高效液相色谱评价血清胆固醇试剂中酶的性能

为了评价国内市场上血清胆固醇试剂中胆固醇酯酶（ＣＥＨ）和胆固醇氧化酶（ＣＯＤ）的性能，设计了测定反应液（血清加试剂）中未被水解的胆固醇酯（ＵＨＣＥ）和未被氧化的游离胆固醇（ＵＯＦＣ）的方法。该法用正己烷提取未经皂化的和皂化的反应液中的游离胆固醇，衍生为苯氨基甲酸酯，高效液相色谱测定其含量。未经皂化的反应液中的游离胆固醇是ＵＯＦＣ，皂化后的反应液中的游离胆固醇是ＵＯＦＣ与ＵＨＣＥ之和，从中减去ＵＯＦＣ即为ＵＨＣＥ。用此法检查了１２种国产和进口试剂盒，多数试剂的ＣＯＤ和ＣＥＨ性能良好，少数较差，表现为反应液中ＵＨＣＥ较高，其中有２种试剂为１％～２％，２种为２％～４％，１种高达５．４％，ＣＥＨ是影响试剂性能的主要因素。该法可以有效地鉴定胆固醇试剂中两种酶的性能是否能达到要求。     

高效液相色谱法测定鸡蛋中胆固醇研究

近年来，随着人们生活水平的不断提高，人们对膳食组成中胆固醇的含量越来越引起重视。胆固醇可在胆道中沉积形成胆石，在血管中的沉积是动脉粥样硬化的重要原因之一。鉴于胆固醇对人体的影响，人们不断地采取各种各样的措施来减少食物中的胆固醇含量，这就要求分析工作者建立一种快速、简便而又重现性好的测定胆固醇的方法。鸡蛋是自然界中营养最为丰富的食品之一，     

超速离心-高效液相色谱测定血清高密度和低密度脂蛋白胆固醇

目的 建立一种新的预期用作参考方法的高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）准确测定方法。方法 血清与含2-琉基乙醇（ME）和脯氨酸的溴化钠溶液混合，使背景密度为1．063，超速离心分离高密度脂蛋白（HDL）；血清与含脯氨酸的溴化钠溶液混合，使背景密度为1.006，超速离心分离HDL和低密度脂蛋白（LDL）；用高效液相色谱测定两种脂蛋白组分胆固醇。结果 ME和脯氨酸可有效消除脂蛋白（a）对超速离心法分离HDL的影响；新方法测定HDLC和LDLC的总变异系数分别为0．96％～2、07％和0．65％～1．12％。结论 建立血清HDLC和LDLC准确测定方法，方法可靠、精密、简便，可望用作HDLC和LDLC测定参考方法。     

高效液相色谱法测定血清总胆固醇

目的　建立用高效液相色谱仪测定血清总胆固醇的具体方法。方法　应用高效液相色谱仪采用柱前衍生,紫外检测仪测定峰面积,用标准曲线定量。结果　该法线性范围为1 .30～13. 0mmol/L ,r =0 . 999(Y =2 5 5 4 . 96X - 6 19 .2 9) ,平均回收率为99 .83% ,批内CV值为2 . 4 % ,批间CV值为4 . 1%。结论　该法有效的色谱分离和消除了其它甾醇的干扰这两点优于其它参考方法。可用于血清胆固醇常规测定方法的评价及胆固醇标准参考物的定值,是一种理想的测定方法。     

高效液相色谱测定血清高密度脂蛋白胆固醇分数和摩尔酯化速率

目的 建立一种高效液相色谱(HPLC)测定血清高密度脂蛋白胆固醇分数和摩尔酯化速率(FERHDL和MERHDDL)的方法.方法 用5,5'二硫代-2-硝基苯甲酸(DTNB)抑制全血中的卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)活性,分离血清,制备HDL;HDL分别在含和不含2-巯基乙醇(ME)的条件下37℃温育1 h,HPLC法测定HDL游离胆固醇,计算FERHDL和MERHDL.结果 DTNB可以有效抑制全血中的LCAT活性,使游离胆固醇稳定在初始水平;ME可有效解除DTNB对LCAT的抑制作用;测定血清FERHDL和MERHDL的总变异系数分别为1.59%～3.74%和1.64%～2.88%;70名健康志愿者FERHDL.均值为18.7%/h(标准差7.2%/h),中位数16.1%/h;MERHDL均值42.7 μmol·L-1·h-1(标准差11.8 μmol·L-1·h-1),中位数41.6 μmol·L-1·h-1;FERHDL和MERHDL与多种心血管病危险因素显著相关.结论 本研究建立了血清FERHDL和MERHDL准确测定的方法,方法安全、简便、精密,将为进一步研究和应用FERHDL和MERHDL打下基础.     

