TNFα刺激的星形胶质细胞条件培养液对海马神经元的兴奋作用(英文)

为了探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNFα)刺激的星形胶质细胞对神经元的作用,本研究将体外纯化培养的大鼠海马星形胶质细胞,用反相高效液相法测定TNFα刺激后细胞培养液内谷氨酸的含量;将TNFα刺激后的星形胶质细胞条件培养液(astrocytic conditioned medium,ACM)作用于培养的海马神经元,运用免疫细胞化学方法和图像分析技术研究神经元NF-κBp65和谷氨酸的表达。结果表明:(1)TNFα可明显促进星形胶质细胞释放谷氨酸,(2)ACM作用1 5 min即可诱导神经元NF-κBp65的核表达,30 min达高峰,180 min恢复至对照水平,(3)ACM作用60 min可使谷氨酸免疫反应阳性神经元平均光密度明显升高,持续至240 min。提示,TNFα刺激的星形胶质细胞可通过释放谷氨酸等可溶性物质使神经元快速激活、兴奋性升高。     

星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的保护作用

为了探讨星形胶质细胞条件培养液(ACM)对缺氧损伤神经元的保护作用,本实验将新生的KM小鼠的皮层星形胶质细胞分离、纯化并传代培养第三代第5d后,将星形胶质细胞(Ast)条件培养液,加入到缺氧损伤的神经元细胞培养液中,观测其对缺氧神经元的存活及其合成和释放一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)和胞膜ATP酶(ATPase)的影响。结果显示:10%和20%ACM对神经元存活有明显促进作用;与对照组相比,20%ACM还有效地减少了缺氧神经元NO、LDH的生成和分泌,保护和提高了ATPase的活性。以上结果提示ACM促进缺氧神经元的存活,其机制可能与减少NO、LDH合成释放及保护细胞膜上ATPase的活性有关。     

星形胶质细胞条件培养液对体外模拟脑缺血再灌注损伤神经元的作用

目的：探讨星形胶质细胞(Ast)条件培养液(ACM)对体外模拟脑缺血再灌注损伤神经元的影响。方法：分离纯化培养大鼠大脑皮质Ast和神经元,体外模拟脑缺血再灌注损伤模型,用ACM培养损伤后的神经元,测定其神经元的活性、存活率、死亡率、培养液乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率和NOS强阳性细胞的表达量。结果：ACM能使脑缺血再灌注损伤神经元的活性和存活率明显提高,使死亡率、LDH的漏出率和NOS强阳性细胞的表达量显著降低。结论：(1)体外模拟脑缺血再灌注损伤神经元的变化具有一定的规律性;(2)ACM对受损的神经元具有重要的保护和修复作用;(3)Ast在脑缺血预适应中发挥重要的作用。     

星形胶质细胞条件培养液促进新生大鼠海马神经干细胞分化

目的探讨星形胶质细胞条件培养液(ACM)对神经干细胞(NSCs)体外分化的影响。方法行新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞的纯化培养后收集ACM,将新生大鼠海马NSCs单克隆培养后行nestin免疫细胞荧光染色,诱导分化5d后行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖脑苷脂(GALC)免疫细胞荧光染色;将单克隆培养的NSCs分为对照组和实验组,对照组为单纯NSCs培养液,实验组根据NSCs培养液与ACM比的不同分3组:A组(2:1),B组(1:1),C组(1:2)。各组培养1周,采用NSE免疫细胞荧光检测方法标记神经元并计数和统计学分析。结果纯化的星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白抗体标记阳性率为96.5%;单克隆培养的海马NSCs呈nestin阳性,诱导后呈NSE、GFAP和GALC阳性表达。ACM培养的海马NSCs各组分化为神经元的比例明显高于对照组(<0.01),其中A组的比例最高。结论ACM可以促进新生大鼠海马NSCs向神经元分化。     

