不同原代培养方法培养人牙髓细胞的研究

目的：比较并建立一种操作简单方便的人牙髓细胞原代培养方法。方法：选择因正畸拔除的完整无龋双尖牙,无菌条件下取出牙髓,分别采用组织块法、酶消化法和改良组织块法进行人牙髓细胞的体外原代培养,比较观察三种不同培养方法的成活率、细胞形态和数量,测定生长曲线并进行细胞来源鉴定。结果：三种方法均可从人牙髓组织分离培养获得外胚间充质来源的牙髓细胞,呈成纤维细胞样,抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性。组织块法耗时较长,培养成功率26.7%;酶消化法培养成活率较低,且细胞数量较少,培养成功率仅为13.3%;在改良组织块法中未发现有漂浮的组织块,培养成活率较高为80%。结论：改良组织块法解决了传统组织块法中组织块难以贴壁的问题,简化了操作步骤并具有较高的成功率,是一种科学可行的人牙髓细胞原代培养方法。     

原代大肠癌细胞分离培养中的影响因素

目的探讨原代大肠癌细胞分离培养中的影响因素。方法采用消化法和贴壁法培养原代大肠癌细胞,观察影响因素。结果原代大肠癌细胞能否培养成功与取材、培养方法及培养液等密切相关。结论标本取材、培养方法等对培养能否成功有重要影响。     

乳腺分叶状肿瘤一例

乳腺分叶状肿瘤是一种罕见的乳腺疾病,占女性乳腺肿瘤的0．3％-0．5％。本病1938年由Müller首先叙述并命名为乳腺叶状囊肉瘤。目前世界卫生组织将其更名为分叶状肿瘤,显示其较大范围的临床病理行为。笔者报道了我院收治的一例乳腺分叶状肿瘤病例。[第一段]     

人脐静脉内皮细胞原代培养方法的改进

目的 改进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代培养方法,以获得足够数量的高纯度可传代内皮细胞.方法 胶原酶消化法分离培养内皮细胞,并加以改进.2.5×104 IU/L重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rb-bFGF)加入完全培养液中.用形态学、免疫细胞化学染色法进行内皮细胞鉴定.观察含rb-bFGF的培养液对内皮细胞生长和形态结构的影响.观察原代细胞长满瓶底60％、70％和80％时传代后第1代细胞的生长情况.结果 HUVECs融合时呈单层铺路石样外观,95％以上细胞Ⅷ因子检测呈阳性.含2.5×104 IU/L rb-bFGF的完全培养液可将HUVECs传7代以上.第7代细胞长满瓶底80％所需时间延长,并出现异常细胞形态.原代细胞长满瓶底60％、70％和80％后传代,第1代细胞长满瓶底80％所需时间均为3d左右.结论 rb-bFGF可取代内皮细胞生长添加剂、内皮细胞生长因子等添加于培养液中,获得足够数量高纯度可传代的内皮细胞;原代细胞的传代时间可适当提前至长满瓶底60％～70％时.     

25种化疗药物对原代培养人乳腺癌细胞的体外药敏研究

目的:研究25种化疗药物对原代培养人乳腺癌细胞的敏感性,探究抗乳腺癌药物敏感性的一般规律。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测25种化疗药物对原代培养人乳腺癌细胞生长的影响,计算各自抑制率(%)。结果:对人乳腺癌细胞抑制率超过30%的药物依次为紫杉醇、多西他赛、表柔比星、环磷酰胺、氟尿嘧啶、替尼泊苷、丝裂霉素、长春新碱、卡铂。S期、M期和周期非特异性药物对乳腺癌平均抑制率分别为(36.2±9.5)%、(29.1±5.6)%和(27.5±8.8)%,差别无显著意义。S期、M期和周期非特异性药物中抑制率最高的药物分别是紫杉醇、氟尿嘧啶和表柔比星。结论:肿瘤药敏的结果佐证了临床联合化疗的合理性。     

