两种大肠癌转移性细胞株双向电泳图谱的初步分析

目的初步分析大肠癌转移过程中差异表达的蛋白质．为阐述大肠癌转移的分子机制提供线索。方法以一对来自同一亲本．转移能力不同的人大肠癌细胞株SW620和SW480为实验对象．利用双向电泳技术(two—dimensional gel electrophoresis，2-DE)，建立并优化两种细胞株的蛋白表达图谱；之后利用Melanie ш软件分析与大肠癌转移相关的差异表达蛋白点。结果两种细胞株的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性；采用了非线性pH3—10及重叠窄范围的固相pH梯度胶条，提高了2-DE图谱的分辨率；初步选择11个差异表达蛋白点。结论非线性及重叠窄范围的固相pH梯度胶条可改善2-DE中蛋白分离的效果，初步分离的差异蛋白点为进一步鉴定大肠癌转移相关蛋白及建立大肠癌转移性细朐株的2-DE数据库奠定了基础．     

两种大肠癌转移性细胞株双向电泳图谱的初步分析

目的 初步分析大肠癌转移过程中差异表达的蛋白质,为阐述大肠癌转移的分子机制提供线索。方法 以一对来自同一亲本、转移能力不同的人大肠癌细胞株SW620和SW480为实验对象,利用双向电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE),建立并优化两种细胞株的蛋白表达图谱;之后利用Melanieш软件分析与大肠癌转移相关的差异表达蛋白点。结果 两种细胞株的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性;采用了非线性pH3-10及重叠窄范围的固相pH梯度胶条,提高了2-DE图谱的分辨率;初步选择11个差异表达蛋白点。结论 非线性及重叠窄范围的固相pH梯度胶条可改善2-DE中蛋白分离的效果,初步分离的差异蛋白点为进一步鉴定大肠癌转移相关蛋白及建立大肠癌转移性细胞株的2-DE数据库奠定了基础。     

血清双向电泳样品制备技术的优化及应用

1 材料和方法 取2.5 μL血清(约200 μg)与含SDS和DTT的缓冲液混合,在95℃下加热5 min,待冷却后用上样缓冲液(含7 mol/L 尿素,2 mol/L 硫脲,40 mol/L CHAPS,65 mmol/L DTT和5 mol/L IPG buffer)稀释至350 μL;取2.5 μL血清直接与347.5 μL的上样缓冲液混合.     

卵巢癌组织蛋白双向电泳分析技术的建立

目的:初步建立卵巢癌蛋白质组研究的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性.方法:提取卵巢癌肿瘤组织中蛋白质,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,对关键环节如样品处理、上样量分析和水化等进行一系列优化.进一步采用垂直SDS-PAGE进行第二相分离,银染显色、图像分析或软件分析电泳图谱.结果:通过实验条件的反复筛选获得了较为满意的卵巢癌双向凝胶电泳图谱.结论:本文初步建立了卵巢癌蛋白质组双向电泳分析方法,具有较好的分辨率和重复性,为进一步研究卵巢癌的差异表达及特异性分子标志物的筛选奠定了基础.     

以双向电泳为基础的肺癌组织差异蛋白分析策略

目的 优化肺鳞癌组织双向电泳方法,进行蛋白图谱差异分析.方法 收集癌组织以及癌外周组织标本,通过优化参数和方法,应用双向电泳技术分离组织总蛋白,比较差异蛋白.用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质指纹图谱(PMF),并进一步检索数据库.结果 获得了分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,得到了若干与细胞增生、分化、周期调控或肿瘤发生有关的蛋白.结论 建立了肺鳞状细胞癌组织的双向电泳方法.     

GSFs细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

目的：建立GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱。方法：用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养GSF细胞，胰酶消化后收集细胞，加入细胞裂解液使细胞充分裂解，离心后取上清液进行第一向等电聚焦电泳和平衡，再进行第二向SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）和银染显色及图像扫描与分析。结果：通过对GSF细胞蛋白提取液进行双向电泳，在17cm pH5～8IPG胶条上可得到重复性及分辨率均较好的蛋白位点。结论：GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立。为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。     

尿蛋白质组双向电泳的样品制备

目的 建立与优化非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者尿液全蛋白双向凝胶电泳技术(2-DE).方法 采用4种不同的方法制备尿液蛋白质样品,以非线性预制胶条进行第一向等电聚焦,12%的SDS-PAGE进行第二向电泳,银染显色.结果 以乙腈沉淀蛋白后经过超滤制备的蛋白质样品,在300μg上样量时,可获得图像清晰、分辨率高、重复性好的双向电泳图谱.结论 建立了较稳定的非小细胞肺癌患者尿蛋白质组双向凝胶电泳技术.     