星形胶质细胞转分化为神经元在神经再生中的研究进展

<正>星形胶质细胞是广泛存在于中枢神经系统内的一类胶质细胞,在建立和维持正常脑功能以及脑损伤后修复中具有重要作用。近几年发现,特定区域脑损伤后星形胶质细胞发生活化,甚至转分化为神经元谱系,表现出类似于神经前体细胞的特性,这一重要的潜能使得星形胶质细胞成为神经再生领域研究的焦点。本文就星形胶质细胞的基本特性、其转分化为神经元的模型以及介导转分化发生的细胞与分子学     

一种同时培养原代神经元和原代星形胶质细胞的实验方法

目的 建立一种简便实用的可同时提取原代神经元和原代星形胶质细胞的培养方法.方法 选用出生24 h的SD乳鼠,75％乙醇消毒,断脊法处死.用眼科镊拨开脑膜各层,取出完整大脑.游离海马,剥离血管,木瓜蛋白酶消化,然后吹打、离心、过滤,以合适密度种植于相应培养皿.4h后更换培养基,以后每2天半量换液培养.第5天用免疫荧光法鉴...     

星形胶质细胞条件培养液促进胚胎干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的:探讨星形胶质细胞条件培养液在体外能否促进胚胎干细胞（ESCs）向神经元方向分化。 方法:在Bain等建立的4-/4+方案基础上，分成两组：单用ATRA组和ATRA联合胎脑星形胶质细胞条件培养液组，分3阶段诱导ESCs定向生成神经元样细胞。形态学观察及畸胎瘤形成试验对ESCs的全能性进行鉴定；免疫组化染色法检测nestin、GFAP、NSE和NF-200的表达对诱导过程进行动态监测。 结果:（1）体外培养的小鼠ESC-D3细胞在胚胎成纤维饲养层细胞上连续传代培养，仍保持向3胚层分化的能力。（2）在诱导分化阶段，联合诱导组分化细胞NF-200和NSE的表达阳性率高于单用ATRA组。（3） 联合诱导组最终诱导ESCs生成纯度高达73.5%神经元样细胞。 结论:采用胚胎脑星形胶质细胞条件培养液可较高产率及纯度地促进ESCs生成神经元样细胞，值得推广应用。     

星形胶质细胞在血脑屏障与神经元损伤中的作用

<正>星形胶质细胞(astrocyte,AST)是中枢神经系统重要的管家细胞,其在神经兴奋时清除多余的兴奋性递质、控制离子和水分子动态平衡、释放神经营养因子、转移代谢产物和废弃物、参与血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)形成、调控     

星形胶质细胞条件培养基对培养海马神经元GluR2和PICK1 mRNA表达的调控

目的 探讨癫痫发病过程中,星形胶质细胞对神经元AMPA受体亚单位表达的调节机制.方法 收集谷氨酸刺激的星形胶质细胞条件培养基,作用于培养的海马神经元,用RT-PCR方法检测神经元GluR2和PICK1 mRNA表达的变化.结果 在星形胶质细胞条件培养基作用2h、8h、12h后,培养的海马神经元GluR2mRNA表达明显下降,而PICK1 mRNA表达则升高,与对照组相比,差异有显著意义(P＜0.05).离子型谷氨酸受体拮抗剂D-AP5和CNQX不能完全阻断条件培养基的作用.结论 在癫痫发病过程中,星形胶质细胞激活能通过上调PICK1的表达,实现下调神经元AMPA受体GluR2亚单位的表达.     

卡马西平对大鼠海马星形胶质细胞形态和GFAP表达的影响

目的观察治疗剂量卡马西平对SD大鼠海马星形胶质细胞形态和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法治疗剂量卡马西平每24 h单次灌胃给药后,于不同时间点经心脏灌注,取脑;GFAP免疫组化染色测量海马GFAP阳性细胞数量及形态。结果1周组海马CA1区星形胶质细胞的形态及GFAP表达无变化,1个月组星形胶质细胞数量及GFAP表达量无明显增加,3个月组GFAP阳性细胞数显著增加,达对照组的1.74倍(P<0.05);并伴细胞体积增大,侧支增多。结论治疗剂量的卡马西平对星形胶质细胞形态和GFAP表达的影响呈时间依赖性。     

