E-钙黏素mRNA在大鼠舌黏膜癌变过程中的表达研究

目的:研究上皮型黏附分子E-钙粘素mRNA在大鼠舌黏膜癌变过程中的表达及其意义。方法:采用4NQO饮水法诱导大鼠舌鳞状细胞癌发生,实时荧光定量PCR技术检测组织标本中E-钙粘素mRNA的表达情况。结果:在大鼠舌鳞状细胞癌发生过程中E-钙粘素mRNA表达降低;上皮单纯增生组、轻度上皮异常增生组、中度和重度上皮异常增生组、鳞状细胞癌组4组标本中E-钙粘素 mRNA的表达量分别是上皮正常组标本中的0.453541倍、0.207062倍、0.190954倍、0.180987倍,且鳞状细胞癌组与上皮正常组间的差异具有统计学意义。结论:在大鼠舌黏膜癌变过程中E-钙粘素mRNA表达随着病理分级的增加呈逐渐降低的趋势。E-钙粘素mRNA表达变化是大鼠舌黏膜癌变过程中的早期事件。     

大鼠舌黏膜癌变中黏着斑激酶的转录表达及其与细胞凋亡的关系研究

目的观察舌黏膜癌变过程中黏着斑激酶（FAK）的mRNA表达变化及其与细胞凋亡的关系,初步探讨其与舌黏膜癌变的关系。方法用4-亚基硝氧喹啉（4NQO）诱导大鼠舌黏膜癌变．分别获取正常、异常增生（轻、中、重度）口腔黏膜和口腔鳞癌组织。采用半定量反转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测各样本FAK的mRNA水平,用TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果大鼠舌黏膜癌变过程中,与正常口腔黏膜相比,FAK的mRNA水平在轻、中、重度异常增生口腔黏膜中无显著变化,然而在鳞癌组织中明显增高,与其他各组问相比差异有统计学意义（P〈0．05）：在黏膜癌变过程中FAK的mRNA水平与细胞凋亡呈负相关（r=-0．581,P〈0．05）。结论FAK参与了舌黏膜癌变过程,可能成为一个新的治疗靶点。     

大鼠舌鳞癌诱变过程中MMP-3、TIMP-1的表达变化及相关性研究

目的:研究基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在大鼠舌鳞癌诱变过程中转录水平表达变化及两者之间的相关性。方法:60只SD大鼠随机分为3组,每组20只,正常对照组,给予正常饮食;另2组每天喂养0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO),于16周和24周处死;16周组可见上皮异常增生,而24周组已经为舌鳞癌,分别选取8个标本作检测。各组利用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测MMP-3、TIMP-1在不同病变时期舌组织中转录水平的表达变化。结果:MMP-3及TIMP-1的mRNA于正常对照组相对表达量较少,上皮异常增生组相对表达量较正常组显著增加,舌鳞癌组的相对表达量最高。MMP-3与TIMP-1的mRNA表达之间成显著相关性。结论:MMP-3与TIMP-1随癌变的发生表达显著上调,两者间平衡失调可导致舌鳞癌的发生及发展。     

