重楼活性单体PP-22对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨重楼活性单体PP-22对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及其联合5-氟尿嘧啶(5-FU)和洛铂的抗肿瘤效果。方法 采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成抑制实验观察不同浓度PP-22对人结肠癌SW620细胞增殖的抑制作用;分别观察PP-22联合5-FU和洛铂对人结肠癌SW620细胞增殖的抑制作用;碘化丙锭单染流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blot法检测PP-22作用后细胞凋亡相关蛋白的表达。结果 重楼单体PP-22能显著抑制SW620细胞的生长,作用呈剂量-效应关系;随着PP-22浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与细胞对照组和DMSO组相比有显著差异;PP-22联合不同浓度的5-FU和洛铂作用于SW620细胞48 h,可提高SW620细胞对5-FU和洛铂的敏感性;不同浓度PP-22作用于SW620细胞后,细胞周期阻滞于S期;PP-22作用后存在Caspase-3和Caspase-9蛋白的活化和降解,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL减少,促凋亡蛋白Bax的表达增加。结论 PP-22能显著抑制人结肠癌SW620细胞增殖,诱导细胞凋亡,提高SW620细胞对5-FU和洛铂的敏感性。     

下调PCNA和VCAM-1表达参与山柰酚抑制人前列腺癌细胞增殖

目的探讨山柰酚对人前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用及机制。方法采用MTT、细胞计数、流式细胞学等方法检测山柰酚对PC-3细胞增殖及凋亡的作用;使用West-ern blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear anti-gen,PCNA)及血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesionmolecule 1,VCAM-1)的表达。结果山柰酚抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖,降低PCNA及VCAM-1的表达水平,诱导PC-3细胞阻滞于S期及G2/M期,但山柰酚对PC-3细胞凋亡无影响。结论山柰酚诱导PC-3细胞阻滞于S期及G2/M期,山柰酚抑制PC-3细胞增殖的作用与该药下调PCNA及VCAM-1的表达有关。     

携带Lipocalin2基因的腺病毒对结肠癌细胞SW620的体外抑制作用

目的探讨携带Lipocalin2基因的腺病毒对结肠癌SW620细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡的作用。方法以不同浓度梯度的腺病毒作用于体外培养的结肠癌SW620细胞,通过MTT法检测腺病毒对细胞生长的抑制作用,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,透射电镜观察细胞凋亡时的超微形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 MTT实验显示携带Lipocalin2基因的腺病毒可抑制SW620细胞的生长,显微镜下可观察到细胞肿胀、破裂、呈坏死状,透射电镜下观察发现细胞体积缩小,细胞核固缩,核内染色质凝集,并附于一侧核膜的边缘,内质网扩张,空泡形成增多,出现明显的凋亡现象。流式细胞仪可检测到SW620细胞凋亡率明显增加,呈时间及浓度依赖性。结论携带Lipocalin2基因的腺病毒能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制SW620细胞的生长。     

奥曲肽与氟尿嘧啶联合对人结肠癌细胞SW480增殖抑制作用的研究

目的:研究奥曲肽单用及其与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合对人结肠癌细胞SW480的增殖抑制作用。方法:采用MTT比色法测定不同浓度(10-7～10-10mol.L-1)奥曲肽单用及其与5-FU(12.5、25、50μg.mL-1)联合作用SW480后的吸光度值后计算抑制率。结果:奥曲肽各浓度中,以10-10mol.L-1抑制率最高,10-12mol.L-1以下对细胞增殖无抑制作用;奥曲肽与5-FU联合使用对细胞增殖的抑制率明显高于单用组(P<0.01)。结论:奥曲肽能抑制人结肠癌细胞SW480的增殖,并与5-FU有协同作用。     

山柰酚诱导人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/阿霉素凋亡的研究

目的 研究山柰酚对人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/阿霉素(ADR)的增殖与凋亡的作用机制.方法(1)将人乳腺细胞MCF-7分为2组:空白组(培养基)和实验组.实验组分别用含不同浓度的山柰酚(20,50,100,150,200,300,400,500μmol·L-1)的培养基干预.干预48 h后,噻唑蓝(MTT)法测定细...     

