痂囊腔菌素A与竹红菌乙素介导的光动力反应对ECV304细胞杀伤效应的比较研究

目的探讨痂囊腔菌素A光动力学疗法(EA-PDT)对ECV304细胞的杀伤效应,并与竹红菌乙素光动力学疗法(HB-PDT)进行比较。方法以不同浓度的痂囊腔菌素A(elsinochromeA,EA)及竹红菌乙素(hypocrellinB,HB)分别孵育人脐静脉血管内皮ECV304细胞4h,然后分别用波长532nmKTP激光,以20mW/cm2功率密度照射1000s。照光后置于37℃、5%CO2的孵育箱中继续孵育24h后,用MTT法分别测定不同浓度下的细胞存活率,绘制杀伤曲线并拟合曲线方程,根据方程求出不同光敏剂对细胞的半数杀伤浓度(IC50)。结果EA-PDT和HB-PDT对ECV304细胞的IC50分别为50·97ng/ml和85·20ng/ml,二者比较差异有统计学意义(P<0·05),EA-PDT对ECV304细胞有较强的杀伤效应。结论EA-PDT对ECV304细胞株的杀伤效应强于HB-PDT,在血管性病变治疗方面可能有广阔的应用前景。     

血卟啉单甲醚在生理盐水溶液中光漂白的研究

目的观察在光动力学反应过程中血卟啉单甲醚(HMME)的光漂白现象,探讨其影响因素。方法通过本研究建立的光敏剂荧光分析系统,应用光学多通道分析仪对生理盐水溶液中HMME介导的光动力反应过程中光漂白的情况进行监测。HMME的浓度分别为1、10μg/ml。Nd∶YAG倍频532nm激光作为光动力的照射光源,同时利用其作为荧光激发光源。在光动力反应过程中采集溶液的荧光光谱,并进行分析处理。结果光敏剂HMME在一定的浓度范围内,初始浓度越高,光漂白的速率越快。在HMME的光漂白过程中于639nm处出现新的荧光峰。根据漂白造成的自体背景的变化,HMME的光漂白可以分为两个阶段:(1)在0～45min阶段,随着照光过程的持续,HMME在613nm与674nm处的荧光特征峰强度下降,同时在639nm处出现新的荧光峰,且其强度持续增强,自体背景强度起伏很小,稳定在HMME初始荧光强度的0.16倍左右;(2)而45～90min阶段,随着照光时间延长,在613、674和639nm处荧光峰的强度均下降,自体背景强度呈接近于线性持续增强,到照光结束时增至HMME初始荧光强度的约0.45倍。结论HMME的光漂白是一个较复杂的过程,初始浓度影响其漂白的速度,并伴有光漂白产物的生成及其再漂白的现象。     

血卟啉单甲醚在血管内皮细胞和角质形成细胞的亚细胞定位及光动力治疗作用点

目的探讨血卟啉单甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME）在血管内皮细胞系ECV304和角质形成细胞系HaCaT的亚细胞定位及光动力疗法的作用点。方法 HMME与ECV304和HaCaT分别孵育1和18 h,选择特异性细胞器荧光探针分别标记线粒体、核膜、细胞膜和过氧化物酶体,应用共聚焦显微镜观察孵育1和18 h时HMME与细胞器的结合率;HMME与ECV304和HaCaT分别孵育20 h,细胞器荧光探针选择同前,给予532 nm连续激光照射,分别在照光前后采集上述细胞器中HMME的荧光强度,比较照光前后HMME的漂白率。结果 HMME与细胞器的结合率结果示,ECV304孵育1 h时线粒体、核膜、细胞膜、过氧化物酶体HMME的结合率分别为1.18±0.18、0.72±0.21、0.95±0.24、0.68±0.15,孵育18 h时上述4种细胞器HMME的结合率分别为1.35±0.13、0.83±0.11、0.73±0.13、0.91±0.15;HaCaT1 h组孵育1 h时上述4种细胞器HMME的结合率分别为1.09±0.12、0.66±0.20、0.92±0.24、0.77±0.16,孵育18 h时上述4种细胞器HMME的结合率1.13±0.13、0.86±0.12、0.72±0.14、1.1±0.20。HMME在线粒体、核膜、细胞膜、过氧化物酶体的漂白率结果显示,ECV304分别为（18.22±3.53）%、（10.77±2.06）%、（7.44±1.06）%、（8.56±3.51）%,HaCaT分别为（11.90±1.46）%、（5.02±1.48）%、（3.82±0.54）%、（8.90±2.30）%。结论 ECV304中HMME主要定位于线粒体,HaCaT定位于的线粒体和过氧化物酶体;ECV304光动力疗法的主要作用点可能为线粒体,而HaCaT的主要作用点为线粒体和过氧化物酶体。     

