酶免疫竞争一步法检测乙型肝炎病毒核心抗体的影响因素探讨

探讨乙型肝炎病毒核心抗体检测的影响因素，排除假阳性结果。实验表明：1．改进二步法可以作为一种消除一步法中假阳性结果的有效办法。2．时差操作是假阳性增高的重要原因。     

酶联免疫吸附试验与微粒子酶免疫法检测血清乙型肝炎病毒核心抗体IgM的结果比较

急性乙型肝炎患者在乙肝病毒(HBV)感染早期、血清丙氨酸转氨酶(ALT)异常达峰值时,即可检出HBV核心抗体IgM(抗HBc IgM),急性乙型肝炎患者血清中抗HBc IgM近乎100%阳性,抗HBc IgM为急性乙型肝炎早期确诊的免疫学指标之一,一般滴度较高,可持续3~6个月[1~3]。慢性乙型肝炎患者抗HBc IgM阳性,说明HBV在肝内复制活跃,肝脏炎症损害明显。抗HBc IgM既是乙型肝炎近期感染的指标,也是HBV在体内复制的指标,并提示患者血液有传染性[3]。慢性活动性乙型肝炎患者血清抗HBc IgM阳性时,通常滴度较低。抗HBcIgM阴转预示急性乙型肝炎逐渐恢…     

酶联免疫吸附试验与微粒子酶免疫法检测血清乙型肝炎病毒核心抗体IgM的结果比较

急性乙型肝炎患者在乙肝病毒（HBV）感染早期、血清丙氨酸转氨酶（ALT）异常达峰值时,即可检出HBV核心抗体IgM（抗HBc IgM）,急性乙型肝炎患者血清中抗HBc IgM近乎100％阳性,抗HBc IgM为急性乙型肝炎早期确诊的免疫学指标之一,一般滴度较高,可持续3—6个月。慢性乙型肝炎患者抗HBc IgM阳性,说明HBV在肝内复制活跃,肝脏炎症损害明显。抗HBc IgM既是乙型肝炎近期感染的指标,也是HBV在体内复制的指标,并提示患者血液有传染性。慢性活动性乙型肝炎患者血清抗HBc IgM阳性时,通常滴度较低。抗HBc IgM阴转预示急性乙型肝炎逐渐恢复。     

间接EIA检测抗丙型肝炎病毒核心抗原IgM抗体

以基因重组的ＨＣＶ核心抗原包固相载体,建立了ＥＩＡ检测抗ＨＣＶｃＩｇＭ抗体的方法。为去除特异性抗ＨＣＶ ＩｇＧ及类风湿因子的干扰,用关抗人ＩｇＧ作血清标本稀释液,用抗入ＩｇＭ μ Ｆ（ａｂ‘）２片段制备酶结合物。该ＥＩＡ法对部分ＨＣＶ感染者的检测结果显示,在急性丙型肝炎中抗ＨＣＶｃ ＩｇＭ有较高的检出率,并与ＨＣＶ ＲＮＡ的检出率密切相关,揭示此 ＨＣＶ早期感染的血清学标志,与ＨＣＶ的复制有关。     

三种方法检测乙型肝炎病毒核心抗体结果的比较

目的比较酶联免疫吸附试验(ELISA)、微粒子酶免分析(MEIA)、电化学发光免疫分析(ECLIA)三种方法检测乙型肝炎病毒核心抗体(抗HBc)的结果,探讨ELISA检测抗HBc结果的正确性。方法用ELISA筛选出100例抗HBc阳性标本和60例抗HBc阴性标本,分别用MEIA和ECLIA检测。将ELISA筛选出的100例抗HBc阳性标本1∶30稀释,再分别用ELISA、MEIA和ECLIA检测。结果(1)100例ELISA检测抗HBc阳性标本,MEIA、ECLIA检测阳性率100%;60例ELISA检测抗HBc阴性的标本,MEIA、ECLIA检测阳性率分别为60%、(36/60)、53%(32/60);MEIA和ECLIA检测抗HBc的结果与ELISA有显著性差异,P值均<0.05。(2)100例ELISA检测抗HBc阳性标本1∶30稀释后,ELISA、MEIA和ECLIA检测阳性率分别为38%、74%和68%。结论MEIA、ECLIA检测抗HBc的阳性率明显高于ELISA。100例ELISA检测抗HBc阳性标本1∶30稀释后用ELISA、MEIA和ECLIA检测,三者阳性率均下降。     

