超声引导下经门静脉穿刺干细胞移植治疗肝纤维化

Liver cirrhosis;Mesenchymal stem cell transplantation     

经肝动脉骨髓干细胞移植治疗肝硬化的初步临床应用

目的探讨经肝动脉自体骨髓干细胞肝内移植治疗失代偿期肝硬化的临床应用可能性及效果。方法20例失代偿期肝硬化患者，乙型肝炎后肝硬化19例，酒精性肝硬化1例。Child—Pugh分级：A级2例，B级6例，C级12例。所有患者术前均行影像学及肝脏功能等检查。移植术当日抽取患者自体骨髓30～50ml，分离出骨髓干细胞，经肝固有动脉注入。对于造影发现肝内有单发小肝癌者，先行肝段超选择TACE治疗，再选择性插管至正常肝动脉供血区，注入骨髓干细胞。术后1周、2周、1月观察患者临床症状、体征，复查肝功能等实验室指标。结果2例造影发现合并单发小肝癌。20例患者中，14例有效，6例无效。所有病例术后均未出现发热、过敏反应及其他不适。结论经肝动脉行自体骨髓干细胞移植安全可行；部分肝硬化患者用此方法治疗近期有效；治疗中通过肝动脉造影可能发现其他影像学检查未能显现的早期肝癌。     

异体大鼠骨髓单个核细胞胰岛细胞移植治疗糖尿病

目的 观察异体骨髓单个核细胞和胰岛细胞通过肝脏和静脉途径移植后对糖尿病大鼠的治疗作用.方法 密度梯度离心法分离胰岛细胞,淋巴细胞分离液分离骨髓单个核细胞,28只糖尿病大鼠模型随机分为A、B、C、D组,A组在肝脏被膜下多点注射1000个胰岛细胞,B组在体外将1000个胰岛细胞和1×107个骨髓单个核细胞混合后在肝脏被膜下多点注射,C组通过尾静脉注射1000个胰岛细胞,D组在体外将1000个胰岛细胞和1×107个骨髓单个核细胞混合后通过尾静脉注射,移植后于不同时间点尾静脉测定随机血糖,比较不同细胞组合和移植途径之间对糖尿病的治疗作用.结果 A、B组血糖于术后3 d内开始下降,A组血糖可降至正常水平(7.98±2.28)mmol/L,血糖维持正常水平(3.71±0.95)d,B组降至(7.72±1. 75)mmol/L可维持(4.86±1.06)d,静脉移植组血糖于术后4 d内降至正常(7.35±1.40)mmol/L,可维持(7.85±1.46)d,D组静脉注射胰岛于4 d起效(7.00±0.83)mmol/L,血糖可降至正常水平可维持(14.10±1.21)d,各组间血糖随时间变化的趋势及维持正常水平的时间具有统计学意义(P＜0.05).结论 骨髓单个核细胞和胰岛混合细胞通过尾静脉移植对大鼠血糖维持正常时间最长,血糖控制水平最理想.     

骨髓单个核细胞移植治疗缺血性心脏病的进展

骨髓单个核细胞包括间充质干细胞、造血干细胞和内皮祖细胞,这些细胞移植到缺血心肌后可分化为心肌细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞;并且可通过旁分泌和自分泌一些细胞因子促进血管新生,防止宿主细胞和移植细胞凋亡,并使内源性修复细胞归巢,修复受损的心肌。目前国内外已进行了大量应用于缺血性心脏病的试验,这些研究采用多种途径将骨髓单个核细胞植入到冠状动脉或心肌内,包括冠状动脉内注射、静脉输入、直接室壁注射、心外膜或心内膜下输入,并通过将细胞制成碎片而提高其滞留率,或应用一些细胞因子提高治疗效果。虽然目前这些临床试验结果尚存在争议,但这些方法在治疗缺血性心脏病方面仍有前景。现对骨髓单个核细胞移植治疗缺血性心脏病的机制、移植途径、骨髓单个核细胞的滞留、归巢、存活和展望等进行综述。     

