在人的类成骨细胞TE85中雌激素对活性维生素D作用的影响

目的　观察雌激素对活性维生素D ［1,25(OH)₂D₃］调节人的类成骨细胞TE85作用的影响。方法　以TE85为成骨细胞模型,³H-胸腺嘧啶参入法测细胞增殖,³H-脯氨酸参入法测细胞胶原合成,放射免疫法测骨钙素（BGP）含量,对硝基苯酚法测碱性磷酸酶（ALP）活性。结果　单独以0.5～5 nmol.L^-1 1,25(OH)₂D₃处理细胞96 h,³H-胸腺嘧啶参入被抑制,作用呈剂量依赖性。5 nmol.L^-1 1,25(OH)₂D₃可使细胞ALP活性增加29.7％。 雌二醇（E₂）可取消1,25(OH)₂D₃对细胞增殖的抑制作用。两药合用时能促进细胞胶原、骨钙素及ALP的合成。结论　1,25(OH)₂D₃有促进成骨细胞骨形成的作用。1,25(OH)₂D₃与E₂联合应用时,其促进成骨的作用增强。     

1,25-二羟基维生素D_3抑制K562细胞增殖及其机制

目的观察1,25二-羟基维生素D3〔1,25(OH)2D3〕对白血病细胞株K562增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法间接免疫荧光法鉴定维生素D受体(VDR)在K562细胞的表达;四噻唑蓝法(MTT)、AO/EB、流式细胞PI单染分析细胞生长抑制率、细胞凋亡率及细胞周期;比色法检测凋亡信号蛋白———天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性。结果①K562细胞核阳性表达VDR;②10-8mol.L-11,25(OH)2D3可明显抑制K562细胞增殖,促进凋亡,凋亡率从4.1%(对照组)增至26.5%,P<0.01;③1,25(OH)2D3作用后K562细胞的Caspase-3活性增加,P<0.05,提示细胞凋亡伴随着Caspaes-3活性升高。结论1,25(OH)2D3可明显抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制与Caspase-3活性增加相关。     

维生素D在骨骼病变外的应用研究进展

维生素D是一组脂溶性类固醇衍生物,是维持人体健康必不可少的营养素.人体内的维生素D主要来自阳光（紫外线B波段）照射皮肤后合成的维生素D3,其次来源于饮食如鱼类、蛋类和强化奶制品等的摄入,合成维生素D2或D3.维生素D3在肝内25羟化酶的作用下形成25-羟维生素D3[25 （OH） D3],然后在肾内1 α羟化酶的催化下成为活性更高的1,25-二羟基维生素D3 [1,25 （OH）2 D3].1,25（OH）2D3与体内靶细胞维生素D受体结合发挥生物效应.近年来,随着对维生素D作用研究的深入,发现维生素D缺乏除导致骨骼病变外,不仅影响钙磷代谢,还具有越来越多的生物学效应,如调节激素分泌、影响免疫功能、调节细胞增生与分化,从而与多种疾病的发生发展密切相关.     

1,25-(OH)2D3在临床的应用

维生素D3是一些抗佝偻病物质的总称,其活性代谢物主要包括25-羟维生素D3(25-(OH)D3)、24,25-二羟维生素D3(24,25-(OH)2D3)和1,25-二羟维生素D3(1,25-(OH)2D3),其中生物活性最强的代谢物是1,25-(OH)2D3.1,25-(OH)2D3是维生素D经肝、肾代谢后的活性形式,它不仅参与内分泌系统对骨和无机盐的代谢调节,还参与调节许多细胞的代谢过程.     