血卟啉单甲醚光动力学疗法对体外培养的人角质形成细胞增生的影响

目的观察人角质形成细胞株Hacat对血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)的吸收特性及HMME-PDT对角质形成细胞增生的影响。方法对数生长期的Hacat细胞分别与浓度为0、10、20和40μg/ml的HMME孵育1h;同时将另一实验组的Hacat细胞与10μg/ml的HMME分别孵育0和30min、1和2h,分别以流式细胞仪检测孵育时间和孵育浓度对Hacat细胞吸收HMME的影响;在此基础上,将Hacat细胞分别与0、2·5、5、10、20和40μg/ml的HMME孵育2h,用532nm的倍频Nd∶YAG激光以20mW/cm2的功率密度分别照射0、2·5、5、10、20min,同时设立完全空白对照组和单纯光敏剂组,24h后以MTT法检测Hacat细胞的存活率。结果Hacat细胞对HMME吸收量随着孵育浓度的增高和孵育时间的增加而增多。单独照光或以高达40μg/ml的HMME孵育对Hacat无明显杀伤(P>0·05)。在激光功率密度相同的情况下,HMME-PDT对Hacat细胞的杀伤呈孵育浓度和激光能量密度相关性。结论Hacat细胞对HMME吸收呈孵育浓度和孵育时间相关性,孵育浓度及激光能量密度是影响HMME-PDT杀伤效应非常重要的影响因素,在实验范围内的HMME-PDT能对Hacat细胞产生明显的杀伤作用。     

光动力学疗法抑制体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖的实验研究

目的探讨光敏剂血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)介导的光动力学疗法(photodynamictherapy,PDT)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用及其影响因素。方法用MTT比色法观察HMME对体外培养人初发、复发翼状胬肉成纤维细胞(以下简称为初发、复发细胞)增殖的影响(毒性作用);用MTT法测定不同的光敏剂孵育浓度(0、2.5、5.0、10、20和40μg/ml)、孵育时间(0、5、10、20、30和60min)和激光能量密度(0.62和2.835J/cm2)条件下行PDT对初发、复发细胞增殖的影响;用免疫组化法检测PDT对初发、复发细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。结果初发、复发细胞分别在浓度≤20、40μg/ml的HMME中孵育60min对细胞无明显毒性。高剂量(2.835J/cm2)照光条件下,HMME孵育浓度分别≥2.5、10μg/ml的初发、复发细胞PDT实验组和对照组相比差异有显著意义(P<0.05),经40μg/ml的HMME孵育1h后用高剂量He-Ne激光照射初发、复发细胞增殖的抑制率分别为61.1%、57.6%;HMME孵育时间≥5min的PDT实验组和对照组相比差异有显著意义(P<0.01)。PDT对初发、复发细胞的PCNA表达具有明显的抑制作用。结论PDT对体外培养的初发、复发翼状胬肉成纤维细胞增殖有抑制作用。照光前光敏剂浓度越高、孵育时间越长,照光剂量越大,PDT效应越强。     

竹红菌乙素-PDT与血卟啉衍生物-PDT对人肺癌细胞杀伤效应的比较研究

目的　探讨竹红菌素 光动力疗法 (HB PDT)对肺癌细胞的杀伤效应 ,并与第一代光敏剂血卟啉衍生物 (HpD)进行比较。方法　以不同浓度的竹红菌乙素 (HB)及HpD孵育细胞 ,然后分别在铜蒸汽激光混合光饱和光剂量条件下进行照光处理 ,照光后置于 37℃、5 %CO2 的孵箱中继续孵育 2 4h ,用MTT法分别测定不同浓度下的细胞存活率 ,绘制杀伤曲线并拟合曲线方程 ,根据方程求出不同光敏剂对细胞的半数杀伤浓度 (IC50 )。结果　HB PDT对肺癌细胞株具有很强的杀伤效应 ,其IC50 为 33 82ng/ml,而HpD对肺癌细胞株的IC50 为 1316 88ng/ml,二者比较差异有统计学意义 (P <0 0 1)。结论　HB PDT对肺癌细胞株的杀伤效应明显优于HpD PDT ,是一种对肿瘤细胞杀伤所需浓度范围小、杀伤强度高的新一代光敏剂。     

