重组人血小板生成素治疗实体瘤化疗后血小板减少症的随机对照研究

目的评价国产重组人血小板生成素(rhTPO)治疗恶性实体瘤化疗后血小板减少症的疗效和安全性.方法 17例恶性实体瘤患者每例接受3周期化疗.第1周期化疗后出现血小板减少,即采用随机交叉、自身对照的研究方法分别进入A、B组.A组在第2周期化疗结束后6～24h,皮下注射rhTPO 1.0μg·kg-1 ·d-1),疗程14d,如血小板计数≥100×109/L则停用rhTPO;第3周期化疗后不注射rhTPO,作为自身对照.B组与A组相反.另9例患者化疗后血小板减少直接进入非随机的C组.化疗2周期,第1周期为对照周期,第2周期化疗后注射rhTPO.结果化疗后rhTPO试验周期与对照周期比较,血小板计数的最低值比对照周期略升高[(51.1±22.4)×109/L vs (46.5±19.9)×109/L,P＞0.05];血小板恢复至75×109/L以上天数显著缩短[(10.66±4.55) vs (19.33±8.72),P＜0.001]. 2例患者在对照周期需要输注血小板,而rhTPO试验周期无1例需要输注血小板.本组26例患者均未发现与rhTPO相关的不良反应,血清rhTPO抗体测定阴性.结论国产rhTPO可以减轻化疗引起的血小板降低程度和持续时间,减少血小板的输注,不良反应罕见,安全性好.     

重组人血小板生成素联合重组人白介素-11治疗恶性肿瘤放化疗后血小板下降的临床效果

目的:观察重组人血小板生成素(特比澳)联合重组人白介素-11(巨和粒)治疗肿瘤患者放化疗后血小板减少症的临床疗效。方法:运用随机信封法对60例化疗或放化疗后血小板减少<50×109/L的肿瘤患者进行随机分组观察,治疗组30例,应用特比澳300U/(kg·d)+巨和粒50μg/(kg·d)皮下注射,直至血小板数量达到≥80×109/L;对照组30例,应用巨和粒50μg/(kg·d)皮下注射,直至血小板数量达到≥80×109/L,观察血小板计数和血小板恢复时间。结果:给药第7,11,15天治疗组血小板平均数明显高于对照组(P<0.05),且血小板计数升至80×109/L以上所需时间治疗组较对照组显著缩短(P<0.05)。结论:特比澳联合巨和粒可有效治疗肿瘤患者放化疗后所引起的血小板减少症。     

重组人促血小板生成素联合糖皮质激素治疗原发免疫性血小板减少症的有效性及安全性研究

目的探讨原发免疫性血小板减少症采用重组人促血小板生成素联合糖皮质激素治疗的临床疗效及安全性。方法选取2016年10月-2017年10月该院收治的原发免疫性血小板减少症患者40例,按单盲法分为两组,各20例。对照组采用常规剂量糖皮质激素治疗,在此基础上,试验组采用重组人促血小板生成素治疗,连续治疗14 d后,比较两组临床疗效、血小板变化情况及不良反应。结果试验组总有效率(95.00%)较对照组(65.00%)高,差异具有统计学意义(P0.05);治疗后,试验组血小板计数(PLT)水平(126.35±15.74)×109/L,较对照组的(80.98±20.98)×109/L高,PLT开始上升时间(5.06±1.68)d、PLT≥50×109/L所需时间(9.65±1.57)d,均较对照组[(7.24±2.11)d、(13.14±1.25) d]短,差异具有统计学意义(P0.05);试验组不良反应发生率(20.00%)与对照组(15.00%)相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论原发免疫性血小板减少症采用重组人促血小板生成素联合常规剂量糖皮质激素治疗可提升治疗效果,改善血小板水平,且不良反应少,安全性较高。     

