小鼠生后发育期间胃肠道5-羟色胺及生长抑素免疫反应细胞的形态学观察

目的:观察小鼠生后发育期间胃肠道内5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)免疫反应(immunoreaetive,IR)细胞和生长抑素(somatostatin,SS)IR细胞的分布、形态及数量变化.方法:应用免疫组化SP法对小鼠出生后5～60 d的胃肠道相邻切片进行染色.结果:生后5 d,十二指肠5-HT-IR细胞明显多于小肠其他段和结肠,而腺胃中5-HT-IR细胞最少.随生后发育成熟,5-HT-IR细胞数量旱持续性增加.腺胃中SS-IR细胞数量显著高于肠道各段.5-HT-IR和SS-IR细胞形态多样,可见免疫组化阳性染色的细胞突起伸抵腔面或伸至其他细胞之间.结论:小鼠生后发育期胃肠道5-HT-IR细胞及SS-IR细胞的分布及数量变化规律有其种属特异性,免疫反应阳性细胞的形态学特点为再一次证实这两种内分泌细胞同时具备外分泌和旁分泌作用提供了形态学依据.5-HT-IR细胞及SS-IR细胞所释放的激素可能与调节小鼠胃肠道的发育及某些生理活动有关.     

小鼠胃肠道、胰腺PP-IR细胞的形态学观察

目的 观察发育中小鼠胃肠道和胰腺内胰多肽免疫反应细胞的发生、分布、形态和数量变化. 方法 采用免疫组化SP法研究小鼠胃肠道和胰腺内PP-IR细胞的形态学特征. 结果 胚胎第11天到生后第45天小鼠的胃体、胃窦和小肠各段未见PP-IR细胞.胰腺和结肠中的PP-IR细胞最早分别见于胚胎第17和18天,随生长发育其数量逐渐增多,分别于生后15 d和30 d达高峰.胰腺内的PP-IR细胞主要分布于胰岛的周边部.小鼠胰腺和结肠内的PP-IR细胞形态多样,可见免疫反应阳性细胞的突起伸至其他细胞之间. 结论 PP-IR细胞分泌的胰多肽可能参与调节胰腺和结肠的功能活动.除内分泌方式外,该细胞还可能以旁分泌方式影响周围细胞.     

发育中小鼠胰腺CCK—IR、Glu—IR和Ins—IR细胞的形态学研究

目的：观察发育中小鼠胰腺内的CCK—IR、Glu—IR和Ins—IR细胞的形态学变化。方法：用免疫组织化学S-P法观察胚胎11d至出生后45d小鼠胰腺内的CCK—IR、Glu—IR和Ins—IR细胞的发生、分布、形态和数量变化。结果：Glu—IR、CCK—IR和Ins—IR细胞均在胚胎12d开始出现。CCK—IR细胞和Glu—IR细胞主要位于胰腺的胰岛内，但在外分泌部也可见到。Ins—IR细胞则只分布于胰腺的胰岛内。结论：三种内分泌细胞形态多样，CCK—IR细胞的数量变化与小鼠胰腺的发育相关。     

小鼠肾发育中集合管细胞的超微结构变化及AQP-的表达

 目的 观察小鼠肾发育过程中集合管细胞的超微结构变化及水通道蛋白4（AQP-4）的表达,探讨AQP-4与小鼠肾集合管细胞发育的关系及作用。方法 应用透射电镜、免疫组织化学、免疫印迹技术,并结合体视学方法观察并检测胚龄14,16,18 d 胎鼠及生后1,3,7,14,21,42 d仔鼠肾发育过程中集合管细胞的超微结构变化及AQP-4的表达。结果 小鼠胚龄18 d可见发育早期的主细胞。生后7~21d,主细胞形态结构发育基本完善。A型闰细胞在胚胎18 d出现,B型闰细胞生后21 d出现。AQP-4于胚龄14 d表达在集合管细胞的基底膜和侧膜,随着胚龄的增加表达逐渐增强,于生后1 d达到高峰。结论 集合管细胞在胚胎时期出现,但其形态结构在生后才逐渐完善。AQP- 4对胚胎期小鼠肾脏水平衡的调节起了重要的作用,而在生后只起辅助性作用。     

海洛因依赖大鼠胰岛D细胞免疫组织化学研究

目的:探讨海洛因依赖对大鼠胰岛生长抑素(somatostatin,SS)免疫反应(IR)细胞(D细胞)的影响.方法:用免疫组织化学SABC单染法、形态计量法,观察海洛因依赖大鼠胰岛SS-IR细胞免疫组织化学反应及平均灰度值的变化.结果:与正常组和盐水对照组比较,海洛因依赖大鼠胰岛SS-IR细胞免疫染色增强,平均灰度值降低,差异有显著性.结论:胰岛SS-IR细胞参与了海洛因依赖期间机体的调节过程.     

