西方马脑炎病毒抗体快速检测试纸条的研制

目的研制一种快速检测西方马脑炎病毒（WEEV）抗体的试纸条。方法利用胶体金标记和免疫层析技术,用25 nm胶体金标记葡萄球菌A蛋白,并用硝酸纤维膜包被WEEV抗原及羊抗兔IgG作为检测带和质控带,研制出WEEV抗体快速检测试纸条。对该试纸条的敏感性、特异性和稳定性做出评价,并拟合检测曲线进行半定量检测。在健康人血清、兔血清和鼠血清中添加WEEV抗体模拟污染样品,评价该方法的检测能力。结果该试纸条可在20 min内完成定性和半定量检测,灵敏度为120 ng/ml,模拟样品的检测灵敏度也相同。线性范围120～1200 ng/ml。对发病症状相似以及近缘的其他病毒进行检测,均无非特异反应。试纸条在37℃下保存1个月,检测结果不变。结论该试纸条具有快速、简便、灵敏、特异、稳定的特点,适用于现场检测。     

多残留金标快速检测法在乳品抗生素残留中的应用

目的采用金标快速检测法测定牛奶中抗生素残留情况,探讨该方法在乳品中的应用效果。方法取10份不含氨基糖苷类和氟喹诺酮类药物的牛奶样品,通过加入不同浓度抗生素的标准品,用金标快速检测试剂盒进行测定,分析其灵敏度和特异性。结果多残留金标快速检测试剂盒可用于牛奶中庆大霉素、卡那霉素和氟喹诺酮类药物的测定,其灵敏度分别为0.100μg/ml,0.100μg/ml,0.050μg/ml;该试剂盒特异性较强,与非同源的其他抗生素无交叉反应。结论该试剂盒操作简便,判读明了,可推广用于大量样品的抗生素筛检。     

诺如病毒纳米酶试纸条检测方法的建立

目的利用纳米酶催化活性,建立高灵敏度诺如病毒检测方法。方法首先进行纳米酶合成、表征及酶活力测定,然后通过纳米酶与诺如病毒抗体偶联,制备诺如病毒纳米酶-抗体探针,组装成纳米酶试纸条,用诺如病毒纳米酶试纸条检测不同浓度抗原,从灵敏性、特异性等方面对建立的方法进行评价。结果纳米酶表征大小均一,颗粒直径为(100±10)nm,纳米酶比活性9.33 U/mg。研发的纳米酶试纸条对诺如病毒的最低检出浓度为10 ng/ml,比普通胶体金试纸条灵敏度高10倍;与轮状病毒、腺病毒、幽门螺杆菌均无交叉反应。结论纳米酶试纸条检测诺如病毒具有简便、快速、可现场应用的优点,在诺如病毒快速检测中具有实际应用价值。     

嗜肺军团菌核酸等温扩增快速检测技术研究

目的建立一种嗜肺军团菌的核酸等温扩增试纸条及pH显色快速检测方法,从而实现对空调冷却水样中嗜肺军团菌的快速现场检测。方法基于嗜肺军团菌特异性mip基因设计引物,建立环介导等温扩增体系,并结合反应产物横向流动试纸条和pH显色检测技术,进而验证方法的灵敏性、特异性,并对浙江省不同地区的中央空调冷却水水样进行检测。结果环介导的等温扩增试纸条及pH显色检测方法灵敏度可高达3 cfu/μl,特异性好,且检测时间仅需40 min左右。检测的灵敏度与荧光定量PCR的方法基本一致,对外环境空调冷却水的检测阳性率与荧光定量也相符。结论建立的嗜肺军团菌试纸条与pH显色快速检测方法,灵敏度高,特异性好,适合现场快速检测。     

