Egr-1基因在人宫颈癌Hela细胞中的表达及其对细胞凋亡的作用

目的　研究不同剂量60 Co射线照射后Egr 1基因在人宫颈癌Hela细胞中的表达及与细胞凋亡的关系。方法　将人宫颈癌Hela细胞株进行体外培养 ,用不同剂量的60 Co射线照射 ,流式细胞仪记录细胞周期的分布和凋亡率 ,电子显微镜观察细胞形态 ,半定量RT PCR法检测Hela细胞Egr 1基因的表达。结果　放射线可抑制人宫颈癌Hela细胞的生长 ,诱导其凋亡。照射后细胞凋亡率随照射剂量增加而增加 ,至 12 0 0cGy时达高峰值 ,与对照组相比均有极显著性差异 (P <0 .0 1) ;照射后Hela细胞出现G0 /G1期阻滞 ,S期明显减少 ,且呈剂量依赖性 ,与对照组相比均有极显著性差异 (P <0 .0 1) ;照射后Egr 1基因表达随照射剂量增加而增加 ,至 12 0 0cGy时达峰值 ,与对照组比均有极显著性差异 (P <0 .0 1) ,Egr 1基因表达与凋亡率相关 (r=0 .96 9,P <0 .0 1)。结论　60 Co射线可引起人宫颈癌Hela细胞周期阻滞并诱导细胞凋亡 ,Egr 1基因为促凋亡基因 ,可能与宫颈癌的发生、发展及预后有关     

抑癌基因HIC-1甲基化状态在宫颈癌Hela细胞中的研究

目的:观察特异性甲基转移酶抑制剂5-氮脱氧胞苷(5-Aza-deoxycytidine)对宫颈癌Hela细胞株中HIC-1、P53启动子的去甲基化作用,对细胞增殖的影响,探讨P53与HIC-1之间的关系,以及HIC-1基因甲基化状态在宫颈肿瘤中的作用.方法:分别使用5、10、20 μmol/L的5-Aza-CdR作用Hela细胞株1、3、5d,采用半定量RT-PCR检测P53、HPV、HIC-1表达的改变;用四甲基偶氮唑蓝法和直接计数法检测细胞生长与增殖状况.结果:Hela细胞株经三种不同浓度的5-Aza-CdR作用5d后Hela细胞形态上无明显改变;经药物处理后,细胞生长活力(A490值)受到不同程度的抑制,其作用在所检测的浓度范围内随5-Aza-CdR浓度的增加而增加,呈量效关系;5-Aza-CdR可有效上调HIC-1、P53基因在Hela细胞中的表达,并随浓度递增;而5-Aza-CdR干预前后,HPV18E6mRNA表达无明显改变.结论:HIC-1可能作为抑癌基因在宫颈癌的发生、发展中发挥重要作用,甲基化是调控其表达下调的重要机制,通过去甲基化有可能抑制宫颈癌病程进展.     

低氧条件下HIF-1α与VEGF在宫颈癌Hela细胞中的表达

目的：探讨低氧对人宫颈癌Hela细胞低氧诱导因子（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）表达水平的影响。方法：Hela细胞按低氧和常氧分两组培养,采用免疫荧光染色法,检测HIF-1α和VEGF在蛋白水平上的表达。结果：低氧培养组Hela细胞中HIF-1α、VEGF的转录水平均高于常氧培养组,低氧培养组的细胞中HIF-1α荧光强度高于常氧培养组,差异有统计学意义（P<0.001）,同样的,低氧培养组的细胞中VEGF荧光强度高于常氧培养组,差异具有统计学意义（P<0.001）。结论：HIF-1α和VEGF在宫颈癌Hela细胞生成和生长过程中的作用依赖氧的调节。     