发育期小鼠肾脏的细胞凋亡

目的研究小鼠肾脏在发育过程中细胞凋亡的变化规律。方法选择不同胚龄和出生后小鼠肾脏做常规光镜标本,进行原位末端标记法（TUNEL）染色后通过光镜、荧光显微镜进行观察。结果胚龄12d小鼠肾脏输尿管芽中可见细胞凋亡,皮质中的肾小体凋亡高峰出现在胚龄18d,而肾小管、髓放线以及髓质的凋亡高峰均出现在生后7d。结论凋亡现象在后肾开始形成时就存在,与输尿管芽的改建有关;生肾区的细胞凋亡主要与肾小体的完善有关;髓质中的细胞凋亡则与肾小管和集合管的改建、完善有关。     

不同种属动物胃窦粘膜中生长抑素免疫反应细胞的定量研究

目的　了解生长抑素免疫反应细胞 (SS -IR细胞 )在不同种属动物胃窦粘膜中的形态分布。方法　用免疫组织化学方法结合图像分析技术研究家兔、大鼠和小鼠胃窦粘膜中SS -IR细胞的数目和细胞的灰度。结果3种动物胃窦粘膜中SS -IR细胞主要分布于幽门腺的中、下 1/3处 ,在大鼠偶尔可见SS -IR细胞位于粘膜上皮中。SS -IR细胞多散在分布于幽门腺细胞之间 ,偶见几个SS -IR细胞聚在一起。在家兔胃窦粘膜中SS -IR细胞多为圆形 ,较少见到有长的胞质突起。在大鼠、小鼠胃窦粘膜中SS -IR细胞大小不等 ,形态多样。多见细胞发出细长的胞质突起 ,伸向邻近细胞 ;偶见有的细胞顶部可达腺腔。大鼠胃窦粘膜SS -IR细胞的数目比家兔、小鼠胃窦粘膜多 ,细胞平均灰度值小 (P <0 .0 1)。结论　胃窦粘膜中SS -IR细胞的形态及数量在不同种属动物间存在差异     

人胎小肠内胰多肽免疫反应细胞的分布及形态学观察

目的 探讨胰多肽免疫反应细胞(PP—IR细胞)在人胎小肠中的个体发生及分布。方法 用免疫组织化学PAP法观察24例11-27周人胎小肠内PP—IR细胞的形态及定位。结果 胎期小肠的PP—IR细胞主要见于十二指肠，偶见于空肠上皮，回肠中未见。11-13周时PP～IR细胞数量很少，单个分散在十二指肠绒毛上皮间。14周后，PP—IR细胞呈增多趋势，除分散在小肠腺和绒毛上皮外，在十二指肠腺上皮中也可见该细胞。17～27周时，PP—IR细胞数量未见明显增减。胎期小肠的PP—IR细胞形态多样。结论 胰多肽在人胎小肠的内分泌细胞中已有表达。PP—IR细胞随着胎儿的发育而发生变化。     

海洛因依赖对大鼠颌下腺5-羟色胺免疫反应细胞的影响

目的:研究海洛因依赖期间大鼠颌下腺内5-羟色胺(5-HT)免疫反应 (immunoreactive,IR)细胞表达及功能的改变,探讨颌下腺5-HT-IR细胞在海洛因依赖期间的可能作用.方法:皮下注射海洛因建立海洛因依赖大鼠模型,用免疫组织化学SABC法并结合图像分析方法进行研究.结果:海洛因依赖期间,5-HT-IR细胞的免疫染色明显增强.图像分析结果显示,5-HT-IR细胞数量增加,平均灰度值明显降低,且第24～31天时变化最明显(P＜0.05).结论:海洛因依赖期间,颌下腺5-HT-IR细胞的表达与功能均发生了改变,提示颌下腺5-HT-IR细胞可能参与调节海洛因依赖对机体的损伤过程.     

