TGF-β_1作用下JEG-3绒癌细胞Smad7蛋白表达的定量分析

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)作用下JEG-3绒癌细胞中Smad7蛋白的表达情况,探讨TGF-β/Smads信号通路在绒癌中的功能作用.方法:分别用0ng/ml、100ng/ml及200ng/ml的TGF-β1处理JEG-3绒癌细胞48h,采用蛋白印迹法定量检测JEG-3细胞Smad7的表达.结果:JEG-3绒癌细胞系可明确表达Smad7;不同浓度TGF-β1作用下JEG-3细胞Smad7蛋白的表达无明显差别(P＞0.05).结论:绒癌细胞系JEG-3中Smad7对于外源性TGF-β1的刺激无应答反应.     

TGF-β1对绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA表达的影响

目的:研究外源性TGF-β1作用不同时间对绒癌JEG-3细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA表达的影响.方法:研究对象为永生化绒癌JEG-3细胞系,以100ng/ml浓度的TGF-β1分别作用JEG-3细胞0h、12h、24h、48h和72h,采用RT-PCR法检测各组细胞MMP-9 mRNA的表达.结果:随着TGF-β1作用时间的延长,MMP-9 mRNA的表达逐渐增加(P<0.01).结论:绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA的表达对外源性TGF-β1的刺激呈现一定的时间效应,可能与绒癌的侵袭转移相关.     

转化生长因子β1刺激系膜细胞的Smad2表达及对结缔组织生长因子产生的影响

目的研究在转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)刺激下系膜细胞表达Smad2及对结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)产生的影响.方法培养第4代大鼠肾系膜细胞分为4组对照组、1ng/ml TGF-β1刺激组、5ng/ml TGF-β1刺激组、Staurosporine抑制组.在15min、30min、1 h、2 h时用RT-PCR测Smad2 mRNA的表达,用免疫组化测Smad2蛋白的表达;同样在24h时用RT-PCR测CTGF mRNA的表达,用免疫组化测CTGF蛋白的表达.结果体外培养的大鼠肾系膜细胞,在TGF-β1刺激下,Smad2 CTGFmRNA和蛋白的表达明显增加(P＜0.05),应用丝、苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine抑制Smad2磷酸化,可以明显减少TGF-β1刺激下系膜细胞表达CTGF(P＜0.05).结论在系膜细胞,TGF-β1主要依赖Smad信号通路调节CTGF的表达.     

TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化

目的:探讨白细胞介素(IL)-17对A549细胞上皮-间质转化的影响及TGF-β1/Smad2信号通路在其中的作用。方法:用不同浓度(0,10,25,50,100ng/ml)IL-17刺激A549细胞48h,RT-PCR检测E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、TGF-β1的表达。将体外培养的细胞分为3组:对照组、IL-17(100ng/ml)组、IL-17+SB431542组。48h后收集各组细胞,RT-PCR和Western Blot检测E-cad、α-SMA、TGF-β1、Smad2、和p-Smad2的表达。结果:不同浓度的IL-17作用后,E-cad在50ng/ml IL-17组时表达下调,与浓度呈负相关;α-SMA在100ng/ml IL-17组时表达上调;TGF-β1在25ng/ml IL-17组时表达上调,与浓度呈正相关。与对照组相比,IL-17组E-cad表达下调,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2表达均增加,Smad2蛋白表达水平无明显变化;与IL-17组比较,IL-17+SB431542组Smad2蛋白表达水平无明显变化,TGF-β1、p-Smad2、α-SMA蛋白表达均降低,E-cad的表达明显增加。结论:TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化。     

骨形成蛋白-7对MCP-1诱导人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1-Smad 3信号转导的作用