8—Br—cAMP和^60Co照射诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及相 …

应用８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ和＾６０Ｃｏ照射体外诱导Ｈｅｌａ细胞凋亡。探讨ｂｘＬ－２,ｗｐ５３,ｍｐ５３,ｃ－ｍｙｃｉＮｏｓ的基因表达和ｉＮｏｓ,Ｆａｓ蛋白表达之间的关系、为探讨无毒性８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对宫颈癌治疗的新途径 提供依据。采用ＴＵＮＥＬ法和Ｆｅｕｌｇｅｎ法进行细胞凋亡实验;采用本实验室创新的完整细胞原位ＲＮＡ斑点印迹技术检测Ｆａｓ和ｉＮｏｓ蛋白,应用高速薄层色谱扫描仪对斑点印迹信号进行定量测     

白藜芦醇对人宫颈癌Hela细胞凋亡、增殖影响的实验研究

目的研究白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞体外生长的影响,并初步探讨其作用机制。方法用不同浓度的白藜芦醇作用于人宫颈癌Hela细胞,通过MTT法来检测白藜芦醇对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响;TdT酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL试剂盒）检测白藜芦醇对Hela细胞凋亡的影响。结果不同浓度白藜芦醇浓度对Hela细胞均有抑制作用。白藜芦醇在25～100μmol/L范围内呈时间和剂量依赖。在100μmol/L已达到作用浓度平台期。50μmol/L及以上浓度的白藜芦醇对Hela细胞有明显的凋亡阳性反应,随时间延长凋亡率增加。结论达到一定浓度的白藜芦醇就能够对人宫颈癌Hela细胞产生明显的抑制增殖作用。白藜芦醇在对Hela细胞抑制其增殖的同时诱导其凋亡。     

γ射线照射后小鼠骨髓造血细胞凋亡及Fas表达的研究

目的：研究γ射线照射后小鼠骨髓造血细胞凋亡及其与Fas 表达的关系。方法：采用电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术观察小鼠经60Co γ射线照射后不同时间的骨髓造血细胞凋亡及Fas的表达情况。结果：在照射后4 h细胞即出现核固缩、染色质凝集;DNA琼脂糖凝胶电泳有大量的小分子片段,呈典型“梯状”图谱;流式细胞术分析表明,凋亡细胞百分率在照射后4 h明显增加,8 h达到高峰;照后4 h,Fas表达显著增强。结论：γ射线照射后可引起骨髓造血细胞凋亡,Fas可能参与了辐射诱导的造血细胞凋亡过程。     

Fas、FasL在大鼠肝癌中的表达及意义

目的:研究Fas、FasL在大鼠肝癌中的表达及其与细胞调亡和肿瘤发生、发展的关系.方法:应用免疫组织化学方法,对41只大鼠肝组织中的Fas及其配体FasL表达进行检测比较,其中34只经过暴露黄曲霉毒素B1(AFB1),28只出现癌变,6只未出现癌变,7只未经处理.结果:出现癌变大鼠肝组织和未出现癌变大鼠肝组织中的Fas表达率分别为25.0%、69.2%(P＜0.05).而FasL表达率分别为32.1%、53.8%(P＞0.05).结论:大鼠肝癌组织中Fas表达率要比未出现癌变的大鼠肝组织的表达率降低,Fas的低表达在大鼠肝癌的形成中可能起着重要的作用.     

γ射线照射后免疫细胞表面Fas表达变化规律的研究

目的 观察γ射线照射后小鼠脾赃淋巴细胞凋亡的变化规律与Fas(CD95)表达的关系。方法 采用PI染色、双荧光流式细胞术及免疫组织化学的ABC方法研究不同剂量γ射线照射后不同时间,小鼠脾脏淋巴细胞凋亡及CD95表达的规律。结果 小鼠脾脏淋巴细胞对不同剂量照射的凋亡敏感性有显著性差异,4Gy照射后凋亡率最高(在2～6Gy之间观察),淋巴细胞表面Fas的表达随照射后细胞凋亡率的变化而改变。结论 B细胞较T细胞具有更高的辐射凋亡敏感性;脾脏淋巴细胞在辐射后表现出明显的Fas介导凋亡。     