Septation and shortening of outflow tract in embryonic mouse heart involve changes in cardiomyocyte phenotype and α-SMA positive cells in the endocardium

Background Studies on human, rat and chicken embryos have demonstrated that during the period of outflow tract septation, retraction of the distal myocardial margin of the outflow tract from the junction with aortic sac to the level of semilunar valves leads to the shortening of the myocardial tract. However, the mechanism is not clear. So we investigated the mechanism of outflow tract shortening and remodeling and the spatio-temporal distribution pattern of α-SMA positive cells in the outflow tract cushion during septation of the outflow tract in the embryonic mouse heart. Methods Serial sections of mouse embryos from embryonic day 9 ( ED 9) to embryonic day 16 ( ED 16) were stained with monoclonal antibodies against α-SCA, α-SMA, or desmin, while apoptosis was assessed using the terminal deoxyribonucleotidy transferase-mediated dUTP-digoxigenin nick-end labeling (TUNEL) assay. Results Between ED 11 and ED 12, the cardiomyocytes in the distal portion of the outflow tract were observed losing their myocardial phenotype without going into apoptosis, suggesting that transdifferentiation of cardiomyocytes into the cell components of the free walls of the intrapericardial ascending aorta and pulmonary trunk. The accumulation of α-SMA positive cells in the cardiac jelly began on ED 10 and participated in the ridge fusion and septation of the outflow tract. Fusion of the distal ridges resulted in the formation of the facing walls of the intrapericardial ascending aorta and pulmonary trunk. Fusion of the proximal ridges was accompanied by the accumulation of α-SMA positive cells into a characteristic central whorl, in which cell apoptosis could be observed. Subsequent myocardialization resulted in the formation of the partition between the subaortic and subpulmonary vestibules. Conclusions The shortening of the embryonic heart outflow tract in mice may result not from apoptosis, but from the trans-differentiation of cells with cardiomyocyte phenotype in the distal portion of the outflow tract into the cell components of the free walls of the intrapericardial ascending aorta and pulmonary trunk. The primary roles of α-SMA positive cells in the septation and remodeling of the outflow tract may assure proper fusion of the outflow ridges and form the facing walls of the intrapericardial ascending aorta and pulmonary trunk.     

海洛因依赖期间大鼠胃窦5-羟色胺免疫反应细胞形态和功能变化

目的:探讨胃窦5-羟色胺(5-HT)免疫反应细胞在海洛因依赖期间的作用.方法:应用免疫组织化学SABC法及图像分析方法研究海洛因依赖期间大鼠胃窦5-HT-IR细胞平均灰度值和细胞计数的变化.结果:与正常组及盐水组比较,海洛因依赖组大鼠胃窦5-HT-IR细胞数量显著增加(P＜0.01),细胞的平均灰度值较正常和盐水对照组显著降低,在第24天时变化最为明显(P＜0.01).结论:大鼠胃窦5-HT-IR细胞通过增加细胞数和增强5-HT的分泌,参与了机体在海洛因依赖期的调节过程.     

气管上皮嗜银细胞和5-羟色胺免疫反应细胞的定位

用银染色及免疫组织化学ＰＡＰ法，对狗、家兔、豚鼠、大鼠、小鼠气管粘膜上皮内嗜银细胞和５－羟色胺（５－ＨＴ）免疫反应（ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｏｎ）细胞的分布及形态进行观察。结果显示：５种动物气管上皮中均可见散在的嗜银细胞，家兔气管内嗜银细胞密度较大，而狗、大鼠的较少。５－ＨＴ－ＩＲ细胞仅见家兔、豚鼠、小鼠的气管粘膜上皮。气管中的内分泌细胞可分为开放型和闭合型，并可见旁突伸至邻近细胞。相邻切片观察未     