重组人白介素11治疗急性白血病化疗后血小板减少的临床疗效

目的 探讨重组人白介素11治疗急性白血病化疗后血小板减少的临床疗效.方法 选取2014年1月至2016年1月于枣阳市第一人民医院收治的急性白血病患者60例作为研究对象.根据随机数表法分为对照组和观察组,各30例,对照组实施常规化疗,观察组实施常规化疗联合重组白细胞介素-11,比较两组患者血小板计数变化.结果 观察组血小板最低值[(8.7±2.0)×109/L]与对照组[(8.8±1.9)×109/L]比较差异无统计学意义(P>0.05);血小板最高值[(162.3±30.2)×109/L]明显高于对照组[(90.6±21.7)×109/L,P<0.05]:观察组和对照组患者的血小板恢复时间[(11.9±5.2)d vs(15.6±6.0)d]、血小板输入量[(7.1±3.1)U vs(10.7±4.2)U]、出血率[23.3%vs 63.3%]、不良反应率[13.3%vs 66.7%]比较,观察组均明显低于或少于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 重组人白介素11治疗急性白血病化疗后血小板减少的临床疗效较佳,且不良反应发生率低,临床应用安全.     

重组人血小板生成素与重组人白介素-11治疗脓毒性血小板减少症临床疗效比较

目的:评价重组人血小板生成素(rhTPO)与重组人白介素-11(rhIL-11)治疗脓毒症相关性血小板减少症患者的临床疗效。方法:将76例脓毒症合并血小板减少的患者,根据"不平衡指数最小的分配原则"随机分为对照组,rhTPO组与rhIL-11组。3组均在控制感染等综合治疗的基础上,rhTPO组予以rhTPO 300 U/(kg.d),rhIL-11组予以rhIL-11 1.5 mg/(kg.d)。当血小板计数恢复至100×109/L或血小板绝对值升高≥50×109/L时即停药。结果:给药第1、2天,3组血小板计数升高不明显,用药第3天血小板计数rhTPO组显著高于rhIL-11组和对照组(P<0.05);rhTPO组血小板计数恢复到>50×109/L及≥100×109/L所需时间及输注血制品量均少于rhIL-11组和对照组(P<0.05);rhTPO组不良反应率显著低于rhIL-11组(P<0.05)。随访28 d内病死率rhT-PO组和rhIL-11组显著低于对照组,但rhTPO组和rhIL-11组间无统计学差异(P>0.05)。结论:rhTPO在促进脓毒症相关血小板减少症血小板数的恢复,减少患者血制品输注量,安全性较rhIL-11更可靠。     

重组人血小板生成素治疗化疗后血小板减少的临床观察

目的评价重组人血小板生成素（rhTPO）治疗化疗后血小板减少的疗效和安全性。方法 45例恶性肿瘤患者在化疗后出现血小板减少,随机分为A组和B组,A组皮下注射rhTPO（15 000U/d）,B组皮下注射白细胞素-Ⅱ（1.5mg/d）,动态监测注射后血小板生长情况。结果 A组血小板计数的最低值明显高于B组（P〈0.01）;A组血小板开始恢复时间为较B组明显缩短（P〈0.01）;血小板恢复至100×109/L以上所需时间A组也较B组明显缩短,分别为：（6.18±4.20）d和（10.46±4.54）d（P〈0.05）;血小板恢复的最高值两组差异无统计学意义（P〈0.05）;B组有2例患者化疗后需要输注外源性血小板,而A组无1例患者需要输注血小板;与B组比较,A组较少发生不良反应,患者可以耐受。结论重组人血小板生成素治疗后出现的血小板减少安全有效。     

重组人血小板生成素治疗化疗病人血小板减少症临床疗效

目的:分析重组人血小板生成素联合白介素-11治疗白血病化疗后血小板减少症的临床疗效。方法:选取郑州大学附属郑州中心医院2011年2月至2013年1月收治的100例白血病化疗后血小板减少症患者,将其均分为观察组和参照组,两组患者分别接受皮下注射重组人血小板生成素、白介素-11治疗,观察外周血小板的变化。结果:白血病患者实施化疗后,两组血小板计数下降值比较无明显差异(P>0.05)。两组实施治疗后,血小板计数恢复的最高值对比差异显著(P<0.05)。观察组患者血小板低于50×109/L延续时间,恢复到75×109/L或100×109/L所需时间,显著低于参照组,对比有统计学意义(P<0.05)。结论:采用重组人血小板生成素治疗白血病化疗后血小板减少症,治疗效果显著,安全可靠,毒副作用小,可有效改善患者临床病症,值得在临床治疗中推广使用。     

