紫外线处理聚苯乙烯微量板的ELISA法检测合成肽的抗体

用普通ELISA技术检测合成肽的特异抗体,有时会受到肽链不易在固相支持物上固定的限制,为了改进合成肽在固相上的附着能力,作者用紫外线(UV)照射聚苯乙烯微量板建立了一种灵敏和快速的免疫分析法。最佳照射时间的选择:将聚苯乙烯微量板用UV照射(辐射强度为3.39J.cm~(-2))照射3～20分钟(不得超过20分钟,否则板会受热而损坏)后,包被合成肽SP89051(HIV包膜蛋白gpl20的片断)(2.5μg/ml),按ELISA法,测定HIV-1阳性病人的血清及抗合成的gp     

用亲和素-生物素改良的反向被动血凝试验检测HIV抗原

分离和定量测定人类免疫缺陷症病毒(HIV),需要有鉴定感染细胞中病毒或其蛋白或核酸的方法.目前常用的方法有逆转录酶测定、分子杂交或ELISA.这些方法都需要昂贵的设备和材料且费时.作者介绍了一种检测HIV抗原的新方法,称为亲和素-生物素改良的反向被动血凝试验(AB RPHA).它是把人O型Rh阴性红细胞经过处理后,用亲和素包被,然后与生物素化的HIV抗体结合,在1%胎牛血清生理盐水中制成2%悬液,-70℃冻存或加10%葡萄糖冻干.     

生物素-亲和素系统及其应用(上)

生物素(Biotin)即维生素H,是动植物体内广泛存在的一种生长因素,在蛋黄和肝、肾等组织中有较高的含量。亲和素(Avidin)又称抗生物素蛋白,对生物素有很强的亲和     

酶法合成中对羟基苯甘氨酸的检测

建立了酶法合成中对羟基苯甘氨酸的定量检测方法，该检测体系不仅能准确地测定酶法合成过程中产物对羟基苯甘氨酸的含量，而且对底物对羟基本海因能同时进行测定。避免培养液中各成分的干扰，通过标准加入法测定对羟基苯甘氨酸及对羟基苯海因的回收率分别为97．8％～102.1％、98.3％～101.6％。结果表明该检测体系简单、实用，测定结果准确、可靠。     

应用亲和素——生物素——过氧化物酶复合物技术检测组织细胞中的禽呼肠孤病毒抗原

应用亲和素——生物素——过氧化物酶复合物(ABC)技术检测经不同途径接种ARV的鸡只,结果表明ARV抗原广泛分布于内脏实质器官、肠道、腱鞘和滑膜。在接种后4周除腱鞘和滑膜外,都检不到病毒抗原的存在,而这两种组织到试验结束时(60d)仍为阳性,感染鸡血液涂片的ABC检测结果均为阴性,ABC技术比病毒分离法更敏感。     

一种利用亲和素-生物素反应检测细菌多糖抗体的ELISA技术

由于纯多糖(PS)抗原不能有效地粘附于固相介质,其重演性也差,因而不能采用BLISA检测相应的抗体.作者以亲和素包盖微量滴定板,利用亲和素与生物素之间的高度亲和性,将生物素化的PS牢牢结合于微量     

β-内酰胺抗生素的酶法合成研究进展

β-内酰胺抗生素的酶法合成是21世纪β-内酰胺抗生素发展的必然趋势之一,本文对近年来β-内酰胺抗生素合成研究、产品的分离纯化、酶反应器研究进行概述。     

利用生物素-亲和素系统提高ELISA的灵敏度

ELISA的灵敏度一般低于或相当于微量固相放射免疫测定(RIA)。结合使用生物素-亲和素(Biotin-Avidin,B-A)系统,可提高ELISA灵敏度。B-A的优点表现为:(1)亲和     

用合成肽检测人体对乙型肝炎疫苗抗体应答的亲和力

作者对接种乙型肝炎疫苗后人体产生的抗-HBs和两种构型不同的合成肽的结合能力与抗-HBs和天然HBsAg的结合能力进行了比较研究,并用上述特异性合成肽作为探针测定接种乙型肝炎疫苗后产生的抗-HBs的亲和力。     

α-生育酚琥珀酸酯的酶法合成研究进展

酶法合成具有反应条件温和、选择性高及环境友好等特点,为制备高质量的α-生育酚琥珀酸酯提供了一条新途径.本文首先概述了酶法合成α-生育酚琥珀酸酯的催化剂及其催化机制,重点介绍了酶催化合成α-生育酚琥珀酸酯的研究成果,讨论了酶催化合成α-生育酚琥珀酸酯研究中的若干问题,最后展望了酶催化合成α-生育酚琥珀酸酯的发展前景.     

酶法合成β-内酰胺类抗生素的现状及展望

β-内酰胺类(β-Lactams)抗生素基本上都含有一个如下的四员环: 在R_2和R_3的位置接上一个含硫的五员环即青霉素(Penicillins),含硫的六员环即头孢菌素(Cephalosporins),R_1通常是一个含有酰胺键的侧链,核心环是由半胱氨酸及缬氨酸并合而成的。     

西他列汀的化学-酶法合成

目的研究西他列汀的化学-酶合成方法。方法以2,4,5-三氟苯乙酸(1)、米氏酸(丙二酸亚异丙酯,2)及3-三氟甲基-5,6,7,8-四氢[1,2,4]三唑并[4,3-a]哌嗪盐酸盐(5)为反应试剂,通过"一锅法"反应制得β-酮酰胺(6),随后,突变型ATA-117转氨酶催化转化6得到西他列汀(7)。结果经化学合成和生物转化,合成了西他列汀磷酸盐,总收率为50.7%,其结构经MS、1H-NM R和13C-NM R数据得到确证。结论本化学-酶法适宜工业化生产。     