槐定碱对人结肠腺癌细胞株SW620增殖和凋亡的影响

目的考察槐定碱对人结肠癌SW620细胞的增殖影响及探讨其诱导凋亡作用。方法MTT法测定槐定碱对SW620细胞的半数抑制浓度;光学显微镜、荧光显微镜及电镜观察细胞凋亡形态变化;流式细胞仪分析细胞周期变化及细胞凋亡率。结果实验结果显示槐定碱对体外培养的SW620细胞增殖具有明显抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性,48hIC50=2.8mmol.L-1。凋亡细胞表现为细胞固缩、变圆、核染色质聚集或碎裂、胞质空泡化。DNA ladder结果显示有凋亡引起的"梯状"条带出现。流式细胞仪细胞周期分析结果表明,随着槐定碱作用时间的延长,G0-G1期细胞增多,同时S期细胞比例也相应增高。结论槐定碱对体外培养SW620细胞生长增殖有明显抑制作用,其作用机制与阻滞细胞周期的进程,诱导细胞凋亡相关。     

槲寄生凝集素对人结肠癌HT-29细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究槲寄生凝集素对人结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT法观察槲寄生凝集素对体外培养的人结肠癌HT-29细胞增殖的影响,运用基因组DNA电泳观察凋亡特征性“梯状”条带及原位末端标记法检测槲寄生凝集素诱导HT-29细胞凋亡。结果：槲寄生凝集素对体外培养的人结肠癌HT-29细胞抑制作用表现出时间和剂量依赖性。基因组DNA琼脂糖凝胶电泳显示槲寄生凝集素作用于HT-29细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带。原位末端标记法检测显示槲寄生凝集素可明显诱导HT-29细胞的凋亡。结论：槲寄生凝集素可抑制人结肠癌HT-29细胞生长并诱导其凋亡。     

雷公藤红素通过活性氧诱导结肠癌SW620细胞凋亡

目的:探讨雷公藤红素(celestrol)诱导KRAS驱动的结肠癌SW620细胞产生凋亡的作用和机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和台盼蓝拒染法检测细胞增殖;免疫印迹法检测蛋白表达;流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡、细胞周期、线粒体膜电位;荧光显微镜检测细胞内活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)。结果:雷公藤红素明显抑制SW620细胞的增殖活性;雷公藤红素下调SW620胞内的p-Akt、NF-κB、Survivin表达,激活caspase-7、caspase-3 和PARP;雷公藤红素增加SW620细胞内的ROS、降低线粒体膜电位、阻滞细胞周期于G₂/M期和诱导凋亡。抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)抑制雷公藤红素引起的上述作用。结论:通过诱导细胞内ROS的累积导致细胞内线粒体膜电位的下降进而触发细胞发生凋亡是雷公藤红素诱导SW620细胞凋亡的作用机制之一。     

人结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人结肠癌SW480细胞移植瘤模型,研究其形态学及生物学特性。方法将处于对数生长期的人结肠癌SW480细胞接种于10只裸鼠右侧背部皮下,待瘤体生长至直径1～2 cm时处死裸鼠,取出肿瘤组织,将其磨碎并与培养基混合、过滤,滤液与基质胶混合,再将基质胶细胞悬液接种于30只裸鼠右侧背部皮下7,d后处死裸鼠,观察肿瘤大体特征,光镜及电镜下观察肿瘤病理学特征。结果接种SW480细胞的裸鼠于接种后4周有3只成瘤。接种基质胶细胞悬液的裸鼠在接种后7 d有28只成瘤,瘤体形状规则,肿瘤组织呈现典型癌变特征。结论本实验成功建立了人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,该模型成瘤率高,瘤体形状规则,病理学改变与临床非常相似,为研究人结肠癌干预措施提供了较为理想的动物模型。     

