散发性结直肠癌中hMLH1基因甲基化的实验研究

[目的]检测散发性结直肠癌患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化状态,分析该基因甲基化与患者临床病理特征的相关性.[方法]采用重亚硫酸盐修饰测序法检测患者肿瘤组织和配对正常组织hMLH1基因甲基化状态,采用免疫组化方法检测其蛋白表达水平,并将甲基化状态与相应的蛋白表达水平及临床病理学资料进行统计学分析.[结果]正常组织的所有CpG位点均为非甲基化.肿瘤组织中CpG岛1(CGI-Ⅰ)甲基化阳性率为20%(6/30).hMLH1蛋白表达阳性率为50%(15/30).经X2检验,CGI-Ⅰ甲基化组与非甲基化组的hMLH1蛋白表达阴性率有显著性差异(P<0.05);低分化组的甲基化阳性率(100%)显著高于高中分化组(14.29%)(P<0.05).[结论]hMLH1基因启动子区CpG岛1甲基化可能导致hMLH1蛋白不表达;甲基化还与肿瘤的分化程度存在关联,提示甲基化还可作为结直肠癌预后的参考指标之一.     

散发性结直肠癌中CpG岛甲基化表型研究及其与微卫星不稳定的关系

目的 研究散发性结直肠癌(SCRC)中CpG岛甲基化表型(CIMP)阳性的发生率及其临床病理特征,并探讨其与微卫星不稳定(MSI)的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)方法对91例散发性结直肠癌患者行P16、hMLH1、MINT1、MINT2和MINT31共5个基因启动子甲基化检测,分析散发性结直肠癌中CIMP阳性病例的临床病理特征.同时应用荧光标记多重PCR法扩增两个微卫星位点BAT25和BAT26,分析两个微卫星位点状况,探讨CIMP与MSI的关系.结果 91例散发性结直肠癌患者中共检出CIMP阳性者22例,阳性率为24.2％.CIMP阳性者与CIMP阴性者相比,前者好发于近端结肠(P=0.02)、分化程度上低分化癌多见(p=0.03)、组织学类型上黏液腺癌或印戒细胞多见(P=0.04).27.3％的CIMP阳性病例表现为MSI,54.5％的MSI病例表现为CIMP阳性(P=0.02).结论 CIMP的散发性结直肠癌具有好发于近端结肠、低分化癌及黏液腺癌或印戒细胞多见等特点,CIMP与MSI两者具有密切关系.     

散发性结直肠癌错配修复基因hMLH1的突变研究

目的:研究散发性结直肠癌hMLH1(human mutl homolog l,hMLH1) 基因突变的状况.方法:采用PCR-单链构象多态性分析(Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism, PCR-SSCP),对44例散发性结直肠癌标本hMLH1基因第8、12、14、15和16号外显子进行突变检测.结果:44例标本的hMLH1基因外显子均未发现突变.结论:散发性结直肠癌hMLH1基因突变可能是偶发事件; 散发性大肠癌的发生、发展主要是由于其它基因引起的.     

HCC患者GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化状态研究

目的 检测人原发性肝癌（HCC）中抑癌基因GSTP1的启动子区CpG岛甲基化的状况，并探讨其在肝癌发生中的作用。方法 以已知的GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化阳性的乳腺癌细胞株MCF-7为阳性对照，以11例正常人外周血单核细胞（PBMC）DNA为阴性对照，用甲基化特异性PCR（MSP）的方法对26例肝细胞癌患者的癌、远癌组织中GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化的状态进行检测。结果 在26例原发性肝癌中GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化在癌组织为88％（23／26），在远癌组织中为69％（18／26）；而在11例正常人外周血单核细胞均为甲基化阴性。结论 抑癌基因GSTP1基因启动子区CpG岛高甲基化可能是肝癌发生早期的分子事件，在人原发性肝癌的发生发展中具有重要的作用。     

