慢性乙型肝炎患者HBsAg和HBsAb共阳性与preS区及S区突变关系的研究

目的 探讨HBsAg、HBsAb共阳性慢性乙型肝炎患者HBV preS及S基因突变的关系.方法 对6例HBsAg、HBsAb共阳性慢性乙型肝炎患者(试验组)、9例HBsAg阳性、HBsAb阴性慢性乙型肝炎患者(对照组)进行HBV DNA的提取及HBV基因组preS和S基因的PCR扩增和测序,比较组间突变率差异.结果 试验组与对照组所感染HBV均为B型或C型.试验组未检出preS区缺失突变,对照组检出1例preS1区15 bp缺失.试验组与对照组比较,preS/S、preS、preS1、preS2区核酸点突变率无统计学差异(P＞0.05),S区核酸点突变率有统计学差异(P＜0.05).在氨基酸水平上,试验组与对照组preS/S、preS、S、preS1、preS2区及a决定簇点突变率比较无统计学差异(P＞0.05).结论 HBV preS基因的缺失及S基因的氨基酸突变均不是B型或C型慢性乙型肝炎患者出现HBsAg、HBsAb共阳性的决定性因素.     

荧光定量PCR检测HBV DNA与血清HBV 标志物和preS1相互关系研究

目的探讨荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA与HBV血清免疫学标志(HBVM)模式,preS1之间的相互关系及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测801例血清的HBVDNA,用ELISA方法对其免疫学标志,preS1同时进行检测。结果HBVDNA的总检出率为67·0%,preS1的总检出率为74·9%。其中,在模式HBsAg( ),HBeAg( ),HBcAb( )中血清HBVDNA含量明显高于HBsAg( ),HBeAb( ),HcAb( )及HBsAg( ),HBcAb( )组。在HBsAg(-)模式中HBVDNA亦有检出。在HBsAg( ),HBeAb( ),HcAb( )组,HBVDNA的检出率为55·8%,而preS1的检出率为69·8%,两者有显著差异(P<0·01),其余HBVM模式,无显著差异(P>0·05)。结论HBVM和preS1提供了HBV感染的间接证据,荧光定量PCR法检测HBVDNA准确灵敏,是HBV感染及复制的直接证据,HBVM,preS1和HBVDNA的检测各有其独特的临床检测意义,在乙型肝炎的诊断治疗中均具有重要的临床指导价值。     

HBV DNA与preS1抗原均阳性患者HBeAg阴性的原因探讨

目的探讨导致HBVDNA阳性、preS1抗原阳性标本ELISA检测HBeAg阴性的原因。方法筛选76例HBeAg阴性而preS1及HBVDNA阳性的血清分别进行（1）血清1：100稀释后重新用ELISA测定HBeAg;（2）用单克隆抗-HBe固相ELISA检测血清HBeAg／IC;（3）用寡核苷酸探针斑点杂交法测定HBV前C区的基因突变。结果76份血清稀释后重测5例HBeAg阳性;38例HBeAg／IC阳性;24例HBV前C区存在基因突变。结论后带效应、HBeAg／IC、前C区基因突变是HBVDNA阳性血清HBeAg阴性的主要原因;HBVDNA阳性、HBeAg阴性标本多为野生型毒株感染,只是由于形成了HBeAg／IC使常规ELISA检测不出HBeAg。     

表达乙肝病毒preS2S蛋白的荷瘤小鼠模型的建立

目的:建立能表达乙肝病毒(hepatitis Bvirus,HBV)preS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,为研究HBV核酸疫苗的体内CTL应答及免疫治疗作用提供简便易行的研究模型。方法:以免疫印迹法验证SP2/0-S2S细胞中有HBVpreS2S抗原的稳定表达,将SP2/0-S2S细胞种植到BALB/c小鼠胁部皮下(荷瘤),观察能否生长成瘤,以及成瘤的时间、肿瘤大小和荷瘤后小鼠的生存时间;以免疫组织化学法检测小鼠肿瘤组织HBVpreS2S抗原的表达。以不表达preS2S抗原蛋白的SP2/0-CMV细胞荷瘤小鼠作为阴性对照。结果:荷瘤后3天～1周,SP2/0-S2S细胞可在小鼠皮下形成实体肿瘤,成瘤率为100%,肿瘤细胞中有preS2S抗原表达,荷瘤后小鼠的平均生存时间为16±1天;与不表达preS2S抗原蛋白的SP2/0-CMV细胞荷瘤小鼠相比,成瘤率、成瘤时间、肿瘤大小及生存时间差异。结论:建立了能表达HBVpreS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,可用于HBV核酸疫苗的体内CTL应答及免疫治疗作用的实验研究。同时也建立了不表达preS2S抗原蛋白的荷瘤小鼠模型,可用作阴性对照。     

