型37例（19.9％）,B/C混合型16例（占8.6％）。选取的51例样本中,熔解曲线法与市售试剂盒检测B型符合率100％,C型符合率100％,B/C混合型符合率81.25％,总符合率94.1％（Kappa=0.909,P＜0.05）。 结论：建立的PCR熔解曲线法操作简便,与商品试剂盒的检测结果有较高的符合率,可用于临床上HBV B、C以及B/C混合型的检测。     

太仓市慢性乙型肝炎患者耐药突变和基因型分布研究

目的：研究太仓地区慢性乙肝患者耐药突变和基因型分布情况,及 HBV 基因型与耐药突变的相关性。方法选择太仓地区350例慢性乙型肝炎患者,在使用核苷（酸）类药物抗病毒前,检测患者耐药突变及基因型情况,分析患者耐药突变与基因型的相关性。结果350例慢性乙肝患者,HBV 基因型分布：B 基因型172例,占49.14％;C 基因型164例,占46.85％;其中 D基因型9例,占2.57％;B、C 混合型基因型有5例,占1.42％;未发现其他基因型。本研究共检出58例耐药突变患者,其中 B 基因型22例,C 基因型35例,D 基因型1例,B、C 混合基因型患者未发现耐药突变。耐药突变位点：与拉米夫定相关的耐药突变36例（10.28％）,与阿德福韦相关的耐药突变16例（4.57％）,与恩替卡韦相关的耐药突变6例（1.71％）。结论太仓地区慢性乙肝患者 HBV 基因型以 B、C 型为主,2种基因型占90％以上,两种基因型比例相似。C 基因型患者发生耐药突变的比例较 B 基因型高,拉米夫定相关的耐药突变比例最高。建议对用药史不明确、复发再治疗的慢性乙肝患者,在接受核苷（酸）类药物治疗前进行耐药检测,选择针对性治疗方案。     

421例乙肝病毒e抗原阴性及阳性慢性乙型肝炎及相关肝病临床和病毒学特点比较分析

目的：了解乙肝病毒e抗原（HBeAg）阴性和阳性慢性乙型肝炎及相关肝病患者临床和病毒学特点。方法：对421例慢性乙型肝炎及相关肝病患者进行回顾性调查,分析HBeAg阴性和阳性的乙肝患者流行病学、病例构成、肝功能、HBV-DNA载量及乙肝前S1抗体（PreS1Ag）等指标的差异。结果：HBeAg阴性组发病率高,占57.96%,高于HBeAg阳性组,其重型肝炎、肝硬化、肝癌构成及肝功能损害指标高于HBeAg阳性组,HBV-DNA载量、PreS1Ag阳性率低于HBeAg阳性组。结论：HBeAg阴性的慢性乙型肝炎及相关肝病发病率高,进展快,预后差,是今后防治慢性乙型肝炎的重点。