启动子区E-box以及周围CpG岛的甲基化与基因节律性表达的关系

目的探讨mPer2、mCry1和mDBP启动子区E-box以及周围CpG岛的甲基化是否影响E-box和BMAL1/CLOCK基因和蛋白相互作用的方式;以及启动子区的甲基化状态是否影响MAP激酶磷酸化酶1(MAP kinase phosphatise 1,MKP1)的组织特异性表达调控。方法分6个时间点取C57 BL/6J小鼠的肝脏和肾脏,提取DNA,通过重硫酸盐处理基因组DNA,以及测序检测E-box和周围CpG岛的甲基化状态。结果 mPer2、mCry1和mDBP启动子区E-box以及周围CpG岛无明显甲基化状态,肝脏和肾脏中MKP1的E-box以及周围CpG岛亦无明显甲基化状态。结论节律基因的启动子区E-box以及周围CpG岛的甲基化不参与节律基因表达的日节律性调控。     

DNA甲基化与结直肠癌

DNA甲基化是肿瘤常见的表观遗传学改变,是一种在原核和真核生物基因组中常见的复制后修饰,参与体内多种重要的生理过程,同时在肿瘤的发生和发展中也起着重要的作用。近年来,DNA甲基化成为表观遗传学研究的热点,一些甲基化事件可望成为早期诊断结直肠癌的重要分子靶标,因此对结直肠癌DNA甲基化进行深入研究,对于结直肠癌的临床早期诊断、治疗和预防都具有重要的指导意义。现就结直肠癌中的DNA甲基化研究进展作简要综述。     

DNA甲基化在结直肠癌中的研究进展

【摘要】 结直肠癌（colorectal cancer,CRC）是使结肠上皮细胞转变为侵袭性的恶性腺瘤,其过程主要由多基因组学累积和表观遗传学改变导致的。表观遗传学是指研究基因的核苷酸序列不发生改变的情况下,使基因表达的程度发生变化,囊括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑及RNA干扰等。其中DNA甲基化是最重要的一种表观遗传修饰,亦然是当前研究最深入的领域。有研究发现,表观遗传学的改变在结直肠癌中发挥着重要的作用,在癌变的过程中,以上一系列表观遗传学的改变通常会使癌基因获得功能或抑癌基因丢失功能。本文就最近几年结直肠癌DNA甲基化相关性研究的进展进行综述。     

散发性结直肠癌组织中hMSH2和hMLH1的表达及其意义

[摘要] 目的 检测错配修复基因hMSH2和hMLH1在散发性结直肠癌组织和正常结直肠组织中的表达,探讨其在结直肠癌发病过程中的意义。方法 采用免疫组化SP法检测结直肠癌和正常结直肠组织中hMSH2和hMLH1的表达。结果 部分结直肠癌组织中有不同程度的hMSH2 和（或）hMLH1蛋白表达缺失,与正常结直肠组织相比差异有显著性（P<0.05）;hMSH2 和 hMLH1蛋白表达缺失与肿瘤组织的分化程度相关（P<0.05）,而与患者性别、年龄、浸润深度、肿瘤组织大小、Dukes分期以及淋巴转移均无明显关系（P>0.05）。结论 结直肠癌组织中hMSH2和（或）hMLH1的缺失可能与部分散发性结直肠癌的发生相关;hMSH2和hMLH1缺失与肿瘤组织的分化程度相关,提示错配修复功能的缺陷可能导致肿瘤恶性程度的加重。     

hMLH1基因启动子CpG岛甲基化，微卫星不稳定与胃癌

由于胃癌预后的分子特征的作用还不清楚,本文旨在探讨hMLH1基因启动子CpG岛甲基化和微卫星不稳定（MSI）在胃癌预后的价值。我们对近年来关于hMLH1基因启动子CpG岛甲基化和微卫星不稳定（MSI）与胃癌关系的文献进行了综合分析。结果显示,MSI胃癌有着特殊临床病理学特征：老年女性,胃窦部位,肠型,较少浆膜侵犯,淋巴侵犯罕见,hMLH1基因启动子CpG岛甲基化,有较好的预后。因此可以得出结论,hMLH1基因启动子CpG岛甲基化和微卫星不稳定（MSI）在胃癌中有显著相关性,在胃癌早期发生、发展过程中起重要作用,对胃癌的鉴别诊断、预后评价、特殊临床干预具有重要的意义,可能成为胃癌早期诊断、评价预后、指导化疗的分子标志物。     