光敏剂亚细胞分布位点光漂白作用的实验研究

目的探讨光敏剂亚细胞分布位点光漂白作用的发生特点。方法将血卟啉单甲醚（hematoprophyrin monomethyl ether，HMME）与传代培养ECV304细胞共同孵育12h后，采用荧光探针标记技术和细胞器．细胞荧光强度比值法对细胞内HMME进行亚细胞定位和定量分析。应用荧光显微镜汞灯照射以激发光敏剂产生光动力效应，并加入ROS探针H2DCF-DA检测单线态氧的产生。分别在光照前后采集四种细胞器及DCF的荧光图像并进行荧光强度的定量分析。结果细胞总荧光光强在光照后较光照前降低26．4％；以每种细胞器光照前的平均荧光光强比值为基准，则光照后线粒体、溶酶体、内质网和高尔基体分别降低了31．1％、23．4％、5．8％和5．0％。线粒体区域在单纯光照和有HMME存在情况下后均检测到DCF荧光的增强。结论光动力效应可能导致亚细胞结构内产生不同数量的单线态氧，会引起不同程度的光漂白作用，线粒体区域HMME光漂白速率较快；线粒体区域产生数量较多的单线态氧，可能是光动力效应的主要作用靶点之一。     

应用荧光探针H2DCF-DA检测光照致细胞内活性氧产生的初步研究

目的应用荧光显微镜及新型荧光探针H2DCF-DA检测在光源照射过程中人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)内活性氧的产生情况。方法将ECV304细胞接种于35mm培养皿中,24h后加入H2DCF-DA,使其终浓度为10μmol/L,孵育30min。利用荧光显微镜的激发光源作为照射光源,在采集荧光图像的同时完成光源照射,光源输出波长范围为460～490nm,功率密度约为100mW/cm2。连续采集DCF的荧光图,观察细胞内DCF荧光的变化情况,采用计算机图像处理和分析技术,求得细胞内不同照射时间点DCF平均荧光强度,进而得到平均荧光强度-时间曲线。另外,使用线粒体特异标记探针MitoFluorRed589与H2DCF-DA共同孵育细胞,分别采集同一细胞的DCF的荧光图和MitoFluorRed589的荧光图,并利用像素-荧光强度分析方法来确定DCF荧光在细胞内的分布位置。结果在光源照射的开始阶段,ECV304细胞内的DCF荧光强度迅速增加,在第10s时便上升至第2s时的2.2倍,但是随着照射时间逐渐延长,荧光强度增幅逐渐变小,到第60s时上升至第2s时的4.7倍。观察时间进一步延长,DCF的荧光强度的变化似乎进入平台期,继而开始出现下降。考察DCF荧光在ECV304细胞内的分布位置主要通过比较细胞内不同区域的I1/I2值,通过图像分析与计算得到线粒体区、细胞核区以及细胞质非线粒体区内I1/I2值分     

血啉甲醚的光漂白特性

目的 研究新型光敏剂血啉甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)在肿瘤诊断应用中的光漂白特性。方法 采用组织光学模型对HMME原液在暗室避光条件下进行稀释,样品溶液中HMME的浓度分别为1、2、3、4和5μg/ml。盛装在计数盘上的样品溶液在Kr^ 激光照射下,利用检测装置实时记录反映样品中光敏剂浓度的荧光强度。结果 激发光功率相同时,HMME的光漂白时间随着光敏剂浓度的增大而增加。光敏剂浓度相同时,其光漂白时间随着激发光功率的增大而减小。无论光敏剂浓度和激发光功率多大,光敏剂的光漂白规律都基本一致。实验结果与理论分析相符合。结论 HMME的光漂白特性能满足临床诊断肿瘤的要求,是一种性能优良的新型光敏剂。     

五种竹红菌素衍生物对A549细胞的光动力效应研究

目的比较五种新型竹红菌素衍生物分别为竹红菌素乙素（hypocrellin,HB）的二位ω-氨基磺酸衍生物THB、3HB和4HB,及十七位ω-氨基磺酸衍生物3SB和4SB对体外培养的人肺腺癌上皮细胞（A549）的光动力（photodynamic therapy,PDT）效应,筛选光动力活性和安全性较好的竹红菌素衍生物。方法 （1）杀伤效应。将0.94 nmol/ml的5种新型竹红菌素衍生物和HB分别与A549细胞孵育4 h后,分别以波长630和532 nm激光照射,功率密度20 mW/cm2,照射时间1 000 s,能量密度20 J/cm2,照光后继续避光孵育24 h后采用MTT法测定细胞存活率。（2）安全系数。分别以波长532和630 nm激光照射,以血卟啉（hematoporph-yrin derivative,HpD）为对照光敏剂,研究17-4-amino-1-butane-sulfonic acid-hypocrellin B（4SB）对A549细胞的光动力效应及和暗毒性,并比较安全系数（暗毒性IC50/光毒性IC50）。结果 （1）杀伤效应。五种竹红菌素衍生物中,4SB在630和532 nm激光照射下对A549的光动力杀伤作用强于其它衍生物,接近HB。（2）安全系数。波长532 nm激光照射,4SB的光毒性分别为103.86和84.16 ng/ml是HpD 960.14 ng/ml的10.53和11.4倍,但前两者之间差异无显著意义（P〉0.05）;波长630 nm激光照射下,4SB光毒性的IC50为50.7 ng/ml,HpDIC50为1 069.88 ng/ml,暗毒性HpD、4SB分别为7.84、21.93μg/ml,安全系数4SB（432.5）〉HpD（7.3）。HpD在532和630 nm两波长下的光毒性IC50差异无显著意义（P〉0.05）,而4SB在532和630 nm两波长下的光毒性差异有显著意义（P〈0.05）。结论 5种衍生物可能成为有价值的光敏剂,值得进一步深入研究。     