自来水及水源水有机提取物类雌激素活性研究

为了检测自来水及水源水有机提取物的类雌激素活性 ,应用环境雌激素基因重组酵母、细胞增殖和子宫增重等三项短期生物学实验进行测定。结果发现 :水样有机提取物在相当于原水量 50ml时两项体外实验均检出雌激素活性 ,原水量 2 50ml时细胞增殖效应达到最大 ,以后随原水量增大细胞增殖效应逐步减弱。原水量 12 50ml时酵母菌β -半乳糖苷酶活性最强 ,以后随原水量增大 β -半乳糖苷酶活性逐步减弱。水厂水源水有机提取物低、中剂量组受试小鼠子宫湿重增加 ,与对照组比较有统计学意义 ,高剂量组湿重减少。提示水源水有机提取物具有类雌激素活性。采用这三项实验组成的生物学检测程序具有一定的灵敏度 ,且较快速、方便。     

甲型H1N1流感病毒快速诊断核酸试纸条的研制及应用

目的建立一种快速、灵敏度高、特异性强的核酸试纸条检测甲型H1N1流感病毒。方法根据2009年公布新型甲型H1N1流感病毒基因组序列设计合理的引物建立环介导恒温扩增体系,并在体系中加入含生物素的标记探针;在恒温下扩增45 min后产物与醋酸纤维棉片结合进行胶体金免疫试纸条显色反应,利用该方法检测76例确诊甲型H1N1流感病毒感染患者的咽部分泌物,同时采用卫生部公布的合格试剂盒进行对比试验。结果 76例确诊患者咽部分泌物经核酸试纸条检测全阳性,经对比试剂盒检测103拷贝/ml的标本进行10倍稀释后采用核酸试纸条检测结果仍能测出。结论核酸试纸条法检测甲型H1N1流感病毒具有快速、灵敏度高、特异性强的特点更适合于临床快速诊断。     

疟原虫新型恒温扩增快速筛检方法的研究

目的建立可现场使用的疟原虫快速检测方法,为检验检疫基层实验室开展筛检和监控工作提供技术手段。方法通过合成特异引物和探针,系统筛选,优化恒温扩增条件,建立疟原虫核酸等温扩增方法,用免疫层析试纸条快速检测扩增产物,并测试其灵敏度和特异性。结果疟原虫交叉引物恒温扩增方法灵敏度达到103拷贝/ml,反应特异,操作简便,不需要特殊设备,3h可报告结果。结论本研究应用交叉引物恒温扩增技术(CPA)对疟原虫的核酸进行扩增,并应用试纸条检测技术检测核酸扩增产物,检测时间短,具有一定的应用价值。     

一种快速筛查金黄色葡萄球菌的荧光纳米免疫层析方法的建立

目的建立一种快速筛查金黄色葡萄球菌的荧光纳米免疫层析检测方法。方法以荧光纳米颗粒作为示踪标记物,采用双抗体夹心法检测金黄色葡萄球菌A蛋白,制备了稀土离子标记的免疫层析试纸条,在紫外激发光源下判断反应结果。对该方法的特异性、敏感性和样本检测的适用性进行了分析。结果所制备的试纸条具有良好的特异性,与表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、沙门菌、志贺菌、大肠杆菌、O1/O139群霍乱弧菌、副溶血性弧菌均无交叉反应。用该试纸条检测纯菌液和未经培养的粪便、呕吐物的灵敏度为7.2×104CFU/ml,检测经培养的模拟污染食物样本、粪便样本的检测限最低为7.2×102CFU/ml,反应在15 min内完成。结论本研究成功建立了金黄色葡萄球菌的荧光纳米免疫层析检测方法,能够快速检测食品、奶制品、呕吐物、粪便中的金黄色葡萄球菌,具有良好的特异性和灵敏性,便于开展现场快速检测。     

胶体金免疫层析试纸快速灵敏检测沙门菌

目的建立快速、灵敏检测沙门菌的免疫层析试纸方法。方法根据沙门菌的16S DNA序列设计引物进行PCR扩增,并根据PCR产物设计2种特异性探针(探针B和探针F),分别在其5'端和3'端标记Biotin和FAM。PCR产物与探针杂交后应用于免疫层析试纸条。当检测有沙门菌时试纸条会出现2条红线,当没有沙门菌会出现1条红线。对探针的浓度进行优化后,检测沙门菌以及其他7种细菌分析该方法的特异性,并检测不同浓度(107cfu/ml~101cfu/ml)的沙门菌,分析其灵敏度。结果探针的最优浓度为1μmol/L,检测除沙门菌外的其他7种细菌,结果均显示阴性,检测沙门菌的最低浓度为10~2cfu/ml。结论该实验方法的灵敏度高、特异性好,适用于检测沙门菌,有良好的应用性。     

