维生素D_3、顺铂对人卵巢癌细胞株的作用及Ki-67,Bax蛋白表达的影响

目的:观察1,25(OH)2VitD3、顺铂对人卵巢癌细胞株增殖及凋亡的作用及Ki-67,Bax蛋白表达情况。方法:MTT法检测1,25(OH)2VitD3单独及其与顺铂合用后卵巢癌细胞的抑制率、流式细胞术测定细胞周期及凋亡率、免疫组化法检测Ki-67,Bax蛋白表达情况。结果:1,25(OH)2VitD3、顺铂均可抑制HO-8910细胞的生长(P<0.01),阻滞细胞于G0/G1期并诱导HO-8910细胞凋亡(P<0.01),当两者合用时Ki-67几乎不表达,而Bax蛋白表达增强(P<0.01)。结论:1,25(OH)2VitD3与顺铂合用有协同抑制增殖和诱导凋亡的作用。     

活性维生素D_3 顺铂对卵巢癌HO-8910细胞株的凋亡研究

目的观察1,25(OH)2维生素D3单独及其与顺铂合用对人卵巢癌细胞株凋亡的影响及Bax蛋白的表达情况。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞抑制率,流式细胞术测定细胞周期及凋亡率,免疫组织化学法检测Bax蛋白表达情况。结果1,25(OH)2维生素3、顺铂均可抑制HO-8910细胞的生长(P<0.01)、均可阻滞细胞于G0/G1期并诱导HO-8910细胞凋亡(P<0.01),当两者合用时上述作用加强,凋亡率明显上升(P<0.01),两者均可上调Bax蛋白表达(P<0.01),两者合用时Bax蛋白表达增强(P<0.01)。结论1,25(OH)2维生素D3与顺铂合用能协同抑制HO-8910细胞的生长并进一步诱导其凋亡。     

1,25-二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖与S期激酶相关蛋白及抑癌基因p27表达的影响

目的 观察1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖及S期激酶相关蛋白（Skp2）基因、抑癌基因p27表达的影响,探讨其抗癌机制.方法 应用免疫组织化学方法检测人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达维生素D受体（VDR） 选用人子宫内膜癌HEC-1-A细胞进行体外培养,用CCK-8法测定不同浓度1,25-二羟维生素D3作用细胞后不同时间后细胞生长抑制率,流式细胞仪进行细胞周期分析,采用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）及蛋白质印迹法检测Skp2/p27基因表达的变化.结果 人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达VDR,且定位于细胞核内 1×（10-8～10-6）mol/L浓度的1,25-二羟维生素D3作用于HEC-1-A细胞1～5 d范围内各不同浓度处理组细胞生长增殖均受到明显抑制,并且随着作用浓度增加,细胞增殖能力逐渐下降 1,25-二羟维生素D3能增加G0/G1期细胞比例,降低S、G2/M期细胞比例,从而降低细胞增殖指数（P＜0.01） 在mRNA、蛋白质水平上,能降低Skp2表达,而p27mRNA减少,p27蛋白表达明显增加.结论 1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞有抑制作用,可能是通过转录水平下调Skp2基因表达,同时由于Skp2的减少增加p27蛋白稳定性,减少其降解,从而产生抑癌作用.     

1,25-(OH)2D3对胰腺癌细胞诱导分化的研究

目的研究1,25-(OH)2D3对胰腺癌细胞的诱导分化作用。方法经1,25-(OH)2D3处理人胰腺癌细胞株Bxpc-3,采用电镜观察形态学;流式细胞仪测定细胞周期动力学;免疫组化法检测p21、DPC-4/Smad4蛋白的表达。结果10-7mol/L1,25-(OH)2D3能使Bxpc-3细胞形态发生变化,细胞周期时相分布出现G0/G1期阻滞,细胞周期有关蛋白p21及DPC-4/Smad4蛋白表达上调。结论10-7mol/L1,25-(OH)2D3具有明显诱导胰腺癌细胞良性分化的作用。     

塞来昔布顺铂对卵巢癌细胞HO-8910增殖与凋亡影响的研究

目的探讨选择性环氧化酶(COX)-2抑制剂塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖与凋亡的影响及Survivin、增殖细胞核抗原(PCNA)、COX-2蛋白表达情况。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度塞来昔布单用及其与顺铂联用时HO-8910细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率;免疫组织化学法检测Survivin、PCNA、COX-2蛋白的表达情况。采用方差分析和LSD-t检验进行统计分析。结果塞来昔布、顺铂均可抑制HO-8910细胞的生长(P<0.01);当两者合用时G0/G1期细胞增加,凋亡率增高更加明显(P<0.01),Survivin、PCNA、COX-2蛋白表达下调(P<0.01)。结论塞来昔布、顺铂对卵巢癌细胞株HO-8910均有抑制作用,塞来昔布能增强顺铂的抗卵巢癌作用。     