乙型肝炎病毒核心抗体定量检测的临床意义

乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)具有很强的免疫原性,针对其产生的HBV核心抗体(Anti-HBc)出现时间早、持续时间长,是HBV感染的经典标志。Anti-HBc定性检测在临床上已应用多年,IgG型Anti-HBc用于识别既往HBV感染,IgM型Anti-HBc用于区分急性HBV感染和慢性乙型肝炎(CHB)急性加重[1]。但是Anti-HBc定量检测(qAnti-HBc)的意义一直未受重视,直到新型双抗原夹心法定量检测Anti-HBc技术的出现,提高了Anti-HBc检测的灵敏度和特异度,开启了一系列对qAnti-HBc临床意义的研究,已经发现qAnti-HBc与肝脏炎症活动、药物治疗的应答、停药后复发、免疫抑制治疗后HBV再激活等相关,有望成为启动抗病毒治疗、预测疗效、判断预后的重要参考指标,具有临床应用潜力,本文对qAnti-HBc最新研究进展和临床意义进行综述。     

乙型肝炎病毒核心IgM抗体检测在乙型肝炎患者中的意义

目的探讨乙型肝炎病毒核心IgM抗体（抗-HBc-IgM）检测在乙型肝炎（乙肝）患者中的意义。方法采用酶联免疫吸附试验,检测234例乙肝患者血清中的抗-HBc-IgM。结果乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）和乙肝病毒核心抗体（抗-HBc）阳性患者组抗-HBc-IgM阳性率为31.0%（31/100）,HBsAg、乙肝病毒e抗体（抗-HBe）和抗-HBc阳性患者组抗-HBc-IgM阳性率为17.0%（17/100）,其他乙肝病毒标志物阳性患者组抗-HBc-IgM阳性率为5.9%（2/34）。结论抗-HBc-IgM检测对于明确乙肝患者的感染病程以及患者的病情、预后评估具有重要的意义。     

第三代酶免疫试验检测丙型肝炎病毒抗体的意义

本文应用Ａｂｂｏｔｔ公司第三代酶免疫试验（ＥＩＡ－３），与Ａｂｂｏｔｔ公司和国产第二代酶免疫试验（ＥＩＡ－２），对比检测了９６例肝炎病人和献血员标本的抗－ＨＣＶ，发现Ａｂｂｏｔｔ公司和国产ＥＩＡ－２的相对漏检率分别为１７．３％和２０．７％，而献血员中有漏检１０．８％。对部分漏检标本应用多聚酶链试验（ＰＣＲ）检测了ＨＣＶ－ＲＮＡ，发现与ＨＣＶ感染有关。这些是造成某些临床误诊及输血后肝炎的重要原因之一     

改良法检测乙型肝炎病毒核心抗体结果的评价

目的：探讨竞争ELISA改良法对乙型肝炎病毒核心抗体结果的影响。方法：收集乙型肝炎病毒核心抗体阳性标本156份及随机血清标本85份,用常规法和改良法两种加样方式检测核心抗体,并以层析ELISA作为对照。结果：两种加样方式检测的核心抗体结果A值存在统计学差异（t=4.121,P〈0.01）;对随机收集的血清标本,常规法与层析法存在统计学差异（χ^2=6.01,P〈0.05）。结论：在竞争ELISA法中,改良法的应用可有效降低核心抗体的假阳性率。     

竞争抑制法检测抗-HBc总抗体的影响因素及对策

目的 研究酶联免疫吸附试验（ELISA）待测血清标本与辣根过氧化物酶（HRP）标记的乙型肝炎病毒（HBV）核心抗体（抗-HBc-HRP）加入间隔时间对抗-HBc总抗体检测结果的影响。方法 选择HBV标志物检测结果为阴性的标本分A、B、C3组：A组,加样后延长室温放置不同时间再加入抗-HBc-HRP;B组,加样同时加入抗HBc-HRP延长室温放置不同时间;C组,A组方式测定的阴性转阳性标本再用ELISA试剂2和化学发光（CLIA）试剂重复测定,确认阴、阳性结果。结果 A组加样方式对抗一HBc总抗体检测结果影响明显,且加样和加入抗-HBc-HRP的间隔时间越长,标本的假阳性越多;B组加样方式对抗-HBc总抗体检测结果基本无影响;C组ELISA试剂1和试剂2有72．8％的检测结果一致;20例ELISA阴性转阳性标本经过CLIA方法验证仍为阴性。结论 A组的不公平竞争在不同时间内可出现程度不等的抗-HBc总抗体假阳性;B组加样方式可最大限度地减少抗-HBc总抗体假阳性,保证检验质量。     