骨髓源性干细胞移植对慢性马兜铃酸肾病大鼠的治疗作用

马兜铃酸肾病（AAN）是由马兜铃酸引起的急慢性肾小管间质病变,以慢性马兜铃酸肾病（CAAN）最常见,其发病机制不清,尚无可靠的治疗方法。近年来越来越多的研究证明骨髓干细胞可以分化为肾脏细胞,这为难治性肾脏疾病的治疗提供了新思路。结合既往研究,我们发现CAAN骨髓造血干细胞特异标志物CD34^＋细胞减少,推测CAAN发病机制可能与骨髓干细胞受损相关。因此,我们建立CAAN模型,并移植骨髓干细胞,以观察干细胞向肾脏细胞分化的潜能。     

自体骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死患者的护理

采用自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植(MBMC)治疗急性心肌梗死患者28例，结果术中注入细胞悬液后出现少数自限性室性早搏1例、寒战2例，术后穿刺点出血2例，尿潴留3例。认为重视术前心理护理和术中配合，强调术后心电及动脉压监测，加强骨髓移植不良反应观察、体位护理、穿刺部位出血观察及排尿护理，有利于减少术后并发症的发生．对促进患者的康复有积极作用。     

自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化

目的 探讨自体骨髓干细胞移植对失代偿期肝硬化患者的疗效.方法 回顾性分析2009年7月至2010年3月解放军第一○五医院收治的28例失代偿期肝硬化患者的临床资料.抽取患者骨髓后,体外分离、纯化骨髓间充质干细胞(BMSCs),经股动脉置管至肝固有动脉,再将BMSCs植入肝脏.自体移植后观察患者临床症状、体征,术前、术后第2、4、8、12周检测肝功能生化指标.组间比较采用单因素方差分析,当方差齐时,组间多重比较采用LSD法分析,若方差不齐则采用Dunnett's法.结果 本组中,26例患者术后1周食欲增加,乏力明显改善;23例术后第4周腹腔积液明显减少或消失.至第12周,患者ALT由(99±36)U/L降至(48±26)U/L,AST由(86±36)U/L降至(46±22)U/L,TBil由(38±16)μmol/L降至(18±13)μmol/L,Alb由(29±4)g/L升至(35±5)g/L,PT由(19±4)s降至(13±4)s.治疗前、后患者各实验室指标比较,差异有统计学意义(F=267.35,143.52,218.74,125.57,331.25,P<0.05).本组患者未见发热、皮疹、过敏反应等并发症,其中1例髂后上棘穿刺点出现血肿,1周后自行消退;1例在施行BMSCs移植过程中出现肝区不适,移植完毕拔管后症状消失;1例于术后3个月因上消化道大出血死亡.结论 BMSCs移植治疗失代偿期肝硬化近期安全有效,远期效果有待进一步观察.     

骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死

目的探讨自体骨髓单个核细胞(BMMNCs)移植对急性心肌梗死后心脏功能及结构的影响。方法中国小型猪16头,随机分为对照组(n=6)及移植组(n=10)。建立急性心肌梗死模型后,分别注入BMMNCs/生理盐水。两组动物于术中监测血流动力学指标,术后进行影像学检查。移植组分别于2、4周后获取心脏标本,检测移植细胞标记物Hoechst33342。结果心梗4周后,移植组心梗范围较对照组显著缩小(P<0.01);血流动力学指标较对照组明显改善;局部室壁运动评分优于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。在术后2周获得的心肌标本内,可见多量Hoechst33342和MHC双阳性细胞。结论成体BMMNCs移植后,有可能抑止心室重构的发展,提高心室运动功能。     

静脉移植骨髓间充质干细胞对大鼠脊髓损伤后轴突再生的作用

目的:研究静脉移植骨髓间充质干细胞(bonemarrowstromalcells,BMSC)对脊髓损伤后轴突再生的影响。方法:体外分离、培养、扩增、纯化、BrdU标记10只同种异体SD大鼠的BMSC,WD法制成完全性截瘫的同种大鼠脊髓损伤动物模型。制模后7d随机分为A、B、C三组,A组22只,作为BMSC移植组,经鼠尾静脉移植2×106/ml的BMSC悬液1ml;B组22只,作为对照组,移植1mlL-DMEM液;C组22只,作为空白手术对照组。移植后1、2、3、4、5、6周用BBB评分评估各组后肢运动功能;移植后2、3、6周组织学及免疫组织化学观察并检测损伤段脊髓内生长相关蛋白-43(growth-associatedprotein-43,GAP-43)、神经丝蛋白200(neurofilament-200,NF200)的表达。结果:移植后3周开始,A组的BBB评分在各观察时间点明显高于B组、C组,移植后6周维持在较稳定水平,而B、C组在伤后3周开始维持在较稳定水平;在移植后2、3、6周,A组GAP-43、NF200的表达明显高于高于B组、C组,6周时开始下降,而B组与C组在移植后2、3、6周的表达均维持在相对恒定的水平。结论:大鼠脊髓损伤后静脉移植BMSC能使损伤段脊髓GAP-43、NF200表达上调,促进脊髓损伤后轴突再生和神经功能改善。     