1，25二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞Skp2mRNA的影响

目的检测1,25二羟维生素D3[1,25（OH）2D3）对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞作用后S期激酶相关蛋白（skp2）表达情况．以探讨其抗癌机制;方法选用人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A进行体外培养,采用RToPCR在mRNA水平检测Skp2基因表达的变化;结果（10^-8-10^-6）mol·L^-1浓度的1,25（OH）2D3作用于HEC-1-A细胞随着作用浓度增加、作用时间延长。细胞增殖能力逐渐下降。Skp2mRNA逐渐减少;结论1,25（OH）2Db对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A有抑制作用．可能通过转录水平下调Skp2基因表达．从而产生抑癌作用。     

1,25-二羟维生素D3对其诱导的树突状细胞上Toll样受体7表达的抑制作用

目的探讨Toll样受体7（TLR7）在1,25-二羟维生素D3（1,25-（OH）2D3）抑制树突状细胞（DC）成熟中可能的机制。方法体外扩增小鼠骨髓来源的DC,采用流式细胞术和混合淋巴细胞反应检测1,25-（OH）₂D₃对DC表型和功能的影响;利用RT-PCR半定量方法测定1,25-（OH）₂D₃对DC的TLR7表达的影响。结果 1,25-（OH）₂D₃处理后,DC表达CD86和MHCⅡ的荧光强度均明显降低;对T细胞的刺激能力较对照组明显减弱,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,1,25-（OH）₂D₃可以明显下调TLR7的表达（P<0.05）。结论 1,25-（OH）₂D₃可能通过影响TLR7的表达来抑制DC细胞的成熟,从而使DC具有耐受性特征。     

1,25-(OH)2D3对胰腺癌细胞诱导分化的研究

目的研究1,25-(OH)2D3对胰腺癌细胞的诱导分化作用。方法经1,25-(OH)2D3处理人胰腺癌细胞株Bxpc-3,采用电镜观察形态学;流式细胞仪测定细胞周期动力学;免疫组化法检测p21、DPC-4/Smad4蛋白的表达。结果10-7mol/L1,25-(OH)2D3能使Bxpc-3细胞形态发生变化,细胞周期时相分布出现G0/G1期阻滞,细胞周期有关蛋白p21及DPC-4/Smad4蛋白表达上调。结论10-7mol/L1,25-(OH)2D3具有明显诱导胰腺癌细胞良性分化的作用。     

维生素D缺乏与桥本氏甲状腺炎的相关性研究

目的：观察桥本氏甲状腺炎（HT）患者血清中1,25（OH）2 D3的水平与甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）、甲状腺球蛋白抗体（TGAb）的关系,并探讨补充骨化三醇对甲减患者血清 FT3、FT4、TSH 、TPOAb 、TGAb 水平的影响。方法选取未经治疗的 HT 患者46例及同期健康体检者40例作为观察组和对照组,检测其血清 FT3、FT4、TSH 、TPOAb 、TGAb 水平。另外选择 HT 组血清1,25（OH）2 D3低于正常值的患者,分为两组,HTl 组仅口服左旋甲状腺素;HT2组除口服左旋甲状腺素外,加用骨化三醇口服,连续2个月,检测患者血清 TGAb 、TPOAb 、FT3、FT4、TSH 、1,25（OH）2 D3水平。结果⑴ HT 甲减组血清1,25（OH）2 D3明显低于正常组（P＜0．05）。⑵两组血清1,25（OH）2 D3治疗后均较治疗前升高（P＜0．05）;治疗后血清1,25（OH）2 D3水平 HT2组较 HT1组明显升高（P＜0．05）;两组 TGAb 及 TPOAb 治疗后均较治疗前降低,且 HT2组下降幅度优于 HT1组（P＜0．05）;治疗后 HT2组较 HT1组甲状腺功能明显改善（P＜0．05）。结论 HT 甲减患者存在1,25（OH）2 D3缺乏,提示1,25（OH）2 D3在甲状腺自身免疫过程中发挥一定作用;补充维生素 D 具有降低甲状腺自身抗体,抑制甲状腺自身免疫反应的作用。     