食源性疾病监测中副溶血性弧菌现场快速检测方法的建立与应用

目的建立食源性病原菌副溶血性弧菌的快速检测方法,应用于基层实验室食源性暴发疫情病原的现场快速检测。方法采用恒温扩增-核酸试纸条方法、荧光定量PCR和典型生化联合筛检法对239份临床样本、152份食品样本进行平行检测比较。通过标准菌株试验,观察方法的敏感性与特异性。结果用恒温扩增-核酸试纸条法、实时荧光定量PCR法、典型生化联合筛检法同时对239份临床患者腹泻样本和152份食品样本进行检测,结果临床样本的阳性检出率均为11.72%,食品样本的阳性率分别为19.73%、20.39%、20.39%,3种方法的阳性率差异无统计学意义(P0.05)。3种检测方法的食品检测、特异性试验结果差异均无统计学意义(P0.05),但敏感性试验结果检测下限恒温扩增-核酸试纸条法、实时荧光定量PCR法均为10-5稀释度(菌量22 cfu/ml),典型生化联合筛检法为10-4稀释度(菌量186 cfu/ml)。结论恒温扩增-核酸试纸条方法具有检测时间短、灵敏度高、特异性强、仪器简单等优点,可应用于基层实验室的现场快速检测。     

Investigation of the residue of the fasciolicide nitroxynil in milk and dairy products]

A sensitive gas chromatographic method with electron capture detection of the fasciolicide, nitroxynil, in milk and dairy products was developed and was applied to assess nitroxynil concentration in cow's milk after subcutaneous injection of three lactating cows. The level of nitroxynil in cow's milk reached a maximum (0.25-0.26 micrograms/ml) in 6-30 hours, and was undetectable within 8 weeks. Analysis of nitroxynil concentrations in cream, skimmed milk, curd and whey prepared from nitroxynil excreting cow's milk showed that the chemical became concentrated in cream and curd. Nitroxynil appeared to be stable at temperature used in LTLT and HTST pasteurization with the rate of degradation in milk being less than 10%. Investigation of nitroxynil residues in milk (raw, liquid whole, processed) and dairy products (processed cheese, natural cheese, butter, sweetened condensed milk, evaporated skimmed milk, skimmed milk powder, formulated milk powder) was performed during 1976-1979. Nitroxynil was detected in 20% of milk samples at a maximum level of 39 ng/ml, with one formulated milk powder at level of 0.34 ng/g. Confirmation of nitroxynil was performed by GCMS. The results of this investigation were promptly reported to the government. Since then administrative guidance was provided leading to appropriated use of nitroxynil thereafter. The ordinance controlling dairy production amended in 1979 revised the withdrawal time for medicines administrated to cows from "three days" to "the period when medicine remains in the milk". There was no mutagenicity of nitroxynil evident by the Ames test.     

利用胶体金免疫层析技术快速定量检测单增李斯特菌方法的建立

〔目的〕建立胶体金免疫层析技术快速定量检测单增李斯特菌方法。〔方法〕利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立单增李斯特菌的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合标准曲线进行定量检测;在牛奶、橙汁、果冻等即食食品样品中添加单增李斯特菌模拟污染样品,评价该方法对半固体、液体等即食食品、可疑生物恐怖样品的检测能力。〔结果〕该法可在10min内完成定性和半定量检测,定量检测灵敏度为3.5×103cfu/ml,线性范围3.5×105～3.5×108cfu/ml,回收率在99%～101.7%之间。〔结论〕建立的检测单增李斯特菌的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地对样品中的单增李斯特菌进行定性、定量检测。     

Organochlorine Pesticide Residues in Bovine Milk from Organic Farms in Chiapas,Mexico

Thirty six samples of bovine milk were collected from Chiapas State, Mexico between January 2011 and December 2011 with the intention of identifying and quantifying organochlorine pesticide residues in organic farms. The analyses were done using gas chromatography with an electron capture detector (Ni⁶³). In general the values found in raw milk were lower than the permissible limit proposed by FAO/WHO/Codex Alimentarius 2006. Average concentrations for alpha + beta HCH were 3.62 ng/g, gamma HCH 0.34 ng/g, heptachlor + epoxide 0.67 ng/g, DDT and isomers 1.53 ng/g, aldrin + dieldrin 0.77 ng/g, and endrin 0.66 ng/g (only present in samples from farm 2). The organic milk from Chiapas has shown low concentrations of pesticide residues in recent years and satisfies international and national regulations for commercialization.     

