TthDNA聚合酶在丙型肝炎病毒RNA检测中的应用

用ＴｔｈＤＮＡ聚合酶行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５’端非编码序列，对２６２例肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ测定，结果ＨＣＶＲＮＡ阳性者５３例，阳性率２０．２％。凡阳性者用酶联免疫吸附法测其抗ＨＣＶＩｇＧ，其中３０例测到抗ＨＣＶ，阳性重叠率５６％（３０／５３）；ＨＣＶＲＮＡ阳性中的１５例同时用成髓细胞瘤病毒酶行传统逆转录。套式聚合酶链反应检测对照，１４例阳性，符合率达９３．３％（１４／１５）。ＴｔｈＤＮＡ聚合酶用于ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ５’端非编码序列片段具有敏感性高、特异性强、稳定性好的优点。     

逆转灵—套式聚合酶链反应检测丙型肝炎病毒RNA

采用逆转录－套式聚合酶链反应检测２８０例疑为ＨＣＶ感染的病人血清，并同时做抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ检测。结果５１例ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性，其中２６例抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性；在２５４例抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阴性血清中有２５例ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性。     

逆转录PCR检测丙型肝炎病毒RNA

逆转录ＰＣＲ检测丙型肝炎病毒ＲＮＡ王捷，杨太成，江悦华，王晓怀（广州军区总医院医学实验科，５１００１０）丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是单股正链ＲＮＡ病毒，流行病学研究表明，大约９０％的输血后肝炎均由ＨＣＶ引起，原发性肝癌的发生也与ＨＣＶ感染相关［１］。目前...     

丙型肝炎病毒RNA非结构区套式聚合酶链反应

目的探讨不同引物对ＨＣＶＲＮＡ检出率的影响，建立敏感的ＮＳ５区基因扩增技术。方法选择不同引物，采用非结构５（ＮＳ５）区套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）及联合式「ＨＣＶ非编码区（５ＮＣＲ）与ＮＳ５联合」技术检测１０例抗ＨＣＶ阳性献赠及３７例输血后丙型肝炎患 血清ＨＣＸＶＲＮＡ。结果 １０例抗ＨＣＶ阳性一献血员应用联合式ＰＣＲ，以ＮＳ５－３＋ＮＳ５－４、ＳＦ２＋ＮＳ５－４、Ｋ１＋ＮＳ５－４、ＮＳ５－１＋ＮＳ     

酶免疫法检测丙型肝炎病毒RNA的聚合酶链反应产物

建立一灵敏，快速的检测丙型肝炎病毒逆转录－套式聚合酶链反应产物的酶免疫法。方法，对第２次ＰＣＲ所用的引物进行双标记，使扩增产物同时被修饰有生物一不和荧光素成分，再经过固相的链亲合素进行捕获，辣根过氧化酶记的抗－ｆｌｕｏｒｅｓ－ｃｅｉｎ反应后显色测定     

丙型肝炎病毒RNA非结构区套式聚合酶链反应

目的探讨不同引物对ＨＣＶＲＮＡ检出率的影响，立敏感的ＮＳ５区基因扩增技术。方法选择不同引物，采用非结构５（ＮＳ５）区套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）及联合式［ＨＣ非编码区（５′ＮＣＲ）与ＮＳ５联合］ＰＣＲ技术检测１０例抗ＨＣＶ阳性献血员及３７例输血后丙型肝患者的血清ＨＣＶＲＮＡ。结果１０例抗ＨＣＶ阳性献血员应用联合式ＰＣＲ，以ＮＳ５－３＋ＮＳ５－４、ＳＦ２＋ＮＳ５－４、Ｋ１＋ＮＳ５－４、ＮＳ５－１＋ＮＳ５－４引物及套式ＮＳ５－１＋ＮＳ５－４引物扩增时，其ＲＮＡ检出率分别为５／１０、６／１０、７／１０、８／１０和９／１０；而３７例输血后丙型肝炎患者中３５例ＲＮＡ阳性，检出率为９５％，其中１８例１ｂ型和１９例２ａ型样品的检出率分别为１００％和８９％。结论ＨＣＶＮＳ５区的ＲＮＡ检出率与引物的选择有关     