自体骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死患者的护理

采用自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植(MBMC)治疗急性心肌梗死患者28例,结果术中注入细胞悬液后 出现少数自限性室性早搏1例、寒战2例,术后穿刺点出血2例,尿潴留3例。认为重视术前心理护理和术中配合, 强调术后心电及动脉压监测,加强骨髓移植不良反应观察、体位护理、穿刺部位出血观察及排尿护理,有利于减少 术后并发症的发生,对促进患者的康复有积极作用。     

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目的总结肝移植术后严重骨髓抑制并发症的临床特点,探讨其发生原因及预防措施。方法回顾性分析2002-2006年天津市第一中心医院收治的肝移植术后并发严重骨髓抑制6例病人的临床资料。结果所有病例均因终末期肝病进行肝脏移植,术后应用标准的免疫抑制剂方案:FK506 骁悉 激素,术后2周常规静脉用更昔洛韦预防巨细胞病毒感染。严重骨髓抑制(白细胞计数<1.0×109/L)发生于术后19~78d,临床表现包括发热伴有或不伴有皮疹、消化道症状、感染以致发生严重的败血症。5例肝功能在治疗过程中始终是正常的。所有病例均死于严重败血症及多脏器功能衰竭。结论肝移植术后严重骨髓抑制的发生可能与免疫反应、药物毒性及严重感染有关,其发生率及确切的发生机制尚不清楚。肝移植术后严重骨髓抑制一旦发生,预后极差,应根据可能的诱发因素采取积极的预防措施。     

Bone marrow cells obtained from cirrhotic rats do not improve function or reduce fibrosis in a chronic liver disease model

Mannheimer EG, Quintanilha LF, Carvalho AB, Paredes BD, Carvalho FG, Takyia CM, Resende CMC, Rezende GFM, Campos de Carvalho AC, Schanaider A, Goldenberg RCS. Bone marrow cells obtained from cirrhotic rats do not improve function or reduce fibrosis in a chronic liver disease model.
Clin Transplant 2011: 25: 54–60. © 2009 John Wiley & Sons A/S. Abstract: Background: The objective of this study was to evaluate the therapeutic potential of bone marrow cells (BMCs) obtained from cirrhotic donors in a model of chronic liver disease. Methods: Chronic liver injury was induced in female Wistar rats by the association of an alcoholic diet with intraperitoneal injections of carbon tetrachloride. BMCs obtained from cirrhotic donors or placebo were injected through the portal vein. Blood analysis of alanine aminotransferase (ALT) and albumin levels, ultrasound assessment including the measurement of the portal vein diameter (PVD) and liver echogenicity, histologic evaluation with hematoxylin and eosin and Sirius red staining, and quantification of collagen deposition were performed. Results: ALT and albumin blood levels showed no significant differences between the experimental groups two months after injection. Additionally, no significant variation in PVD and liver echogenicity was found. Histological analysis also showed no significant variation in collagen deposition two months after placebo or BMC injection. Conclusion: This study suggests that, even though BMC therapy using cells from healthy donors has previously shown to be effective, this is not the case when BMCs are obtained from cirrhotic animals. This result has major clinical implications when considering the use of autologous BMCs from patients with chronic liver diseases.     

Pure red cell aplasia after major ABO-incompatible bone marrow transplantation: two case reports of treatment with recombinant human erythropoietin

A 34-year-old man with acute myelocytic leukemia (AML: MO) and a 32-year-old woman with AML: M2 developed pure red cell aplasia (PRCA) after receiving a major ABO-incompatible bone marrow transplant (BMT). The first patient responded to recombinant human erythropoietin (rhEPO) therapy, while the second did not. The second patient also received methylprednisolone (m-PSL) but developed reticulocytosis and hemolysis after the administration of m-PSL. Plasmapheresis was then performed and the patient promptly recovered from hemolysis and PRCA. We conclude that close attention must be paid when treating PRCA following major ABO-in-compatible BMT with rhEPO and m-PSL, as there is always the potential for massive hemolysis.     