目的探讨骨形成蛋白-7（BMP-7）对单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）诱导体外培养人肾小管上皮细胞转分化的作用,并初步探讨该作用与转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3表达变化的关系。方法将体外培养HK-2细胞分为以下各组：阴性对照组;阳性对照组：TGF-β1（5ng／ml）处理;MCP-1（0．1,1,10及50ng／ml）组,BMP-7组（0．1,1,10,50ng／ml）;MCP-1（1ng／ml）加BMP-7（50ng／ml）组;MCP-1（1ng／ml）加MCP-1中和抗体（5μg／ml）组。应用半定量RT—PCR方法检测HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）mRNA表达,ELISA方法测定上清液中Ⅰ型胶原分泌,Western blot方法检测HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达。结果MCP-1（0．1,1ng／ml）组HK-2细胞α—SMAmRNA表达较阴性对照组明显增强（P〈0．01）。ELISA方法测定MCP-1（0．1,1ng／ml）组上清液中I型胶原分泌明显高于阴性对照组（P〈0．01）。MCP-1中和抗体与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后。HKC细胞α—SMAmRNA表达几乎被完伞抑制（P〈0．001）,而BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后HK-2细胞α—SMAmRNA表达仅部分被抑制（P〈0．01）;MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后Ⅰ型胶原分泌较MCP-1（1ng／ml）组明显降低（P〈0．05）。Western blot方法检测显示,MCP-1（1ng／ml）组HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达水平均较阴性对照组明显上调（P〈0．01）。MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后,HK-2细胞TGF-β1表达均分别比MCP-1（1ng／mL）单独作用明显下调,以MCP-1中和抗体的作用更强（P〈0．01,P〈0．05）;在MCP-1中和抗体或BMP-7作用24h后,Smad3表达也有类似下调（P〈0．01,P〈0．05）。结论MCP-1能诱导体外培养的HK-2细胞发生转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达上调有关。BMP-7能部分抑制MCP-7诱导HK-2细胞转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达部分下调有关;间时提示MCP-1诱导的转分化可能涉及非TGF—β依赖的细胞信号传导途径,需进一步研究。     

转化生长因子-β1对人绒癌JEG-3细胞增殖及基质金属蛋白酶抑制剂-1的作用研究

目的 观察转化生长因子(TGF)-β1不同作用时间对绒癌JEG-3细胞增殖及基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1的影响.方法 以100 μg/L TGF-β1处理JEG-3细胞,分别于不同时间收获细胞,采用MTT法于0、12、24、48 h检测细胞的增殖活力,采用Western Blotting及RT-PCR技术于0、12、24、48、72 h分析TIMP-1在蛋白和转录水平的表达情况.结果 随着100 μg/L TGF-β1作用时间的延长,各实验组的细胞增殖率逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05);TIMP-1蛋白和TIMP-1mRNA的表达随着100 μg/L TGF-β1作用时间的延长均呈明显的增加趋势(P＜0.05).结论 绒癌JEG-3细胞对外源性的TGF-β1有良好的反应性并呈时间依赖性,100 μg/L TGF-β1可促进JEG-3细胞增殖及TIMP-1蛋白及其mRNA的表达.     

来氟米特干预肾小球系膜细胞Smad2的表达及Ⅳ型胶原分泌的体外研究

目的观察来氟米特(leflunomide,LEF)在转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表达Smad2及Ⅳ型胶原(ColⅣ)过程中发挥的作用。方法建立体外培养大鼠肾小球系膜细胞模型,经鉴定后第7代用于实验。按照对大鼠肾小球系膜细胞模型处理方式不同,实验分4组,对照组(只加培养液),TGF-β1组(TGF-β1 5 ng/ml),LEF-1组(LEF 5 ng/ml+TGF-β1 5 ng/ml)和LEF-2组(LEF 50 ng/ml+TGF-β1 5 ng/ml)。分别于15min、30min、1h、2h和6h收集标本,用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测定细胞培养上清液的ColⅣ胶原蛋白表达量的变化。用间接免疫荧光法检测各组磷酸化Smad2(P-Smad2)蛋白表达的变化;采用荧光半定量RT-PCR法检测各组Smad2 mRNA表达的变化。结果在各时间点,TGF-β1刺激组ColⅣ分泌量高于对照组(P<0.05),LEF各组Ⅳ胶原分泌低于TGF-β1(P<0.05)。对照组P-Smad2蛋白有少量的表达;TGF-β1组表达升高,有统计学意义(P<0.05),与TGF-β1组相比,两LEF组P-Smad2表达下降,有统计学意义(P<0.05)。肾小球系膜细胞中,TGF-β1组Smad2 mRNA表达高于对照组。LEF-1组和LEF-2组Smad2 mRNA表达水平低于TGF-β1组(P<0.01)。但两LEF组间比较无统计学意义(P>0.05)。LEF干预作用有时间性,随时间延长,其LEF干预作用逐渐减弱。结论经TGF-β1刺激后,体外培养的大鼠肾小球系膜细胞磷酸化-Smad2表达及Ⅳ胶原分泌增加,来氟米特可降低Smad2表达和Ⅳ胶原分泌水平,减轻细胞外基质(ECM)的沉积,为来氟米特的肾脏保护作用提供实验依据。     