酶免疫法检测丙型肝炎病毒RNA的聚合酶链反应产物

目的建立一灵敏、快速的检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ逆转录－套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物的酶免疫法。方法对第２次ＰＣＲ所用的引物进行双标记，使扩增产物同时被修饰有生物素和荧光素（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）成分，再经过固相的链亲合素进行捕获、辣根过氧化物酶标记的抗－ｆｌｕｏｒｅｓ－ｃｅｉｎ反应后显色测定。结果所建立的方法与常规聚丙烯酰胺凝胶电泳法相比灵敏、快速、准确，结果判断客观，重复性也较好；所测结果可反映ＰＣＲ产物量的多少，但不能准确表示模板量的大小。结论建立的方法可取代电泳法而成为ＨＣＶＲＮＡ常规ＰＣＲ反应产物的检测技术。     

丙型肝炎病毒RNA国产聚合酶链反应诊断试剂技术现状及临床考核评价

利用聚合酶链反应 (PCR)检测血液中丙型肝炎病毒 (HCV) RNA是确诊 HCV感染的有效手段之一 ,是酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测抗 - HCV的 1种补充方法。欧盟、美国都已将 HCV RNA的检测纳入献血员筛查项目。继 Roche公司的AMPLICOR HCV试剂批准上市以后 ,国内基于基因扩增技术检测血液中 HCV RNA的体外诊断试剂盒已批准临床使用 ,我们介绍国内研制开发的此类试剂盒的技术现状、临床考核结果 ,以供使用者、临床医生及诊断试剂的研发者参考。一、国产试剂盒的技术现状1 .方法和原理(1 )丙型肝炎病毒 RNA PCR-杂交酶联检测方…     

定量聚合酶链反应在丙型肝炎病毒感染检测中的应用及临床意义

近年许多实验表明，应用荧光定量聚合酶链反应（FQPCIR）术检测丙型肝炎病（HCV—RNA）具有快速以及特异，灵敏度高等特点。这种方法对于丙型肝炎患的早期诊断、治疗期间抗病毒药物的评价、受感人群的普查均有较高的实用价值。HCV—RNA定量检测在一定程度上可以反映肝脏炎症活动及肝损伤程度。本实验就对100份丙型肝炎分别进行HCV—RNA，抗-HCV，ALT检测，进一步探讨三之间的关系。     

丙型肝炎病毒RNA国产聚合酶链反应诊断试剂技术现状及临床考核评价

利用聚合酶链反应(PCR)检测血液中丙型肝炎病毒(HCV)RNA是确诊HCV感染的有效手段之一,是酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗-HCV的1种补充方法.欧盟、美国都已将HCV RNA的检测纳入献血员筛查项目.继Roche公司的AM-PLICOR HCV试剂批准上市以后,国内基于基因扩增技术检测血液中HCV RNA的体外诊断试剂盒已批准临床使用,我们介绍国内研制开发的此类试剂盒的技术现状、临床考核结果,以供使用者、临床医生及诊断试剂的研发者参考.     

核酸纯化柱提取核酸定量检测丙型肝炎病毒RNA的临床应用

目的观察核酸纯化柱提取法（简称柱提法）对血浆标本中丙型肝炎（简称丙肝）病毒核糖核酸（HCV-RNA）进行定量检测的临床应用效果。方法分别用柱提法和酚-氯仿提取法提取血浆标本中的HCV-RNA,用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对117例抗-HCV阳性的丙肝患者同时进行HCV-RNA定量检测,并对结果进行比较分析。结果117例抗-HCV阳性丙肝患者以酚-氯仿提取法提取核酸进行HCV-RNA定量检测的阳性率为66．7％（78／117）,以柱提法提取核酸进行HCV-RNA定量检测的阳性率为79．5％（93／117）。两法比较,差异有统计学意义（X^2=4．26,P〈O．05）。将两法所测浓度结果换算成对数值,经“检验两者差异无统计学意义（μ=1．61,P〉0．05）。结论采用核酸柱提法提取血浆标本中HCV-RNA进行定量检测简单、快速,分离效率高,容易掌握,适于临床常规应用。     

特异核酸捕获RT-PCR技术建立及在HCV RNA检测中的应用

目的 解决ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ方法的重复性较差问题,使其成为常规实验室检测方法。方法 采用亲合素生物素系统将ＨＣＶ特异的核酸片段包被在微孔板上,利用特异核酸捕获样本中的ＨＣＶＲＮＡ然后进行逆转录和ＰＣＲ扩增,从而建立了特异核酸捕获ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ方法,并与酶消化法和抽提法进行比较,评价其敏感性、特异性、重复怀及抗污染能力。结果 特异性核酸获ＲＴ－ＰＣＲ获得的电要带较为清晰,其特     