双向电泳-质谱法寻找类风湿关节炎疾病相关蛋白

目的建立正常人及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血浆蛋白质的双向凝胶电泳图谱,并分析其差异表达的蛋白质,寻找RA疾病相关蛋白,以阐明RA的发病机制.方法采用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及类风湿关节炎患者血浆总蛋白质,凝胶经银染显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定.结果获得正常人及类风湿关节炎患者血浆蛋白双向凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为592和563,匹配率分别为89%和87%,通过比较分析,差异表达蛋白质点数为24,选取15个点进行质谱鉴定,成功鉴定7个蛋白质,其中6个蛋白质表达上调.结论两者间存在一些差异表达的蛋白质,为阐明RA的发病机制打下了坚实的基础.     

大鼠皮质双向电泳样品制备方法的优化

目的 优化大鼠皮质双向电泳样品制备方法．初步建立双向电泳条件．提高电泳分辨率和重复性。方法 分别应用三氯乙酸／丙酮沉淀法、超速离心法及改良超速离心法制备电泳样品．并比较各处理方法对电泳的影响。改良超速离心法即将混合了匀浆液Ⅱ的匀浆物4C放置过夜后再进行后续处理。结果 改良超速离心法所制备的电泳样品．不仅可以减少蛋白的降解．还可以增加蛋白的溶解性．从而获得分辨率较高、重复性较好的双向电泳图谱。结论 改良超速离心法更适于制备来源于中枢神经系统双向电泳样品。     

不同时段艾灸血清中内生性蛋白组分双向电泳的实验研究

目的:从血清蛋白质组初步探讨艾灸免疫调节中蛋白质分子的变化规律.方法:采用超速离心除盐方法预处理血清,进行一维和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离,凝胶银染显示各组蛋白质差异表达.结果:2-DE图谱中可辨识的蛋白质斑点达300～400个,除有看家蛋白、特异蛋白外,不同时段存在差异表达蛋白,从十几个至几十个不等.艾灸经穴组的蛋白质组分变化较为明显,以酸性蛋白点缺失和蛋白峰度下降最为主,而非经穴组血清蛋白变化不明显.结论:在特定穴位上艾灸刺激有助于清除血清中的免疫抑制物,使艾灸血清的蛋白质组分发生以酸性蛋白缺失为主的改变.     

胃腺癌组织蛋白质双向电泳图谱分析

目的　利用蛋白质组学方法建立分辨率高和重复性好的人胃腺癌组织及其正常胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱 ,并分析其差异表达的蛋白质 ,以期用于早期诊断。方法　采用固相pH梯度(immobilizedpHgradient,IPG)双向凝胶电泳 (two -dimensionalgelelectrophoresis ,2 -DE)分离人胃腺癌组织及正常胃黏膜组织的总蛋白质 ,凝胶经银染显色后 ,ImagingMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质。结果　 ( 1 )得到了分辨率较高、重复性较好的人胃腺癌组织和正常胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱 ,癌组织和正常胃黏膜组织凝胶的平均蛋白质点数分别为 1 0 4 9± 67和 1 0 97± 73,平均匹配的点数分别为 835± 48和 95 3± 5 6,匹配率分别为 79.6%和 86.7% ;同一组织凝胶在蛋白质点位置上有较好的重复性 ,不同凝胶间蛋白质点在等电聚焦 (isoelectricfocusing ,IEF)方向的偏差是 0 .873±0 .1 2 5mm ,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (sodiumdodecylsulfate -polyacrylamidegelelectrophore sis ,SDS -PAGE)方向上的偏差为 1 .0 2 5± 0 .2 1 3mm。 ( 2 )通过比较分析 5例胃腺癌组织及正常胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱 ,得到平均匹配蛋白质点数为 769± 45 ,差异表达蛋白质点数为 81 ,其中 1 7个点仅     

结直肠癌组织的二维荧光差异凝胶电泳分析

目的 以二维荧光差异凝胶电泳(2-D DIGE)技术分析结直肠癌(CRC)组织及正常结直肠组织的蛋白质表达差异.建立二者间的蛋白质表达差异图谱.方法 6对样品分别取自6例CRC手术切除的新鲜的癌和正常肠黏膜组织,进行2-D DIGE,Typhoon~(TM)多功能扫描仪进行图像扫描,并以DeCyder~(TM) 2-D差异分析软件分析.结果 正常肠黏膜组织和癌组织有统计学差异(P<0.05)的表达蛋白点共有315个,癌组织中表达上调(>1.5倍)的有138个,下调(>1.5倍)的有103个.结论 建立了CRC与正常肠黏膜组织的2-D DIGE图谱,发现并经统计学证实癌组织中有表达上调或下调的蛋白存在.     

糖尿病大鼠肾脏蛋白表达的双向电泳分析

目的:观察糖尿病大鼠肾脏的蛋白质组,进一步探讨糖尿病引起肾脏病变的可能机制.方法:采用链脲菌素(STZ)诱发Wistar大鼠产生高血糖,建立1型糖尿病大鼠模型.用固相pH梯度双向凝胶电泳(2D-PAGE)分离糖尿病大鼠与正常大鼠肾脏的蛋白质.考马斯亮蓝染色凝胶后,用ImageMaster 2D Platinum计算机软件进行图像分析.结果:图像分析测得2块大胶的匹配率达64%,在等电点3～10、分子量14.4～97.4 kD分离得到实验组大鼠肾脏的蛋白质点约1 073个,对照组大鼠的蛋白质点约1 059个,其中至少70个蛋白点在两组肾脏间有2倍以上量变.结论:实验组大鼠肾脏蛋白质表达发生变化,差异蛋白质点的进一步研究有助于探讨糖尿病肾病的发病机制.     