重组人血小板生成素治疗肺癌患者同步放疗、化疗后血小板减少的临床观察

目的:探讨重组人血小板生成素(Recombinant human thrombopoietin,rhTPO)治疗肺癌患者同步放疗、化疗后血小板(Blood platelet,PLT)减少的临床疗效和安全性。方法:接受同步放疗、化疗后PLTⅢ、Ⅳ度减少(PLT<50×109/L)的肺癌患者40例,随机分为治疗组(rhTPO)和对照组(IL-11),观察治疗疗效及不良反应。结果:治疗组PLT计数<50×109/L的天数比对照组缩短约2.4 d,PLT计数恢复至100×109/L以上所需时间平均缩短3.3 d,PLT计数恢复的最高值比对照组平均升高69×109/L以上。治疗组无需输注PLT,且不良反应少。结论:rhTPO能有效地缩短肺癌患者同步放疗、化疗后血小板减少持续时间,促进血小板恢复,安全性好。     

重组人血小板生成素治疗实体肿瘤患者化疗后血小板减少的多中心临床试验

目的评价国产重组人血小板生成素(rhTPO)治疗实体肿瘤患者化疗后血小板减少的临床疗效和安全性.方法采用随机交叉自身对照研究,154例实体瘤患者随机分为A、B两组,每组77例,接受方案和剂量相同的两周期化疗.A组:第1个周期(用药周期)注射rhTPO,第二个周期(对照周期)不注射rhTPO;B组:第1个周期(对照周期)不注射rhTPO,第2个周期(用药周期)注射rhTPO.两组患者均于用药周期化疗结束后6～24 h皮下注射rhTPO 1.0μg·kg-1·d-1,连续用药最长14 d.监测血尿便常规、肝肾功能、凝血功能、胸片、心电图及血清抗rhTPO抗体.结果A、B两组用药周期与对照周期血小板减少程度和持续时间差异无显著性.154例实体瘤患者用药周期与对照周期比较:(1)化疗后血小板下降的最低值分别为(64.4±45.4)×109/L和(52.4±30.9)×109/L(P=0.000),血小板计数恢复后的最高值分别为(263.9±142.5)×109/L和(148.9±67.7)×109/L(P=0.000);(2)化疗后血小板＜50×109/L的持续时间分别为(2.5±3.9)和(3.7±5.7)d(P=0.04);(3)用药周期化疗后血小板恢复至75×109/L、100×10 9/L以上所需天数为(10.3±8.7)和(14.0±8.9)d,而对照周期为(15.9±10.5)和(21.1±9.5)d(P=0.000);(4)血小板平均输注量两周期比较无差异;(5)化疗后血红蛋白、白细胞、尿常规、便常规、肝肾功能、凝血功能、胸片和心电图的变化无明显差异.1例患者产生低滴度非中和性血清抗rhTPO抗体.不良反应轻,仅个别患者出现发热、头晕或寒战.结论实体肿瘤患者化疗后给予国产rhTPO可减少血小板降低程度和持续时间,并能促进血小板恢复,且无严重不良反应.     

重组人血小板生成素治疗肿瘤化疗后血小板减少的临床观察

目的:评价重组人血小板生成素(recombinant human thrombopoietin,rhTPO)对肿瘤化疗后血小板减少的疗效和不良反应。方法:采用自身对照交叉研究方法,对第1周期(对照周期)化疗后PLT≤75×109/L的38例实体肿瘤患者于第2周期采用相同化疗方案,随机分为A、B两组,每组19例患者。A组:第2周期化疗前3天开始皮下注射rhTPO(15 000μ),每日1次,连用7 d;B组:第2周期化疗结束后6~24 h注射rhTPO(15 000μ),1次/d,连用7 d。结果:与对照周期相比,A、B两组血小板减少程度和持续时间差异有统计学意义(P<0.05);A、B两组比较,血小板最低值、血小板≤50×109/L持续时间及血小板恢复至≥100×109/L时间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:rhTPO可减少PLT降低程度和持续时间,提前给药效果更佳,且无严重不良反应。     