姜黄素联合伊立替康对结肠癌SW620细胞的体外抑制作用

目的研究姜黄素增强伊立替康对结肠癌SW620细胞的体外抑制作用,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测不同质量浓度伊立替康和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同质量浓度伊立替康和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞凋亡的影响,比较细胞凋亡率;采用蛋白质印记法检测不同质量浓度伊立替康和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞内拓扑异构酶I蛋白表达水平的影响。结果伊立替康和姜黄素单用均对SW620细胞增殖具有抑制作用,呈浓度和时间相关性。5、50μg/mL伊立替康分别与0~30μg/mL姜黄素联合处理SW620细胞12、24、48 h均具有协同抑制细胞活性的作用,且呈浓度和时间相关性。高质量浓度比低质量浓度的伊立替康与姜黄素联合用药抑制效果显著(P0.01)。0、20μg/mL姜黄素分别与0、5、50μg/mL伊立替康联合处理SW620细胞12、24、48 h,姜黄素可以增强伊立替康诱导的SW620细胞凋亡率。20μg/mL姜黄素联合5、50μg/mL伊立替康显著上调了SW620细胞内拓扑异构酶-Ⅰ蛋白的表达,协同诱导了SW620细胞内拓扑异构酶-Ⅰ蛋白的表达。结论伊立替康联合姜黄素可以协同增强对SW620细胞活性的抑制作用,协同诱导SW620细胞凋亡,其作用机制可能与伊立替康、姜黄素上调拓扑异构酶-Ⅰ表达有关。     

TNP-470对人结肠癌Lovo细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的　探讨TNP 4 70对体外培养的人结肠癌Lovo细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法　采用MTT法检测TNP 4 70对体外培养的Lovo细胞的生长抑制作用 ,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡百分率。结果　TNP 4 70对Lovo细胞生长具有抑制作用 ,并存在量效和时间依赖性。流式细胞仪分析表明 :G0 /G1期细胞百分率上升 ,S期细胞百分率下降 ,增值指数 (PI)下降 ,凋亡率上升 ,电镜下可见典型的细胞凋亡形态改变。结论　TNP 4 70对Lovo细胞的增殖具有抑制作用 ,其机制与细胞周期阻滞和凋亡有关     

Cigarette smoke extracts induced the colon cancer migration via regulating epithelial mesenchymal transition and metastatic genes in human colon cancer cells

There was considerable evidence that exposure to cigarette smoke is associated with an increased risk for colon cancer. Nevertheless, the mechanism underlying the relationship between cigarette smoking and colon cancer remains unclear. Moreover, there were only a few studies on effects of complexing substance contained in cigarette smoke on colon cancer. Thus, we further investigated whether cigarette smoke extract (CSE) affects the cell cycle, apoptosis and migration of human metastatic colon cancer cells, SW‐620. MTT assay revealed that SW‐620 cell proliferation was significantly inhibited following treatments with all CSEs, 3R4F, and two‐domestic cigarettes, for 9 days in a concentration‐dependent manner. Moreover, CSE treatments decreased cyclin D1 and E1, and increased p21 and p27 proteins by Western blot analysis in SW‐620 cells. Additionally, the treatment of the cells with CSE contributed to these effects expressing by apoptosis‐related proteins. An increased migration or invasion ability of SW‐620 cells following CSE treatment was also confirmed by a scratch or fibronectin invasion assay in vitro. In addition, the protein levels of E‐cadherin as an epithelial maker were down‐regulated, while the mesenchymal markers, N‐cadherin, snail, and slug, were up‐regulated in a time‐dependent manner. A metastatic marker, cathepsin D, was also down‐regulated by CSE treatment. Taken together, these results indicate that CSE exposure in colon cancer cells may deregulate the cell growth by altering the expression of cell cycle‐related proteins and pro‐apoptotic protein, and stimulate cell metastatic ability by altering epithelial‐mesenchymal transition (EMT) markers and cathepsin D expression. © 2016 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol 32: 690–704, 2017.     

