日本血吸虫成虫及肝卵石蜡切片间接荧光抗体试验诊断血吸虫病

<正> 用血吸虫成虫冰冻切片为抗原,以血吸虫病人血清为抗体作间接免疫荧光实验(IFAT),诊断血吸虫病和循环抗原定位,显示出敏感性特异性均高。为适应血吸虫病流行疫区普遍推广使用,作者用福尔马林固定石蜡包埋血吸虫成虫和血吸虫病兔肝脏切片为抗原,以血吸虫患者血清为抗体作IFAT,获得较满意结果,现报道如下。     

乙型肝炎患者抗微粒体抗体检测及临床意义

<正> 国外报道部分慢性肝炎患者存在一种自身抗体—抗微粒体抗体。本文报道乙型肝炎患者抗微粒体抗体检测结果。 对象和方法 一、病例:共检测86例住院肝炎患者血清,其中HBsAg阳性39例;HBsAg阴性/抗-HBc阳性30例;非乙肝感染11例。 二、方法:抗微粒体抗体检测:采用间接免疫荧光方法。抗微粒体抗体阳性对照血清系Dr.Rizze-tto实验室提供;阴性对照包括用正常人血清取代病人血清及用荧光标记羊抗兔IgG取代荧光标记羊抗入IgG。肝内HBsAg、HBcAg检查采用ABC     

日本血吸虫成虫抗原和虫卵抗原检测先天性感染仔兔血清抗体的动态变化

目的　观察仔兔血清抗体动态变化 ,探讨家兔日本血吸虫病垂直传播的体液免疫反应规律。方法　 5只怀孕晚期母兔分别人工感染 5 0 0条日本血吸虫尾蚴 只 ,仔兔出生后 4 3d起每隔 2周采血收集血清 ,至仔兔发育成熟 (约出生后113d)。分别运用日本血吸虫成虫抗原 (AWA)和可溶性虫卵抗原 (SEA) ,ELISA法检测血清中特异性IgG、IgM抗体 ,观察动态变化。结果　仔兔先天性感染率为 6 0 % (12 2 0 ) ,其中 5只双性感染 ,7只单性感染。 2 0只仔兔 ,抗AWA IgG、抗AWA IgM抗体检测始终呈阴性 ;抗SEA IgG检测 ,5只双性感染仔兔有 4只于出生后 5 7d起陆续呈阳性 ,其余 16只始终为阴性 ;2 0只仔兔抗SEA IgM也始终呈阴性。结论　先天性感染日本血吸虫病的仔兔呈低免疫应答状态 ,可能存在免疫耐受     

抗兔μ链和抗兔γ链血清的制备及初步应用

用常规生化方法提取正常兔血清中的IgM,用吸附法制备抗兔μ链血清。免疫电泳证明所制备的抗兔μ链血清与兔全血清仅有一条沉淀线,与兔IgG、IgA没有交叉反应。与抗兔μ链结合的兔血清成份有抗体活性,对2-巯基乙醇敏感;分子排阻层析证明,分子量与入骨髓瘤IgM相同。同时制备了抗兔Υ链血清。应用这二种血清检测经福氏2a志贺氏免疫兔的血清抗体证明它们分别对IgM、IgG有特异性,可用于观察免疫后特异IgM、lgG抗体产生的动态规律。     

间接ELISA法检测轮状病毒

本文报道检测急性小儿腹泻患者粪便中轮状病毒的间接 ELISA 法。分别用兔抗 SA_(11)轮状病毒血清和正常兔血清的粗提 IgG 包板,检测抗体为豚鼠抗 SA_(11)抗体。酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗豚鼠 IgG 抗体。根据正常人标本结果为阴性,阻断试验成立,以及阳性标本用正常豚鼠血清检测为阴性,说明本试验具特异性。分析比较50份标本的电镜检查结果和间接 ELISA 试验结果,说明本试验的敏感性好。初步比较了抗牛轮状病毒(NCDV)抗体和抗 SA_(11)抗体检测的结果,两者基本一致。用硫酸铵粗提的 IgG 代替兔全血清,可减少非特异性显色。     

抗日本血吸虫SEA特异性IgY应用于循环抗原检测的研究

本研究应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)建立敏感、特异的检测循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA).用SEA皮下多点注射法免疫海蓝鸡,水稀释法制备IgY抗体,以辣根过氧化物酶标记纯化的IgY抗体(IgY-E)和兔抗IgG抗体(IgG-E)分别作为检测抗体,IgY抗体和兔抗...     