细胞角蛋白19和间隙连接蛋白43在4-亚基硝氧喹啉诱发大鼠舌黏膜癌变过程中表达的研究

目的 研究4-亚基硝氧喹啉（4NQO）诱发大鼠口腔黏膜癌变过程中细胞角蛋白19（CK19）和间隙连接蛋白43（Cx43）的表达,探讨口腔黏膜癌变过程中CK19与Cx43的相关性。方法 利用4NQO诱导SD大鼠的口腔黏膜癌变,运用免疫组织化学的方法检测CK19、Cx43在口腔黏膜癌变过程中各阶段的动态变化。结果 在大鼠正常舌黏膜组织中,CK19阳性染色的细胞散在分布于黏膜基底层;随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,CK19表达于黏膜基底上层;在口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织中,CK19阳性染色细胞分布在黏膜各层。CK19在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中阳性表达率分别为30.00%、50.00%、58.33%、80.00%、91.67%,差异有统计学意义（P<0.05）。在正常舌黏膜中Cx43蛋白主要表达于大鼠舌黏膜上皮细胞的细胞膜上,上皮的基底层、棘层和颗粒层呈阳性染色。随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,Cx43的表达明显下降。Cx43在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中阳性表达率分别为100.00%、85.71%、66.67%、40.00%、33.33%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 在大鼠舌黏膜癌变过程中,CK19蛋白表达水平随病变程度加重显著升高,提示CK19与口腔上皮细胞的癌变有关;Cx43蛋白表达水平随病变程度加重显著下降,Cx43表达下降是口腔黏膜癌变的早期事件。CK19与Cx43蛋白表达呈负相关,CK19和Cx43的联合检测对OSCC的早期诊断有重要的作用,有利于提高OSCC早期诊断的灵敏度和特异性。     

大鼠舌鳞癌诱变过程中基质金属蛋白酶13表达变化的研究

目的探讨基质金属蛋白酶13（matrix metalloproteinases 13,MMP-13）在大鼠舌鳞癌诱变过程中转录水平表达变化及其临床意义。方法 50只SD大鼠随机抽取10只作为正常对照组,给予正常饮食。另40只每天喂养0.002%4-硝基喹啉-1-氧化物,于16周时处死20只,选取处于上皮异常增生的8个标本为上皮异常增生组;24周时处死另外20只,选取发生舌鳞癌的8个标本为鳞癌组。各组利用定量逆转录聚合酶链反应检测MMP-13在不同病变时期舌组织中转录水平的表达变化。结果大鼠诱癌16周时重度上皮异常增生发生率为75.0%（15/20）,大鼠诱癌24周时舌鳞癌发生率为94.8%（18/19）。转录水平的检测显示MMP-13上皮异常增生组的表达较正常组上调,但差异无统计学意义（t=-1.759,P=0.129）;舌鳞癌组与正常组（t=-6.579,P=0.001）和上皮异常增生组（t=-6.376,P=0.001）比较MMP-13的表达均有统计学意义的上调。结论 MMP-13随癌变的发生表达显著,可能在舌鳞癌的发生过程中起着重要作用。     

RB1CC1在人和小鼠口腔癌发生发展中表达的比较研究

目的:比较视网膜母细胞瘤RB1-诱导卷曲蛋白1(RB1CC1)在人和小鼠正常口腔黏膜、上皮异常增生组织及口腔鳞状细胞癌中的表达,并探讨其在口腔癌发生发展过程中的作用。方法:采用免疫组化和RT-PCR检测人及小鼠在正常口腔黏膜、上皮异常增生、高分化鳞癌原发灶组织中RB1CC1蛋白及基因的表达情况。结果:RB1CC1蛋白在人上皮异常增生组、高分化鳞癌组的阳性表达高于正常组(P<0.05);RB1CC1蛋白在鼠正常组、异常增生组、高分化鳞癌组阳性表达逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。人RB1CC1 mRNA的表达量在异常增生组与高分化鳞癌组无明显差异,正常口腔黏膜组均高于异常增生组与高分化鳞癌组(P＜0.05);小鼠RB1CC1 mRNA的表达量在正常口腔黏膜组与异常增生组、高分化鳞癌组差别无统计学意义。结论:RB1CC1表达在人和小鼠相似, RB1CC1可能参与了口腔鳞癌的早期癌变过程。     