1，25-二羟基维生素D3减少Heymann肾炎鼠足细胞凋亡脱落

：观察凋亡蛋白p53、Bax、Bcl-2,粘附蛋白整合素α3β1、肌营养不良蛋白聚糖（DG）在Heymann肾炎鼠肾小球的表达,以及1,25-（OH）,D,对其表达的影响。方法：雌性SD大鼠随机分为对照组和Heymann肾炎模型组;后者经腹腔注射FX1A抗原诱导肾炎模型,再随机分Heymann肾炎组和1,25-（OH）2D3组。1,25-（OH）2D3组皮下埋置渗透性微量泵,给予1,25-（OH）,D,3ng·100g^-1·d^-1,连用4周。检测大鼠尿蛋白、尿足细胞。电镜检测每视野足细胞数、足突平均宽度。免疫组织化学sP法观察肾小球p53、Bax、Bcl-2,整合素仅381、肌营养不良蛋白聚糖（DG）蛋白的表达。原位末端标记（TUNEL）法检测足细胞凋亡。结果：与对照组相比,Heynmnn肾炎组大鼠尿蛋白、尿足细胞排泄明显升高;足细胞数目减少,足突宽度增加;肾小球p53、Bax表达增高,Bcl-2表达减少,足细胞凋亡明显增多;整合素α3β1、DG表达明显减少。与Heymann肾炎组相比,1,25-（OH）2D3组尿蛋白、尿足细胞排泄明显减少;肾小球p53、Bax表达减少,Bcl-2表达增加,足细胞凋亡减少;整合素α3β1、DG表达明显增加。结论：1,25-（OH）2D3可减少Heymann肾炎鼠肾小球p53、Bax的表达,增加Bcl-2的表达,减少足细胞凋亡。亦可增加整合素α3β1、DG在肾小球中的表达,减少足细胞脱落。从而维持肾小球足细胞数量。     

淫羊藿苷对破骨细胞的分化及骨吸收功能的影响

目的研究淫羊藿苷对破骨细胞的分化及骨吸收功能的影响,评价淫羊藿苷对骨质疏松的预防及治疗作用。方法采用1,25-(OH)2D3诱导兔骨髓单核细胞形成破骨细胞样细胞以及原代分离的乳兔成熟破骨细胞与骨片共培养的方法,考察淫羊藿苷对破骨细胞的分化及骨吸收功能的影响。结果浓度为100、50μmol.L-1的淫羊藿苷明显抑制1,25-(OH)2D3诱导兔骨髓单核细胞形成破骨细胞样细胞的数目,当其浓度为100、50、10μmol.L-1时,明显抑制破骨细胞的骨吸收功能,具体表现在吸收陷窝数目及表面积均明显减少。结论淫羊藿苷不仅可以明显抑制破骨细胞的分化,同时具有抑制破骨细胞的骨吸收功能的作用,提示淫羊藿苷具有改善骨吸收功能亢进的潜力。     

1,25-二羟基维生素D_3通过抑制尿激酶型纤溶酶原激活剂受体表达降低足细胞活动力

目的观察1,25-二羟基维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]对脂多糖诱导的足细胞活动力和尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)表达的影响。方法小鼠足细胞分化成熟后分为3组:正常对照组、脂多糖组(50 mg·L~(-1)脂多糖孵育足细胞24 h)、脂多糖+1,25(OH)2D3组[50 mg·L~(-1)脂多糖+1 nmol·L~(-1)的1,25(OH)_2D_3]共同孵育足细胞24 h。采用免疫荧光激光共聚焦、流式细胞术、实时荧光定量PCR、转板迁移测定法等技术,检测足细胞活动力改变以及足细胞uPAR蛋白和uPAR mRNA(Plaur mRNA)的表达。结果转板迁移测定法中每个视野细胞在正常对照组、脂多糖组、脂多糖+1,25(OH)2D3组分别为(8.4±3.8)、(31.3±7.9)、(19.2±6.8)个,脂多糖组膜下层迁移足细胞多于其他2组,脂多糖+1,25(OH)_2D_3组多于正常对照组(P<0.01)。脂多糖组uPAR蛋白荧光信号强于正常对照组,脂多糖+1,25(OH)_2D_3组弱于脂多糖组。脂多糖+1,25(OH)2D3组uPAR蛋白表达率和Plaur mRNA为(31.12±4.46)%和1.97±0.46,均低于脂多糖组[(54.66±8.69)%和3.06±0.93,P<0.05],高于正常对照组[(9.80±3.1 1)%和1.00±0.00,P<0.05]。结论 1,25(OH)_2D_3可能通过抑制uPAR的表达,降低足细胞活动力,起到保护足细胞的作用。     

