β-细辛醚抗动脉硬化的体外作用观察

[目的]观察β-细辛醚对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉血管内皮细胞株ECV304损伤的保护作用及其对损伤条件培养基作用下的血管壁平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.[方法]取生长稳定的ECV304细胞随机分成5组:正常对照组,模型组,β-细辛醚高、中、低剂量组.除正常组外,其他各组均加入25 μg/mL ox-LDL诱导损伤,给药组同时分别加入30、15、7.5 μg/mL的β-细辛醚.采用流式细胞术(FCM)测定ECV304细胞凋亡率、线粒体膜电位(MMP)及VSMC细胞周期各时相的DNA含量、增殖指数.[结果]ox-LDL损伤模型组ECV304细胞凋亡率显著增高,MMP降低,损伤条件培养基可促进VSMC增殖,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01或P<0.001).β-细辛醚能降低细胞凋亡率, 稳定MMP,抑制VSMC增殖,与模型组比较差异有显著性意叉(P<0.05或P<0.01或P<0.001).[结论]石菖蒲主要成分β-细辛醚的抗动脉硬化作用可能与其能有效抑制ox-LDL对ECV304的损伤作用,稳定MMP,减少细胞凋亡,抑制VSMC增殖有关.     

β-细辛醚的药代及药理作用研究进展

天南星科植物石菖蒲（Acorus tatarinowii Sehott）气味芳香,具有开窍豁痰、醒神益智、化湿和胃等功效,临床上多用于湿浊或痰浊蒙蔽心窍之神昏谵语。β-细辛醚是石菖蒲的主要活性成分之一,是石菖蒲挥发油中的六个特征成分之一,近些年来有关β-细辛醚的研究报道很多,本文对其药代动力学、药理学等方面的研究综述如下。     

石菖蒲有效部位中α-细辛醚、β-细辛醚的含量测定

目的建立石菖蒲有效部位中α-细辛醚、β-细辛醚的含量测定方法。方法HPLC法:采用翡纳米科技kromasil ODS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μL),流动相为甲醇-水(56:44),流速: 1.0 mL／min,检测波长:257 nm。结果β-细辛醚平均回收率为98.57％,RSD=0.35％;α-细辛醚平均回收率为99.75％,RSD=1.30％。结论所建立的方法简便、准确,可作为石菖蒲有效部位的质量控制方法。     

高效液相色谱法测定通塞益脑口服液中α-细辛醚和β-细辛醚的含量

目的：建立通塞益脑口服液中α-细辛醚和β-细辛醚的含量测定方法,为生产质量提供保障。方法采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Lichrospher-C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.05%磷酸溶液（54：46）,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为257 nm。结果α-细辛醚在1.248~6.240μg/mL范围内有良好的线性关系,Y =85526X-1.0581（r=0.9999）,β-细辛醚在2.632~13.159 mg/mL范围内有良好的线性关系,Y =41727X-0.0433（r=0.9999）,平均回收率分别为99.07%、101.94%,RSD分别为2.15%、2.83%（n=6）。结论该方法准确易行,便于通塞盖脑口服液的质量控制。     

α-细辛醚、β-细辛醚改善Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤及机制

目的：探究α-细辛醚、β-细辛醚对β淀粉样蛋白活性片段Aβ_25-35诱导的PC12细胞损伤模型的保护作用及相关作用机制。方法：采用Aβ_25-35诱导PC12细胞建立Aβ毒性损伤细胞模型。将PC12细胞分为空白对照组、模型对照组、α-细辛醚组（0.5、1.0、1.5?μg/mL）、β-细辛醚组（6.3、12.5、25.0?μg/mL）、血管活性肠肽（VIP）组,并设VIP拮抗剂对照。采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验检测炎症因子白介素（IL）-1、IL-10、肿瘤坏死因子（TNF）-α,氧化因子诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、一氧化氮（NO）和凋亡因子caspase-3、p53水平;蛋白质印迹法检测细胞c-Jun氨基端激酶（JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）蛋白表达。结果：与模型对照组比较,α-细辛醚组、β-细辛醚组和VIP组细胞存活率增加,细胞凋亡率下降,凋亡因子caspase-3、p53和炎症因子IL-1、TNF-α水平下降,IL-10水平升高,氧化因子iNOS和NO水平下降,c-Jun氨基端激酶（JNK）、p38MAPK蛋白表达减少（均P<0.05）。VIP拮抗剂干预后,β-细辛醚组细胞存活率下降,细胞凋亡率增加,凋亡因子caspase-3、p53和炎症因子IL-1、TNF-α水平升高,IL-10水平下降,氧化因子iNOS和NO水平升高,JNK、p38MAPK蛋白表达增加（均P<0.05）;α-细辛醚组无显著变化（均P>0.05）。结论：α-细辛醚、β-细辛醚对Aβ_25-35诱导的PC12细胞损伤模型具有保护作用,β-细辛醚可通过促进VIP的分泌,调控JNK/MAPK通路从而抑制炎症因子、氧化因子水平,改善PC12细胞凋亡;α-细辛醚作用机制与VIP分泌水平无明显联系。     