结直肠癌与DNA甲基化

表观遗传调控是真核基因的表达调控之一,在结直肠癌的发生发展中具有重要作用。DNA甲基化修饰是表观遗传调控中目前研究较多的部分,DNA甲基化异常引起抑癌基因失活和癌基因激活是结直肠癌形成的分子机制之一。DNA异常甲基化的逆转可能有助于结直肠癌的诊断和治疗。     

cyclinD1甲基化程度降低与大肠癌的关系

目的探讨cyclinD1基因启动子区甲基化改变在大肠癌发生发展过程中的作用及意义。方法采用MSP法检测大肠癌标本中cyclinD1的甲基化状态,并与大肠癌病理学特征比较。结果在大肠癌发生发展过程中,cyclinD1甲基化率呈逐渐下降趋势,其在癌旁、腺瘤、癌组织中的甲基化率与切缘上皮相比均有显著性差异(P<0.01)。在各病变阶段cyclinD1甲基化程度与其蛋白表达呈明显负相关。癌组织中cyclinD1甲基化率还与肿瘤的分化程度、浸润深度及淋巴结转移密切相关(P<0.01)。结论cyclinD1甲基化程度降低致cyclinD1过表达在大肠癌的发生发展中可能起重要作用,其在大肠癌的早期诊断和恶性程度及预后判断上可能是一个有用的分子指标。     

大肠癌组织MALmRNA、蛋白表达及其启动子甲基化状态研究

目的探讨MAL基因对大肠癌筛查及早期诊断的价值。方法选取10例正常大肠组织作为对照,应用RT-PCR、甲基化特异性PCR、Westernblot方法分别检测并比较大肠癌组织（40例）及相应癌旁组织（40例）中MALmRNA、蛋白的表达情况以及MAL基因启动子甲基化状态。结果大肠癌组织中MALmRNA、蛋白的表达阳性率（10.0%、20.0%）均低于其在癌旁组织（75.0%、85.0%）和正常大肠组织（100.0%、100.0%）中的表达阳性率（均P＜0.05）,而大肠癌组织中MAL基因启动子甲基化率（90.0%）均高于其在癌旁组织（40.0%）和正常大肠组织（0.0%）中的甲基化率（均P＜0.05）。结论大肠癌组织中MAL基因或可作为大肠癌筛查及早期诊断的高潜力分子标志物。     

胃黏膜上皮错配修复基因hMLH1表达在胃癌诊断中的临床意义

[目的]探讨hMLH1蛋白表达在胃癌诊断中的意义及用于胃癌预警的可能性.[方法]免疫组织化学(SP)法检测106例胃癌患者的癌(癌组)与癌旁黏膜上皮(癌旁组)的hMLH1蛋白表达情况并与34例非肿瘤患者(正常组)胃黏膜上皮进行比较,分析该蛋白在细胞中的表达部位与病变的关系.[结果]癌组和癌旁组及正常组hMLH1蛋白的胞核阳性表达率分别为71%(75/106)、50%(53/106)和26%(9/34),各组间差异有显著性意义(P＜0.05);胃癌组hMLH1蛋白在核、浆中同时表达阳性率为38%(40/106)显著高于癌旁组和正常组的17%(18/106)和15%(5/34)(P＜0.05),但后两组间差异无显著性意义.[结论]hMLH1蛋白在细胞核中出现高表达可能是胃黏膜上皮细胞癌变的组织学预警标志,而其在细胞核和细胞浆同时高表达对胃癌诊断具有一定意义.     

大肠腺瘤及其癌变错配修复基因hMLH1和hMSH2表达与细胞增殖的关系

目的探讨错配修复基因hMLH1和hMSH2表达在大肠癌发生中的作用及其与细胞增殖间的关系.方法采用免疫组织化学染色法对63例大肠腺瘤、20例腺瘤癌变和20例大肠癌的hMLH1和hMSH2、PCNA和Ki-67表达进行检测.结果大肠腺瘤、癌变和大肠癌中hMLH1、hMSH2阳性表达率逐渐降低,与正常大肠粘膜相比相差显著(P＜0.01),腺瘤不典型增生分级增加其阳性率亦逐渐降低.腺瘤不典型增生Ⅱ、Ⅲ级、腺瘤癌变和大肠癌中hMSH2-者,其PCNA LI显著低于hMSH2 者(P＜0.05);hMSH2表达缺失的大肠癌,其Ki-67 LI较阳性者显著降低(P＜0.05).3组大肠病变hMLH1阳性与阴性表达组间,其PCNA LI和Ki-67 LI无差异显著性.结论提示错配修复基因突变或功能缺失与大肠癌的发生有关,可能系大肠癌发生过程中的早期事件,并对大肠肿瘤细胞增殖活性有所影响.     