辛二酰苯胺异羟肟酸对人卵巢癌细胞恶性表型的抑制作用

目的 探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对人卵巢癌细胞恶性表型的作用及其可能的分子作用机制。方法 （1）选取 2 组人卵巢癌细胞(SKOV3 和 SKOV3/DDP; HO8910 和 HO8910-PM)后, 设置对照组和终浓度为 1、 3、 5 及 7 μmol/L SAHA 组(SAHA 1~4 组), 采用 CCK-8 法分别检测 SAHA 对细胞增殖的影响。（2） 设置对照组和 SAHA 1、 2 组(2 和 5 μmol/L), Annexin V-FITC/PI 双标记流式细胞术分别检测 SAHA 对细胞凋亡及周期的影响。（3） RT-PCR 和 Western blot 检测 SAHA 1~4 组表型相关蛋白的表达水平。结果 （1）随着 SAHA 浓度的增加, SKOV3 细胞株 SKOV3/DDP 及 HO8910 细胞株 48 h 光密度 （OD） 值均呈逐渐降低趋势(均 P＜0.05)。（2） 48 h SAHA 1、 SAHA 2 组凋亡率高于对照组(均 P＜0.05); SAHA 作用 48 h, 细胞周期发生阻滞, 与对照组比较, SAHA 1 组和 SAHA 2 组 SKOV3 和 SKOV3/DDP 细胞 S 期和 G2/M 期比例增高, HO8910 和 HO8910-PM 细胞 G0/G1期比例增高(P＜0.05)。（3） SAHA 1、 2 组 CyclinB1 和 Cdc2(p34)的 mRNA 表达水平均低于对照组, Caspase-3、 p21 和 p53 的 mRNA 表达水平明显高于对照组(P < 0.05); SAHA 1~4 组 Ac-Histone H3 和 Ac-Histone H4 和 p53 蛋白的表达较对照组明显增强, CyclinB1、 Cdc2 (p34)蛋白的表达减弱。结论 SAHA 通过调节恶性表型相关蛋白 Caspase-3、 p53、 CyclinB1 和 Cdc2(p34)的表达水平, 促进组蛋白乙酰化, 抑制卵巢癌细胞增殖, 阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。     

1，25二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞Skp2mRNA的影响

目的检测1,25二羟维生素D3[1,25（OH）2D3）对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞作用后S期激酶相关蛋白（skp2）表达情况．以探讨其抗癌机制;方法选用人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A进行体外培养,采用RToPCR在mRNA水平检测Skp2基因表达的变化;结果（10^-8-10^-6）mol·L^-1浓度的1,25（OH）2D3作用于HEC-1-A细胞随着作用浓度增加、作用时间延长。细胞增殖能力逐渐下降。Skp2mRNA逐渐减少;结论1,25（OH）2Db对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A有抑制作用．可能通过转录水平下调Skp2基因表达．从而产生抑癌作用。     

Skp2-siRNA干预对Eca-109食管癌细胞系p21和p27蛋白及细胞周期的影响

目的探讨Skp2-siRNA干扰后食管癌Eca-109细胞株Skp2、p21和p27蛋白表达情况及其对细胞增殖调控的影响。方法经Skp2-siRNA干扰食管癌Eca-109细胞株24、48和72 h后,用免疫细胞化学法检测Skp2、p21和p27蛋白的表达情况,流式细胞仪检测细胞增殖周期的分布。结果食管癌Eca-109细胞株主要分布在G1期,Skp2蛋白表达下降（P＆lt;0.05或＆lt;0.01）,p21和p27蛋白的表达增高（P＆lt;0.05或＆lt;0.01）。结论运用Skp2-siRNA技术可以有效降低对p21和p27蛋白的降解,促进细胞停滞在G1期,降低细胞增殖活性。     

血管紧张素Ⅱ受体抑制剂对人卵巢癌细胞抑制作用的研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂(氯沙坦)对人卵巢癌HO89101细胞的体外生长的影响。方法采用体外实验的方法将不同浓度的Losartan作用于HO8910细胞后,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察氯沙坦对HO8910细胞增殖的抑制作用,并采用流式细胞仪分析氯沙坦对HO8910细胞增殖周期的影响。结果①不同浓度的氯沙坦对HO8910细胞有抑制其生长的作用(P<0.05),并呈现剂量依赖性关系;②细胞周期分析显示氯沙坦使HO8910 G0/G1期细胞明显增加,而S和G2/M期的细胞减少,说明细胞被阻滞在G0/G1期,细胞增殖被抑制。结论氯沙坦可以抑制HO8910细胞的体外增殖,细胞被阻滞在G0/G1期,诱导细胞进行程序性死亡。     