乙型肝炎病毒载量与血清学标志及preS1抗原的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)载量与血清学标志及preS1抗原的关系,为乙型肝炎的诊断、疗效评估提供科学依据。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA),检测患者血清HBVDNA载量、血清学标志及preS1抗原。结果155例HBVDNA载量大于103拷贝/ml的标本中,preS1阳性136例,HBeAg阳性100例,两种检测指标间存在显著性差异(P<0·01)。preS1/HBeAg组合分析检测HBV复制的灵敏度100%、特异性78·1%。preS1或HBeAg阳性患者HBVDNA拷贝数显著高于preS1或HBeAg阴性患者(P<0·01)。结论血清preS1、HBeAg与HBV复制密切相关。作为反映HBV复制的指标,preS1优于HBeAg,preS1/HBeAg组合分析优于preS1,preS1/HBeAg在HBV的诊断和疗效评估方面有重要的临床应用价值。     

HBV preS2真核载体的构建及其表达

【目的】扩增乙型肝炎病毒（HBV）前S2基因（preS2）,并构建其真核表达载体,为研究HBV树突状细胞疫苗奠定实验基础。【方法】从慢性乙型肝炎患者血清中提取HBVDNA,用聚合酶链反应技术扩增全长preS2基因,将其克隆到真核载体pcDNA3．1（＋）上,经PCR、酶切和DNA测序鉴定筛选阳性克隆,构建真核表达载体pcDNA3．1（＋）preS2,并将其转染巨噬细胞48h后,ELISA检测细胞裂解液中preS2的表达。【结果】从慢性乙型肝炎患者血清抽提的DNA中扩增得到约860bp大小的目的片段,preS2基因片段正确插入pcDNA3．1（＋）载体,得到HBVpreS2真核表达载体pcDNA3．1（＋）-pre2。【结论】成功地构建了舍preS2基因的真核表达载体pcDNA3．1（＋）-preS2,并能在巨噬细胞中表达目的蛋白HBVpreS2。     

PCR-RFLP检测HBeAg阴性preS1抗原阳性的HBV感染者前C区基因变异

目的探讨HBeAg阴性的HBV感染者前S1(preS1)抗原阳性与前C区基因G1896A变异发生频率的关系。方法用荧光定量PCR检测64例HBeAg阴性HBV感染者血清HBVDNA,ELISA法检测preS1抗原,以错配聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析HBV前C区1896位点的基因变异。结果64例血清中preS1抗原阳性25例(39.1%),preS1抗原阴性39例(60.9%);25例preS1阳性的标本中23例(92.0%)HBVDNA阳性(19例≥103copies/ml,4例为102copies/ml,2例为检测限以下),有21例(84.0%)发生1896位点变异;39例preS1抗原阴性的标本中11例(28.2%)HBVDNA为102~103copies/ml、17例(43.6%)发生1896位点变异。preS1阳性与阴性患者1896位点变异率有显著性差异(P<0.005)。结论HBeAg阴性的HBV感染者中,preS1抗原不受前C区基因变异的影响,可以更客观地反映HBV复制状态。     

