血液基因组DNA提取方法的改良简

目的 探讨改良血液样品基因组DNA的提取方法,制备纯化的高分子量DNA。方法 将312份新鲜血液样品随机分为2组:A组(90份)和B组(222份)。A组采用常规基因组DNA提取方法。B组采用改良的基因组DNA提取方法,其基因组DNA提取方法改良之处:1)在血液样品中加入细胞裂解液CL后采用手工震荡,并离心2min 40s;2)震荡混匀后将样品分装成3管,然后将缓冲液GS加入第1管吹打溶解后吸取上清,并加入第2管,再吹打溶解后吸取上清加入第3管,继续吹打溶解;3)加入缓冲液GB后再58℃水浴过夜16h。结果 改良的血液样品DNA提取方法能够提高产率,提高纯度,获取更多高分子量的DNA,相对于常规基因组DNA提取方法有显著提高。结论 改良的血液基因组DNA提取方法操作简便,能有效地避免操作导致DNA链断裂,提高DNA的完整性及纯度。     

从血液和唾液中自动化提取人体DNA的探索与应用

目的 从样本获取方式、储存条件和DNA提取方法等方面探索快速、有效、低成本、无创伤、适合于大规模流行病学研究的基因组DNA来源样本.方法 对带有分离胶的血细胞、EDTA抗凝全血、分离血清后的凝固血细胞、新鲜唾液、-20℃保存1个月的唾液、2种唾液保护液作用的唾液样本和棉拭子获得的口腔黏膜上皮细胞样本进行DNA提取和检测...     

外周血DNA简易提取法

从人血液中或组织中提取ＤＮＡ是现代分子生物学研究获得大分子ＤＮＡ的普遍方法，我们对经典［１～４］的ＤＮＡ提取法进行了一些改进和简化，获得了较好的效果，现介绍如下。１方法与结果取ＡＣＤ抗凝血２ｍｌ，加入等量质量浓度为３％明胶生理盐水（含０．５％ＥＤＴＡ...     

提取陈旧血液标本中DNA的三种方法比较

目的寻找适合从陈旧全血中提取基因组DNA建立基因组库的方法。方法分别用改良的酚-氯仿法、SDS法、试剂盒法从陈旧全血中提取基因组DNA,采用聚合酶链反应（PCR）对提取的基因组DNA进行评估。结果提取的基因组DNA经统计学分析,3种提取基因组DNA的方法之间差异有统计学意义（P〈0.01）,以改良的酚-氯仿法提取的基因组DNA效率最高,试剂盒法次之,SDS法较差。结论建基因组库推荐改良的酚-氯仿法。     

血凝块DNA提取方法探讨

目的:探讨血凝块DNA提取的方法.方法:利用血凝块融化液直接进行DNA提取,并通过血凝块融化液涂片、血凝块冰冻切片以及琼脂糖电泳鉴定所提DNA的质和量.并与常规研磨法提取DNA进行比较.结果:利用血凝块融化液直接提取DNA浓度可高达(13.9±10.4)mg/L,A(260 nm)/A(280 nm)为1.85±0.11;高于研磨法的(9.70±4.1)mg/L和1.74±0.08(P＜0.05).血凝块融化液中以及血凝块冰冻切片中均含有较多的有核细胞.结论:利用血凝块的融化液直接进行DNA提取是一种简便、实用的DNA提取方法.     

从血凝块中提取染色体DNA的方法及其应用

目的：探讨从血凝块中提取染色体ＤＮＡ的方法，并对其应用价值进行评价。方法从血凝块和抗凝血中分别提取ＤＮＡ，采用ｔ检验对两种方法提取ＤＮＡ的量和纯度进行比较。结果从血凝块和新鲜抗凝血中提取的ＤＮＡ，无论在量上还是纯度上均类似，差异无显著性意义。结论从血凝块中提取染色体ＤＮＡ的方法在分子流行病学和慢性病的病因学研究中具有重要的实际意义和推广价值。     