急性中毒患者血浆和肽素检测的临床意义

目的探讨和肽素检测对急性中毒患者病情评估的价值。方法 ELISA法检测175例急性中毒患者(中毒组)和30例健康志愿者(对照组)血浆和肽素含量,予急性生理学及慢性健康状况评分系统(APACHE)Ⅱ评分。记录患者30d病死率,比较死亡组和存活组血浆和肽素水平及APACHEⅡ评分。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血浆和肽素水平及APACHEⅡ评分对患者死亡的预测价值。结果 (1)死亡组患者血浆和肽素水平及APACHEⅡ评分高于对照组和存活组(P<0.01),血浆和肽素水平与APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.71,P<0.01)。(2)血浆和肽素水平和APACHEⅡ评分的ROC曲线下面积分别为0.748和0.665,95%可信区间分别为0.649-0.847和0.528-0.801。(3)血浆和肽素水平分界值为18.5pmol/L时,其预测死亡的灵敏度为81.0%,特异度为35.1%;APACHEⅡ评分分界值为7.5分时,其预测死亡的灵敏度为66.7%,特异度为44.8%。结论急性中毒患者血浆和肽素水平升高。联合血浆和肽素水平检测和APACHEⅡ评分有助于评估急性中毒患者的预后。     

酶法制备半合成β-内酰胺抗生素的进展

在抗生素产品中,半合成β-内酰胺类抗生素发展最快。目前半合成β-内酰胺抗生素仍以化学合成法为主。但化学法存在收率低、副反应多以及三废公害等问题,因而人们不断地对酶法制备半合成β-内酰胺抗生素进行研究,其中酶法制备氨苄青霉素、头孢菌素Ⅰ和头孢菌素Ⅳ已可供实用。本文介绍最近几年酶法制备半合成β-内酰胺抗生素的进展。     

L-天冬氨酸六肽-布洛芬的合成

目的 合成可能具有骨靶向性的非甾体抗炎药.方法 使用混合酸酐法制备L-天冬氨酸六肽,分别用混合酸酐法和DCC法连接布洛芬,氢化还原得产物.结果 制备得到L-天冬氨酸六肽-布洛芬,产物经MS确证.结论 所用方法经济,可靠.     

血管紧张素转化酶抑制剂——膦三肽的合成

由Ｎ－保护α－氨基烃基膦酰氯与氨端游离的三肽缩合，合成了一系列具有血管紧张素转化酶（ＡＣＥ）抑制活性的膦三肽化合物，差向异体的膦三肽可用反相柱Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ－Ｃ１８层析分离，并利用＾３１Ｐ－ＮＭＲ推定未定手性中心的构型，测定了系列抑制剂的体外半抑制活性常数ＩＣ５０。     

人血清甲状腺素的生物素-亲和素竞争酶联免疫分析

目的:建立人血清T4-BA-ELISA分析方法。方法:合成的3种生物素化的T4-衍生物、经过筛选,Biotin-BSA-T4被用于以下实验中:T4在三氯乙酸作用下与甲状腺T4结合球蛋白（TBG）分离,并与Biotin-BSA-T4对有限量的兔抗人T4IgG形成竞争,在链霉亲和素化辣根过氧化物酶（streptavidin-HRP）存在下,以四甲基联苯胺（TMB）为底物,进行T4的ELISA定量分析。结果:标准曲线的可测量范围是10～20μg/L,批内变异系数为7.1％,批间变异系数为 8.03％。另外,用EIA和RIA同时测定了71份血清标本,对两套数据作了回归分析.r=0.969 5,P<0.001。结论:此方法的灵敏度已达到甚至超过了放射免疫分析的灵敏度,标准曲线范围与放射免疫分析相同。     

甲状旁腺素1-34肽的固相合成

目的以Wang树脂为载体 ,应用芴甲氧羧基 /tBu方法合成人甲状旁腺素。方法芴甲氧羧基保护氨基酸用 1 氧 3 双二甲胺羧基苯骈三氮唑四氟化硼盐 / 1 羧基苯并三氮唑活化后 ,进行缩合反应。合成的多肽用三氟乙酸处理 ,从Wang树脂上切除。所得粗肽用SP Sepharose FF色谱柱和半制备型高效液相色谱分离纯化。结果用反相高效液相色谱法和毛细管电泳法鉴定纯度在 92 %以上。通过电喷雾质谱法测定其分子量为 4 1 1 6D ,与计算值相符。总收率为 8%。结论此工艺简单 ,易于扩大 ,适合于规模化生产     

用微孔板读数仪快速比色法检测转化生长因子-β

<正> 我们介绍了一种改良的快速、半自动生物检测法以检测转化生长因子-β(TGF-β)这一多功能细胞因子。此方法避免采用放射性同位素标记技术。近来,Danielpour等(1989)对最先的生物测定法作了改进,他们采用的是貂肺上皮细胞系(Mv1Lu)。最近我们对此方法作了进一步的改进,完全避免使用放射性同位素标记,在无血清的条件下在96孔微量板上进行。板孔中福尔马林固定的细胞层可以吸收美兰,可以利用此特性测定细胞与含有TGF-β的生物样品作用48小时后,其贴附细胞的减少量。贴附细胞层的着染强度可以很方便地用微