兔抗人NDR2高效价抗血清的制备、纯化及鉴定

目的 制备高效价的NDR2抗体。方法 构建pRset-A-ndr2,pGEX-4T-1-ndr2-a和pGEX-4T-1-ndr2-b三种重组表达质粒,并分别在大肠杆菌中导表达相应的融合蛋白;用全长GST－NDR2蛋白免疫兔,然后用GST－NDR2－A和GST－NDR2－B片段加强免疫;对包涵体形式表达的6His-NDR2进行初步的纯化;利用固定于硝酸纤维素膜上的NDR2抗原亲和吸附纯化抗血清。结果 经免疫得到了高效价的兔抗人NDR2多克隆抗血清,亲和纯化提高了NDR2抗体的特异性;免疫组化表明NDR2是一种胞浆蛋白。结论 用全长NDR2蛋白免疫兔,再用片段加强免疫,可以提高蛋白的抗原性,制备得到高效价的抗体。纯化后的特异性NDR2抗体,为进一步研究NDR2的功能打下了必要的基础。     

高效价人IL-3抗血清的制备与鉴定

自1986年Yang等首次证实人IL-3的存在以来,国内外尚无建立人IL-3依赖株的报道,故其检测一直是科研和临床工作中的一大难点。本文以重组人IL-3(rHIL-3)为抗原,在国内首次制备成功高效价兔抗人IL-3血清,并对其进行了免疫学及生物学活性鉴定。 材料与方法     

高效价兔抗人免疫血清的制备

动物免疫血清是我们在医学教学、科研及临床检验工作中,经常用到的试剂,高效价免疫血清制备的关键在于佐剂的正确使用,抗原剂量要适中,免疫间隔时间长短要适当等,注意这些方面有利于高效价免疫血清的制备。     

高效价抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备高效价抗人血红蛋白(Hb)单克隆抗体并对其进行鉴定。方法用纯化人血红蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌抗人Hb单克隆抗体的细胞株,将阳性细胞株接种于小鼠腹腔制备单克隆抗体并对腹水抗体进行纯化,测定抗体亚类,分析其敏感性、特异性及纯化抗体的相对亲和力。结果共获得3株单克隆抗体杂交瘤细胞株,均与人Hb有较高的亲和力,其敏感性可达0.5μg/ml,而且与人肌红蛋白(Mb)及各种动物血红蛋白、肌红蛋白均无交叉反应。结论3株单克隆抗体杂交瘤细胞株有较好的特异性,与人Hb有较高的亲和力。     

高效价甲状旁腺抗血清制备的经验及临床应用

甲旁腺激素(PTH)是维持体内钙磷代谢的重要激素,目前靠进口放免药盒测定,试剂易失效、供应不及时且外汇昂贵,而且PTH分子量小抗原性弱,免疫引起代谢紊乱使动物死亡率高,抗血清制备不易,是国内未广泛开展PTH测定的原因。本文比较大、小剂量两种免疫方案,並将所获高效价之PTH抗血清(IgG),用生物素亲和素酶免疫法(BAELISA)代替放免法测定人血PTH用于临床。     

短程免疫法制备高效价抗血清研究

目的:探索快速制备免疫血清的方法和效果。方法:采用短程免疫法,分别以伤寒沙门菌O抗原和卵黄抗原分组小剂量连续多次免疫家兔后,收集抗血清,用ELISA间接法测定抗体效价。结果:ELISA结果显示伤寒沙门菌O抗原和卵黄抗原抗血清最终分别达到1∶20 480和1∶10 240的高效价。结论:短程免疫法所制备抗血清效价高,亲和力强。     

兔抗人ERA抗血清的制备

目的　在大肠杆菌中表达人 ERA蛋白 (h- ERA)和 h- ERA C端结构域蛋白 ,并制备兔抗 h- ERA抗血清 .方法　以 PCR扩增人 era基因 (h- era)全长 c DNA和 h- ERA C端的结构域基因 ,并分别克隆到 (His) 6 融合表达载体 p RSET- C和非融合表达载体p DH中 ,诱导表达 (His) 6 - h- ERA融合蛋白和 h- ERA C端结构域蛋白 .用 h- ERA C端结构域蛋白免疫兔 ,制备兔抗 h- ERA抗血清 ,并以 Western- blot对兔抗 h- ERA抗血清进行鉴定 .结果　大肠杆菌中表达的 h- ERA C端结构域蛋白和 (His) 6 - h- ERA融合蛋白 ,分别占菌体总蛋…     

教学用高效价兔抗人免疫血清的制备

目的:制备教学用高效价兔抗人免疫血清.方法:采集健康人混合血清,用混合免疫法免疫健康家兔,一个月后产生高效价免疫血清,并用双向琼脂免疫扩散法测定其效价.结果:制备出效价高于1∶16的兔抗人免疫血清.结论:采用混合免疫法可在较短期内制备出高效价兔抗人免疫血清.     

兔抗人纤维蛋白抗体的制备

兔抗人纤维蛋白抗体的制备首都医科大学病理解剖学教研室李良董小黎生化教研室王泽生于培兰首都医科大学附属北京红十字朝阳医院内科容凯纤维蛋白是在血液凝固过程中，由纤维蛋白原经一系列酶催化的化学链锁反应转化而来，因此在防治血栓性疾病时，研究纤维蛋白的形成及其...     