一种从唾液中快速提取基因组DNA的方法

目的 探索一种快速、有效且对人体无创伤的基因组DNA提取方法.方法 比较碘化钾法和口腔拭子基因组DNA提取试剂盒法对新鲜和室温放置1周的唾液标本的基因组DNA提取和TP53、PRB-3基因PCR扩增效果.同时采集99名健康儿童和成人的唾液标本验证碘化钾法提取唾液基因组DNA的稳定性.结果 两种DNA提取方法都能从新鲜唾液标本中获得高质量的基因组DNA,其中碘化钾法的得率和D260/D280分别为(1.91±0.15) μg和1.99±0.05,试剂盒法分别为(2.64±0.34) μg和1.81±0.02.对于室温放置1周的唾液标本,两种提取方法获得的DNA虽然降解明显,但是对TP53和PRB-3基因都能扩增正确大小的目的片段.碘化钾法提取的99名健康儿童和成人的唾液基因组DNA虽然个体差异明显[得率为(1.89±0.46) μg],但是DNA质量稳定可靠(D260/D280为1.96±0.10).结论 碘化钾法提取唾液基因组DNA不仅廉价、高效,而且对人体无创伤,非常适合大范围分子流行病学研究.     

应用改良法从冷冻血凝块中提取基因组DNA

[目的]建立从冷冻血凝块中提取基因组DNA的改良方法.[方法]取冷冻血凝块在4℃条件下解冻,经高盐及高EDTA提取液处理,消化液消化,异丙醇抽提.[结果]用改良异丙醇法成功地从人血凝块中提取基因组DNA,其质量浓度为(22.5±7.2)mg/L,光吸收比值A260/A280为1.63~2.00.[结论]应用改良法提取的基因组DNA的总量较多,提取率高,PCR扩增效果较好,可用于血凝块基因组DNA的提取.     

细菌DNA提取方法比较

目的：比较细菌DNA4种提取方法的优缺点。方法：采用水煮法、传统法、Genmiction DNA Kit法、E．ZNA法分别制备18种细菌DNA，比较4种方法提取DNA纯度及量的差异。结果：4种方法制备的DNA均可成功应用于PCR扩增，水煮法与E．ZNA法提取DNA量都较大，但前者纯度低于后者；Genmiction DNA Kit法提取DNA纯度高，但量较低；传统法提取的DNA量及纯度均较低，但经济、可靠。结论：4种方法各具特点，应根据实验目的选用。     

多聚酶链反应产物DNA的简便、快捷纯化法

在分子生物学领域中，常常需要对DNA样品作有效的分离、纯化。由于许多实验过程中所涉及的DNk量甚微，因此要求所使用的方法既能达到纯化的目的，又不至于将十分微量、珍贵的DNA样品丢失。作者在进行多聚酶链反应（PCR）产物DNAN序过程中，需要纯净的DNA作为测序反应系统的模板。在这一系列的工作中作者发现，直接用PCR产物进行测序难以获得清晰的凝胶图谱。为此，作者采用一种细小的玻璃微珠（glass-milk）分离纯化PCR产物，以获得较纯净的DNA，然后将此DNA应用于测序反应，效果满意，现介绍如下。1材料与方法本文所进行的PC…     

实验动物皮肤病原真菌DNA快速少量提取法

PCR技术应用于实验动物皮肤病原真菌检测,方法简单、省时。但是,真菌的DNA提取较为困难。本文推荐一种既简单又经济快速的提取皮肤真菌DNA的方法,并能成功用于实验动物皮肤病原真菌质量检测研究。     

全血基因组DNA快速提取法

目的　建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法。方法　采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核,用氯仿:异戊醇(2 4 :1)直接提取基因组DNA。结果　该方法提取外周血基因组DNA的纯度高,提取效率每毫升外周血可得DNA 33±3.5 2 μg。结论　本法简便、快速、有效,适应于批量临床标本的处理。     

高质量植物基因组DNA的分离

为了从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量基因组DNA ,本文通过改良几种已经存在的分离方法 ,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。使用该方法从人参、西洋参及三七的新鲜或干燥根组织分离DNA时 ,A2 60 /A2 80 为 1.8左右 ,分子量大小约为 2 1.2kb ,由此所得的DNA可直接用于AFLP分析 ,即用EcoRⅠ /MseⅠ消化DNA后 ,用DNA的限制酶切片段经T4DNA连接酶连接 ,再用巢式PCR扩增 ,构建出可重复的、多态性丰富的人参、西洋参、三七基因组DNAAFLP指纹图谱。结果表明 ,该技术可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量和高分子量DNA ,此法亦有望用于其它植物DNA的分离。     