Recombinant Human IgG antibodies against Human Cytomegalovirus

Objective To study the passive immunization with human monoclonal antibodies as for prophylaxis of human cytomegalovirus （HCMV） infection. Methods Fab monoclonal antibodies to HCMV were recovered by repertoire cloning of mRNA from a HCMV infected individual. Antigen binding specificity, CDR sequence of VH and VL and neutralizing activity on HCMV AD169 stain were analyzed in vitro. The light and heavy chain Fd fragment genes of Fab antibodies were further cloned into a recombinant baculovirus expression vector pAC-K-Fc to express intact IgG. Secreted products were purified with affinity chromatography using protein G. Results SDS-PAGE and Western blot confirmed the expression of the intact IgG. Immuno-blotting and -precipitation were used to identify HCMV proteins. One Fab monoclonal antibody recognized a conformational HCMV protein. Conclusion IgG antibodies can neutralize the HCMV AD169 strain efficiently at a titer of 2.5 μg/mL and may prove valuable for passive immunoprophylaxis against HCMV infection in humans.     

重组人白细胞介素—2的分离纯化

报道了重组人白细胞介素-2(rHuIL-2)高表达菌株的最佳培养和表达条件、表达产物的分离纯化、复性条件对rHuIl-2活力的影响及高纯度rHuIL-2的性质鉴定。利用制备性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)进行rHuIL-2的纯化,回收率可达80%以上,纯度达95%以上,其比活为1～2×10~6 U/mg,能在体外维持CTLL和CTC细胞的增殖,其分子量、等电点、氨基酸组成、N-末端分析结果与德国Boehringer公司的同类产品基本一致。     

重组人血小板生成素与人血丙种球蛋白治疗难治性血小板减少性紫癜

目的:比较重组人血小板生成素(rh TPO)与人血丙种球蛋白治疗难治性血小板减少性紫癜的临床疗效。方法:选取难治性血小板减少性紫癜患者80例随机分为3组,rh TPO组皮下注射rh TPO,对照组予糖皮质激素治疗,人血丙球组在对照组治疗基础上给予人血丙种球蛋白;比较3组出血停止时间、血小板开始上升时间、血小板达正常时间、血小板升高达最高峰时间、停药后恢复到治疗前水平时间,观察3组患者疗效和不良反应。结果:rh TPO组、人血丙球组总有效率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),rh TPO组、人血丙球组总有效率差异无统计学意义(P>0.05);人血丙球组血小板开始上升时间、血小板达正常时间均短于rh TPO组,rh TPO组血小板升高达最高峰时间及停药后恢复到治疗前水平时间长于人血丙球组,差异具有统计学意义(P<0.05);rh TPO组与人血丙球组比较,不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:rh TPO与人血丙种球蛋白均可有效治疗难治性血小板减少性紫癜,丙球起效更为快速,但rh TPO疗效更持久。     

人重组白细胞介素-8的快速纯化

报道一种快速人重组IL-8纯化方法，大肠杆菌表达的IL-8包涵体经尿素变性后，直接用DEAE柱和SephadexG50柱纯化。纯化的hIL-8经FPLC鉴定，纯度达90%以上。该法为实验室快速、简便纯hIL-8提供了新的技术路线。     

人FRNK重组腺病毒的构建

目的:应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建人FRNK基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组病毒。方法:把人FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建腺病毒质粒pAdTrack-CMV-hFRNK,经PmeⅠ内切酶酶切成线性化后,采用电穿孔转化将其转化到含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中,通过卡那霉素筛选获得阳性腺病毒重组质粒。再将获得的腺病毒重组质粒转染到HEK293细胞进行包装,获得人FRNK重组腺病毒pAdhFRNK。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。结果:经酶切和绿色荧光蛋白表达证明了hFRNK基因的重组腺病毒载体pAdhFRNK构建成功,并制备出高滴度的重组病毒。结论:成功构建携带人FRNK基因的重组腺病毒pAdhFRNK,为研究FRNK的基因治疗奠定了基础。     

重组软骨实验研究

关节软骨为透明软骨,其厚度约为2～4mm。一旦损伤,出现软骨皲裂、下陷或者软骨下骨损伤,自愈的可能性较小,长期发展出现关节退行性改变。现有的各种手术方法如软骨表面钻孔、表面新鲜化,只能促使纤维软骨生长,自体骨软骨移植是最佳治疗方法,但其数量受到一定的限制。随着组织工程学技术的发展,将具有生命力的活体组织,用少量组织修复大量组织缺损并可按照预制形状塑形,为组织缺损的修复提供了一种新的治疗途径。在近3年时间内我们不仅培养出骨髓间充质干细胞,并寻找到一种理想的载体,通过种植实验动物体内后,获得良好的效果。     