1,25-二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖与S期激酶相关蛋白及抑癌基因p27表达的影响

Objective To investigate the expressions of vitamin D receptor (VDR) in endometrial carcinoma cell HEC-1-A;to study the effect of 1,25-(OH)2D3 on prolifetation of human endometrial carcinoma cell HEC-1-A and the mechanism of detecting the expression of S-phase kinase associated protein 2 ( Skp2 ) and p27 gene.Methods Expressions of VDR in human endometrial carcinoma cell HEC-1-A were detected by immunohistochemical method. HEC-1-A human endometrial carcinoma cell line were cultured in vitro and treated with different concentrations of 1,25-( OH)2D3 for 1-5 days. Cell proliferation was evaluated by CCK-8 method, distribution of cell cycle were determined by flow cytometry. The expression level of Skp2/p27 mRNA was examined by real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR). The expression level of Skp2/p27 protein was finally detected by Western blotting. Results (10-8-10-6) mol/L 1,25-(OH)2D3 inhibited the proliferation of HEC-1-A cell line,and inhibitory rate was positively associated with concentration of 1,25-( OH)2D3 and treatment time. 1,25-(OH)2D3 increased the rates of G0/G1, decreased the rates of S and G2/M and also decreased cells PI (P ＜0.01 ). The mRNA and protein expression of Skp2 in HEC-1-A cell lines after 1,25 (OH)2 D3 treatment decreased.The level of p27 mRNA was decreased but the level of p27 protein was significantly increased. Conclusions 1 ,25-(OH)2D3 can inhibit the growth of HEC-1-A cell line. It may inhibit cancer cell proliferation through down-regulation of Skp2 gene and increase p27 stability by decreasing the abundance of Skp2.     

雌孕激素对人卵巢癌细胞KLK5 mRNA表达和增殖的影响

目的探讨雌孕激素对其受体阳性人卵巢癌HO8910细胞中组织激肽释放酶5(KLK5)基因mRNA表达的调控。方法取对数生长期的HO8910细胞,雌激素组分别加入10-10、10-9、10-8、10-7mol/L的17-β雌二醇(17-βE2),孕激素组分别加入10-7、10-6mol/L的黄体酮(P),对照组加入无水乙醇,培养72h。用实时荧光定量逆转录PCR检测各实验组和对照组中KLK5mRNA表达变化。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖。结果作用72h后,17-βE2各实验组(10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)HO8910细胞KLK5mRNA水平均高于乙醇对照组(P<0.01);P各实验组(10-7、10-6mol/L)HO8910细胞KLK5mRNA水平均低于乙醇对照组(P<0.01)。经MTT检测17-βE2各实验组HO8910细胞光吸收度A值与乙醇对照组相比明显增加(P<0.01);P各实验组细胞光吸收度A值与乙醇对照组相比明显降低(P<0.01)。结论雌激素对KLK5mRNA的表达具有上调作用,同时能促进卵巢癌HO8910细胞的增殖;而孕激素作用正相反。     

Effects of 1,25-dihydroxyvitamin D3 analogue 1,24(OH)2-22-ene-24-cyclopropyl D3 on proliferation and differentiation of a human megakaryoblastic leukemia cell line.

The novel analogue of 1,25-dihydroxyvitamin D3 (1,25(OH)2 D3), 1,24(OH)2-22-ene-24-cyclopropyl D3 (calcipotriol, MC903), exhibits similar effects on cell proliferation and cell differentiation in a newly established human megakaryoblastic leukemia cell line (HIMeg). MC903 was found to inhibit cell proliferation and induce cell differentiation in a liquid culture system at concentrations comparable to those of 1,25(OH)2 D3. Colony formation assay showed that MC903 or 1,25(OH)2 D3 markedly diminished the colony-forming ability of HIMeg cells at concentrations of 10(-6) M to 10(-10) M. Cell cycle analysis demonstrated that, as seen with 1,25(OH)2 D3, MC903 also altered the cell cycle distribution; the fraction of cells in G0 + G1 increased while those in S and G2 + M decreased. It can be concluded from these findings that 1,25(OH)2 D3 and its analogue MC903 have approximately equipotent effects on cells of megakaryoblastic lineage and are potentially useful in studying the cellular processes that are responsible for megakaryocytopoiesis.     