维生素D受体变异对下游靶基因转录调控的研究进展

维生素D3是人体必需的一种维生素,属于类固醇激素,在体内的主要活性形式为1,25（OH）2VD3（简称VD3）,在体内具有重要的生物学功用,其所有作用的实现都是通过维生素D受体（VDR）来介导的。VDR与VD3结合后,可以调控下游一系列靶基因的转录,发挥其调节钙磷代谢、调控细胞生长分化等作用;另外VDR还在药物代谢、转运、以及药物疗效中起关键作用。VD3的抗肿瘤机制之一也是当今日益受到重视的化学性保护作用：VD3通过VDR诱导了药物代谢酶CYP450,对内外源性物质尤其是一些前致癌物进行代谢分解继而排出体外的能力加强从而起到抗肿瘤的作用;由此VDR基因变异所产生的蛋白数量或质量的改变也就预示了其在临床上将产生深远影响。     

1,25(OH)_2D_3对NOD小鼠1型糖尿病的免疫干预及其机制研究

目的观察1,25(OH)2D3对雌性非肥胖糖尿病(NOD)小鼠糖尿病发病率、胰岛炎的影响,以及外周免疫器官脾脏T淋巴细胞亚群的变化,血清细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)及一氧化氮(NO)的水平,从而更好地揭示1,25(OH)2D3的免疫调节机制。方法离乳(21 d龄)的雌性NOD小鼠(80只)随机分为两组:第1组给予1,25(OH)2D3(5μg/kg)隔日1次腹腔注射,共7周,作为实验组。第2组给予等量花生油作为对照组(40只),给药时间、方法同前。10周龄时腹腔注射环磷酰胺以加速糖尿病。加速1周后各取15只通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测IFN-γI、L-4水平,生化比色法检测NO水平,流式细胞仪分析脾组织T细胞亚群的变化。其余继续观察。小鼠在被确诊糖尿病或环磷酰胺加速后1个月处死,观察胰腺病理变化、糖尿病发病率及血钙水平。结果实验组发病率(12%)明显低于对照组(56%),P<0.01;实验组胰岛炎症分数较对照组明显降低P<0.01,炎症程度也明显减轻;实验组血清IL-4较对照组明显升高[(52±9)ng/Lvs(33±3)ng/L],P<0.01;IFN-γ、NO较对照组显著降低[(71±16)ng/Lvs(141±11)ng/L,(78±28)ng/Lvs(118±19)ng/L],P均<0.01;脾脏淋巴细胞经流式细胞仪测定,结果显示实验组T细胞CD4+、CD8+亚群较对照组显著升高,CD4+亚群为47±6与35±4(P<0.01),CD8+亚群为11.6±3.6与7.8±1.5(P<0.05),而CD4+/CD8+亚群分别为4.3±0.9与4.6±0.9(P>0.05),两组差异无统计学意义;实验组血钙较对照组稍高,但NOD小鼠可以很好耐受。结论1,25(OH)2D3可以预防环磷酰胺加速的NOD小鼠糖尿病的发生,并可减轻胰岛炎。其机制:①可能与增加Th2型细胞因子的全身表达,降低Th1型细胞因子的全身表达,从而调节Th1/Th2型细胞因子比例失衡有关。②可能与增加抑制性T细胞数目,促进CD4+T细胞由Th1向Th2亚群转化有关。该实验同时证实了NO在糖尿病的发生机制中起一定作用。     

Differential involvement of protein kinase C in human promyelocytic leukemia cell differentiation enhanced by artemisinin