先天性感染日本血吸虫家兔攻击感染后血清抗体动态的观察

日本血吸虫抗原系统相对比较复杂，汤益等对先天性感染日本血吸虫仔兔于出生后第55天攻击感染，以ELISA法检测仔兔血清特异性针对可溶性虫卵抗原(SEA)抗体，结果仔兔对攻击性感染呈低反应状态。本研究采用ELISA法检测先天性感染仔兔攻击感染后血清针对日本血吸虫抗原(AWA)IgC、IgM抗体并观察其动态变化，同时重复SEA-ELISA法检测结果，进一步探讨日本血吸虫病先天性感染仔兔的体液免疫应答。     

应用蛋白质A-琼脂糖-4B亲和层析柱纯化兔血清免疫球蛋白G制备羊抗兔IgG血清

近年来在不少免疫学科研实验中,需要高纯度和高效价羊抗兔IgG免疫血清作为第二抗体,应用于多种免疫学实验方法中,如放射免疫分析法,免疫荧光法,免疫酶法及ABC法等。本实验采用蛋白质A—琼脂糖—4B亲和层析柱,从兔血清中一步提纯免疫球蛋白G,用     

人E1A激活基因阻遏子的表达、抗体制备及生物学活性分析

目的:构建人E1A激活基因阻遏子(humancellularrepressorofE1A-stimulatedgene,hCREG)基因的原核表达载体,纯化重组的hCREG融合蛋白并制备兔抗hCREG抗体。探讨hCREG蛋白在人血管平滑肌细胞克隆株(HITASY)中的表达、定位。方法:用PCR技术,扩增hCREG并构建pGEX-4T-1/hCREG原核表达载体。诱导表达重组谷胱甘肽巯基转移酶(glutathioneS-transferase,GST)-hCREG融合蛋白。以GST-hCREG为抗原,制备兔抗人GST-hCREG的抗血清,并通过蛋白A和GST亲和层析纯化。用ELISA和Westernblot法检测抗体的效价和特异性;用免疫荧光染色法检查去血清培养前后HITASY细胞中hCREG蛋白的表达及定位;用BrdU染色观察分泌型hCREG蛋白对HITASY细胞增殖的影响。结果:经鉴定证实构建的重组质粒正确。诱导后pGEX-4T-1/hCREG菌株可表达大量的GST-hCREG融合蛋白,层析纯化后其纯度达90%。Westernblot检测表明,纯化的兔抗hCREG抗体可与hCREG蛋白特异性结合。ELISA测得该抗体的效价>1∶105。免疫荧光染色检测显示,去血清培养诱导的HITA-SY细胞中hCREG蛋白的表达增加且定位在核周围。BrdU染色表明,hCREG可明显抑制HITASY细胞增殖。结论:成功地获得兔抗hCREG抗体。证实去血清培养的血管平滑肌细胞中CREG蛋白的表达上调。表达的hCREG蛋白可抑制HI-TASY细胞增殖,提示hCREG可能参与调控血管平滑肌细胞的增殖与分化。     

感染小鼠用吡喹酮治疗后其体内血吸虫体表抗原的显露

应用间接荧光抗体试验法对整体血吸虫检测的结果表明,感染日本血吸虫的小鼠一次口服吡喹酮300毫克/公斤后10～30分钟,其体内两性血吸虫的体表抗原即开始显露,16小时后虫的体表抗原大部分已显露。治后3～7天,残留血吸虫体表抗原的检测转为阴性。本文就经吡喹酮作用后血吸虫体表抗原显露的意义进行了一些讨论。     