β-细辛醚体外皮肤渗透动力学研究

目的　考察β-细辛醚在不同溶剂体系中的体外皮肤渗透情况。方法　采用大鼠离体皮肤作为屏障进行体外透皮试验 ,采用 HPL C法测定在不同冰片、水性氮酮的溶剂中 β-细辛醚的含量 ,计算 2 4 h累积渗透量和稳态渗透速率。结果　 0 .1%冰片对β-细辛醚没有促透皮作用 ;水性氮酮有降低β-细辛醚透皮的作用 ;β-细辛醚在 2 0 %乙醇中 ,2 4 h累积渗透量和稳态渗透速率分别为 (35 2 .6 2 4± 87.0 4 9) μg/ cm2、(18.90 2± 4 .84 0 ) μg/ (cm2· h)。结论　不加促渗剂的β-细辛醚溶剂体系 ,透皮吸收情况最好。     

β-细辛醚及石菖蒲挥发油中β-细辛醚在家兔体内的药代动力学

目的:研究β-细辛醚及石菖蒲挥发油中β-细辛醚的药物代谢动力学.方法:采用气相色谱法测定β-细辛醚的血药浓度,色谱柱:HP-35毛细管气相色谱柱;程序升温:起始温度为30℃,6℃/min升至220℃,保持5 min;进样口温度250℃;检测器温度320℃;进样量2.0 μL;无分流进样;溶剂:甲醇;载气:氦气;柱头压:5.5×104 Pa;内标物:α-萘酚.结果:建立了用气相色谱法测定β-细辛醚血药浓度的方法,线性方程:Y=0.01889ρ 1.755×10-3(n=6,r=0.9999),线性范围:0.04～40.00mg/L.兔全血中最低检测浓度为:0.04mg/L. β-细辛醚灌胃ig后,在兔体内符合一级吸收二室模型,T1/2(α)为7.5 min,T1/2(β)为69.6 min.家兔灌胃石菖蒲挥发油后,β-细辛醚在体内的药时过程为线性动力学过程,同样符合一级吸收二室模型,T1/2(α)为18.3 min,T1/2(β)为114.5 min.结论:本实验的研究结果为中药石菖蒲的合理用药以及进一步开发石菖蒲新制剂提供了参考依据,同时,也为中药材中挥发油类有效成分的药代动力学研究提供了可供借鉴的方法.     

β-细辛醚对PC12细胞、血管平滑肌细胞、人静脉内皮细胞缺氧损伤的影响

目的：探讨缺氧对脑神经细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞的损伤顺序及β-细辛醚干预后对上述损伤的影响。方法：观察β-细辛醚对PCI2细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞缺氧损伤形态变化,配合以MTF法和流式细胞分析法对各种细胞缺氧损伤后的存活和凋亡时间及状况进行分析。结果：在缺氧0．5h时神经细胞凋亡率达到40％,在缺氧1．5h时血管内皮细胞和血管平滑肌细胞凋亡率达到40％。β-细辛醚0．015mg／ml组,0．03mg／ml和0．06mg／ml组对PCI2细胞、血管平滑肌细胞均有保护作用,且呈剂量依赖性;β-细辛醚0．015mg／ml组对血管内皮细胞无保护作用;0．06mg／ml和0．03mg／ml组均有保护作用。结论：一定剂量的β-细辛醚具有保护脑神经细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞免受缺氧损伤,提高细胞存活率的作用。     

石菖蒲中α、β-细辛醚含量的测定

Grass leaved Sweetflag (Shi chang pu),a traditional Chinese drug, is dried rhizome of Acorus tatarinowii Schott. and the main active components are αand β asarone.In order to control the interior quality of the Grass leaved Sweetflag, the HPLC method was built to determine the Contents ofαand β asarone in Grass leaved Sweetflag. The method was superior to the GS/MS method.     