高效液相色谱质谱联用法同时测定牛奶中氯霉素、甲砜霉素残留量

目的 建立高效液相色谱-质谱联用同时测定牛奶中氯霉素、甲砜霉素方法。方法 样品经乙腈液-液萃取、聚醚砜针式过滤头过滤后,再经ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱梯度洗脱分离,单四级杆质谱仪检测,标准曲线法定量。结果 氯霉素和甲砜霉素线性回归方程分别为y=82.276x+141.31和y=299.92x+267.31;在0.1ng/ml~100ng/ml范围内,线性相关系数均大于0.999;方法检出限分别为0.25μg/kg和0.27μg/kg;加标回收率分别为91.3%~97.3%和89.0%~98.2%。相对标准偏差(RSD)均＜5.6%。结论 本方法快速、简便、准确、灵敏,适合于牛奶中氯霉素和甲砜霉素的测定。     

Relative zinc availability in human breast milk, infant formulas, and cow's milk

The concentration and bioavailability of zinc was analyzed in 10 varieties of milk. The concentration of zinc averaged 4.1 microgram/ml in unprocessed (raw) cow's milk; fortified infant formulas contained about 3 to 5 microgram Zn/ml; human breast milk and processed cow's milk contained approximately 2 microgram Zn/ml; sweetened condensed milk contained 1.3 microgram Zn/ml, and reconstituted nonfat dry milk contained 0.4 microgram Zn/ml. The mean values for zinc bioavailability to rats were as follows: sweetened condensed milk = 66%; human breast milk 59.2%, processed cow's milk = 43.7 to 50.9%; unprocessed (raw) cow's milk = 42%; nonfat dry milk = 41.2%, and infant formulas = 26.8 to 39.5%. Assuming similar absorption of zinc in rats and humans, our experimental results provide some guidelines for estimating the quantity of zinc that would actually be absorbed from various types of milk.     

大肠杆菌O157胶体金免疫层析快速筛查方法的建立

目的建立一种大肠杆菌O157的胶体金免疫层析快速筛查方法。方法利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157,对该法进行敏感性、特异性和食品样品的适用性分析。结果该法能在15分钟内完成检测,检测不同的肠杆菌科细菌(非O157型大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、柠檬酸杆菌、肠杆菌、沙雷菌、耶尔森菌)、葡萄球菌、李斯特菌、气单胞菌、弧菌等共24种30株常见细菌,未发现有交叉反应,显示该法特异性良好。检测大肠杆菌O157的最低检出浓度为1×105cfu/ml。方法适用于奶粉、面粉、淀粉、咖啡粉、饼干、蛋糕、果冻、燕窝和果汁等食品样品的检测。结论新建立的大肠杆菌O157胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查。     