应用逆转录套式PCR检测血清丙型肝炎病毒RNA

应用逆转录套式PCR检测了经ELISA检测抗－HCV的86份血清，抗－HCV阳性血清66份，用PCR检测有37份是阳性，阳性符合率为56．1％，抗－HCV阴性血清20份，用PCR检测有8份是阳性，两种方法检测结果总符合率为57．0％。单项ALT升高、HB、HC和血液病患者HCV、RNA阳性率分别为37．5％，55．6％，62．5％和53．8％。用PCR检出HCV－RNA时间早于抗－HCV阳转时间，而且敏感性高于后者，是一种早期、灵敏及特异的HCV感染诊断方法。检测HCV－RNA有助于发现抗－HCV阴性的急、慢性丙型肝炎，根据HCV－RNA的连续检测，结合抗－HCV的消长状态，可用于丙型肝炎的预后判断和干扰素等药物疗效评价指标。     

应用PCR检测丙型肝炎病毒PNA的影响因素

丙型肝炎病毒ＲＮＡ的血中浓度非常低，大约为每毫升血液中１０＾３个拷贝数。ＲＮＡ酶的降解作用在血液标本中ＨＣＶ ＲＮＡ往往迅速被破坏。此外，ＨＣＶ基因序列高度变异的特性直接影响逆转录多聚酶锭反应ＨＣＶ ＲＮＡ的阳性检出率。     

血清HCV RNA检测在慢性丙型肝炎诊断中的意义

目的探讨血清HCVRNA检测在慢性丙型肝炎临床诊断中的意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量PCR（FQ-PCR）检测146例慢性丙型肝炎患者抗-HCV和HCVRNA。结果抗-HCV及HCV RNA检出率分别为73．9％（108／146）和52．1％（76／146）；抗-HCV（＋）组和抗-HCV（-）组HCVRNA的检出率分别为75．9％（82／108）和10．5％（4／38）。结论血清HCVRNA荧光定量是临床诊断丙型肝炎的直接证据，且可以弥补抗-HCV对丙型肝炎的漏诊等不足。     

固相法分离RAN用于丙型肝炎病毒聚合酶链反应检测

寻找一种简便，稳定，敏感性高，特异性强，且易于推广的ＲＮＡ分离纯化方法，用于丙型肝炎的逆转录０聚合酶链反应检测。应用双功能交联剂在乳胶颗粒上交联１段与ＨＣＶ核酸５‘端非结构区序列互补的探针，制备对ＨＣＶ特异的活化乳胶颗粒。将这种活化微粒混悬在６ｍｏｌ／Ｌ硫氰酸胍中，当待测血清与之混合后，病毒ＲＮＡ释放并与微粒上的探针杂交，极易被分离出来。     

改良二氧化硅吸附法检测丙型肝炎病毒核酸

建立了改良二氧化硅吸附法检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的方法。将待检血清５０μｌ、二氧化硅悬液２０μｌ、裂解液３００μｌ（含硫氰酸胍、ＥＤＴＡ、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、Ｔｒｉｓ．Ｃｌ）混匀置室温６０分钟，病毒颗粒裂解释放的核酸吸附在二氧化硅颗粒上，经离心和双蒸水洗脱，所得ＨＣＶ ＲＮＡ模板以５′ＮＣ区引物作套式聚合酶链反应扩增。使用该方法可检出１０μｌ血清中的ＨＣＶ ＲＮＡ。１１０份抗－ＨＣＶ     

聚合酶链反应检测献血者血清中的丙型肝炎病毒

聚合酶链反应检测献血者血清中的丙型肝炎病毒３６２０００福建省泉州市中心血站陈惠民泉州市皮肤病性病防治院吴丽惠目前主要用ＥＬＩＳＡ法检测献血者的抗－ＨＣＶ，作为其是否感染上丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的指标，但这不能完全反映献血者的ＨＣＶ感染情况。笔者选用Ｈ...     

血清HCV RNA检测在慢性丙型肝炎诊断中的意义

目的探讨血清HCVRNA检测在慢性丙型肝炎临床诊断中的意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(FQPCR)检测146例慢性丙型肝炎患者抗HCV和HCVRNA。结果抗HCV及HCVRNA检出率分别为73.9%(108/146)和52.1%(76/146);抗HCV(+)组和抗HCV(-)组HCVRNA的检出率分别为75.9%(82/108)和10.5%(4/38)。结论血清HCVRNA荧光定量是临床诊断丙型肝炎的直接证据,且可以弥补抗HCV对丙型肝炎的漏诊等不足。