肾透明细胞癌中β-环连蛋白抑制基因1启动子CpG岛甲基化与其失表达相关

目的:探讨肾透明细胞癌中β-环连蛋白抑制基因1(dapper homolog 1,antagonist of beta-catenin,Dact1)表达与其启动子CpG岛甲基化状态的关系,并探究他们之间的关系及在肾透明细胞癌发生中的作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)分别检测30例癌组织及相应的癌旁对照组织中Dact1基因mRNA的表达和其启动子甲基化状态。结果:癌组织组中,19例Dact1基因mRNA失表达(63%),7例表达低于癌旁对照组(23%);癌旁对照组织组中,2例Dact1基因mRNA低表达(6%)。Dactl基因在癌组织、癌旁对照组织中的甲基化阳性率分别为70%、6%,2组比较差异有统计学意义(P < O.001),Dactl基因mRNA的失表达或低表达与其启动子甲基化状态的相关性分析有统计学意义(P < 0.05)。结论:Dact1基因mRNA的失表达或低表达可能参与了肾透明细胞癌的发生发展,其失表达可能与Dactl启动子区异常甲基化相关。     

错配修复蛋白hMLH1在子宫内膜癌表达的临床意义

【目的】探讨错配修复蛋白hMLH1在子宫内膜癌（endometrial carcinoma，EC）的失表达情况及其临床意义。【方法】用免疫组化S-P方法检测hMLH1蛋白在61例子宫内膜癌组织的失表达情况，并分析hMLH1蛋白失表达与子宫内膜癌临床病理的关系。【结果】子宫内膜癌组织存在hMLH1蛋白失表达，其失表达率为29．5％。hMLH1失表达子宫内膜癌细胞分化较好（P=0．047），临床预后较好（OR=5．458，P=0．025），hMLH1失表达为子宫内膜癌独立预后因素（Cox多因素分析，P=0．006）。【结论】hMLH1基因功能缺失在子宫内膜癌代表较良好的预后，hMLH1失表达有可能作为子宫内膜癌的独立预后因素。     

胃黏膜上皮及胃癌细胞中错配修复基因hMLH1蛋白的表达及意义

[目的]探讨hMLH1蛋白作为胃癌预警标记物的可能性。[方法]免疫组织化学SP法半定量检测24例非肿瘤患者胃黏膜上皮、39例胃癌患者癌旁黏膜上皮及癌细胞hMLH1蛋白的表达情况,比较该蛋白在不同黏膜上皮组织中表达的差异性。[结果]hMLH1蛋白表达率在非肿瘤患者胃黏膜上皮为33％,明显低于胃癌患者癌旁黏膜上皮的72％(P=0．003)及癌细胞的74％(P=0．001),但在癌旁黏膜上皮与癌细胞间无显著性差异(P=0.799)。[结论]hMLH1蛋白在胃癌患者癌旁黏膜上皮及癌细胞的表达强于非肿瘤患者胃黏膜上皮表达的现象,提示其作为胃癌预警组织学标记物的可能性。     

喉鳞状细胞癌组织CLDN11基因启动子甲基化及临床意义研究

目的探讨喉鳞状细胞癌（LSCC）组织中CLDN11基因启动子的甲基化水平及其临床意义。方法采用实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应（qMSP）分别检测91例LSCC患者的LSCC组织及其配对的癌旁正常组织CLDN11基因启动子甲基化水平,分析其与临床病理特征及预后的关系,绘制ROC曲线评估其诊断价值。结果LSCC组织CLDN11基因启动子甲基化水平明显高于癌旁正常组织（P＜0.01）。Ⅲ、Ⅳ期、T3~4期、有淋巴结转移的LSCC组织CLDN11基因启动子甲基化水平分别高于Ⅰ、Ⅱ期、T1~2期、无淋巴结转移的LSCC组织（均P＜0.01）。ROC曲线分析AUC为0.884（95％CI：0.835~0.932,P＜0.01）,甲基化水平为0.571时,诊断LSCC的灵敏度、特异度分别为0.923、0.736。与低甲基化组（甲基化水平＜0.571）患者相比,高甲基化组（甲基化水平≥0.571）患者总生存率较低（P＜0.01）。结论CLDN11基因启动子高甲基化或可作为LSCC诊断和预测预后的生物标志物。