竞争抑制法检测抗-HBc总抗体的影响因素及对策

目的研究酶联免疫吸附试验(ELISA)待测血清标本与辣根过氧化物酶(HRP)标记的乙型肝炎病毒(HBV)核心抗体(抗-HBc-HRP)加入间隔时间对抗-HBc总抗体检测结果的影响。方法选择HBV标志物检测结果为阴性的标本分A、B、C 3组:A组,加样后延长室温放置不同时间再加入抗-HBc-HRP;B组,加样同时加入抗-HBc-HRP延长室温放置不同时间;C组,A组方式测定的阴性转阳性标本再用ELISA试剂2和化学发光(CLIA)试剂重复测定,确认阴、阳性结果。结果A组加样方式对抗-HBc总抗体检测结果影响明显,且加样和加入抗-HBc-HRP的间隔时间越长,标本的假阳性越多;B组加样方式对抗-HBc总抗体检测结果基本无影响;C组ELISA试剂1和试剂2有72.8%的检测结果一致;20例ELISA阴性转阳性标本经过CLIA方法验证仍为阴性。结论A组的不公平竞争在不同时间内可出现程度不等的抗-HBc总抗体假阳性;B组加样方式可最大限度地减少抗-HBc总抗体假阳性,保证检验质量。     

抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体国产ELISA试剂评价

目的 评价6种国产抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体(抗-HBs)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒。方法 将Roche Elecsys 2010电化学发光免疫分析系统上检测余留的抗-HBs标本，用6种国产抗-HBs ELISA试剂盒进行检测，评价6种试剂盒的敏感度、检测范围、精密度和特异性。结果 6种国产试剂盒的敏感度相差较大，10～40IU／L不等。50IU／L以下时，浓度与吸光度呈直线关系，但吸光度数值较低；未发现高浓度时的钩状效应。50IU／L的标本，A、B2种试剂的批内变异系数(CV)分别为10．1％和13．7％；日间CV分别为14．1％和24．8％；阴性标本在6种试剂盒中出现了不同程度的假阳性。结论 国产抗-HBs ELISA试剂的部分性能应改进和提高。     

抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体国产ELISA试剂评价

目的　评价 6种国产抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体 (抗 HBs)酶联免疫吸附试验 (ELISA)试剂盒。方法　将RocheElecsys 2 0 10电化学发光免疫分析系统上检测余留的抗 HBs标本 ,用 6种国产抗 HBsELISA试剂盒进行检测 ,评价 6种试剂盒的敏感度、检测范围、精密度和特异性。结果　 6种国产试剂盒的敏感度相差较大 ,10～ 4 0IU/L不等。 5 0IU/L以下时 ,浓度与吸光度呈直线关系 ,但吸光度数值较低 ;未发现高浓度时的钩状效应。 5 0IU/L的标本 ,A、B 2种试剂的批内变异系数 (CV)分别为 10 .1%和 13.7% ;日间CV分别为 14 .1%和2 4 .8% ;阴性标本在 6种试剂盒中出现了不同程度的假阳性。结论　国产抗 HBsELISA试剂的部分性能应改进和提高。     

乙型肝炎病毒核心抗体临床意义再研究?

目的：分析化学发光微粒子免疫分析法检测乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)在临床上的应用。方法收集2012年1月至2014年11月乙型肝炎两对半检测 HBcAb 阳性标本16830份,根据 HBcAb 的 cut off 指数(COI 值)将其分为3组：1.0~<9.0组、9.0~<11.0组、≥11.0组进行统计分析。对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与乙型肝炎表面抗体(HBsAb)均阴性且 HBcAb 的 COI 值大于或等于11.0的标本进行乙型肝炎病毒(HBV)DNA 检测。结果COI≥11.0组标本 HBsAg(+)HB-sAb(-)检出率(13.84%)明显高于其他表现形式(P <0.05);COI 值为9.0~<11.0组各 HBsAg、HBsAb 表现形式检出率比较差异无统计学意义(P >0.05);COI 值为1.0~<9.0组标本 HBsAg(+)HBsAb(-)检出率(0.5%)明显低于其他2组(P <0.05)。HBsAg(-)HBsAb(-)且 COI≥11.0的标本304份,其中 HBV DNA 阳性64份,阳性率为21.0%。结论HBcAb 检测中,COI≥11和1.0~<9.0可分别作为判断 HBV 现症感染和既往感染的参考指标,临床应用时应联合 HBV 的其他实验室标志物并结合临床综合分析。     