马桑内酯所致慢性癫痫大鼠海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋 …

用免疫组织化学方法研究了系统应用马桑内酯所致的慢性癫痫大鼠海马中星表胶质细胞伯胶质纤维酸性蛋白的表达。结果证明，整个海马的胶质纤维酸性蛋白免疫反应明显增强，并可见阳性细胞增生，胞体肥大，尤以齿状回门区和海分子腔隙层及始层为甚，此外，本实验还发现海胶质纤维酸性蛋白的阳性反应随发作后不同时间间隔（２ｈ～９ｄ）而不同，而直至发作后９ｄ胶质纤维酸性蛋白阳性反应程度仍高于对照组，此结果表明，马桑内酯所致癫痫     

体外血小板活化因子对神经元和星形胶质细胞的作用

目的：研究血小板活化因子（PAF）对神经元活力及星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。 方法： 分别取BALB/c胎鼠和新生小鼠大脑皮层，纯化培养神经元和星形胶质细胞，设正常对照组和实验组，实验组中分别加入4、8和16 μmol/L的PAF并分别作用4 h、24 h和72 h,用MTT法和免疫组织化学方法测定神经元活力和星形胶质细胞表达GFAP的平均灰度值。 结果： PAF作用后，神经元活力降低；星形胶质细胞数量减少，但存活细胞GFAP表达增加。两者均呈浓度依赖关系。 结论： PAF不仅直接作用于神经元，且可通过作用于星形胶质细胞间接影响神经元的存活。     

星形胶质细胞正常条件培养液对体外脑缺氧/复氧损伤神经元的影响

目的:探讨星形胶质细胞正常条件培养液(NCMA)对体外脑缺氧/复氧(H/R)损伤神经元的营养性作用。方法:先行大鼠大脑皮质星形胶质细胞和神经元的分离纯化培养,然后用NCMA以不同的浓度培养正常及脑H/R损伤的神经元,通过MTT法测定其神经元的活性和存活率。结果:NCMA能提高正常及脑H/R损伤神经元的活性和存活率。结论:NCMA对培养的神经元具有营养性支持作用。     

川芎嗪对缺氧缺血性脑损伤大鼠海马星形胶质细胞的影响

观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)大鼠海马星形胶质细胞的影响。将90只7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组、TMP治疗组,各组分别在0h、6h、12h、24h、48h五个时间点取右脑,透射电镜下观察海马CA1区星形胶质细胞超微结构变化,免疫组织化学法检测胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary a-cidic protein,GFAP)表达的变化。结果显示,在电镜下HIBD损伤组星形胶质细胞肿胀,体积增大,核形状不规则,核质比增大,核仁明显,位于近核膜处,细胞器明显减少,线粒体肿胀,嵴紊乱,有缺失,可见粗面内质网池扩张;TMP组星形胶质细胞损伤轻,形态基本正常。HIBD后海马CA1区星形胶质细胞反应明显增强(P<0.01),川芎嗪治疗后可明显减轻星形胶质细胞的反应程度(P<0.01)。以上结果提示川芎嗪可通过减轻HIBD后星形胶质细胞的反应程度发挥保护和修复神经细胞的作用。     

星形胶质细胞在体内直接重编程为神经元的研究进展

人类神经元几乎不具有再生能力,这也意味着神经元一旦受损或退化,神经系统的自我修复将无计可施。研究发现,星形胶质细胞作为一种广泛分布于中枢神经系统(CNS)中的神经胶质细胞,具备诱导转化为神经元的潜力。事实上,各国研究学者已经成功利用多种技术手段将来源不同的星形胶质细胞重编程为神经元。本文综述了脊髓损伤(SCI)、脑卒中(CS)、帕金森病(PD)、阿尔茨海默病(AD)和亨廷顿病(HD)、肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)等神经系统相关疾病中星形胶质细胞直接重编程为功能性神经元的再生策略。     