多西紫杉醇对宫颈癌细胞系Hela细胞毒性和放射增敏作用的研究

目的探讨多西紫杉醇对宫颈癌细胞系Hela的细胞毒性和放射增敏作用。方法MTT法检测多西紫杉醇对Hela的细胞毒性以及1.0nM多西紫杉醇对Hela不同分割放疗方式的增敏效果;克隆形成实验分析不同浓度多西紫杉醇对Hela细胞生长抑制的影响,多靶单击拟合模型方程测定的各组细胞放射增敏比,评价增敏效果。结果0.1￣20.0nM多西紫杉醇对Hela细胞的细胞毒性有明显剂量和时间依赖性,20.0nM以上浓度及药物作用超过48h多西紫杉醇的细胞毒性并无明显增加。1.0nM和5.0nM多西紫杉醇放射增敏比分别为1.26和1.69。1nM多西紫杉醇对2.0Gy/次、1.0Gy/次(×2)、0.5Gy/次(×4)分割放疗组的放射增敏比分别为:2.03、2.51、3.57;多西紫杉醇增敏比分别为:1.41、1.82、2.92,每组中放射增敏比较多西紫杉醇增敏比高。结论多西紫杉醇对宫颈癌细胞系Hela有良好的细胞毒性和放射增敏作用,对低剂量分割放射的增敏作用更强。     

姜黄素及其联合化疗对子宫颈癌Hela细胞体外增殖的影响

目的：探讨姜黄素（curcumin,Cur）及其联合化疗对子宫颈癌Hela细胞体外生长的抑制作用.方法：将Cur单独应用或与临床上常用的宫颈癌化疗药物顺铂（cDDP）、博来霉素（BLM）、拓扑替康（TPT）联合应用,观察对Hela细胞生长抑制率的影响,药物敏感实验采用MTT法.结果：Cur抑制Hela细胞的生长,其半数抑制浓度（IC50）为22.37μmol/L,Cur与各种浓度的cDDP、BLM或TPT联用,可提高各种药物对Hela细胞的生长抑制率（P＜0.05）.结论：Cur在体外对宫颈癌Hela细胞具有抑制作用,与cDDP、BLM或TPT联合应用,可提高3种药物的化疗效果.     

中药苦参碱对体外培养人宫颈癌Hela细胞的抑制作用

目的:探讨中药苦参碱对体外培养的人宫颈癌细胞株Hela细胞的抑制作用。方法:选用人宫颈癌Hela细胞进行体外培养,以0.125～2.0 mg/ml的苦参碱分别处理Hela细胞24～72 h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,透射电镜进行形态学观察,RT-PCR半定量检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA表达水平。结果:苦参碱对Hela细胞有抑制作用,呈剂量和时间依赖性,其24 h半数抑制浓度(IC 50)为1.074 mg/ml;流式细胞仪检测到细胞在苦参碱作用后,细胞凋亡率增加;透射电镜观察发现部分细胞发生凋亡早期改变;RT-PCR结果显示凋亡相关基因Bcl-2/Bax比值随药物剂量增加而逐渐减少。结论:苦参碱对人宫颈癌Hela细胞具有明显抑制作用,诱导细胞凋亡可能是其机制之一。     

PTEN影响宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性

目的:通过转染PTEN基因表达载体,提高宫颈癌Hela细胞中PTEN的表达水平,观察能否影响Hela细胞对顺铂的敏感性,并探讨其分子学机制.方法:将培养的宫颈癌Hela细胞分为空白对照(未转染质粒的Hela细胞)、质粒对照(转染空质粒的Hela细胞)和PTEN转染(转染PTEN表达载体的Hela细胞)3组.分别用RT-PCR和Western检测各组Hela细胞中PTEN的mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测各组Hela细胞对顺铂的化学敏感性;RT-PCR检测各组Hela细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的表达水平.结果:PTEN转染组Hela细胞中PTEN的表达水平比另2组细胞显著增高(P＜0.01);经顺铂处理后,PTEN转染组Hela细胞生长抑制率比其它2组显著增高(P＜0.01),PTEN转染组Hela细胞中PI3K被显著抑制(P＜0.01).结论:PTEN能增强宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性,它可能通过下调Hela细胞中PI3K而导致Hela细胞对顺铂耐药性下降.     