酶联免疫吸附试验定量检测乙型肝炎病毒表面抗体的研究

乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）浓度是人机体对乙型肝炎病毒（HBV）免疫能力的评价指标，而目前很多实验室特别是基层单位仅对抗-HBs作定性检测。定性检测抗-HBs的临界值一般设在10mIU／mL左右，大于此值的标本被判定为阳性。仅被判定为抗-HBs阳性的标本，难对其免疫能力作进一步的评价。本院用国产酶联免疫吸附试验（EuSA）定性检测抗-HBs试剂作定量检测，并用美国Abbott公司AxSYM免疫分析仪抗-HBs定量检测作比较，评价其效果。     

一步法和二步法检测乙型肝炎病毒表面抗原的比较

目的探讨一步法检测高浓度表面抗原的漏检现象。方法对一步法检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阴性乙型肝炎病毒e抗原和乙型肝炎病毒核心抗体阳性的标本进行倍比稀释后分别进行一步法和二步法检测。结果一步法检测的620份阴性血样中,二步法检测在原倍至1∶512时均有8份为阳性,而一步法检测在不同稀释浓度检测结果不同,高浓度时阴性率较低,在稀释度1∶128至1∶512的阳性率最高。结论一步法检测高浓度HBsAg存在漏检现象,而二步法检测可减少HBsAg漏检率。     

单项乙型肝炎病毒核心抗体假阳性结果分析

我国人群乙型肝炎病毒（HBV）感染率高,HBV感染血清学标志物是临床实验室最主要的检测项目之一。但是常常发现一些人其他HBV标志物阴性而仅仅乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）阳性,即所谓单项抗-HBc阳性者。抗HBc单项指标存在的意义是：（1）急性HBV感染恢复期,乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）消失而乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）尚未产生,抗-HBc是惟一能检出的指标;（2）慢性乙型肝炎感染,乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）水平很低,用一般的血清学方法不能检测出HBeAg;（3）过去的乙型肝炎感染,由于抗HBc比抗HBs在体内存在的时间长,因此抗-HBs已消失或在可检测水平以下时,抗-HBc仍存在。     

乙型肝炎病毒核心基因在毕赤酵母中的表达及表达产物在乙型肝炎病毒核心抗体检测中的应用评价

目的在毕赤酵母中表达出高免疫反应性和特异性的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg),探讨该表达产物在乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)免疫检测中的应用。方法用PCR从含有乙型肝炎病毒DNA模板的质粒中扩增出编码HBcAg的C基因,插入pPIC9酵母表达载体。携带有C片段的pPIC9转化毕赤酵母菌株GS115,经甲醇诱导表达HBcAg。分别用分子筛纯化毕赤酵母表达的HBcAg(A)、单克隆HBcAb特异结合纯化毕赤表达的HBcAg(B)、分子筛纯化大肠杆菌表达的HBcAg(C)、单克隆HBcAb特异结合纯化大肠杆菌表达的HBcAg(D)作为固相抗原,辣根过氧化物酶标记多克隆HBcAb为探测抗体,用竞争抑制法酶联免疫吸附测定(competitiveinhibitionELISA)检测HBcAb标准品及含有乙型肝炎病毒PCR阳性和阴性血清的临床标本。结果聚丙烯酰胺凝胶电泳、immunoblot、ELISA显示HBcAg在毕赤酵母中高效表达;分别用抗原A、B、C、D制备的试剂检测中国药品生物制品检定所HBcAb国家参考品:试剂A与B结果相同:阴性符合率(-/-)15/15,阳性符合率(+/+)15/15;最低检出量(稀释度):灵敏度参考品2#=1∶128,3#=1∶16,4#=1∶64。试剂C与D结果相同:阴性符合率(-/-)15/15;阳性符合率(+/+)14/15;最低检出量(稀释度):灵敏度参考品2#=1∶32;3#=1∶16;4#=1∶32;大肠杆菌抗原的灵敏度明显低于毕赤酵母抗原。对乙型肝炎病毒PCR阳性及阴性的临床标本进行检测,结果如下:PCR阳性组HBcAb阳性检出率:试剂A97.8%;试剂B98.1%;试剂C96.6%;试剂D91.4%;A、B、C三组间比较差异无统计学意义(P>0.05);D分别与A、B、C相比较差异均有统计学意义(P<0.005)。PCR阴性组HBcAb阴性检出率:试剂A80.3%;试剂B80.9%;试剂C75.0%;试剂D85.7%;AB两组比较差异无统计学意义(P>0.05);AC、AD、BC,BD、CD相比较差异均有统计学意义(P<0.005);分子筛纯化的大肠杆菌HBcAg含有干扰检测的杂质,结果出现假阳性;大肠杆菌HBcAg存在表位缺失导致结果出现假阴性。结论毕赤酵母表达系统高效表达出具有良好免疫反应性和特异性的HBcAg,用于HBcAb的检测灵敏度及特异性均优于大肠杆菌表达产物。