乳腺乳头状肿瘤病理分析体会

目的：探讨乳腺乳头状肿瘤的病理特征,以提高乳腺乳头状肿瘤病理分析诊断的水平。方法：选择2008年6月-2010年12月的乳腺乳头状肿瘤患者共45例,对患者的病理分析资料进行回顾性分析。结果：45例乳腺乳头状肿瘤中,乳腺乳头状癌22例（48．9％）、大导管乳头状瘤6例（13.3％）、中小导管乳头状瘤8例（17．7％）、乳腺乳头状腺瘤5例（11．1％）、小导管上皮乳头状增生4例（9．0％）。结论：乳腺乳头状癌及中小导管乳头状瘤的发病率高,病理特征不典型,应作为临床研究的重点内容,对于促进乳腺疾病诊疗技术水平的提升有积极的作用。     

乳腺分叶状肿瘤一例

乳腺分叶状肿瘤是一种罕见的乳腺疾病，占女性乳腺肿瘤的0．3％-0．5％。本病1938年由Müller首先叙述并命名为乳腺叶状囊肉瘤。目前世界卫生组织将其更名为分叶状肿瘤，显示其较大范围的临床病理行为。笔者报道了我院收治的一例乳腺分叶状肿瘤病例。     

乳腺肿瘤患者的彩超分析

目的：分析乳腺肿瘤的彩超特点。方法选取我院收治的乳腺肿瘤患者84例,对所有患者的临床资料及彩超检查结果进行回顾性分析。结果经彩色超声检查后,发现恶性肿块与良性肿块分别为60例和24例,患者彩超检查影像特点对比存在显著性差异,组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论采用彩超对乳腺肿瘤患者进行诊断具有较高的临床应用价值,其准确率高,能够及时发现及早治疗,对患者生命健康和生活质量有着重要的意义。     

甲氨蝶呤及重组人肿瘤坏死因子对体外培养软骨肉瘤细胞株的作用

目的:研究甲氨蝶呤(MTX)及重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)对体外培养软骨肉瘤细胞株的作用。方法:采用细胞培养技术,将不同含量的MTX、rhTNF加入到培养的软骨肉瘤细胞株中,培养4d后,通过光学显微镜观察软骨肉瘤细胞株的形态学变化,MTT法观察软骨肉瘤细胞株的生长情况,以及采用荧光染色、流式细胞仪法观察软骨肉瘤细胞株的凋亡情况。结果:MTX和rhTNF使软骨肉瘤细胞的增殖受到明显抑制,凋亡细胞数显著增加(P<0.01),其作用随着药物浓度的增加而增强。联合应用MTX、rhTNF后细胞增殖抑制作用得到增强,凋亡细胞数亦增加。结论:MTX、rhTNF有一定的抗软骨肉瘤细胞活性,MTX、rhTNF间具有协同作用。     

乳腺肿瘤的超声诊断分析

乳腺肿瘤是女性的常见病、多发病,发病率居女性恶性肿瘤首位.目前检查乳腺肿瘤的常用方法是乳腺钼靶X线检查和超声检测,钼靶X线摄影适合年龄为40岁;我国年轻妇女以致密型乳腺为多,高频超声在乳腺肿瘤病灶与正常腺体组织的对比优于钼靶X线摄影;而且超声检查因简便、可重复性和无创伤性及费用低廉等特点,已被广泛应用于乳腺肿瘤的诊断检查.     

人表皮干细胞的分离培养

目的 探索人表皮干细胞原代培养方法.方法 将皮肤标本进行分离,用DispaseⅡ酶消化表皮皮片后,重悬细胞,接种于铺有Ⅳ型胶原的培养瓶进行培养.表皮干细胞的鉴定采用免疫细胞化学技术检测其表面标记物β1整合素、CK19的表达.对表皮干细胞与角质形成细胞的克隆形成情况进行比较.结果 倒置相差显微镜下观察细胞形态及生长状况良好,表皮干细胞β1整合素及CK19角蛋白染色阳性.表皮干细胞克隆形成率高于角质形成细胞（P＜0.05）.结论 采用本方法进行人表皮干细胞的培养较为理想.     