供肝冷保存门脉再灌注制备大鼠肝移植模型

目的 在Kamada"二袖套法"基础上采用供肝冷保存时经门静脉再灌注的方法建立稳定的大鼠原位肝移植动物模型,为以后进行肝移植免疫排斥、器官保存、缺血再灌注等进一步的实验研究提供安全、有效的模型制作方法.方法 将30只接受供肝移植的SD大鼠随机分为5组(n=6):A为假手术组,开腹后不做任何处理即关腹;B组供肝修整后冷保存期不进行再灌注;C组供肝修整后以5 ml生理盐水经门静脉灌注;D组供肝修整后以10 ml生理盐水经门静脉灌注;E组供肝修整后以15 ml生理盐水经门静脉灌注.然后以改良Kamada "二袖套法"完成大鼠原位肝移植模型,观察各组受体大鼠一般情况、生存情况、肝功能情况和组织病理学改变.结果 B组大鼠术后苏醒时间明显长于A组和D组(P<0.05),其存活3 d体质量下降程度均高于各组,和D组相比差异明显(P<0.05),B组存活一周体质量增加程度明显小于A、D、E组(P<0.05);B组中位生存时间明显短于A组、C组、D组和E组(P<0.05),D组和E组中位生存时间无明显差异(P>0.05);术后第1、4、7天实验组大鼠ALT显著高于对照组(P<0.05),而D组大鼠ALT值明显低于B组和C组(P<0.05);实验组术后ALB均显著低于对照组(P<0.05),但D组下降程度较低,其ALB仍明显高于B、C、E组(P<0.05),且于术后4 d开始升高,E组术后ALB始终处于较低水平.结论 通过改进技术改善肝功能,提高了生存率,尤其在冷保存时经门静脉再灌注,在供肝的质量上明显优于不进行灌注组,并应严格掌握灌注液体量,10 ml灌注量明显优于其他液体量,能有效地驱除供肝内残留的血液和气泡.     

Double bone marrow transplantation for severe aplastic anemia after orthotopic liver transplantation: implications for clinical management and immune tolerance

A 2-year-old boy underwent liver transplantation for fulminant hepatic failure of unknown cause. Four months later the child developed severe aplastic anemia. Allogeneic bone marrow transplantation (BMT) was performed using marrow from his 14-month-old HLA-identical sister. Severe aplastic anemia recurred 2.5 months later. After reconditioning a second BMT was performed using the same donor. Tapering of immunosuppression 2 years after BMT led to biopsy-confirmed rejection of the liver. Therapy with high-dose corticosteroids and an increase in cyclosporine A medication readily reversed rejection and a low-dose immunosuppression reflected by cyclosporine trough levels less than 50 ng/ml has been maintained since. Eight years later the boy is in excellent health with both bone marrow and liver functioning perfectly. In summary, this case demonstrates that even recurrent severe aplastic anemia after OLT can be cured by BMT, and that a transplanted liver can tolerate a double conditioning regimen without problems. Tolerance towards the liver through BMT did not develop.     

内皮祖细胞抑制小鼠异基因骨髓移植后肝小静脉血栓形成的作用

目的 探讨内皮祖细胞(EPC)抑制异基因骨髓移植后肝小静脉血栓形成的作用.方法 采用随机数字表法将Balb/c小鼠分为3组,单纯骨髓移植组的小鼠在全身照射后经尾静脉输注C57BL/6小鼠的骨髓单个核细胞5×106/只 ;联合EPC移植组则在单纯骨髓移植的基础上同时输注C57BL/6小鼠的EPC 5×105/只 ;正常对照组的小鼠不作任何处理.分别于移植后第0、5、10、15和20天时,计算各组小鼠的肝脏指数,光镜下观察肝小静脉血栓形成情况以及肝细胞及血管内皮损伤情况,电镜下观察肝小静脉、肝血窦内皮、肝细胞损伤及血小板黏附情况,检测外周血活化血小板的比例及肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度的变化.结果 移植后第0、5、10、15和20天时,单纯骨髓移植和联合EPC移植组的活化血小板比例、肝脏指数和外周血TNF-α浓度均呈现上升趋势,至第15天时达到高峰,随后下降,但仍明显高于正常对照组(P＜0.05) ;各时间点联合EPC移植组的上述指标均明显低于单纯骨髓移植组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与单纯骨髓移植组比较,联合EPC移植组的血小板黏附减少,肝小静脉血栓形成较少,肝细胞水肿和坏死程度均较轻,且肝脏损伤修复较快.结论 小鼠骨髓移植时联合输注EPC能显著抑制肝小静脉血栓形成,明显减轻肝脏损伤.     