AIF对人宫颈癌Hela细胞体外生物学活性的影响及机制研究

目的 探讨凋亡诱导因子(AIF)对人宫颈癌Hela细胞体外生物学活性的影响及其作用机制.方法 通过脂质体转染pcDNA3空载体质粒及pcDNA3-AIF质粒于人宫颈癌Hela细胞,采用免疫荧光反应,Real time PCR及Western blot法检测细胞中AIF的表达.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Annexin V-PI流式双染及Hoechst染色检测细胞凋亡情况,Real-time PCR及Western blot法检测细胞中腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)及核酸内切酶G(EndoG)蛋白及mRNA的表达.结果 与pcDNA3组比较,peDNA3-AIF组细胞中AIF主要定位于细胞核中,且细胞核中AIF蛋白及mRNA表达量皆显著提高(P＜0.01),同时细胞活力下降,细胞凋亡率提高(P＜0.01),细胞中PARP-1、EndoG蛋白及mRNA表达量显著提高(P＜0.01).结论 AIF具有促进宫颈癌Hela细胞凋亡的作用,可能与PARP-1/AIF/EndoG信号通路有关.     

Apoptin对宫颈癌Hela细胞放疗增敏作用实验研究

目的探讨Apoptin增加宫颈癌Hela细胞的敏感性及作用机制。方法应用脂质体转染方法将表达Apoptin的重组载体pEGFP—Apoptin转染入人宫颈癌Hela细胞。其中转染pEGFP-Apopti为实验组,转染pEGFP—C2组为阳性对照组,未转染组为阴性对照组。上述各组经射线干预后利用平板克隆形成实验、流式细胞术、MTT及蛋白印迹western—blot等方法分别检测细胞凋亡、周期及相关蛋白表达水平。结果pEGFP—Apoptin在人宫颈癌Hela细胞中稳定表达。Apoptin可增加宫颈癌Hela细胞对放射线的敏感性,Apoptin可使p21、p27的表达量上调,使Rad50及Ku80的表达量下调,而对XLF的表达量则无影响。结论Apoptin可增加宫颈癌Hela细胞的放疗敏感性,其机制可能与细胞周期阻滞及同源与非同源重组修复相关蛋白的表达水平改变有关。     

维生素C增加人宫颈癌Hela细胞株对顺铂敏感性的研究

目的研究维生素C与顺铂合用对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响。方法用MTT比色法检测细胞生长抑制作用,流式细胞术测定各组细胞周期分布和凋亡率。结果维生素C和顺铂均可抑制Hela细胞生长,将肿瘤细胞阻滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡。两药联合作用时表现出协同作用,细胞生长抑制率显著提高,凋亡率明显增加。结论维生素C可与顺铂协同抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

海龙蛋白质提取物诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的机制

目的 研究海龙蛋白质提取物对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的诱导作用.方法 采用MTT法检测蛋白质提取物对细胞生长的抑制情况,采用Annexin WPI流式细胞分析法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、P53的表达.结果 不同浓度海龙蛋白质提取物对Hela细胞的增殖有抑制作用,具有时间和浓度依赖性.Annexin V/PI流式细胞分析显示,加药组早期凋亡率分别为29.18±0.65、39.32±0.78、51.21±1.13、61.56±1.09,与对照组（9.82±0.18）差异有统计学意义（P＜0.05）;晚期凋亡率加药组分别为3.20±0.03、7.48±0.06、11.11±0.07、14.60±0.03,与对照组（1.12±0.09）差异有统计学意义（P＜0.05）.Western blot检测发现随着蛋白质提取物浓度的升高,Bax、P53蛋白的表达逐渐升高,Bcl-2蛋白的表达逐渐降低.结论 海龙蛋白质提取物在一定浓度范围内可在体外抑制Hela细胞增殖并诱导其凋亡,且随蛋白质提取液浓度的升高,凋亡率显著增加,可能的机制是增强促凋亡蛋白Bax、P53的表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.