转化生长因子-β1诱导小鼠足细胞凋亡实验研究

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）是否能诱导小鼠足细胞株凋亡以及诱导凋亡的途径。方法（1）体外培养小鼠足细胞株;（2）应用不同浓度（10^-1～104ng／L）TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡;（3）10^3ng／LTGF-β1诱导不同时间（12、24、48h）后观察足细胞凋亡情况;（4）采用流式细胞仪检测AnnexinV、Caspase3;（5）实时定量PCR及Western印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、Smad2、Smad3、Smad7mRNA及蛋白质的表达情况。结果（1）小鼠足细胞在不同浓度（10^-1～10^4ng／L）TGF-β1刺激下,细胞凋亡率明显高于正常对照组（均P〈0.05）;（2）随着TGF-β1浓度增加、凋亡时间增加,足细胞凋亡率增高（P〈0．05）;p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7mRNA表达增加;TGF-β1 103ng／L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度,24h为最佳诱导凋亡时间;（3）与正常对照组比较,10^3ng／LTGF-β1诱导后Caspase3阳性细胞比率显著增加（P〈001）．p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7蛋白质表达亦显著增加（P〈0．01）。结论TGF-β1能诱导小鼠足细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。TGF-β1通过Smad通路、p38MAPK通路以及线粒体通路诱导小鼠足细胞凋亡。     

调控TGF-β1/Smad4通路对宫颈癌 SiHa细胞自噬基因p62的影响

目的 探究调控TGF-β1/Smad4通路对宫颈癌SiHa细胞自噬基因p62的影响。方法 对数生长期的宫颈癌SiHa细胞加入不同浓度的TGF-β1和SIS3干预24h后收取细胞,分别检测在mRNA及蛋白水平上自噬基因p62表达量的变化。结果 TGF-β1作用SiHa细胞24h后,随着浓度升高, p62 mRNA及蛋白的表达量逐渐降低(P<0.05)。SIS3作用SiHa细胞24h后,随着浓度升高,p62 mRNA及蛋白的表达量逐渐增高(P<0.05)。结论 外源性的TGF-β1/Smad4通路激活剂TGF-β1可使宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白p62 mRNA及蛋白的表达量降低,诱导宫颈癌SiHa细胞发生自噬;外源性的TGF-β1 /Smad4通路抑制剂SIS3可使宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白p62 mRNA及蛋白的表达量升高,抑制宫颈癌SiHa细胞发生自噬;且随TGF-β1和SIS3浓度的增加,p62表达量出现变化,具有一定的浓度依赖性。     

转化生长因子-β1对大鼠肌成纤维细胞增殖及胞内Smad蛋白磷酸化的影响

目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对大鼠肌成纤维细胞（MFB）增殖及胞内Smad蛋白磷酸化的影响。方法 TGF-β1（0．33～81pmol／L）在不同作用时间（5～120min）的条件下诱导MFB细胞活化,采用免疫吸附和Westernblot方法观察TGF-β1对MFB细胞内pSmad2C、pSmad2L、pSmad3L及Smad2／3蛋白表达的影响;采用M1Tr方法观察TGF-β1对MFB细胞增殖的影响。结果 在0．33—9pmol／L浓度范围内,TGF-β1均呈浓度依赖性刺激MFB细胞内Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化,以9pmol／L最明显,TGF-β1在27、81pmol／L浓度时,Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化仍处于高水平状态,而各组Smad2／3蛋白表达无明显变化。在TGF-β1为9pmol／L浓度条件下,30—60min孵育时间对MFB细胞增殖无明显影响,但可呈时间依赖性刺激MFB细胞内Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化,以30min最明显,TGF-β1在60、120min时间时,Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化仍处于高水平状态,而各组Smad2／3蛋白表达量无明显变化。结论 TGF-β1诱导MFB细胞内Smads磷酸化先于刺激细胞增殖。     