探讨preS1Ag与HBV其他抗原和DNA在诊断肝病中的价值

目的 探讨乙肝病毒前S1抗原与HbsAg、HbeAg、HBV-DNA,在诊断肝病中的应用价值.方法 对590例肝病患者血清,用ELISA法检测preS1Ag和HbsAg、HbeAg,用PCR法检测HBV-DNA的临床结果,进行回顾性分析.结果 preS1Ag、HbsAg、HbeAg、HBV-DNA,在肝病患者血清中,阳性率分别为72.4%、89.3%、45.1%、74.8%,preS1Ag与HbsAg、HBV-DNA之间,具有良好的相关性(P＞0.05);HbeAg阳性组preS1Ag与HBV-DNA的阳性率,明显高于HbeAg阴性组(P＜0.05);在慢性肝炎、重症肝炎、肝硬化和肝癌病例中,preS1Ag检出率分别为75.1%、88.7%、70.3%和63.6%;HbeAg阴性组preS1Ag阳性率为58.3%明显低于HbeAg阳性组83.4%,(P＜0.05).结论 检测preS1Ag与HbsAg及HbeAg和HBV-DNA,对乙肝病毒性肝病患者的诊断和估计预后,具有重要的临床意义.对于HbeAg阴性病例的诊断、预后评估和治疗,preS1Ag是一个更具有指导意义的参考指标.     

HBV S基因与HCV C基因嵌合真核表达质粒免疫效果研究

目的 比较三种含HBV S基因与HCV C基因嵌合真核表达质粒的免疫效果；为HBV和HCV嵌合基因疫苗研究奠定基础。方法 将同时含HBV preS1 preS2 S、preS2 S或S基因与HCV C区基因的真核表达质粒S1S2SCpcDNA3．1、S2SCpcDNA3、1、SCpcDNA3．1分别免疫小鼠，ELISA法检测血清抗HBs和抗HCV。结果 两次免疫后，全部小鼠均产生了抗HBs和抗HCV，且抗HCV的产生水平高于抗HBs；S1S2SCpcDNA3．1和S2SCpcDNA3．1质粒免疫小鼠，产生抗HBs的水平低于SCpcDNA3．1，S2SCpcDNA3．1和SCpcDNA3．1质粒免疫的小鼠，产生的抗HCV水平高于S1S2SCpcDNA3．1。结论 preS基因对抗HBs的产生、preS1基因对抗HCV的产生有负调控作用，说明不同长度的HBV表面抗原基因可以影响抗HBs和抗HCV的产生。     

完整乙肝病毒Dane颗粒标志物preS1蛋白检测药盒的研制

乙肝病毒表面抗原的ｐｒｅＳ１主要存在于含ＤＮＡ的４２ｎｍ乙肝病毒颗粒表面，可作为完整病毒颗粒存在的志。我们在筛选到抗ｐｒｅＳ１单抗的基础上，研制出ｐｒｅＳ１蛋白的检测试剂盒。经实验证实，ｐｒｅＳ１蛋白与ＨＢＶ－ＤＮＡ之间有很好的相关性，符合率为８０％。该试剂盒具有专一性强，重复性及稳定性好，操作简便等优点，可以作为检测乙肝病毒复制的一个血清学指标。     

乙肝preS1抗原与HBV-DNA拷贝数的对比研究

目的 进一步探讨乙肝preS_1抗原与HBV-DNA的关系及临床意义。方法 乙肝preS_1抗原采用双抗体夹心ELISA法检测,HBV-DNA采用荧光定量PCR法检测。结果 110例急、慢性乙型肝炎及携带者preS_1抗原阳性63例,HBV-DNA≥10~3(拷贝数/ml)有62例。其中DNA≥10~3中,preS_1抗原阳性55例(P<0.01);59例HBeAg阳性中48例preS_1抗原阳性(P<0.01)。结论 乙肝preS_1抗原与HBV-DNA的复制密切相关,它可作为乙肝早期诊断、疗效评估等的新指标。     

慢性乙型肝炎患者HBV前S1抗原及HBV-M和HBV-DNA与肝功能的关系

乙型肝炎病毒(HBV)基因组表面抗原(HBsAg)编码区(S区)由S、前S1和前S2基因组成，分别编码S、前S1和前S2三种主要蛋白，从而共同构成HBV外壳蛋白。作为一项新的HBV血清学检测指标，乙型肝炎病毒前S1抗原(HBV preS1-Ag)的检测已被普遍应用于乙型肝炎的实验室诊断和疗效观察。我们对310份慢性乙型肝炎患者血清进行了：HBV preS1-Ag、HBV-M、HBV-DNA及丙氨酸氨基转移     