吡喹酮对日本血吸虫诱导白细胞趋化性的影响

<正> 前文指出,吡喹酮抗日本血吸虫成虫,除药物的直接作用外,尚有赖于宿主免疫机制的参与。进一步的观察结果表明,血吸虫经吡喹酮作用后,白细胞迅速附着于受损的虫体体表,并钻入虫体内,而这种白细胞附着又依赖于抗体的存在。为了阐明此种现象,乃用Boyden室观察血吸虫经吡喹酮作用后的白细胞趋化活性。     

11型HPV E7蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

目的构建人11型乳头瘤病毒(HPV 11)E7蛋白的原核表达载体,表达纯化后制备抗HPV11E7蛋白的多克隆抗体。方法构建pGEX-4T2-HPV11E7原核表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大肠杆菌表达可溶性融合蛋白GST-HPV11E7,纯化获取11型HPVE7蛋白。将HPV11E7蛋白免疫新西兰大白兔获得抗HPV11E7的多克隆抗体,用蛋白G琼脂糖纯化获得IgG型多克隆抗体。Western blot法及免疫荧光染色检测该抗体的效价及特异性。结果 SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导6 h后可表达出高水平可溶性GST-HPV11E7融合蛋白。纯化后免疫新西兰大白兔获得抗HPV11E7的血清,纯化获得了IgG型多克隆抗体。Western blot及免疫荧光染色结果显示,兔抗HPV11E7 IgG具有效价高和特异性强的特点。结论成功表达了HPV11E7蛋白并制备了效价较高、特异性较好的IgG型兔抗HPV11E7蛋白多克隆抗体。     

冠状病毒感染细胞抗原片法检测SARS患者血清中特异性抗体

目的：检测SAILS患者血清中特异性抗冠状病毒抗体及其滴度变化，协助临床确诊SAILS。方法：用本次爆发SAILS患者鼻腔抽吸液分离的冠状病毒感染新生恒河猴肾细胞，制备抗原片，用间接免疫荧光法检测患者体内急性期和恢复期血清中的抗冠状病毒抗体。结果：汕头地区7例SAILS患者血清内均有特异性抗冠状病毒抗体，且恢复期抗体滴度比急性期的滴度增高4倍以上。结论：用冠状病毒感染细胞抗原片对怀疑感染SAILS的患者血清进行特异性抗体检测，可协助临床确定SAPS的诊断。     

抗神经元和抗心磷脂抗体对中枢型SLE诊断的意义

用间接免疫荧光技术和ELISA法检测神经精神性狼疮(NPLE)和非NPLE患者,非SLE脑血管疾病患者及正常人血清和脑脊液中抗神经元抗体、抗心磷脂抗体。结果显示NPLE患者血清和脑脊液中这两种抗体的阳性率与其它患者相比,有显著差异。提示这两种抗体的检测有助于NPLE的临床诊断。     

用重组结构区抗原检测抗丙型肝炎病毒IgM抗体方法？…

目的 检测抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区蛋白ＩｇＭ抗体。方法 采用丙型肝炎病毒Ｃ，Ｅ１、Ｅ２区重组抗原混合包被和分别包被酶标板；用兔抗人γ链血清处理人血清标本，再用固相包被羊抗兔抗体吸附兔抗人γ链－人ＩｇＧ复合物，建立了抗－ＨＣＶＩｇＭ检测方法。结果 对７６例现型肝炎病人血清进行抗－ＨＣＶ ＩｇＭ检测，同时与逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ＋ＰＣＲ）检测结果进行比较，再会得具有相关性（Ｐ〈０．００５     

日本血吸虫经胎盘传染的仔兔再次感染后血清抗体动态的研究

怀孕晚期母兔 (怀孕 2 1～ 2 5ｄ)感染70 0条日本血吸虫尾蚴。分 3组 :①经胎感染仔兔无攻击感染组 (Ｇ1) :4只母兔感染 ,所产仔兔不进行攻击感染 ;②经胎感染仔兔攻击感染组 (Ｇ2 ) :3只母兔感染 ,所产仔兔出生后 5 5ｄ攻击感染 2 0条尾蚴 /只 ;③对照组 (Ｇ3 ) :3只母兔不感染 ,所产仔兔出生后 5 5ｄ感染 2 0条尾蚴/只。 3组仔兔出生后 5 3ｄ起 ,每隔 2周(出生后 5 3、6 7、81和 95ｄ)收集血清 ,用ＥＬＩＳＡ检测血清中抗日本血吸虫特异性ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体。ＩｇＧ检测 :①Ｇ1组 :5只仔兔ＩｇＧ始终阴性 (Ａ值 0 0 4～ 0 2 1)未检到虫…     