Efficient dual treatment of the hormone-refractory prostate cancer cell line DU145 with cetuximab and 1,25-dihydroxyvitamin D3

BACKGROUND: Targeting of the epidermal growth factor receptor (EGFR) pathway is a promising treatment strategy for aggressive androgen-refractory prostate cancer (PCa). The effect of treating the androgen-resistant PCa cell line DU145 with a combination of the anti-EGFR drug cetuximab and 1,25-dihydroxyvitamin D3 (1,25(OH)2D3) was evaluated. MATERIALS AND METHODS: DU145 cells were treated with 5 nM cetuximab, 100 nM 1,25(OH)2D3 or a combination of both. The effect of the treatments on cell growth, cell-cycle and apoptosis was evaluated. RESULTS: Single-drug treatments decreased DU145 cell growth by up to 25% and caused a 1.5-to 1.7-fold increase of apoptosis, but did not affect the cell-cycle distribution. However, dual treatment with a combination of cetuximab and 1,25(OH)2D3 inhibited DU145 cell proliferation by 40%, caused considerable cell-cycle arrest in the Go/Gl-phase, and enhanced apoptosis by 2.5-fold (compared to the control, p < 0. 0001, p <0. 006 and p <0. 0001, respectively). CONCLUSION: A combination of cetuximab and 1,25(OH)2D3 efficiently suppresses hormone-resistant PCa cell growth and could provide a basis for its clinical application.     

1,25-二羟维生素D_3对人胃腺癌细胞诱导分化的实验研究

目的观察1,25-二羟维生素D3对胃腺癌MGC-803细胞的诱导分化作用。方法1,25-二羟维生素D3(10-6、10-5、10-4mmol.L-1)作用于MGC-803细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力、平板克隆试验测定细胞集落形成率、流式细胞仪测定细胞周期、TRAP-银染法测定端粒酶活性。结果1,25-二羟维生素D3作用24、48、72和96h后胃腺癌细胞生长均明显受抑制,48h后细胞周期出现向G0/G1期移行的特征性动力学改变,端粒酶活性明显受到抑制。细胞集落形成率明显下降(P<0.05)。结论1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞有诱导分化作用。     

1,25(OH)2D3对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞功能的影响

目的观察1,25-双羟维生素D3(1,25(OH)2D3)通过miR-124-3p调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)通路对肺炎链球菌(SP)感染的肺泡上皮细胞功能的影响,探讨其作用机制。方法体外培养肺泡上皮细胞A549,肺炎链球菌刺激后,随机分为10,20,40,80,160 ng·mL^-11,25(OH)2D3组、Control组、1,25(OH)2D3组、1,25(OH)2D3+anti-miR-NC组、1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p组和1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p+LY294002组。以细胞计数(CCK-8)法试剂盒法、流式细胞仪检测各组细胞增殖、凋亡,以蛋白质印迹(WB)法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、PI3K/AKT通路的相关蛋白表达,以反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测miR-124-3p的表达。结果10,20,40,80,160 ng·mL^-11,25(OH)2D3处理A549细胞72 h,细胞活力分别为(83.20±1.92)%,(75.73±3.70)%,(64.40±5.10)%,(47.13±3.56)%,(33.93±5.27)%;细胞凋亡率分别为(8.14±0.96)%,(12.26±1.00)%,(14.37±0.88)%,(16.44±0.96)%,(18.12±1.15)%,最终选择160 ng·mL^-11,25(OH)2D3进行后续实验。Control组、1,25(OH)2D3组、1,25(OH)2D3+anti-miR-NC和1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p组的miR-124-3p相对表达量为1.00±0.11,1.69±0.05,1.71±0.13,1.12±0.09,细胞活力分别为(100.00±9.67)%,(34.83±2.44)%,(37.70±1.50)%,(68.80±2.45)%,细胞凋亡率分别为(7.20±0.85)%,(18.59±0.82)%,(19.06±0.60)%,(13.44±2.15)%。与Control组对比,其他组miR-124-3p、细胞活力和细胞凋亡率均有统计学意义,CyclinD1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Control组、1,25(OH)2D3组、1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p组和1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p+LY294002的细胞活力分别为(100.00±9.64)%,(40.13±7.13)%,(74.40±6.54)%,(42.93±1.82)%,细胞凋亡率分别为(5.51±1.11)%,(15.90±0.24)%,(9.35±0.86)%,(14.24±0.84)%,与Control组相比,1,25(OH)2D3对肺泡上皮细胞A549的增殖、凋亡及CyclinD1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白表达的作用,以及抑制下游PI3K/AKT通路的作用,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论1,25(OH)2D3通过抑制miR-124-3p负向调控PI3K/AKT通路,促进肺泡上皮细胞的增殖,并诱导凋亡。