Krüppel-like factor 4在小鼠舌黏膜癌变过程中的表达

目的 检测Krüppel-like factor4 (KLF4)在小鼠舌黏膜癌变模型中的表达,探讨KLF4与口腔黏膜癌变的关系.方法 选用C57BL/6J小鼠75只,其中阴性对照组15只,饮用纯净水;实验组小鼠60只,饮用4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)水溶液(50μg/ml).实验组分别在第8、12、16、24周末各处死15只小鼠,取舌组织,观察并记录标本的大体损害,将其固定在10％中性福尔马林溶液中,用于HE染色及KLF4免疫组织化学染色.结果 在4NQO的诱导下,成功构建了小鼠舌黏膜癌变模型.HE染色结果显示,随着4NQO处理时间的延长,小鼠舌黏膜病变逐步加重,呈现出从单纯增生、异常增生到癌的变化.免疫组化结果显示,KLF4在口腔癌变过程中呈现动态变化,与正常口腔黏膜上皮相比,KLF4在单纯增生、异常增生上皮中的表达没有明显变化,但在鳞癌中,KLF4的表达量明显下降,具有显著性差异(P＜0.01).结论 KLF4可能在口腔黏膜上皮癌变过程中发挥抑癌基因的作用.     

4-硝基喹啉-1-氧化物诱导大鼠舌癌过程中Notch1的表达特点

目的：研究 Notch1在大鼠舌癌模型发生发展过程中的表达变化。方法：将40只 SD 大鼠随机分为对照组（A 组10只）和实验组（B、C、D组各10只）,使用质量百分比浓度为0．004％的4-硝基喹啉-1-氧化物（4-nitroquinoline-1-oxide,4NQO）饮用水喂养实验组 SD大鼠,用蒸馏水喂养对照组 SD大鼠。B、C、D组分别于8、16、24周取大鼠舌体组织;A 组在8、16、24周同时各取3只、3只、4只作为正常对照。行常规组织学观察,并使用免疫组织化学法检测 Notch1在病变不同阶段的舌粘膜内的表达。结果：4NQO可以有效诱导大鼠舌黏膜鳞状细胞癌的发生。在不同的给药时间点,可以诱导大鼠舌黏膜产生不同程度的癌前病变。Notch1在正常舌黏膜、癌前病变、舌鳞癌中的表达逐渐增高（P＜0．01）。随着异常增生程度的增加,阳性表达部位逐渐由基底层向表层扩展,且 Notch1的膜型表达逐渐增多。结论：Notch1的高表达及其在细胞膜上的集中表达可能与舌癌的发生、发展过程相关。     

大鼠舌癌变过程中MMP-2及MMP-9基因表达的变化

目的　通过观察基质金属蛋白酶 (MMP)在大鼠舌癌变过程中的不同表达 ,分析MMP在口腔鳞癌 (OSCC)及其癌变过程中的表达规律 ,探讨其与肿瘤发生、发展的关系。方法　用原位杂交方法检测 80例 4NQO饮水诱发大鼠舌癌变各期组织MMP 2和MMP 9基因表达。结果　正常粘膜、轻中度异常增生、原位癌、鳞癌的MMP 2mRNA阳性率分别为 8 3% ,2 2 6 % ,35 7% ,73 9% ;MMP 9mRNA阳性率分别为 8 3% ,19 4 % ,35 7% ,82 6 %。结论　MMP 2、MMP 9基因上调表达与口腔粘膜基底膜破坏密切相关 ,是口腔癌浸润生长的重要分子机制。     

Survivin基因和EphB4基因在金黄地鼠颊囊癌变过程中的mRNA表达及意义

目的：探讨survivin基因和EphB4基因表达在金黄地鼠颊囊癌变过程中的作用。方法：采用DMBA诱导金黄地鼠颊囊动态癌变的动物模型,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测survivin和EphB4在各组组织中的表达。结果：Survivin mRNA在正常组、上皮单纯增生组、上皮异常增生组和鳞癌组的阳性表达率依次增加,除正常组与上皮单纯增生组无显著性差异外（P〉0．05）,其余任两组均有显著性差异（P〈0．05）。EphB4 mRNA在以上任两组中的阳性表达率无显著性差异（P〉0．05）。结论：在转录水平,survivin的表达与口腔黏膜从正常到癌变的发生发展过程有关,而EphB4则与之无关。     