β-细辛醚对缺血—再灌注损伤心肌细胞的保护作用

[目的]观察石菖蒲有效成分β-细辛醚对缺血-再灌注损伤(MI-RI)心肌细胞的保护作用.[方法]培养原代乳鼠心肌细胞,采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)复制心肌细胞MI-Rl模型,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞存活率,紫外分光光度法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的含量,利用流式细胞术(FCM)检测线粒体膜电位(MMP)平均荧光强度.[结果]β-细辛醚能显著提高MI-RI模型细胞存活率,降低培养液中LDH、CK的含量,提高MMP值(均P＜0.05).[结论]β-细辛醚时MI-RI心肌细胞具有保护作用,其作用机理可能与减轻细胞膜损伤,降低线粒体膜通透性有关.     

β-细辛醚对抑郁模型大鼠海马组织及Bax、Bcl-2的影响

目的:探讨β-细辛醚对抑郁模型大鼠海马组织及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:经过敞箱实验选取得分相近的2~3个月龄SD大鼠80只,按随机数字表法分为四组,每组20只,结合孤养并给予慢性轻度不可预见刺激,复制抑郁模型,于造模成功第2天开始,分别给予氟西汀组和β-细辛醚组1.2 mg/(kg·d)氟西汀和25 mg/(kg·d)β-细辛醚灌胃,模型组与正常组给予等体积生理盐水。于第21天对大鼠处死取脑,免疫组织化学法检测Bax、Bcl-2蛋白相对含量。结果:模型组大鼠海马组织神经元数目减少,散在排列,细胞核发生固缩变形,CA1区,CA3区变化显著。与模型组比较,β-细辛醚组、氟西汀组Bax蛋白表达均显著降低(P0.01)。结论:β-细辛醚可以降低大鼠海马组织Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达。     

定志小丸有效成分中人参皂苷Rb3联合β-细辛醚对血管性痴呆模型小鼠作用研究

目的 研究定志小丸有效成分中人参皂苷Rb3联合β-细辛醚对血管性痴呆模型小鼠的作用.方法 采用四血管阻断法建立血管性痴呆小鼠模型后,随机分为模型组、人参皂苷Rb3组(10 mg/kg)、β-细辛醚组(10 mg/kg)、人参皂苷Rb3联合β-细辛醚组(10 mg/kg +10 mg/kg)、盐酸多奈哌齐组(1 mg/k...     

石菖蒲挥发油β-细辛醚对支气管哮喘的影响

【目的】观察石菖蒲挥发油β-细辛醚喷雾给药对支气管哮喘模型豚鼠的影响。【方法】豚鼠30只,随机分为模型组、氨茶碱组和β-细辛醚组,各组豚鼠喷雾给药7 d后,以组织胺(His)和乙酰胆碱(Ach)喷雾复制哮喘模型,观察药物对模型豚鼠引喘潜伏期和跌倒潜伏期的影响;取豚鼠气管,置克—亨氏液浴槽内,观察药物对His和Ach造模后,离体气管平滑肌张力的影响;豚鼠30只,分组同前,先以40 g/L卵蛋白(OVA)和Al(OH)3致敏,连续喷雾给药7 d后,再以OVA喷雾引喘,观察各药物对模型豚鼠支气管和肺组织中肥大细胞脱颗粒数的影响。【结果】β-细辛醚可延长His和Ach引喘的模型豚鼠的哮喘发作潜伏期和跌倒潜伏期;拮抗因His和Ach所致的离体支气管平滑肌痉挛;抑制由OVA和Al(OH)3引喘的模型豚鼠的肥大细胞脱颗粒,与模型组比较均有显著性差异(P<0.05或P<0.01或P<0.001),与氨茶碱的作用相仿。【结论】β-细辛醚具有一定的平喘和抗过敏作用。     