山萘酚对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的：考察山萘酚对人卵巢癌SKOV-3细胞生长、凋亡的影响及作用机制。方法：采用CCK-8法检测山萘酚对SKOV-3细胞增殖的影响;流式细胞术和AnnexinV-FITC/PI凋亡试剂盒检测SKOV-3细胞的凋亡情况;RT-PCR检测NICD mRNA的表达;Western Blot方法检测Notch1蛋白的表达。结果：山萘酚对卵巢癌SKOV-3细胞有显著的增殖抑制作用,且呈一定的剂量依赖性;凋亡检测结果表明,山萘酚能够促进卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的发生; RT-PCR结果显示山萘酚干预组（80 μmol·L^-1） NICD mRNA的表达水平明显降低（P<0.05）,Western Blot结果显示山萘酚干预组（80 μmol·L^-1） Notch1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论：山萘酚能明显抑制卵巢癌SKOV-3细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡其机制可能是通过干预Notch1的表达。     

沉默LIMK1促进DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭

目的探讨LIMK1沉默对DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭的影响。方法 RNA干扰技术建立稳定LIMK1-miRNA/SW480细胞株;免疫组化和Western blot检测DADS对沉默LIMK1结肠癌SW480细胞LIMK1和磷酸化LIMK1蛋白表达的影响。划痕实验和侵袭实验检测LIMK1 RNA沉默与DADS对SW480细胞迁移与侵袭的影响。结果 RT-PCR与Western blot显示,LIMK1-miR/SW480细胞LIMK1mNRA与蛋白表达明显下调,表明成功构建稳定沉默LIMK1基因的SW480细胞株。免疫组化和Western blot显示,45 mg.L-1DADS处理和沉默LIMK1组较未转染组与空载体组SW480细胞LIMK1蛋白和磷酸化LIMK1明显下调(P<0.05)。划痕实验和侵袭实验发现,沉默LIMK1或DADS处理SW480细胞的迁移与侵袭能力较未转染组与空载体组明显抑制(P<0.05)。而DADS处理沉默组抑制SW480细胞迁移和侵袭能力更为明显(P<0.05)。结论沉默LIMK1基因可抑制SW480细胞迁移与侵袭,增强DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭作用。     

Bufalin induces apoptosis via mitochondrial ROS-mediated caspase-3 activation in HCT-116 and SW620 human colon cancer cells

Objective: Bufalin has been reported to kill various types of cancer including human colorectal cancer. Our previous study demonstrated that bufalin induced cell death via autophagy in HT-29 and Caco-2 colon cancer cells, but the action of bufalin remains unclear. This study was conducted to investigate the role of bufalin in other colon cancer HCT-116 and SW620 cells as well as its potential mechanism.

Methods: The effect of bufalin in HCT-116 and SW620 colon cancer cells was detected by assessing cell viability and cell death. Apoptotic cells were analyzed by Western blot and trypan blue dye exclusion assay. Mitochondrial ROS production was analyzed by flow cytometry after DCFDA and DHR-123 staining. The potential mechanism was investigated via pharmacological inhibitors.

Results: Bufalin had high potency against HCT-116 and SW620 cells with IC50 values of 12.823?±?1.792?nM and 26.303?±?2.498?nM in HCT-116 and SW620 cells, respectively. Bufalin decreased cell viability, increased cell death as well as caspase-3 downstream target (cleaved PARP) accumulation, and these actions were significantly blocked by pan-caspase inhibitor zVAD-FMK. Mechanistically, ROS production, but neither the NAD(P)H oxidase, AMPK, ERK nor p38, is responsible for bufalin-induced apoptotic cell death. Moreover, bufalin-induced ROS generation is derived from mitochondria.

Conclusion: Bufalin significantly induces apoptosis in HCT-116 and SW620 colon cancer cells via mitochondrial ROS-mediated caspase-3 activation. We believe that our novel findings will greatly alter our current understanding on the anti-cancer mechanism of bufalin in colon cancer cells and will pave the way for further exploiting the clinical application.