重组人半乳糖苷结合凝集素-9质粒的构建及表达

目的构建人半乳糖苷结合凝集素-9(Galectin-9)的真核表达质粒pGalectin-9,并检测其表达。方法通过DNA重组技术和PCR方法从人外周血单个核细胞克隆Galectin-9基因,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,通过PCR、酶切及测序鉴定重组载体的正确性;采用脂质体转染技术将重组质粒pGalectin-9瞬时转染中国仓鼠卵巢(Chinesehamster ovary,CHO)细胞,通过Western blot、RT-PCR和间接免疫荧光方法检测Galectin-9的表达。结果 DNA测序和酶切鉴定证明Galectin-9基因正确克隆至pcDNA3.1(+)的多克隆位点;以重组质粒pGalectin-9瞬时转染CHO细胞,通过Western blot、RT-PCR和间接免疫荧光方法,在分子和细胞水平证实Galectin-9的表达。结论成功构建pGa-lectin-9的重组质粒,并证实其在CHO细胞中可以成功表达。     

重组人血管抑素的纯化和生物活性鉴定

目的：纯化大肠杆菌表达的重组人血管抑素（ｒｈＡＧＮ）并鉴定其抗血管生成生物活性。方法：通过超声破碎、包涵体洗涤、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００ 凝胶过滤层析等步骤初步纯化ｒｈＡＧＮ,Ｌｏｗｒｙ法测定蛋白浓度,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析观察其纯度;应用 ＭＴＴ法观察在终浓度为 ０．１～３．０ ｍｇ／Ｌ范围内 ｒｈＡＧＮ对 １０ μｇ／Ｌ ＥＧＦ刺激的人真皮微血管内皮细胞系ＨＤＭＥＣ的增殖抑制活性;以ＰＢＳ为对照（ｎ＝５）,应用原位鸡胚绒毛尿囊膜（ＣＡＭ）技术观察１００ μｇ／只（ｎ＝５）和２００ μｇ／只（ｎ＝５）ｒｈＡＧＮ作用７２ ｈ对３０ｎｇ ｂＦＧＦ 诱导的鸡胚ＣＡＭ毛细血管生成的抑制作用。结果：①ｒｈＡＧＮ电泳纯度达到 ９６％,总回收率为 ６１．７％;②ｒｈＡＧＮ对 ＨＤＭＥＣ细胞增殖的最大抑制剂量约为 ２．０ ｍｇ／Ｌ,抑制率约９２．３％．半数最大抑制剂量在１．０ ｍｇ／Ｌ附近;③１００ μｇ／只和２００ μｇ／只ｒｈＡＧＮ组鸡胚ＣＡＭ 载样滤纸片下毛细血管数目分别为７９±２３条和３７±１１条,两组间比较差异显著（Ｐ＜０．０５）;与对照组（１４５±３６条）相比,均有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结论：ｒｈＡＧＮ达到了较高的电泳纯度,     

重组人干扰素α2b表达与分离纯化研究

目的从湿菌体中分离纯化重组人干扰素α2b。方法采用(NH4)2SO4盐析-H3PO4处理-CM32离子交换层析-DE52离子交换层析-SephadexG100凝胶层析等非亲和层析纯化方法。结果回收率约为30%,HPLC检验纯度达96%,每毫克蛋白比活力达1.66×108IU。结论分离纯化系统令人满意,回收率较高。     

人胸腺素α1原核表达重组体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的：以基因工程方法获得人胸腺素α1（Tα1）多肽产品。方法：通过PCR扩增人工合成模板的方法获得人Tα1基因，然后将其克隆入原核细胞表达载体pGEMEX1，用重组体转化大肠杆菌，并从mRNA和蛋白质水平检测重组体在大肠杆菌中的表达情况。结果：构建人Tα1克隆重组体pUC18-Tα1，经序列分析证实对码、序列无误；成功构建了人Tα1原核细胞表达重组体pGEMEX1-Tα1;从mRNA水平证实pGEMEX1-Tα1在大肠杆菌JM109（DE3）中能够转录；转化大肠杆菌JM109（DE3），经IPTG诱导，能产生-36kD左右的融合蛋白。结论：构建成功重组体pGEMEX1-Tα1，并在大肠杆菌中得以表达。