TGF-β1的非Smad4依赖性途径与胰腺癌细胞耐药性的相关性

目的: 研究TGF-β1的非Smad4依赖性途径与胰腺癌耐药性之间的相关性.方法: 采用MTT法观察Smad4纯合性缺失的胰腺癌细胞株BxPC3对不同化疗药物(5-Fu、健择、草酸铂、顺铂、开普拓和表柔比星)的敏感性差异;MTT法观察转染了pcDNA3-TGF-β1质粒的BxPC3细胞及5 ng/ml和10 ng/ml TGF-β1作用后的BxPC3细胞对顺铂敏感性的影响、蛋白免疫印迹检测TGF-β1作用后p170的改变情况.结果: BxPC3细胞对健择和表柔比星的敏感性最差,5-Fu、开普拓和草酸铂次之,顺铂作用最强.转染了TGF-β1全长cDNA质粒的BxPC3细胞对顺铂的耐受能力增强;给予TGF-β1细胞外刺激后,也能增加细胞对顺铂的耐受能力.蛋白免疫印迹表明TGF-β1能增加p170(mdr 1)的表达.结论: TGF-β1的非Smad4依赖性途径能通过上调p170的表达而增加肿瘤细胞的耐药性.     

TGF-β1对绒毛膜癌JEG-3细胞基质金属蛋白酶-9基质金属蛋白酶抑制剂-1蛋白表达的影响

目的：观察转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）对绒毛膜癌JEG-3细胞系基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinases,MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）蛋白表达的影响。方法：体外培养人绒毛膜癌JEG-3细胞,分别给予不同浓度及不同作用时间的TGF-β1进行诱导,Western Blotting法检测MMP-9、TIMP-1蛋白的表达变化。结果：与对照组相比,100、200μg/L TGF-β1作用后,检测各组细胞MMP-9及TIMP-1蛋白的相对表达量均增加（P〈0.01）;与0h比较,12、24、48、72h各组细胞MMP-9及TIMP-1蛋白的相对表达量均增加（P〈0.05）,且各组MMP-9/TIMP-1大于1。结论：绒癌的浸润转移与MMP-9及TIMP-1的表达变化密切相关。     

Lefty-2蛋白对转化生长因子β1诱导的大鼠肾成纤维细胞NRK-49F转分化的逆转作用及其机制

目的观察Lefty-2蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾成纤维细胞(NRK-49F)转分化的逆转作用,并探讨其机制。方法对照组:NRK-49F不做处理;刺激组:加入TGF-β1(10ng/ml);低剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(10ng/ml);中剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(20ng/ml);高剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(50ng/ml)。通过细胞免疫荧光法观察各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,通过Western blot法检测各组α-SMA、FN、Vimentin、p-Smad3蛋白、Smad7蛋白的表达水平。结果细胞免疫荧光结果显示,刺激组α-SMA、FN、Vimentin表达量均显著增加,治疗组较刺激组表达量均明显减少。Western blot法结果显示,治疗组α-SMA、FN、Vimentin的表达量较刺激组均下降(P<0.01),而且呈现剂量效应。刺激组p-Smad3蛋白表达上调,治疗组p-Smad3蛋白的表达量较刺激组明显下调(P<0.01);刺激组Smad7蛋白表达下调,治疗组Smad7蛋白的表达量较刺激组明显上调(P<0.01)。结论 Lefty-2蛋白可逆转TGF-β1诱导的NRK-49F的转分化,可降低α-SMA、FN、Vimentin的表达,可能是通过活化Smad7信号通路,抑制Smad3的磷酸化,从而抑制Smad3信号通路来实现的。     