凋亡相关基因Bcl-2、Bax与舌鳞状细胞癌的相关性研究

目的探讨舌鳞癌组织Bcl-2和Bax基因蛋白表达与舌鳞状细胞癌发生、发展的关系。方法采用Envision免疫组织化学两步法检测10例舌慢性炎症标本、45例舌鳞状细胞癌标本及20例癌旁舌组织中Bcl-2的表达水平。结果舌鳞癌组织中Bcl-2基因蛋白阳性表达率82.22%,舌鳞癌组织中Bax基因蛋白阳性表达率62.22%,与炎症组织和癌旁组织相比,差异均有显著意义(P<0.05)。舌鳞癌组织中Bcl-2和Bax基因蛋白的表达呈明显的负相关关系(r=-0.324,P<0.01)。结论舌鳞癌组织中Bcl-2和Bax协同作用参与了舌鳞癌的发生发展,有可能成为早期诊断的指标或基因治疗的靶点。     

线粒体肿瘤抑制基因1在舌鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的 探讨线粒体肿瘤抑制基因1（MTUS1）在舌鳞状细胞癌（TSCC）中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学检测80例TSCC、27例舌白斑和13例正常舌黏膜中MTUS1的表达,并对其表达水平进行统计学分析。定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测正常舌黏膜与TSCC中MTUS1亚型的表达水平并进行统计学分析。Kapalan-Meier法分析TSCC患者生存率,并统计分析MTUS1在TSCC中的表达与生存率之间的关系。SPSS 13.0统计软件分析数据。结果 在正常舌黏膜上皮中MTUS1主要表达于棘层细胞胞浆内,部分位于胞核。正常舌黏膜中MTUS1的表达水平明显高于舌白斑（t = 5.876,P=0.037）和TSCC（t = 7.638,P=0.000 83）;舌白斑中MTUS1的表达明显高于TSCC,其差异有统计学意义（t = 5.281,P=0.0042）。MTUS1在高分化TSCC组织中的表达高于中分化和低分化者,但表达差异无统计学意义（F = 1.873,P=0.071）。定量RT-PCR检测显示,ATIP1、ATIP3a和ATIP3b是舌黏膜组织中MTUS1/ATIP的主要亚型;与正常舌黏膜相比,TSCC组织中MTUS1/ATIP亚型的表达明显降低,差异有统计学意义（t = 5.627,P=0.0153）。高表达MTUS1的TSCC患者生存率明显高于低表达者（F = 5.876,P=0.0286）。结论 MTUS1在TSCC的发生、发展中起着重要作用。     

B7-H3在口腔鳞癌细胞中的表达及其意义

目的：研究B7-H3在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织中的表达差异,以及B7-H3对口腔鳞癌细胞生物学的影响。方法：RT-qPCR、免疫组化检测B7-H3在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织的表达差异;构建B7-H3腺病毒表达载体,感染人舌鳞癌细胞Tca8113,CCK-8、PI染色流式细胞仪检测B7-H3高表达对Tca8113细胞增殖和细胞周期的影响。采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学处理。结果：RT-qPCR结果显示,口腔鳞癌组织B7-H3 mRNA表达为3.021±0.2310,显著高于正常口腔黏膜组织（0.6002±0.1010）;与对照组比较,10、50、100感染复数组在作用24h呈现促进细胞增殖作用,S期细胞比例显著增加,72h时增殖作用最强（P〈0.05）;与感染复数1组比较,同时间段50、100组促细胞增殖作用和S期细胞比例显著增加（P〈0.05）,50与100组比较无显著差异（P〉0.05）。结论：口腔鳞癌组织B7-H3mRNA和蛋白表达显著高于正常口腔黏膜组织;B7-H3高表达,可促进口腔鳞癌细胞增殖。     