兔抗人β血小板球蛋白抗血清制备

在提纯β血小板球蛋白(βThromboglobulin,简称βTG)的基础上,我们制备出高特异性、高滴度的兔抗人βTG 抗血清。用中纯βTG 为抗原制备的抗血清含βTG 抗体和少量白蛋白抗体,用白蛋白吸附后成为单价βTG 抗血清。用纯βTG 制备的抗血清不需再作处理即为单价抗血清。放射免疫测定提示此抗血清和进口βTG 放射免疫药盒中的标准βTG 在免疫学上是一致的。已经证明此抗血清以1∶32,000倍稀释能用于βTG 放射免疫测定并已成功地用于在国内建立βTG 放射免疫测定体系。     

高效价人绒毛膜促性腺激素的制备新方法

目的:研究制备高效价人绒毛膜促性腺激素(HCG)的新方法。方法:运用组合利凡诺沉淀法和BaCO3吸附法纯化低效价HCG。结果:该法可将效价约为3000IU/mg的HCG纯化为效价为8000IU/mg左右的高效价HCG,平均活性回收率为63.81%。结论:该方法简便,成本低,便于实际推广。     

抗地高辛抗血清的制备

地高辛(Digoxin)是目前应用最广的强心甙类药物,然其有效血浓度与最低中毒浓度很接近,使临床应用时中毒发生率较高,成为最难掌握的药物之一。因此,地高辛给药时,严密地临床观察和血浓监测是必不可少的。近年来,我国已引进数十台ABBOTT 公司的快速血药浓度分析仪,用荧光偏振免疫分析法监测地高辛血样,快速、准确,尤适于急诊。但进口试剂盒订购费时,价昂且花费宝贵的外汇,因此,试剂国产化迫在眉睫。本文报告试     

高效价兔抗入免疫血清的制备

动物免疫血清是我们在医学教学、科研及临床检验工作中,经常用到的试剂,高效价免疫血清制备的关键在于佐剂的正确使用,抗原剂量要适中,免疫间隔时间长短要适当等,注意这些方面有利于高效价免疫血清的制备.     

人角蛋白的提取与抗角蛋白抗血清的制备

本研究用含8M尿素和0.1M巯基乙醇的Tris-HCl液从人胼胝中提取角蛋白。以十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其分子量为46,000、50,000、55,000和63,000。用电镜负染技术观察角蛋白细丝并测定其直径为80～100A。以此角蛋白免疫家兔制备成的抗血清,其琼扩效价为1∶32,用过氧化物酶—抗过氧化物酶法鉴定其特异性。该抗血清对正常上皮组织和上皮性肿瘤有反应,对非上皮性组织及其肿瘤无反应。初步证实:此抗血清具有抗角蛋白特异性,作为鉴定上皮性肿瘤的试剂具有一定价值     

人免疫球蛋白的连续提取及抗IgG-Fc重链抗血清的制备

近年来国内外广泛开展了对免疫球蛋白增殖病的测定,并以此作为某些异常免疫球蛋白症的重要指标。根据浆细胞恶变所产生的M蛋白(浆细胞恶性增生时,血中可出现大量结构均一的免疫球蛋白,其抗体活性很低;在区蛋白电泳时可出现一个狭窄而致密的蛋白带称M带)成分的差异,可将这组疾     

抗大鼠甲胎蛋白抗血清制备方法

我国第一株小鼠可移植性肝细胞性肝癌模型(H615)的建立,为肝癌的基础理论研究及实验治疗提供了条件。已证实H615宿主的血清及瘤组织中具有AFP及r—谷氨酰转肽酶(r—GT)两种肝癌标志物。要检测其血清中的AFP,需先制备抗AFP抗血清。若从H615宿主提取AFP免疫动物制备抗AFP抗血清,则较为困难及复杂。鉴于AFP种属专一性低,大小鼠之间亲缘性近,相互的AFP有强烈的交叉反应,故可用抗大鼠AF-     

冰冻红细胞的特点、制备、保存及临床应用

目的提高标准化操作冰冻红细胞制备程序,保证临床供血。方法利用不同条件制备成品冰冻红细胞,测定回收率、血细胞残留量、甘油残留量、溶血率、上清游离血红蛋白。结果在有效条件下,制备成品冰冻解冻红细胞,其红细胞回收率、溶血率、上清游离血红蛋白及体外溶血试验差异均无统计学意义。结论掌握制备冰冻解冻红细胞操作要点,可以提高冰冻解冻红细胞质量。     

兔抗鼠胸腺细胞抗血清的制备及应用

目的 应用大鼠胸腺细胞悬液免疫新西兰大白兔，制备兔抗大鼠胸腺细胞抗血清(ATS)。方法 初次免疫采用大鼠胸腺细胞悬液与福氏完全佐剂乳化混合后作为免疫原液，于大白兔皮下多点注射；加强免疫分别采取静脉注射和皮下多点注射的方法。并用间接免疫荧光的方法对抗血清效价进行测定。结果 皮下加静脉注射免疫法制得ATS效价达1：2000，皮下注射免疫法制得ATS效价为1：1000。结论 两种免疫方法均可诱导产生满意的ATS。高效价的ATS为系膜增殖性肾炎动物模型的研究提供了方法学基础。     

兔抗人β-内啡肽抗血清的制备及其特性的研究

β-内啡肽(β-EP)的研究在神经生物学中占重要地位。为了本实验室研究工作的需要,自行设计了一套抗血清的制备方法,研究了抗血清的特性,建立了放射免疫分析法,并初步应用于课题研究。用碳二亚胺(EDCI)将β-EP连接在牛甲状腺球蛋白上,每个分子甲状腺球蛋白大约连接了40个分子的β-EP。特选用雌性大耳白兔做为免疫动物,给每只动物背部多点皮内注射200μg β-EP(加福