TGF-β1对皮肤成纤维细胞的p-ERK表达的影响

目的探讨TGF-β1刺激后对皮肤成纤维细胞中磷酸化ERK表达的影响及相互关系。方法以原代培养人正常皮肤成纤维细胞为研究对象。细胞分2组:浓度组:10 ng/ml、5 ng/ml、1.0 ng/ml、0 ng/ml。时间组:给予10 ng/ml的TGF-β1刺激不同时间,分别在0、15、30、60、120 min的时间点提取蛋白。采用Western blotting法检测成纤维细胞中磷酸化ERK蛋白的表达变化。结果浓度组及时间组p-ERK蛋白表达与对照组相比均有差异(P0.05),随着TGF-β1剂量增加和作用时间延长,其磷酸化ERK蛋白表达水平逐渐增强,在TGF-β1 5 ng/ml时p-ERK水平达作用最强,在作用60 min时p-ERK达高峰。结论随着TGF-β1浓度增加及作用时间延长,大剂量TGF-β1时可上调体外培养成纤维细胞内的ERK信号蛋白活性。TGF-β1诱导的成纤维细胞的p-ERK水平增高可能是依赖ERK通路激活的,但ERK通路与TGF-β/Smad通路存在交互作用的机制,目前还无定论。     

转化生长因子-β对大鼠胰岛素基因表达的调节作用

目的：研究不同浓度转化生长因子-β（TGF-β）对大鼠胰岛细胞胰岛素基因表达的影响,探讨TGF-β在2型糖尿病治疗中的作用。方法：大鼠胰岛细胞与不同刺激浓度的TGF-β（0ng／mL、1ng／mL、2ng／mL、5ng／／mL、10ng／mL、20ng／mL）和葡萄糖浓度分别为2．2mmol／L、5．5mmol／L、11．1mmol／L的RPMI1640营养液共培养24h后,提取细胞总RNA.运用RT-PCR技术检测胰岛素基因表达的变化。结果：葡萄糖浓度为2．2mmol／L时,随TGF-β浓度逐渐升高,胰岛素基因表达量无明显变化;葡萄糖浓度为5．5mmol／L时,TGF-β浓度由0ng／mL升至2ng／mL时,胰岛素基因表达量无变化,而当TGF-β浓度进一步升高,胰岛素基因表达量呈剂量依赖性升高;葡萄糖浓度为11．1mmol／L时,随TGF-β浓度升高,胰岛素基因表达量呈浓度依赖性升高。结论：TGF-β以葡萄糖依赖和浓度依赖方式促进胰岛素基因的表达：     

鹿茸Ⅰ型胶原对MC3T3-E1细胞TGF-β1/Smad基因蛋白表达的影响

目的研究梅花鹿茸I型胶原(SDC-I)对MC3T3-E1细胞TGF-β1及Smad2/3基因蛋白的影响,探究SDC-I治疗骨质疏松的作用机制。方法分别用不同浓度的SDC-I处理小鼠成骨细胞MC3T3-E1。采用MTT法检测MC3T3-E1细胞增殖活性;应用RT-PCR及ELISA方法检测MC3T3-E1细胞TGF-β1/Smad通路相关因子TGF-β1、Smad2和Smad3的m RNA及蛋白表达水平。结果 SDC-I促进MC3T3-E1细胞的增殖;SDC-I不同浓度作用于MC3T3-E1细胞48 h以后,能显著上调TGF-β1、Smad2以及Smad3基因蛋白表达的水平。与空白对照组相比具有显著性差异,同时SDC-I的浓度越高,效果越明显。结论 SDC-I能刺激MC3T3-E1细胞Smad 2/3和TGF-β1的表达,可通过TGF-β1/Smad信号通路促进骨的形成,为骨质疏松症的防治提供理论依据。     

尿酸对人尿道成纤维细胞TGF-β1、Smad3的影响

目的 观察人尿道成纤维细胞在尿液、尿酸刺激下TGF-β1、Smad3的表达变化,探讨尿道瘢痕的形成机制.方法 体外培养人尿道成纤维细胞,以尿液、350 μmol/L浓度的尿酸刺激溶液刺激人尿道成纤维细胞,通过免疫荧光染色和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测各组细胞TGF-β1、Smad3因子表达变化,ELISA法比较各组细胞上清液Ⅰ型胶原蛋白差异.结果 免疫荧光检测提示TGF-β1与Smad3蛋白在人尿道成纤维细胞中均有表达,尿液及生理浓度的尿酸刺激后,TGF-β1与Smad3的mRNA表达上调,蛋白表达明显升高(P＜0.05);ELISA法检测显示,尿液和尿酸刺激人尿道成纤维细胞24、48 h后,细胞上清液中Ⅰ型胶原蛋白含量显著升高(P＜0.05).结论 尿酸刺激引起人尿道成纤维细胞TGF-β1、Smad3的表达升高;尿酸可能对尿道瘢痕的形成起促进作用.     