苯丁酸钠对人舌鳞状细胞癌细胞凋亡影响机制的探讨

目的 探讨苯丁酸钠对人舌鳞状细胞癌Tca8113和TCSSA细胞株的生长、凋亡的影响及其分子机制,为临床治疗提供理论依据.方法 应用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测苯丁酸钠对人舌鳞状细胞癌细胞株的抑制作用,采用流式细胞仪研究苯丁酸钠对人舌鳞状细胞癌细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,应用蛋白质印迹法和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测p21和生存素基因的转录和表达.结果 苯丁酸钠对两种细胞株增殖均有明显的抑制作用;流式细胞仪检测显示苯丁酸钠诱导细胞株G1期阻滞,碘化丙啶-异硫氰酸荧光素标记的磷脂酰结合蛋白双标结果表明,苯丁酸钠能诱导细胞株凋亡,使p21的mRNA及蛋白质表达升高,与对照组比较,Tca8113细胞株的p21 mRNA及蛋白质分别增加0.09±0.08和0.72±0.10,TCSSA细胞株的p21mRNA及蛋白质分别增加1.34 4±0.12和1.56±0.09(P<0.05).生存索的mRNA及蛋白质表达下降.与对照组比较,Tca8113细胞株的生存素mRNA及蛋白质分别降低1.10±0.05和1.14±1.10,TCSSA细胞株的生存素mRNA及蛋白质分别降低1.02±0.08和0.94±0.09(P<0.05).苯丁酸钠诱导p21表达上升和生存素表达下降,二者的mRNA水平变化呈显著负相关(rs=-0.532,P<0.001),蛋白表达变化同样呈显著负相关(rs=-0.564,P<0.001).结论 苯丁酸钠能抑制人舌鳞状细胞癌细胞株增殖,诱导细胞G1期阻滞和细胞凋亡.     

P75神经营养因子受体在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:研究口腔鳞状细胞癌中p75神经营养因子受体(p75NTR)的表达,探讨p75NTR作为预测口腔鳞状细胞癌预后指标及将其作为肿瘤干细胞标志物的可能性。方法:采用SP免疫化学方法,对舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113及43例手术切除口腔鳞状细胞癌标本进行p75NTR表达的检测,另外选取5例癌旁组织及8例正常组织作为对照。应用SPSS16.0软件包,采用行×列表资料的χ2检验进行统计学分析。结果:p75NTR在Tca8113细胞膜中阳性表达。43例口腔鳞状细胞癌组织中,p75NTR阳性表达33例,在癌旁组织及正常对照组中没有表达。p75NTR均定位于细胞膜上,于癌巢中分散分布,且常有聚集性分布趋势。p75NTR表达与临床分期(P<0.05)及有无淋巴结转移(P<0.05)相关。结论:p75NTR的表达可以作为预测口腔鳞状细胞癌预后的指标,但还不能将其单独作为肿瘤干细胞的标志物,其在肿瘤发生、发展中的作用及机制仍需进一步研究。     

化疗前后Caspase-3和P73在颊粘膜鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究Caspase-3和P73在颊粘膜鳞状细胞癌中应用奥铂联合替加氟化疗前后的表达及临床意义。方法选取30例颊粘膜鳞状细胞癌患者的癌组织为实验组,10例颊粘膜良性肿瘤患者的正常黏膜为对照组。将癌组织和正常粘膜组织分为三组,即A组(化疗前)、B组(化疗后)和C组(正常粘膜)。应用免疫组织化学SP法和流式细胞术,检测Caspase-3和P73在各组中的表达。结果①免疫组化:Caspase-3在化疗前颊粘膜鳞状细胞癌中阳性率为69.65±2.75%,化疗后为83.96±3.37%,正常黏膜组织阳性率为98.53±1.08%;P73在化疗前颊粘膜鳞状细胞癌中阳性率为89.57±4.0%,化疗后为71.19±12.3%,正常黏膜组织阳性率为54.85±4.43%。②流式细胞术:Caspase-3在化疗前颊粘膜鳞状细胞癌中的表达为0.715±0.063,化疗后为0.880±0.038,正常口腔粘膜细胞为1.000±0.091。各组之间比较有显著性差异(P<0.05)。P73在化疗前为1.310±0.065,化疗后为1.134±0.037,正常粘膜细胞为1.000±0.091。各组之间比较有显著性差异(P<0.05)。结论 Caspase-3和P73可能是颊黏膜癌变的早期事件,可作为癌变监测和临床疗效观察的辅助指标。     