结缔组织疾病和其它疾病存在的人细胞核抗原的自身抗体

一般认为抗核抗体既无器官特异性,也无种族特异性。然而近几年来,曾报告它有一定限度的特异性。据报道有一种只与粒细胞核抗原起反应的自身抗体,它是类风湿关节炎所特有的。作者通过免疫荧光技术,三年来检测血清23000份,抗核抗体阳性者3450份,发现23份(0.66%)血清里存在一种与人细胞核抗原发生反应的自身抗体。这种自身抗体和鼠肾、鼠肝细胞核反应很弱或不反应。23份血清中只有7份血清可与其它物种细胞核发生弱反应,滴度在1:80以下,这种弱阳性反应,能被丙酮提取的兔胸腺粉吸收而消失。但与人细胞核的反应,既使在低滴度抗     

检测单克隆抗体不同ELISA方法的敏感性比较(文摘)

本文比较7种不同的EL1SA方法在检测9株单克隆抗体中的敏感性。7种ELSA按试剂加入程序不间分别为①抗原、鼠抗体、酶标兔抗鼠②抗原、鼠抗体、兔抗鼠、酶标羊抗兔③羊抗体、抗原、鼠抗体、酶标兔抗鼠④鸡抗体、抗原,、鼠抗体、免机鼠、酶标羊抗兔⑤鼠抗体、抗原、兔抗体、酶标羊抗兔⑥兔抗鼠、鼠抗体、抗原、酶标兔抗体⑦羊抗鼠、鼠抗体、抗原、鸡抗体、酶标兔抗鸡。抗原为烟草花叶病毒(TMV)及其衣壳蛋白(TMVP)。用碱     

抗RIP3抗体的制备及其亚细胞定位

目的:制备兔抗受体相互作用蛋白3(RIP3)的抗体,并探讨其在鼠源NIH3T3细胞株中的定位。方法:用RTPCR技术从NIH3T3细胞株中克隆鼠rip3基因,进行原核表达及电洗脱纯化。以高纯度的RIP3抗原免疫新西兰兔制备抗血清并纯化。用Westernblot检测该抗体的特异性,以免疫荧光法确定RIP3在NIH3T3细胞株中的定位,以及TNFα和zVAD.fmk对其定位的影响。结果:获得特异性的兔抗RIP3蛋白的抗体。免疫荧光的结果显示,RIP3定位于细胞质中。单用TNFα或zVAD.fmk处理NIH3T3细胞后,RIP3的定位均无明显变化;而用zVAD.fmk和TNFα共同处理细胞后,在核内外均有RIP3分布。结论:成功地克隆rip3基因并制备高特异性的兔抗RIP3抗体。RIP3在NIH3T3细胞株中定位于细胞质中,为进一步研究RIP3在TNFα诱导的caspase非依赖的细胞凋亡途径中的作用奠定了基础。     

血吸虫病免疫诊断的研究——放射免疫检测循环抗原初报

为了提高血吸虫病免疫诊断的敏感性与特异性,试以同位素(~(125)I或~(131)I)标记抗循环原抗体(抗CSA IgG),进行检测血吸虫病循环抗原试验,现分三部分小结如下。 一、抗循环抗原体IgG制备,同位素标记及标记物的鉴定: 以日本血吸虫尾蚴5,000条感染家兔,感染后30天心脏取血,分离血清,用三氯醋酸沉淀血清蛋白。离心后取上清液透析。再经超滤取样,冰冻干燥获取循环抗原。再将此循环抗原加甲基化兔白蛋