胆固醇脱氢酶测定血清胆固醇方法的建立

目的　评价胆固醇脱氢酶测定法在临床应用的可行性。方法　胆固醇酯在胆固醇酯酶的作用下 ,水解为游离胆固醇 ,后者被胆固醇脱氢酶还原为胆烷 4 烯 3 酮 ,同时 β NAD+ 还原为 β NADH +H+ 。联胺能清除其反应产物胆烷 4 烯 3 酮 ,使反应完全。结果　回收率为 99.9%和 10 0 .1% ,在 1.1～ 2 0 .2 8mmol/L内为线性 ;批内CV为 0 .2 9%～ 0 .39% ,批间CV为 0 .4 2 %～ 0 .4 5 % ;乳酸脱氢酶无影响 ;与化学比色法 (X1)和胆固醇氧化酶法 (X2 )比较 ,回归方程分别为Y =0 .992X1- 0 .0 0 6 ,r =0 .997;Y =0 .989X2 - 0 .0 4 8,r =0 .999。结论　本法结果准确、可靠、易自动化。     

生物检材中利血平的高效液相色谱／质谱和高效液相色谱的检测

目的：建立生物检材中利血平的高效液相色谱／质谱（HPLC／MS）和高效液相色谱（HPLC）的检测。方法：采用C18（200mm×4．6mm,5mL）色谱柱,乙腈：水（40：60）用盐酸调节pH值至3．00±0．05为流动相,检测波长258nm。结果：HPLc／Ms分析利血平的选择离子m／z为608,195。心血中利血平HPLC检测的回归方程、线性检测范围、相关系数、回收率、最低检出浓度,分别为Y=56．576X＋0．3168（μg／mL）,（0．5～48）μg／mL,0．995,（96．50土3．O）％,0．5μg／mL;肝组织中利血平HPI。C检测的回归方程、线性检测范围、相关系数、回收率、最低检出浓度,分别为Y=38．567X＋0．054（μg／g）,（o．5～48）μg／g,0．984,（97．5±2．5）％,0．5μg／g。染毒大鼠心血、心、肝、脾、肺、肾和脑中利血平的含量依次为：（316．39±6．43）,（284．96±3．03）,（353．82±7．73）,（185．74±4．07）,（221．64±1．38）,（215．94±2．87）,（170．15±7．05）μg／g。结论：生物检材中HPLC／MS检测方法选择性好,定性准确,HPLC检测简便,快速,灵敏,定量结果准确,可用于利血平中毒的临床快速检验诊断和利血平中毒死亡案件的法医学鉴定。     

胆固醇脱氢酶测定血清胆固醇方法的建立

目的 评价胆固醇脱氢酶测定法在临床应用的可行性。方法 胆固醇酯在胆固醇酯酶的作用下，水解为游离胆固醇，后者被胆固醇脱氢酶还原为胆烷-4-烯-3-酮，同时B—NAD^ 还原为β-NADH H^ 。联胺能清除其反应产物胆烷-4-烯-3-酮，使反应完全。结果 回收率为99．9％和100．1％，在1．1～20．28mmol／L内为线性；批内CV为0．29％～0．39％，批间CV为0．42％～0．45％；乳酸脱氢酶无影响；与化学比色法(X1)和胆固醇氧化酶法(X2)比较，回归方程分别为Y=0．992X1—0．006，r=0．997；Y=0．989X2-0．048，r=0．999。结论 本法结果准确、可靠、易自动化。     

高密度脂蛋白胆固醇测定匀相法试剂评价

目的 评价国内市场上常见的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)匀相法试剂的分析质量.方法 用超速离心-HPLC法作为比对方法,7种HDL-C试剂和校准物与Hitachi 7170A组合构成的7种分析系统为待评方法.用比对方法和常规方法同时测定40份新鲜人血清,考察匀相法的精密度、偏差和总误差等.结果 7种匀相法试剂均具有良好的精密度(CV<4%).与超速离心-HPLC法相比,方法A、B和D测定的平均百分偏差(1.33%,4.98%和4.78%)、在医学决定水平上的偏差(<5%)和总误差(-4.3%～7.8%,-3.2%～12.9%和-0.8%～11.5%)达到美国胆固醇教育计划(National Cholesterol Education Program,NCEP)的要求,具有较好的分析性能.方法 C虽然有较好的特异性,但测定结果存在显著负偏差(平均偏差-19.74%),提示校准物的定值偏低.方法 E、F和G与UC-HPLC的相关系数R2<0.975,40份样本测定的平均绝对百分偏差>5%,存在一定的准确性和特异性问题.除方法G以外其他6种方法测定的总误差均达到美国临床实验室改进修正案(CLLA88)的要求.结论 目前有些HDL-C匀相法试剂的分析质量还存在较大差异,临床实验室应重视HDL-C试剂的选择和评价.     