RKIP在舌癌组织及转移淋巴结中的表达及意义

目的：探讨RKIP在舌癌组织及转移淋巴结中的表达及意义。方法：应用免疫组化法检测RKIP在60例舌癌组和癌旁组织表达情况,比较舌癌分化良好组和分化不良组RKIP表达,将舌癌淋巴结转移组和淋巴结无转移组RKIP表达进行比较。结果：舌癌组和癌旁组织相比,RKIP表达水平明显下降,两者之间有统计学差异（P〈0．05）。舌癌分化良好组RKIP表达高,分化不良组表达低,RK1P与舌癌病理分级之间,有相关关系（P〈0．05）。转移淋巴结RKIP表达低。结论：RKIP具有抑制舌癌转移的作用,其表达的上调能促进舌癌的分化,抑制舌癌的转移。     

核因子-κB/p65 siRNA介导的舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及相关分子机制

目的：研究下调核因子κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）/p65基因的表达对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的影响,并探讨Tca8113细胞凋亡可能的分子机制。方法：利用脂质体2000将终浓度为100nmol/L的p65 siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,通过RT-PCR检测0、24、48和72hp65 mRNA的表达,并通过流式细胞术检测转染前后细胞凋亡变化,通过Caspase-Glo○R-3/7,-8和-9检测试剂盒分析caspase-3/9活性,用Western blotting技术检测p65、bcl-2和bax蛋白表达。结果：Tca8113细胞转染p65siRNA后,在48hp65 mRNA的相对表达量为0.181±0.028,显著低于未处理组0.595±0.038和对照siRNA组0.613±0.067（P〈0.05）。流式细胞术结果显示,p65 siRNA能促使Tca8113细胞凋亡,其早期凋亡比率为（23.16±1.72）%,显著高于未处理组和对照siRNA组（P〈0.01）。转染48h后,p65和bcl-2蛋白的相对表达水平明显下调,而促凋亡蛋白bax的表达显著上升,并伴随着caspase-3/9活性的显著上升。结论：NF-κB信号途径中的p65亚基可能在舌鳞状细胞癌凋亡中发挥重要作用,该研究有望为舌鳞状细胞癌的分子靶向治疗提供理论依据。     

Livin、Bcl-2在舌癌中的表达及临床意义

目的:探讨舌癌组织中Livin蛋白的表达及其与Bcl-2蛋白表达的相关性。方法:采用免疫组织化学法(SABC法)检测Livin、Bcl-2在舌癌和正常舌黏膜组织中的表达。应用SPSS 13.0统计软件对数据进行统计学分析。结果:舌癌与正常舌黏膜组织中Livin蛋白阳性表达率分别为68.89%和10%,二者有非常显著的差异(P<0.01);Livin的高表达与舌癌组织学分化程度相关(P<0.05),与颈淋巴结转移密切相关(P<0.05)。舌癌与正常舌黏膜组织中Bcl-2蛋白阳性表达率分别为60.0%和0,二者有非常显著的差异(P<0.01);经Spearman等级相关分析,Livin与Bcl-2之间呈正相关(r=0.353,P=0.027)。结论:Livin蛋白在舌鳞癌组织中高表达,显著高于正常舌黏膜组织:Bcl-2蛋白在舌鳞癌组织中高表达,而在正常舌黏膜组织中无表达:在舌鳞癌组织中Livin与Bcl-2蛋白表达呈正相关。