吲哚-3-原醇对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

【目的】探讨吲哚-3-原醇(indol-3-carbinol,I3C)对人低分化鼻咽癌细胞株CNE-2的作用及其机制。【方法】将对数生长期的CNE-2细胞分成空白对照组和I3C组。空白对照组细胞常规培养,I3C组细胞培养体系中加入I3C(50μmol/L)。各组细胞培养48 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;Annexin V-碘化丙啶/异硫氰酸荧光素(PI/FITC)检测细胞凋亡,Real-time PCR检测细胞中胞外信号调节激酶(ERK)和Bax、Bcl-2基因表达;Western blot法检测细胞中ERK、p-ERK、Bax、Bcl-2蛋白表达,Caspase3活性试剂盒检测Caspase3活性。【结果】I3C组与空白对照组比较,CNE-2细胞增殖率显著下降(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05),Real-time PCR检测显示I3C组与空白对照组比较,ERK m RNA表达无显著性差异,但Bax m RNA表达水平显著增高(P<0.001),Bcl-2 m RNA表达水平显著下降(P<0.05)。Western blot法检测显示,I3C组与空白对照组比较,ERK总蛋白无明显变化(P>0.05),但p-ERK和Bcl-2蛋白表达显著减少(P<0.05),Bax蛋白表达和Caspase3活性显著增加(P<0.05)。【结论】吲哚-3-原醇能通过抑制ERK信号传导通路激活而抑制CNE-2细胞增值和促进CNE-2细胞凋亡。     

β-细辛醚对阿尔茨海默病大鼠海马神经元突触可塑性的影响

目的 探讨石菖蒲挥发油主要成分β-细辛醚对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马神经元突触可塑性的影响.方法 以雄性Sprague-Dawley大鼠为研究对象,建立AD动物模型,用不同剂量β-细辛醚[12.5、25、50 mg/(kg·d)](分别为β-细辛醚低、中、高剂量组),连续灌胃4周;生理盐水组予等量生理盐水灌胃,正常对照组不予任何造模处理.Morris水迷宫检测动物的空间记忆能力;JC-1法检测海马组织线粒体膜电位;利用透射电镜观察海马CA1区突触数量及结构的变化;实时定量PCR比较各组生长相关蛋白43(GAP-43)、突触素(SYP)、突触后致密蛋白95(PSD-95) mRNA表达水平的差异.结果 水迷宫结果显示β-细辛醚高剂量组大鼠逃避潜伏期明显比生理盐水组要短.AD大鼠海马线粒体膜电位较正常对照组明显降低;而β-细辛醚处理组大鼠海马线粒体膜电位均增加,β-细辛醚高剂量组增加最明显.透射电镜结果证实β-细辛醚处理组大鼠海马CA1区突触数量增多,尤其是β-细辛醚高剂量组.PCR结果表明,与生理盐水组相比,β-细辛醚中、高剂量组中SYP mRNA表达量明显增加;而β-细辛醚处理组GAP-43和PSD-95 mRNA表达量明显降低,尤其是β-细辛醚高剂量组.结论 β-细辛醚通过影响海马神经元的突触可塑性,从而改善Aβ1-42导致的大鼠认知功能障碍.     

β-细辛醚微乳的制备及其性质考察

目的 制备β-细辛醚微乳，并对其性质进行考察。方法 根据β-细辛醚在各溶媒中的溶解度初步确定处方组成，通过绘制伪三元相图对处方进行优化；采用HPLC法测定微乳中β-细辛醚的质量分数；以外观、粒径及其分布、多分散指数（PI）、pH值、黏度和β-细辛醚的质量分数为指标考察所制备微乳的初步稳定性。结果 优化的处方组合为β-细辛醚-肉豆蔻酸异丙酯-聚氧乙烯蓖麻油-丙三醇的质量比为1∶2∶8∶2。制备的微乳澄清透明，有蓝色乳光，平均粒径为（18.2±0.2）nm，PI为0.222±0.005，pH值为6.50±0.01，10 000 r/min离心10 min后和高温灭菌后均无分层现象，平均载药量为（21.5±0.48）mg/mL。结论 所制备的微乳理化性质较稳定，符合鼻腔给药制剂的标准。     

β－细辛醚对抑郁模型大鼠海马神经元细胞的影响

目的探讨β－细辛醚对抑郁症大鼠海马区细胞的影响。方法将80只SD成熟雄性大鼠随机分为4组,即正常组、模型组、氟西汀组（剂量为1．2 mg／kg）、β－细辛醚组（剂量为25 mg／kg）。除正常组外,其他3组复制抑郁症大鼠模型后分别给药,21 d后,采用流式细胞术及TUNEL法,分别对各组大鼠进行凋亡细胞的数量及形态学的检测。结果与正常组比较,抑郁模型组大鼠海马CA3、 DG区出现典型的凋亡细胞,且凋亡率及凋亡细胞数量差异均有统计学意义（P＜0．01）。与模型组比较,β－细辛醚组与氟西汀组海马区凋亡细胞数量及凋亡率均显著降低（P＜0．01）。结论β－细辛醚可能通过减少细胞凋亡的方式对抑郁症大鼠海马区细胞起到保护作用。     