大鼠胰腺蛋白质组研究中双向电泳技术的初步建立

目的：初步建立大鼠胰腺蛋白质组研究中双向电泳技术，提高其分辨率及重复性。方法：应用大鼠成年和胚胎18天胰腺组织提取的总蛋白，对以载体两性电解质pH梯度为第一向的双向电泳关键因素与环节，如样品处理、凝胶制备、电泳参数等进行一系列的优化。结果：获得了分辨率及重复性均很好的双向电泳图谱。结论：通过对各种条件的优化，初步建立了双向电泳技术，为研究胚胎胰腺不同时期特异性蛋白的表达及分子标志打下基础。     

适于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术

 【目的】 建立适于人表皮组织的双向电泳技术,并应用质谱技术对人表皮组织蛋白质组进行初步分析?【方法】 利用组织匀浆法制备人表皮组织总蛋白?固相pH 梯度胶条进行双向电泳?PDQuest 7.4软件比较和分析电泳图谱,利用质谱技术鉴定部分蛋白斑点?【结果】 成功建立了适用于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术,获得和比较了人表皮组织双向电泳四种染色图谱?人表皮组织的蛋白质在pH5～8范围内分布均匀,分子量集中在15～100 ku之间?银染图谱获得的蛋白斑点数为586±14;对质谱兼容的几种染色方法进行比较分析,结果表明Neuhoff 胶体考染更适合于人表皮组织蛋白质的双向电泳分析,其在上样量为350 μg时蛋白斑点数达394±9,匹配率为85.53%?利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术成功获得了Neuhoff 胶体考染的两个蛋白斑点的肽质量指纹图谱,并鉴定为Caspase 14 前体和27 ku热激蛋白1?【结论】建立的表皮组织双向电泳技术及其图谱可为皮肤蛋白质组学研究提供参考,为人皮肤蛋白质组学平台的构建奠定良好基础?     

血清双向凝胶电泳体系的建立

目的:建立血清双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)技术体系.方法:用Proteoprep blue albumin depletion kit将血清中高峰度蛋白去除.预冷丙酮沉淀蛋白质后,加入样品溶解液充分溶解,进行等电聚焦电泳(isoelectric focusing,IEF)和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel elecrophoresis,SDS-PAGE),行硝酸银染色后,运用ImageMaster软件行初步分析.结果:通过调整,优化2-DE技术条件,建立了稳定的2-DE技术.结论:建立了相对稳定的人血清蛋白质2-DE技术,其稳定性、重复性好,为开展疾病蛋白质组学的研究奠定了基础.     

人肝癌胞浆蛋白质双向电泳的研究

用高分辨率的蛋白质双向电泳对人肝癌及正常肝组织的胞浆蛋白质进行检测。结果表明肝细胞癌变后,胞浆蛋白质双向电泳图谱发生了显著改变,总点数增加,蛋白质点的分布向低分子量低等电点偏移,出现了一些新的蛋白质点,有些蛋白质点密度增加,有些蛋白质点密度减少或消失。     

大鼠脊神经蛋白质组研究中双向电泳技术的建立

目的探讨双向凝胶电泳技术在大鼠脊神经组织蛋白质组研究中的应用。方法应用高蛋白溶解度裂解液提取正常大鼠脊神经组织蛋白质，以固相pH梯度等电聚焦电泳和垂直板SDS-PAGE电泳结合的方法进行蛋白质的分离，使用银染和考马斯亮蓝两种方法分别对凝胶进行染色。结果正常大鼠脊神经组织样品在18cmpH3～10非线性固相pH梯度干胶条，12．5％的Acr-Bis PAGE的胶上可分离到900个左右蛋白点，不同凝胶间蛋白点平均匹配率为80％。结论实验所采用的高离液剂体系的裂解液，及对第一向和第二向电泳过程中各个因素及环节的把握，是获得大鼠脊神经组织蛋白质双向电泳图谱的关键。     

肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝组织蛋白质双向电泳图谱的建立与分析

目的:建立具有高分辨率和稳定性的大鼠肝组织蛋白质组研究的双向电泳图谱,并对其进行差异蛋白质组分析.方法:正常大鼠和肾上腺切除造成的肾阳虚模型大鼠,肝组织匀浆后提取总蛋白,用Cy3或Cy5标记,每一个Cy3标记样品和一个Cy5标记样品与一个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同波长单色光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.所获得的图谱用DeCyder软件进行分析.结果:在肾阳虚大鼠肝组织,有8个蛋白质表达水平显著增加,9个蛋白质表达水平显著下降.结论:分析所得的17个差异蛋白质可能与肾阳虚疾病有关.