Glutamine supplementation in vitro and in vivo,in exercise and in immunodepression

In situations of stress, such as clinical trauma, starvation or prolonged, strenuous exercise, the concentration of glutamine in the blood is decreased, often substantially. In endurance athletes this decrease occurs concomitantly with relatively transient immunodepression. Glutamine is used as a fuel by some cells of the immune system. Provision of glutamine or a glutamine precursor, such as branched chain amino acids, has been seen to have a beneficial effect on gut function, on morbidity and mortality, and on some aspects of immune cell function in clinical studies. It has also been seen to decrease the self-reported incidence of illness in endurance athletes. So far, there is no firm evidence as to precisely which aspect of the immune system is affected by glutamine feeding during the transient immunodepression that occurs after prolonged, strenuous exercise. However, there is increasing evidence that neutrophils may be implicated. Other aspects of glutamine and glutamine supplementation are also addressed.     

Temporal changes in the oxidation state in in vitro blood

The rates at which the paramagnetic compounds deoxyhemoglobin (Hb) and methemoglobin (MHb) form in vivo within an area of hemorrhage are unknown. The present experiment establishes the baseline concentrations and rates of change in paramagnetic hemoglobin concentrations, as well as the pH in normal heparinized and clotted human blood maintained in vitro at 37 degrees C under anaerobic conditions over 30 hours. There was a moderate increase in Hb concentration in normal heparinized blood (average increase was 15.5%, rate = 0.50%/hour) and a slight increase in MHb concentration in the heparinized blood and clots (average increase was 1.4%, rate = 0.044%/hour). A second experiment was done to verify the activity of the RBC systems responsible for maintaining the hemoglobin molecule in the reduced state. Conversion of MHb to Hb in these samples proceeded at a rate of 5.6%/hour. In a third experiment, blood from 11 normal subjects maintained at 4 degrees C 25 degrees C was analyzed for MHb concentration over the course of 28 days. The level of MHb formation remained in the range of normal for at least 11 days in all subjects. The authors conclude that at basal conditions created in vitro, the blood levels of both Hb and MHb remain at relatively low levels. Therefore, if the accumulation of Hb and/or MHb occurs in acute in vivo hematomas it must be driven by intrinsic tissue factors.     

Carcinoma in situ in cryptorchid testes in post-pubertal patients]

The pathohistologic analysis of testis sections of 37 postpuberty patients with different types of cryptorchism is performed. The tissue samples were taken during orchiopehy, fixed in Bouin's solution and treated by the standard histologic techniques. The morphologic criteria are presented for identification of the presence of the so called carcinoma in situ cells found in two cases. Besides, in 13 patients rare, mainly single, atypical germinative cells were found in a smaller number of the seminiferous tubules. It has been concluded that the presence of carcinoma in situ cells in undescended testes of some patients and considering the simple way of sampling, lack of complications and high reliability of the diagnostic procedure, it is absolutely justified to take routine biopsy of testes during orchiopexy in each postpuberty and perhaps prepuberty patient.     

我国医用辐射防护研究概况

医学放射学技术的迅速发展及介入放射学在临床广泛应用，使更多的人受到电离辐射的照射，同时也促进了医疗照射防护工作的发展。文中重点综述了我国医用辐射防护工作者近年来在Ｘ射线ＣＴ的医疗照射防护、对介入放射学工作者的剂量监测以及应用医疗照射防护体系，降低医疗照射剂量等方面所作出的成绩和研究进展     

新时期军医学院人才培养的思考

在新的历史条件下 ,军医学院迎接未来高技术局部战争的挑战 ,适应部队武器装备的不断更新以及医学科技、社会发展对人才素质提出的新要求 ,必须在更为广阔的时空背景下找准人才培养的着眼点 ,科学确立人才培养方向 ,提高人才培养质量。现就人才培养思考如下 :1　改变教育观念 ,     

成批煤气爆燃烧伤的救治体会

报道治疗因煤气泄漏爆炸烧伤病员7例，经应用MEBT技术积极救治，其中6例于伤后17天痊愈出院，另一例特重伤员也于伤后30天康复出院。作者认为：应严格按照MEBT／MEBO要求进行规范治疗，正确处理生命体征、休克、感染、脏器功能和创面的辨证关系。同时，不能忽视外科营养在过程中的重要作用，它是创面修复的物质保证。