高效液相色谱测定血清胆固醇酯n-3脂肪酸指数方法的建立

目的 建立一种HPLC测定血清胆固醇酯n-3脂肪酸指数的方法.方法 血清标本来自于70名北京医院健康志愿者和36例冠心病患者,用NaOH乙醇溶液水解血清三酰甘油,乙酸终止水解反应,正己烷提取胆固醇和胆固醇酯,HPLC分离脂质,UV(205 nm)检测.20:5-CE和22:6-CE用液相色谱串联质谱鉴定,各胆固醇酯峰面积修正因子用测定相应组分胆固醇含量的方法确定,归一化法定量,计算n-3脂肪酸胆固醇酯的百分比(即胆固醇酯n-3指数).结果 色谱分析在6 min内完成;影响胆固醇酯n-3指数测定的三酰甘油用4 mol/L NaOH乙醇溶液水解30 s可被去除;测定血清胆固醇酯n-3指数的批内和总CV为0.66%和0.90%,106名试验对象血清胆固醇酯n-3指数略呈正偏态分布(偏度值=1.25,峰度值=1.70),全体中位数为0.98%(0.37%～2.40%).n-3指数对数基本呈正态分布,(x)±s为0.003 7%±0.15%.性别组n-3指数分布与全体类似,女性和男性中位数(范围)分别为1.08%(0.60%～2.40%)和0.95%(0.37%～2.11%),不同性别间差异具有统计学意义(t=-3.021,P=0.003).结论 成功建立了HPLC测定血清胆固醇酯n-3指数的方法,有望在营养监测和心血管病危险分析中发挥作用.     

高效液相色谱法测定血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性的建立

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)活性的方法,观察LCAT活性与动脉粥样硬化性心血管病(CVD)传统危险因素的关系。方法选用7-脱氢胆固醇和1,2-二癸酰基甘油-3-磷酸(10∶0 PC)作为LCAT的反应底物,加入LCAT激活肽(LAP642),制备脂质体;在冰水浴中将500μL脂质体与10μL血清混合,37℃温育1 h;提取脂质,HPLC测定反应后7-脱氢胆固醇及其酯之比,计算LCAT活性。用所建方法测定120例健康志愿者血清的LCAT活性,分析其与CVD危险因素的关系。结果 7-脱氢胆固醇、10∶0 PC(物质的量的比为1∶8.5)与LAP642组成的脂质体制备简单、性质稳定。当温育时间0~8 h、血清量0~20μL时,LCAT活性与变量线性相关;平均批内不精密度(CV)和总CV分别小于1.76%、3.11%。方法比对结果显示,所建方法与ELISA测定的LCAT质量和内源底物法测定的LCAT活性显著正相关(P0.01)。120例样本LCAT活性与体质量指数(BMI)、三酰甘油(TG)等呈正相关(P0.05);与载脂蛋白AⅠ(apo AⅠ)(P0.05)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(P0.01)等呈负相关。结论建立了HPLC测定LCAT活性的外源底物法,所建方法简便、精密、可靠,结果不受反应底物影响,为脂代谢机制研究和CVD危险分析提供了新的方法学基础。     

高效液相色谱检测全血贮存对血清总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的影响

目的检查全血贮存对血清总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)的影响,并探讨其可能机制。方法建立高效液相色谱(HPLC)方法,测定不同个体全血样品经不同温育后血清TC、总游离胆固醇(TFC)、HDLC和高密度脂蛋白游离胆固醇(HDLFC),计算有关参数或指标并做统计分析。结果建立的HPLC方法平均批内变异系数0.22%～0.51%;全血温育造成血清TC和HDLC变化(平均0.6%～2.1%和2.0%～4.1%),有些个体变化明显(TC>±3%,HDLC>±5%)。结论建立血清TC、TFC、HDLC和HDLFC的精密测定方法;血清TC和HDLC在不同条件下的全血贮存中,受血清体积变化、血细胞-脂蛋白间胆固醇交换或转移等许多复杂因素的影响而发生变化;血脂测定标本应尽量减少不必要的贮存。     

红细胞胆固醇含量酶试剂快速测定法

胆固醇是人体内的主要脂类之一,也是构成生物细胞膜的主要成份.目前,国内外一些学者以检测红细胞或红细胞膜胆固醇含量来反映脂代谢的情况,但因采用的测定方法繁琐,难以在一般实验室中开展.     