介绍一种简便、快速的回收DNA片段的方法

我们采用国产 DF-17型电洗脱槽回收了限制性内切酶酶切的 DNA 片段,证明该方法是一种简便、快速、可靠的回收核酸片段的方法.回收的 DNA 片段可进一步用于 DNA 克隆、探针标记和 DNA 分析.     

血液病患儿骨髓细胞DNA变异的临床意义

目的：探讨小儿常见血液病骨髓细胞变异的临床意义。方法：应用流式细胞仪测定54例血液病患儿骨髓单个核细胞的DNA含量，计算细胞周期各时相比例。结果：白血病组异倍体检出率明显高于非白血病组。12例非白血病中4例为异倍体，其中2例癌变。白血病组癌细胞S％明显低于对照组。3例接受治疗的急性淋巴细胞性白血病患儿达到完全缓解后，其S％明显高于治疗前，非白血病组的骨髓细胞周期与正常对照组无显著差异。结论：检测常见小儿血液病DNA可为临床诊断、判断其预后及其治疗提供客观的参考依据。     

全血基因组DNA快速提取法

目的　建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法。方法　采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核 ,用氯仿∶异戊醇 ( 2 4∶1 )直接提取基因组DNA。结果　该方法提取外周血基因组DNA的纯度高 ,A2 60nm/A2 80nm=1 .83± 0 .1 3,每毫升外周血可得DNA 33± 3.5 2 μg。结论　本法简便、快速、有效 ,适用于批量临床标本的处理。     

快速高效提取白色念珠菌DNA

目的建立两种简便的白色念珠菌ＤＮＡ提取方法，即纯ＤＮＡ提取法和快速ＤＮＡ提取法。方法以原生质体提取法为基础进行改良，两种方法均用Ｌｙｔｉｃａｓｅ破壁。结果与结论纯ＮＤＡ提取法提取ＤＮＡ耗时６～７ｈ，产量较高，每１０~（１０）个菌细胞可提取４μｇＤＮＡ，且纯度高，ＯＤ_（２６０）ＯＤ_（２８０）＞１．７，对核酸限制性内切酶敏感，适用于各种分子生物学方面的研究。快速ＤＮＡ提取法全过程仅需３～４ｈ，每１０~（１０）个菌细胞提取１μｇＤＮＡ，ＯＤ_（２６０）：ＯＤ_（２８０）＝１．４，不能进行核酸限制性内切酶酶切，但可用于作ＰＣＲ扩增。     

利福乐微量血测糖仪测定微血管全血糖与葡萄糖氧化酶法测定静脉血浆糖临床比较

本文用宝灵曼公司的利福乐(Refbolux)血糖仪测定空腹或服糖后微血管全血糖共200例次。结果:当血糖<10mmol/L时,两者差别小,相对差均值为7.O％(P>O.05)。血糖愈高差别愈大,10—15mmol/L时为18.1％>15mmol/L时为12％。结论:利福乐测糖仪测定微血管全血糖基本可靠,适用于糖尿病的筛选、普查及临床监测。     

大鼠肝星状细胞简便分离法及鉴定

目的：介绍一种简便、经济、稳定的大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）分离方法,为肝纤维化的研究提供细胞模型。方法：取符合标准的雄性SD大鼠,体重约400-450g,行肝脏门静脉插管,灌洗肝脏后,先后采用链酶蛋白酶、Ⅳ型胶原酶、DNA酶I灌注,消化肝脏制成细胞悬液,20％Nycodenz密度梯度离心分离得到原代HSC。Desmin及α—SMA抗体免疫组化鉴定纯度。结果：HSC得率2×10^7／每肝,细胞存活率及纯度达95％以上。结论：该法简便、经济,细胞得率和纯度稳定,是一种实用的大鼠HSC分离方法。