低渗刺激后大鼠视上核内星形胶质细胞和神经元的可塑性改变及其相互关系

为观察低渗刺激后大鼠视上核(SON)内星形胶质细胞和神经元的可塑性反应及其两者在反应时间和空间上的相互关系,我们采用大鼠尾静脉注射 5. 5ml/kg低渗盐水(0. 83% 葡萄糖+ 0. 3% NaCl)制作模型,应用抗Fos、抗胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)单标记,以及抗Fos/抗GFAP双标记、抗Fos/抗血管加压素 (VP) /抗GFAP三标记的免疫组化方法。结果发现:在SON中GFAP阳性星形胶质细胞数量在刺激后 15min增加,其胞体肥大,突起伸长变粗, 45min达高峰。Fos阳性星形胶质细胞胞核呈蓝黑色小点,刺激后 15~45min达高峰, 90min明显减少;Fos阳性神经元胞核较大,刺激后 15min未见表达, 45min少量表达, 90min表达增加。该结果表明低渗刺激后,SON内星形胶质细胞的Fos表达早于神经元,三重标记显示星形胶质细胞与神经元关系密切,提示SON内星形胶质细胞可能在低渗刺激的调节中发挥一定作用。     

星形胶质细胞对β-淀粉样蛋白诱导神经元凋亡的影响

目的:于大鼠海马原代培养的细胞模型中明确星形胶质细胞(Astrocytes,AS)在β-淀粉样蛋白(Am-yloid-β,Aβ)诱导的神经元凋亡中是否发挥作用,以及其发挥作用的主要方式。方法:建立4天龄Wistar大鼠海马原代混合培养体系(MIX-S)、纯化原代AS培养体系(AS-S)及纯化原代神经元培养体系(NE-S),用Aβ处理三种不同体系细胞,24 h后收集三种培养液(MNE-Aβ24 h、MAS-Aβ24 h、MMIX-Aβ24 h)及control组三种培养液(MNE-control、MAS-control、MMix-control)。在下一批NE-S和MIX-S培养细胞中,分别用不同培养液或Aβ处理24 h后应用TUNEL法检测细胞凋亡数量的变化。结果:Aβ处理后NE-S凋亡比例显著高于MIX-S,其中MIX-S凋亡与control组相近,MIX-S表现出较弱的Aβ毒性易感性。比较Aβ处理24 h后收集的培养液(MAβ24 h,Aβ前处理)与对照组培养液(Mcontrol)再加Aβ处理(Aβ后处理)培养细胞,发现Aβ前处理(MNE-Aβ24 h、MAS-Aβ24 h)比Aβ后处理(MNE-control、MAS-control再加Aβ)诱导NE-S凋亡的效果更加显著。而Aβ前、后处理对MIX-S组神经元诱导凋亡的效果类似,接近Control组凋亡比例。结论:AS参与保护Aβ诱导的海马神经元凋亡,其保护作用依赖于AS与神经元构建的MIX-S完整性而并不是由AS分泌入培养液的成分介导。单纯AS-S在Aβ刺激下不仅失去保护功能,且释放促凋亡物质。     

中枢神经系统中星形胶质细胞作用的研究进展

星形胶质细胞是中枢神经系统中维持生理动态平衡的关键细胞,具有广泛功能,在正常生理和疾病状态中发挥多样的调节作用,包括提供信息传递和代谢支持、调控血脑屏障功能、调控突触形成、建立和维持适当的突触连接、调节神经保护及神经毒性作用等功能,在中枢神经系统的生长,各种生理、病理环境下均发挥重要作用。该文旨在阐明星形胶质细胞在中枢神经系统中的作用,总结其具体的调节过程和相关机制,为神经系统相关疾病的诊断和治疗提供新思路和方向。     

桩蛋白在两型星形胶质细胞及神经元中的差异表达

目的:观察桩蛋白在大鼠两型星形胶质细胞及神经元中的差异表达情况。方法:通过细胞培养并结合免疫荧光和RT-PCR方法,观察了桩蛋白的mRNA及蛋白在大鼠两型星形胶质细胞T1A和T2A以及神经元中的表达。结果:RT-PCR显示体外培养的T1A表达桩蛋白mRNA,而T2A和神经元未表达桩蛋白mRNA;免疫荧光染色显示桩蛋白主要分布于T1A的胞浆及突起中。结论:桩蛋白在T1A中表达,但未表达于T2A和神经元中;本实验结果为进一步研究桩蛋白在T1A中的生物学作用奠定了基础。