大鼠肾小管上皮细胞分离及其体外原代培养

目的探讨大鼠肾小管上皮细胞的原代培养方法。方法在原有肾小管细胞培养方法的基础上进行改良,采用机械研磨过筛、Ⅰ型胶原酶消化法分离出肾小管节段,在DMEM/F12[含5%胎牛血清(FBS)和胰岛素-转铁蛋白-硒]培养基中培养,并进行ZO-1免疫荧光染色鉴定。结果细胞培养至第3天完全贴壁,为多边鹅卵石样;免疫荧光染色显示90%以上的细胞为ZO-1表达阳性。结论采用机械研磨过筛、Ⅰ型胶原酶消化、DMEM/F12(含5%FBS和胰岛素-转铁蛋白-硒)培养基中培养的方法可以获得纯度达90%以上的肾小管上皮细胞,可满足对肾小管上皮细胞的研究。     

子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离培养

目的　建立一种获得高产量子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离培养方法。方法　通过胶原酶消化法、系列过滤法及贴壁纯化等技术分离纯化培养人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞 ,并通过光镜及免疫细胞化学染色进行鉴定。结果　腺上皮细胞呈蝌蚪形 ,漩涡状生长。角蛋白免疫细胞化学染色阳性 ,纯度约 90 %。基质细胞呈梭形或多角形 ,平行状生长。波形蛋白染色反应阳性 ,纯度达 95 %。每例子宫肌瘤切除标本可获得 (10～2 5 )× 10 6 原代基质细胞和 (4～ 6 )× 10 6 原代腺上皮细胞 ,每例诊断性刮宫获得的原代细胞数约为前者的 1/ 2～2 / 3。结论　改良培养程序可获得高产量的纯化的子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。     

人胚神经干细胞分离培养与鉴定方法

目的:建立神经干细胞(NSCs)实验室分离、培养方法,为NSCs移植提供细胞源.方法:取4月龄(±15 天)正常孕妇水囊引产胎儿大脑纹状体区组织分离神经干细胞,培养于含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和B27的无血清培养基;同时利用单细胞克隆技术进行连续传代培养;利用形态学观察和免疫荧光技术检测神经上皮干细胞蛋白Nestin抗原的表达来鉴定神经干细胞.结果:体外培养的干细胞在bFGF和B27培养基中可不断增殖形成细胞球,并出现少量细胞分化.单细胞培养4天即开始分裂,同时伴有个别细胞分化;出现大量神经球一般为15天;分化的细胞在30天开始分解,50天左右基本消失.细胞培养3个月(每月补液1次)仍具有分裂增殖能力.单细胞克隆可连续传代10次,仍具增殖分化能力.液氮冻存6个月的细胞复苏后仍具增殖分化能力.单细胞克隆传代增殖的细胞球经Nestin免疫荧光鉴定,呈阳性结果,证实其胚胎源性.结论:采用bFGF和B27的无血清培养基能促进神经干细胞连续稳定增殖,并有少量分化,细胞体外培养3个月、克隆连续传代10次情况下的细胞仍具有神经干细胞特性.     

人脑胶质瘤细胞的分离、培养、冻存与复苏

目的 研究分离、培养人脑胶质瘤细胞方法.方法 手术获得切除胶质瘤新鲜标本30例,酶消化法分离培养获得人脑胶质瘤细胞.利用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行体外原代培养及传代,观察肿瘤细胞生长特点.运用冻存液冻存培养的胶质瘤细胞,分别于冻存后1、4、8、12、16、20、24周复苏,计数复苏后活细胞比例,进行再培养并观察肿瘤细胞生存情况.结果 从脑胶质瘤标本分离出的胶质瘤细胞可进行原代培养及传代.冻存1、4、8、12、16、20、24周后脑胶质瘤细胞复苏的成活比例分别为54%、52%、52%、50%、48%、46%、40%.复苏后再培养的肿瘤细胞生长良好.结论 通过分离培养手术切除胶质瘤标本可获得脑胶质瘤细胞株,肿瘤细胞可通过冻存的方式进行保存,冻存后复苏的细胞可再培养.     