前S2、前S1抗原与乙肝病毒标志物的相关性探讨

目的 探讨 HBV前S2抗原(preS2Ag)和前S1抗原(preS1Ag)与HBV-DNA和乙肝病毒标志物之间的关系.方法 采用定量PCR技术检测HBV-DNA载量, ELISA法检测preS2Ag、preS1Ag及"两对半",并对preS2Ag、preS1Ag与HBV-DNA及"两对半"各模式之间的相关性进行分析.结果 177例乙肝患者中,大三阳33例、小三阳144例、"1、5"阳30例,HBV-DNA阳性39例.乙肝病毒标志物各模式preS2Ag和preS1Ag检出率与健康对照组比较,均有非常显著性差异(P均＜0.01);小三阳和"1、5"阳模式的preS2Ag和preS1Ag检出率与HBV-DNA阳性比较,亦有非常显著性差异(P＜0.01).结论 血清preS2Ag、preS1Ag与HBV病毒复制密切相关,作为反映HBV复制的指标preS2Ag优于preS1Ag及HBeAg,preS2Ag在HBV的诊断和疗效评估中有重要临床应用价值,可为乙型肝炎的诊断、疗效评估提供依据.     

乙肝五项不同模式HBV-DNA与perS1检测结果的相关性分析

目的：比较乙肝五项不同模式之间,HBV-DNA与preS1结果的相关性。方法：同时对149份标本进行乙肝五项、HBV-DNA、preS1三项指标的检测,并对结果进行分析。结果：大三阳30例,HBV-DNA、preS1的阳性率分别为95.8%、68.4%;小三阳组58例,HBV-DNA、preS1的阳性率分别为59.1%、42.6%。1、5阳性25例,HBV-DNA、preS1的阳性率分别为75.2%、46.3%。HBsAg阴性36例,未检出HBV-DNA、preS1。结论：HBV-DNA、preS1、E抗原都能反映病毒复制情况,但preS1比E抗原更敏感,对于E抗原阴性的患者,preS1是一个判断HBV复制的有价值指标。     

两种HBV前S1蛋白试剂盒检测结果的比较与临床价值

目的比较两种前S1蛋白(preS1)试剂盒检测乙型肝炎的结果及临床价值。方法采用两种preS1试剂盒对248例HBsAg( )、41例HBsAg(-)血清进行检测,并与常见HBV血清标志物及HBV DNA结果作比较分析。结果HBsAg( )、HBeAg( )、抗HBc( ／-)7l例,HBV DNA、试剂1 preS1和试剂2 preS1的阳性率分别为97．2％、70．4％和31．0％。HBsAg ( )、HBeAg(-)、抗HBe( )、抗HBc( )156例,HBV DNA、试剂1 preS1和试剂2 preS1的阳性率分别为57．1％、39．1％和16．7％。HBeAg(-)、HBsAg( )、抗HBc( )21例,HBV DNA、试剂1 preS1和试剂2 preS1的阳性率分别为76．2％、47．6％和9．5％。41例HBsAg(-)血清未检出preS1和HBV DNA。结论preS1反映HBV复制情况较HBeAg更敏感,但试剂盒的不同影响检测结果。对于HBeAg(-)患者,preS1是一个判断HBV复制的有价值的指标。     

乙型肝炎病毒前S1蛋白与病毒复制的关系

目的探讨乙型肝炎病毒前S1蛋白(preS1)与乙型肝炎病毒血清标志物(HBV-M)以及HBV-DNA之间的关系;了解preS1在乙肝病毒感染及复制中的应用价值。方法应用ELISA法检测1254例preS1和HBV-M;应用荧光定量PCR法检测372例HBV-DNA。结果1254例中有573例preS1阳性,阳性率45.7%并且preS1阳性只存在于HBsAgHBeAgHBcAb(大三阳)、HBsAgHBeAbHBcAb(小三阳)、HBsAgHBcAb(小二阳)3种血清模式中,阳性率分别为96.0%、68.6%、81.4%,经χ2检验,3者之间差异极显著。分析372例HBV-DNA,有292例>1×104,其中preS1阳性268例,阳性符合率为91.8%,而HBeAg阳性符合率为53.4%;另外80例HBV-DNA<1×104病例中,preS1阳性率仍为50.0%,而HBeAg阳性率仅为2.5%。结论通过对preS1、HBeAg和HBV-DNA的检测分析,证实了preS1作为判断HBV病毒感染和复制的指标比单纯用HBeAg和HBV-DNA定量更敏感,更确切,更方便,是一项非常好的检测指标。     