β-细辛醚对抑郁模型大鼠海马CA3区超微结构的改变及脑组织ERK蛋白表达的影响

目的：探讨β-细辛醚对抑郁模型大鼠海马CA3区超微结构及脑组织ERK蛋白表达的影响及干预作用。方法：选取60只4~5月龄SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、氟西汀组和β-细辛醚组,每组15只。采用慢性轻度不可预见性应激制作大鼠抑郁模型,造模第2天开始,氟西汀组和β-细辛醚组给予氟西汀和石菖蒲干预,于实验第1、7、14、21天,分别进行体重、糖水偏爱度检测和敞箱实验,对大鼠行为学改变进行评定。采用电镜技术观察大鼠大脑组织海马CA3区超微结构的改变,采用免疫组织化学染色和计算机图像分析技术测定检测ERK蛋白阳性目标积分光密度及其表达的变化。结果：电镜观察结果显示：模型组大鼠海马神经元凋亡增加,β-细辛醚能改善大鼠海马病理改变;免疫组化结果显示：与模型组比较,氟西汀组和β-细辛醚组大鼠行为学指标显著改善,海马区ERK蛋白表达增强,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：β-细辛醚可显著改善抑郁模型大鼠的抑郁症状,其作用机制可能与增强ERK蛋白表达有关。     

β-细辛醚通过PKA/CREB信号通路对快速老化痴呆小鼠脑组织凋亡机制的影响

目的研究β-细辛醚对快速老化痴呆小鼠大脑组织蛋白激酶A(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的影响。方法选取健康昆明小鼠10只作为对照组,30只快速老化小鼠被随机分为模型组(10只)、实验组(10只)、治疗组(10只)。对照组采用生理盐水灌胃,2 mL/次;实验组采用β-细辛醚混浊液灌胃,2 mL/次;治疗组采用脑复康水溶液5 mg/mL灌胃,2 mL/次;模型组采用生理盐水灌胃,2 mL/次。所有小鼠均每天灌胃1次,持续3周。3周后进行小鼠行为学测试,检测脑组织PKA、CREB酶改变及光镜和电镜下神经元细胞形态变化。结果实验组和治疗组与模型组相比,潜伏期明显缩短、在原平台停留时间延长,PKA、CREB活性与模型组比较均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。光镜下观察实验组海马神经元损伤较轻,大部分细胞核清楚完整,电镜下核周隙清晰,细胞器清晰,神经纤维较丰富。结论β-细辛醚能提高快速老化痴呆小鼠知识记忆能力,影响PKA/CREB传导路径和突触结构,减少快速老化痴呆小鼠大脑组织神经元损伤,对快速老化痴呆小鼠有明显治疗作用。     

TCF3对非小细胞肺癌A549细胞株生长和迁移的影响

目的:探讨T细胞因子3(T cell factor 3,TCF3)基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞株的Wnt通路转录活性及细胞生长和迁移的影响。方法:采用RNAi技术将TCF3基因沉默作为实验组,同时设立空白对照组和阴性对照组。采用实时荧光定量PCR及Western blot检测各组细胞中TCF3的m RNA和蛋白表达水平,通过TOPFlash/FOPFlash双荧光素酶报告基因检测Wnt通路转录活性,CCK-8检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移能力。结果:与空白对照组和阴性对照组比较,实验组TCF3的m RNA和蛋白水平明显下调;TOPflash/FOPflash报告基因的比值降低(P=0.00,P=0.00);Wnt靶基因C-myc的蛋白表达量下降(P=0.00,P=0.00);细胞的增殖活性降低,细胞凋亡率增加(P=0.00,P=0.00),细胞周期比例发生变化,G0/G1期细胞增多(P=0.01,P=0.00),S期细胞减少(P=0.01,P=0.00);细胞迁移能力减弱(P=0.00,P=0.00)。结论:在肺癌细胞中,TCF3可能作为转录激活因子对细胞的恶性生物学行为起着正向调控作用。