Artemisinin, a sesquiterpene lactone endoperoxide that exists in several medicinal plants, is a well-known anti-malarial agent. In this report, we investigated the effect of artemisinin on cellular differentiation in the human promyelocytic leukemia HL-60 cell culture system. Artemisinin markedly increased the degree of HL-60 leukemia cell differentiation when simultaneously combined with low doses of 1 alpha,25-dihydoxyvitamin D(3) [1,25-(OH)(2)D(3)] or all-trans retinoic acid (all-trans RA). Artemisinin by itself had very weak effects on the differentiation of HL-60 cells. Cytofluorometric analysis and cell morphologic studies indicated that artemisinin potentiated 1,25-(OH)(2)D(3)-induced cell differentiation predominantly into monocytes and all-trans RA-induced cell differentiation into granulocytes, respectively. Extracellular-regulated kinase (ERK) inhibitors markedly inhibited HL-60 cell differentiation induced by artemisinin in combination with 1,25-(OH)(2)D(3) or all-trans RA, whereas phosphatidylinositol 3-kinase (PI3-K) inhibitors did not. Particularly, protein kinase C (PKC) inhibitors inhibited HL-60 cell differentiation induced by artemisinin in combination with 1,25-(OH)(2)D(3) but not with all-trans RA. Artemisinin enhanced PKC activity and protein level of PKC beta I isoform in only 1,25-(OH)(2)D(3)-treated HL-60 cells. Taken together, these results indicate that artemisinin strongly enhanced 1,25-(OH)(2)D(3)- and all-trans RA-induced cell differentiation in which PKC is differentially involved in arteminisin-mediated enhancement of leukemia cell differentiation.     

维生素D受体基因Fok Ⅰ多态对CYP3A4转录调控的影响

目的：研究人维生素D受体（human vitaminDreceptor,hVDR）基因翻译起始密码子Fok Ⅰ突变介导CYP3A4诱导表达的调控能力与野生型比较有无统计学差异。方法：从肝脏组织标本中提取总RNA,RT-PCR法扩增获得野生型hVDR基因cDNA序列,并用定点诱变的方法获得含Fok Ⅰ突变的hVDRcDNA序列,构建野生型和突变型的真核表达载体;同时构建含CYP3A4近端ER6元件的荧光素酶报告基因载体。将hVDR真核表达载体、CYP3A4报告基因载体和内对照载体共同瞬时转染COS-7细胞,转染24 h后用1、10、100 nmol/L的1,25（OH）2D3孵育48 h,最后裂解细胞分析荧光素酶活性。结果：Fok Ⅰ突变型和野生型hVDR真核表达载体以及CYP3A4荧光素酶报告载体均构建成功。瞬转后胞内荧光素酶活性检测显示,各浓度1,25（OH）2D3孵育后hVDR基因Fok Ⅰ突变型组与野生型组均可激活CYP3A4的转录;但各维生素D3（vitamin D3,VD3）浓度下,突变型组与野生型组的荧光素酶比活性值没有统计学差异。结论：与VD3结合后,hVDRFokI突变型与野生型均能激活CYP3A4的诱导表达,但与野生型比较,FokI突变不能导致VDR蛋白转录激活调控能力     

Synthesis of diacetoxy acetal derivatives of santonin and their enhancing effects on HL-60 leukemia cell differentiation

Several diacetoxy acetal analogues have been synthesized from santonin and assessed for their ability of inducing or enhancing the differentiation of human HL-60 leukemia cells. The compounds themselves had little effect on HL-60 cell differentiation. However, three analogues, 2a, 3a, and 5b, synergistically enhanced 1,25-dihydroxyvitamin D3 [1,25-(OH)2D3]-induced HL-60 cell differentiation when combined with 5 nM of dihydroxyvitamin D3 [1,25-(OH)2D3], a well-known differentiation inducer. Especially, the compound 5b profoundly enhanced the 1,25-(OH)2D3]-induced HL-60 cell differentiation.     

1,25-二羟维生素D_3对人胃腺癌细胞诱导分化的实验研究

目的观察1,25-二羟维生素D3对胃腺癌MGC-803细胞的诱导分化作用。方法1,25-二羟维生素D3(10-6、10-5、10-4mmol.L-1)作用于MGC-803细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力、平板克隆试验测定细胞集落形成率、流式细胞仪测定细胞周期、TRAP-银染法测定端粒酶活性。结果1,25-二羟维生素D3作用24、48、72和96h后胃腺癌细胞生长均明显受抑制,48h后细胞周期出现向G0/G1期移行的特征性动力学改变,端粒酶活性明显受到抑制。细胞集落形成率明显下降(P<0.05)。结论1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞有诱导分化作用。