TGF-β1对胃癌细胞BGC-823侵袭性的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)对人胃癌细胞BGC-823侵袭性的影响.方法 将体外培养的人胃癌细胞BGC-823用外源性人重组TGF-β1干预后,用四甲基偶氮唑蓝比色法(MT法)检测TGF-β1对细胞增殖的影响;免疫细胞化学法、免疫荧光法、流式细胞术分别检测Snail、E-cadher-in及N-cadherin蛋白的表达;Transwell侵袭实验检测TGF-β1对细胞侵袭性的影响.结果 ①经过18 h的作用,低浓度(1、5和10ng/ml)的TGF-β1促进胃癌细胞的增殖,高浓度(20和50 ng/ml)的TGF-β1则抑制胃癌细胞的增殖,且呈剂量依赖性;选取不同时间段(18、42、66 h)检测细胞生长曲线,发现不呈时间依赖性;②在外源性TGF-β1作用下,胃癌细胞均不同程度地表达Snail、E-cadherin及N-cadherin,其中TGF-β1对Snail、N-cadherin表达有促进作用,而对E-cadher-in的表达有抑制作用,E-cadherin和N-cadherin的表达呈相反的趋势;③选取不同浓度的TGF-β1(1、10和20 ng/ml),发现10 ng/ml的TGF-β1明显促进胃癌细胞的侵袭性(P<0.05).结论 不同浓度的TGF-β1对胃癌细胞增殖的影响不同;TGF-β1有增加胃癌细胞侵袭性的作用,该作用可能是通过上皮间质转化而产生,钙黏蛋白表达的变化可能是重要的分子学机制之一.     

阿魏酸联合脂肪间充质干细胞调节TGF-β/Smad信号转导通路对肝星状细胞凋亡的影响研究

目的 探讨阿魏酸(FA)联用大鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)调节TGF-β/Smad信号转导通路对肝星状细胞(HSCs)凋亡的影响.方法 实验将HSCs分为4组:空白组、FA组、ADMSCs组、FA+ADMSCs组.流式细胞术检测各组HSCs的凋亡率;qRT-PCR检测HSCs中TGF-β1、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达水平;Western blot检测HSCs中TGF-β1和Smad7蛋白、Smad2/3磷酸化(p-Smad2/3)表达变化.结果 与其他3组比较,FA+ ADMSCs中HSCs凋亡率明显升高(P＜0.05);TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达明显下降,Smad7 mRNA表达明显升高(P＜0.05);TGF-β1蛋白、p-Smad2/3表达明显降低,而Smad7蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论 FA能增强ADMSCs对HSCs中TGF-β1表达的下调作用,进而导致下游p-Smad2/3活性下降及Smad7表达升高,从而参与促进细胞凋亡.     

oxLDL和大豆异黄酮对滋养细胞LOX-1表达的调控及意义

目的通过检测氧化修饰低密度脂蛋白(oxLDL)和大豆异黄酮(SI)对绒癌细胞株JEG-3细胞血凝素样氧化修饰低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达的调控,来探讨SI对滋养细胞的抗氧化作用,为其应用于子痫前期的防治提供一定的实验基础。方法以具有妊娠早期细胞滋养细胞特性的绒癌细胞株JEG-3细胞为研究对象,用细胞免疫化学、Westernblot、RT-PCR方法检测oxLDL和不同浓度的SI对JEG-3中LOX-1表达的调控。结果通过细胞免疫化学技术检测到LOX-1在JEG-3细胞浆及细胞膜中均有表达。oxLDL可诱导JEG-3细胞LOX-1mRNA和蛋白的表达;在oxLDL作用基础上,加入不同终浓度的SI共培养24h后,又可剂量依赖的逆转上述作用。结论推测SI在JEG-3细胞可能通过受体途径LOX-1对抗oxLDL的氧化损伤作用。