高效液相色谱测定血清甘油三酯的研究——一种参考方法的建议

目的　建立特异、精密的血清总甘油和游离甘油测定方法 ,以便甘油三酯测定标准化。方法　以 1,2 ,4 丁三醇作内标 ,用柱前衍生高效液相色谱技术分析血清皂化前后的甘油含量 (两者分别代表血清游离甘油和总甘油浓度 )。结果　测定总甘油相对不精密度小于 2 % ,游离甘油小于 4% ;总甘油平均回收率 10 0 0 % ,游离甘油 99 7% ,与同位素稀释 /质谱法的相对偏差不大于± 2 %。结论方法特异、精密、简单 ,可望用作血清甘油三酯测定参考方法。     

两种血清苯丙氨酸高效液相色谱测定法的比较

目的对两种血清苯丙氨酸高效液相色谱测定法进行比较。方法对高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)和高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD),从线性范围,检测限,精密度等参数上进行比较,用两种方法分别测定了正常儿童和一组PKU患儿血清phe值,对结果进行统计分析。结果HPLC-UV法和HPLC-FLD法的线性范围分别为6~1512μmol/L和12~1220μmol/L,最低检测限分别为0.75μmol/L和3μmol/L,平均回收率分别为98.6%和102.5%,批内CV均<5%,批间CV分别为4.01%和7.17%,正常儿童血清phe值分别为63.2±11.6μmol/L和92.8±21.3μmol/L(-x±s);两种方法同时测定PKU血清phe结果之间的差异有显著性的意义(P=0.019),HPLC-FLD法值较高但与HPLC-UV法值呈正相关(r=0.783)。结论两种HPLC方法均能灵敏,特异地测定血清phe,满足对pku筛查的需要,HPLC-UV法在精密度及缩短分析检测时间上略优于HPLC-FLD法。     

用高效液相色谱法测定血清中尼群地平的浓度

目的：建立测定血清中尼群地平浓度的高灵敏度高效液相色谱方法，用于尼群地平临床药物代谢动力学的研究和临床治疗检测。方法：以尼群地平为内标，使用紫外检测器，血甭标本经有机溶剂提取后，上层有机相在空气流下吹干，重组后进行色谱分析。结果：在该方法条件下，浓度为１５０，５０和１５ｎｇ／ｍｌ的尼群地平的平均回收率分别为６８．２％，８８．２％和８７．３％（ｎ＝８），平均日内不精密度分别为３．７％，３．１％和５．     

尿液中纤维蛋白肽A的高效液相色谱检测

尿液中纤维蛋白肽Ａ的高效液相色谱检测宋善俊李学军魏文宁刘莉胡俊斌纤维蛋白肽Ａ（ＦＰＡ）是凝血激活过程中的多肽产物之一，其血浆和尿液中的水平变化可反映机体的凝血激活状态，可作为监测血栓形成和其它凝血机制障碍性疾病的分子标记。近来国外学者开展了对尿液中Ｆ...     

热稳定CHOD—CE—POD三合酶测定血清胆固醇试剂的研制与应用

用海藻糖作生化工具酶的常温干燥稳定剂,研制出热稳定良好的ＣＨＯＤ－ＣＥ－ＰＯＤ三合酶试剂,用于血清胆固醇的测定。此酶试剂热稳定性高,分别在７０℃、５５℃、３７℃三种温度下放４０ｄ,１５０ｄ、２１０ｄ后再测酶活,三种酶的活性均保持在９０％以上。酶试剂的线性范围为０￣１５．６７ｍｍｏｌ／Ｌ,批内ＣＶ〈１．５％,日间ＣＶ〈３．１％,回收率９７．８％￣１００．５％,与中生公司酶法试剂盒（Ｘ）相关显著,ｒ＝     

高效液相色谱法测定血清甘油三脂的研究

本文研究用高效液相色谱测定血清甘油三脂含量的方法。结果表明 ,用 1,2 ,4 丁三醇作内标 ,2 30nm为测定波长 ,在本文色谱条件下 ,测定血清甘油三脂的含量 ,其结果准确、灵敏、回收率高、操作较简便 ,是测定血清甘油三脂含量较理想的方法