人胚神经干细胞分离培养与鉴定方法

目的 :建立神经干细胞 (NSCs)实验室分离、培养方法 ,为NSCs移植提供细胞源。方法 :取 4月龄 (± 15天 )正常孕妇水囊引产胎儿大脑纹状体区组织分离神经干细胞 ,培养于含碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和B2 7的无血清培养基 ;同时利用单细胞克隆技术进行连续传代培养 ;利用形态学观察和免疫荧光技术检测神经上皮干细胞蛋白Nestin抗原的表达来鉴定神经干细胞。结果 :体外培养的干细胞在bFGF和B2 7培养基中可不断增殖形成细胞球 ,并出现少量细胞分化。单细胞培养 4天即开始分裂 ,同时伴有个别细胞分化 ;出现大量神经球一般为 15天 ;分化的细胞在 3 0天开始分解 ,5 0天左右基本消失。细胞培养 3个月 (每月补液 1次 )仍具有分裂增殖能力。单细胞克隆可连续传代 10次 ,仍具增殖分化能力。液氮冻存 6个月的细胞复苏后仍具增殖分化能力。单细胞克隆传代增殖的细胞球经Nestin免疫荧光鉴定 ,呈阳性结果 ,证实其胚胎源性。结论 :采用bFGF和B2 7的无血清培养基能促进神经干细胞连续稳定增殖 ,并有少量分化 ,细胞体外培养 3个月、克隆连续传代 10次情况下的细胞仍具有神经干细胞特性     

Cell-growth quantitation methods for the evaluation of antiestrogens in human breast cancer cells in culture.

The antiproliferative activity of the antiestrogen, tamoxifen, on the growth of MCF-7 human breast cancer cells was evaluated using the hemocytometric trypan blue exclusion method, [3H]-thymidine incorporation, and a total protein determination. Tamoxifen was evaluated over a concentration range from 10(-9) to 10(-6) M. The hemocytometric trypan blue exclusion method and [3H]-thymidine incorporation were sensitive enough to demonstrate the inhibitory influence of tamoxifen on the proliferation of MCF-7 cells at a concentration as low as 10(-9) M. A very good correlation of these two methods was observed in the submicromolar concentration range of tamoxifen. The total protein determination method was only sensitive enough to detect the antiproliferative influence of tamoxifen at concentrations above 10(-6) M. In conclusion, the [3H]-thymidine incorporation method was found to be effective and much less time consuming than the hemocytometric trypan blue exclusion method for evaluating the antiproliferative effects of antiestrogens in cultured MCF-7 cells. However, when evaluating antiestrogens, which are cell-cycle specific, the results of the [3H]-thymidine incorporation method should be interpreted with caution.     

原代乳腺癌细胞对中药体外敏感性研究

目的 探讨中药提取有效成份康莱特在乳腺癌临床治疗中的作用.方法 采用手术切取的乳腺癌组织制备原代乳腺癌细胞悬液,MTT法体外药敏实验检测原代乳腺癌细胞对康莱特及数种临床常用化疗药的不同敏感性,并进行比较分析.结果 原代乳腺癌细胞对康莱特的敏感性低于5-Fu、ADM及MMC,且有显著性差异(P＜0.05);乳腺癌细胞对康菜特具有中度敏感性,而与常用化疗药物相近,且无显著性差异(P＞0.05).结论 中药提取有效成份康莱特对乳腺癌的临床治疗具有中度敏感性,可作为临床二线用药或联合用药.