HBV前S1蛋白的临床应用

目的了解前S1蛋白(preS1)与乙型肝炎病毒(HBV)复制的关系,以及诊断乙型肝炎的价值,判断预后中的作用。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对164例携带乙型肝炎不同病毒标志物的慢性乙型肝炎患者血清,进行preS1测定,并与HBV DNA做对比分析。检测21例急性乙型肝炎患者血清,分析preS1和HBV DNA与丙氨酸氨基转移酶(ALT)间关系。结果HBsAg、HBeAg和抗-HBc阳性组74例,HBV DNA和preS1的检出率分别是100%和96%,慢性乙型肝炎患者血清preS1、HBeAg和HBV DNA检出率高度符合(P>0.05)。HBsAg和抗-HBe、抗-HBc阳性组80例,HBV DNA与preS1蛋白的检出率分别为35%和32.5%,说明部分HBeAg阴性抗HBc阳性患者仍有病毒在复制。不同病程的急性乙型肝炎患者血清prS1和HBVDNA与ALT之间的关系,preS1与ALT相比符合率高(P>0.05)。HBV DNA与ALT相比符合率较低(P<0.05)。结论preS1能够敏感地反映乙型肝炎病毒复制的情况,尤其可以反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者病毒复制的情况。在急性乙型肝炎患者中,preS1先于HBV DNA转阴,提示疾病预后良好。     

各类慢性乙型肝炎患者HBV前S2抗原与HBV感染血清标志物及HBVDNA的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S2抗原(preS2Ag)与HBV感染5项标志物(HBV-M)、HBV DNA之间的关系及对慢性乙型肝炎分类诊断的临床意义。方法对584例各类慢性乙型肝炎患者血清采用放射免疫法(R IA)检测preS2Ag,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV-M(HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc),用聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA。结果慢性乙型肝炎轻度、中度、重度及肝炎后肝硬化患者preS2Ag的检出率分别为45.98%、67.10%、83.87%及92.86%;preS2Ag在HBeAg阳性、HBV DNA>105拷贝/mL患者中检出率明显高于HBeAg阴性、HBV DNA<105拷贝/mL患者,差异有统计学意义(P<0.001)。结论preS2Ag的检出意味着病毒有复制或有传染性;开展preS2Ag的检测有助于慢性乙型肝炎的分类、慢性乙型肝炎急性发作和预后的判断。     

乙肝病毒标记物阳性表型血清标本HBV-DNA的检验分析

目的探讨乙肝病毒标记物阳性表型血清标本乙型肝炎病毒(HBV)-DNA临床检验分析的应用价值。方法选择该院收治的358例不同的HBV标记物模式的血清标本,测定乙肝5项及preS1抗原、HBV-DNA在各种HBV-M模式中的阳性表达水平,以及preS1抗原与HBV-DNA在各种乙肝表面抗原阳性(HBsAg+)模式中的表达相关性。结果乙肝表面抗原阳性(HBsAg+)、乙型肝炎e抗原阴性(HBeAg-)、乙肝表面核心抗体阳性(HbcAb+)模式组的HBV-DNA阳性率明显高于其他模式组的阳性率,差异有统计学意义(P0.05);HBsAg+、HBeAg-、HBcAb+模式组的preS1+阳性率高于其他模式组的阳性率,差异有统计学意义(P0.05);在各种HBSAg的阳性模式中,HBV-DNA在preS1+中的阳性表达率明显高于HBV-DNA在preS1-中的阳性表达率,差异有统计学意义(P0.05)。结论 preS1能准确反映患者体内HBV-DNA的复制情况,并且可以弥补传统乙肝5项测定中的漏诊情况,同时preS1测定所需成本较低,操作简单,值得对其进行进一步的研究。