改良奶牛与传统蒙古黄牛的牛奶中雌激素和孕激素含量的比较

目的 测定我国目前市场上销售的改良奶牛的牛奶中雌激素和孕激素的含量,比较改良奶牛和传统蒙古黄牛所产牛奶的雌激素和孕激素含量.方法 用酶联免疫试剂盒测定牛奶中的雌酮、雌二醇、孕酮含量;并通过文献阅读和现场调查比较家庭散养的蒙古黄牛和饲养基地的改良奶牛在饲养和牛奶生产上的差异.结果 本研究中测定的蒙古黄牛奶中雌酮平均浓度为(98.5±12.4)pg/ml,雌二醇平均浓度为(24.6±3.0)pg/ml,孕酮平均浓度为(0.2±0.3)ng/ml.3种晶牌的市售奶之间,雌激素和孕激素的浓度高低不等,雌酮浓度分别为(150.2±8.4)、(131.3±16.3)、(128.9±13.0)pg/ml;雌二醇浓度分别为(35.4±2.2)、(30.3±3.1)、(30.0±2.0)pg/ml;孕酮浓度分别为(20.2±1.5)、(18.1±2.2)、(16.5±2.4)ng/ml.3种市场奶中的雌酮、雌二醇以及孕酮的含量均高于黄牛奶中的含量(雌酮此较:t=5.43,19.23,5.89;雌二醇比较:t=4.14,4.93,14.03;孕酮比较:t=28.47,32.73,22.82;P值均<0.05).文献阅读和现场调查发现家庭散养的传统黄牛在妊娠中后期不产奶,而奶牛饲养基地的改良奶牛在雌激素和孕激素水平显著升高的妊娠中后期继续产奶,改良奶牛的泌乳期明显延长,产奶量明显增加.结论 目前我国市场上销售的牛奶中含有一定量的雌激素和孕激素,含量高于蒙古黄牛生产的牛奶.这一结论不能否定牛奶的营养价值,旨在提醒大家关注牛奶中的雌激素和孕激素可能对健康产生的影响.     

气相色谱-氮磷检测器测定牛奶及奶粉中三聚氰胺

目的:建立应用气相色谱-氮磷检测器测定牛奶及奶粉中三聚氰胺含量的方法。方法:样品用三氯乙酸提取,MCX阳离子固相萃取柱净化后,采用DB-1701毛细管柱和氮磷检测器进行检测。结果:方法线性范围在0.05μg/ml～5μg/ml,定量限为0.1 mg/kg(牛奶)和0.25 mg/kg(奶粉),相对标准偏差为2.1%～7.9%,回收率为86.4%～108%。结论:本方法不经衍生化处理直接测定三聚氰胺,简便、快速,灵敏度较高。     

上海市市售禽肉中金黄色葡萄球菌污染的半定量风险评估

目的了解上海地区生牛乳中金黄色葡萄球菌污染状况,产肠毒素特性及细菌耐药性。方法采集上海地区4家奶牛场共计306份生牛乳, 按照GB4789.10《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定及毒素测定,并对检出的金黄色葡萄球菌根据临床与实验室标准化协会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法进行药敏试验,定量测定最低抑菌药物浓度(MIC)。结果共检出金黄色葡萄球菌32株, 检出率为10.5%;其中17株产肠毒素阳性, 阳性率为53.1%;对上述金黄色葡萄球菌株进行12种抗生素的耐药检测,其中耐药最严重的是青霉素、氨苄西林、红霉素、四环素,耐药率分别达78.1%、65.6%、53.1%、21.9%,并表现出多种耐药谱。结论上海地区生牛乳中金黄色葡萄球菌污染及其肠毒素产毒能力较强,耐药情况严重,这与奶牛养殖过程中抗生素暴露有关,建议上海地区奶牛场扩大对奶牛乳腺炎治疗的药物筛选范围,根据药物敏感实验结果合理选择抗菌药物。     

氯霉素竞争ELISA检测试剂盒的研制

目的应用抗氯霉素多克隆抗体,建立竞争ELISA分析方法,研制氯霉素残留快速检测试剂盒,并对其性能进行测定。方法选用抗氯霉素高特异性抗体,直接包被抗体后,将酶标记氯霉素和氯霉素标准品或样品加入预先包被了特异性抗体的孔内,建立直接竞争ELISA检测试剂盒。结果所选用的抗体对氯霉素亲和力高,与链霉素、四环素、土霉素、青霉素4种抗生素及克伦特罗的交叉反应率均小于0.01%;抗体的特异性强;检测质量浓度为50、10.5、0.5mg/ml样本时,平均变异系数为11.4%;对氯霉素残留检测的标准曲线为y=-14.843logx+56.692,R2=0.9965,线性范围为0.02～64.0ng/ml,检测限IC10为0.451ng/ml,灵敏度IC50为2.82ng/ml,样品的加标回收率为72%～113%。结论试剂盒检测的准确性和重现性较好,可用于批量虾肉、鸡肉、牛奶等样品中氯霉素残留的检测。