自体骨髓细胞诱导肝移植大鼠长期存活的机制探讨

目的 研究自体骨髓细胞诱导肝移植大鼠长期存活的可能机制.方法 雌性受体大鼠随机分成空白对照组(A组)、D-hanks液组(B组)、全骨髓细胞组(C组)、间充质干细胞组(D组).观察大鼠的中位生存时间(median survival time,MST)、肝功能、病理变化、Sry基因原位杂交和甲胎蛋白、白蛋白免疫组化双标检测观察自体骨髓细胞的分化情况.结果 C组、D组MST均>180 d(P<0.01);血肝功能指标C组、D组降低明显,有显著差异(P<0.01);C组、D组之间比较无显著差异(P>0.05);移植术后60 d C、D组均无明显的急性排斥反应;C组、D组Sry基因原位杂交和甲胎蛋白、白蛋白免疫组化双标检测呈阳性.结论 自体骨髓细胞能减少排斥反应、诱导大鼠肝移植术后长期存活,其中间充质干细胞在移植肝内诱导分化为肝细胞发挥肝细胞功能,是其中可能的机制.     

自体骨髓移植治疗失代偿期肝硬化的临床观察

目的 研究自体骨髓经门静脉输注对失代偿期肝硬化的治疗作用。方法 回顾性分析2016年1月到2019年12月对失代偿期肝硬化患者做自体骨髓经门静脉输注的临床资料。其中30例进行常规药物保肝利尿等治疗,52例常规治疗+自体骨髓经门静脉输注,55例常规治疗+脾切除+自体骨髓经门静脉输注。结果 30例进行常规治疗后1个月和3个月与治疗前相比肝功能和血常规各项指标没有好转;2例死于消化道出血。52例常规治疗+门静脉自体骨髓输注治疗后1个月和3个月肝功能指标明显好于常规治疗（P＜0.05）;2例死于消化道出血。55例常规治疗+脾切除+自体骨髓经门静脉输注治疗后1和3个月肝功能指标明显好于常规治疗（P＜0.05）;3例手术后1周内死于创面出血诱发的肝衰竭。治疗3个月后,常规治疗+脾切除+自体骨髓经门静脉输注、常规治疗+自体骨髓经门静脉输注与常规治疗相比,在白细胞数[（6.28±1.63）×10⁹,（3.39±0.98）×10⁹,（3.04±0.65）×10⁹]、血红蛋白量[（107.16±19.25）g/L,（98.66±19.81）g/L,（92.54±17.52）g/L]、血小板数[（223.00±47.99）×10⁹,（45.52±12.93）×10⁹,（38.64±9.48）×10⁹]方面均明显增高（P＜0.05）。结论 常规治疗对失代偿期肝硬化没有明显疗效。常规治疗加自体骨髓经门静脉输注可以明显促进失代偿期肝硬化的肝功能重建,但是不能缓解脾功能亢进。脾切除加自体骨髓经门静脉输注可以解除脾功能亢进,并促进失代偿期肝硬化的肝功能重建,但是脾切除术后创面渗血容易诱发肝衰竭,有较高手术风险。对肝功能C级的失代偿期肝硬化可以先作上腹部小切口经网膜右静脉插管输注自体骨髓,待肝功能好转后,再做脾切除,可以降低手术风险。     

供体特异性输血和骨髓胸腺内注入在大鼠肝移植中的作用

目的 探讨供体特异性输血（DST）和骨髓细胞胸腺内注入(IBMC)在大鼠肝移植中的作用。方法 在建立稳定的大鼠肝移植模型的基础上，在移植当天进行DST 2ml，在移植前7d行供体胸腺内MBC注入了解能否延长移植物的存活状况。结果 移植当天行DST或(和)移植前7d BMC胸腺内注入，可将移植肝脏存活时间中位数从对照组的7d分别有效延长12d和16d(P＜0．01)，DST和IBMC联合应用时延长至33d(P＜0．01)。结论 DST和IBMC能延长大鼠肝移植的存活时间，两者联合应用有协同作用。