海兔5-羟色胺能神经纤维与侧节感觉神经元的关系 Ⅰ免疫光镜研究

应用ABC免疫组化技术,研究了海兔5-羟色胺免疫反应阳性(5-HT-IR)纤维在侧节感觉神经元簇(PSC)中的分布及其与侧节感觉神经元(PSN)的关系。可见PSN胞体和轴突的近侧段被含有大量膨体的5-HT-IR纤维所包绕。光镜下测量4个视野区的5-HT-IR,膨体平均短径为1.1±0.6μm,分布范围为0.2～3.8μm。膨体大小的频数分布呈正偏态,79%的膨体短径分布于0.2～1.4μm之间。5-HT-IR纤维至少存在4种类型。少数5-HT-IR纤维可有分支发出,发出点通常是在膨体上,从膨体发出2～4条细分支,每条分支上又可见数个子膨体存在。发出分支的膨体平均短径为1.70±0.5μm,分布范围在1.0～2.4μm,某些小的膨体似与PSN胞体表面形成接触,但现有结果尚不足以说明5-HT-IR纤维与PSN之间存在着突触样联系,因为PSN细胞胞体表面有胶质细胞形成的胶质鞘包绕,这一结构或许阻碍5-HT-IR纤维与PSN形成真正的突触联系。     

海兔5-羟色胺能神经纤维与侧节感觉神经元的关系 Ⅰ免疫光镜研究

应用 ABC 免疫组化技术,研究了海兔5-羟色胺免疫反应阳性(5-HT-IR)纤维在侧节感觉神经元簇(PSC)中的分布及其与侧节感觉神经元(PSN)的关系。可见 PSN 胞体和轴突的近侧段被含有大量膨体的5-HT-IR 纤维所包绕。光镜下测量4个视野区的5-HT-IR,膨体平均短径为1.1±0.6μm,分布范围为0.2～3.8μm。膨体大小的频数分布呈正偏态,79%的膨体短径分布于0.2～1.4μm 之间。5-HT-IR 纤维至少存在4种类型。少数5-HT-IR 纤维可有分支发出,发出点通常是在膨体上,从膨体发出2～4条细分支,每条分支上又可见数个子膨体存在。发出分支的膨体平均短径为1.70±0.5μm,分布范围在1.0～2.4μm,某些小的膨体似与 PSN 胞体表面形成接触,但现有结果尚不足以说明5-HT-IR 纤维与 PSN 之间存在着突触样联系,因为 PSN 细胞胞体表面有胶质细胞形成的胶质鞘包绕,这一结构或许阻碍5-HT-IR 纤维与 PSN 形成真正的突触联系。     

牦牛胃肠道中5—HT免疫活性细胞的形态和分布

本文主要应用免疫组织化学方法探索牦牛的5-羟色胺免疫活性细胞在胃肠道中的数量,分布和形态。实验结果显示牦牛胃肠道中5-羟色胺免疫活性细胞均可发现,而十二指肠各段和空肠出现率为最高,胃体部的出现率最低。细胞形态有锥体形、圆形、卵圆周形、蝌蚪形、长棱形等多种形态、和其他动物胃肠道内分泌细胞相似。     

Cx43基因敲除胎鼠心脏近端流出道隔心肌化过程中的关键基因

 目的 研究Cx43基因纯合敲除（Cx43-/-）小鼠胚胎心脏近端流出道组织中基因表达谱的改变,筛选可能导致Cx43-/-小鼠流出道梗阻的关键基因。方法 以胎龄（embryonic day,ED）14.5的Cx43-/-和野生型（Cx43+/+）鼠胚心脏近端流出道部分为研究对象,分别提取总RNA,逆转录成cDNA,并在体外转录为cRNA,同时进行生物素标记及片段化,再与Affymetrix-430 2.0基因芯片进行杂交。杂交信号经扫描后,应用相关生物信息软件分析基因表达情况。结果 与Cx43+/+组相比,Cx43-/-组中表达上调2倍以上的基因共有143个,表达下调2倍以上的基因有235个。其中表达差异的基因参与转录调控、细胞周期、细胞黏附、细胞活动和细胞骨架的信号通路等主要生理过程。进一步筛查表达差异1.5倍以上的基因发现,与圆锥动脉干畸形相关的TGFβ/BMP信号通路上的多个基因以及Ssr1、Ptk2、Bmp6等基因在Cx43-/-组有明显变化。对这些基因进行荧光定量PCR验证,结果与基因芯片一致（P<0.05）。结论 利用基因芯片技术初步筛选出与Cx43-/-鼠胚心脏近端流出道发育有关的多个基因,并经荧光定量PCR验证。其中TGFβ/BMP信号通路上的多个基因以及Ssr1、Ptk2、Bmp6等基因可能与Cx43-/-小鼠流出道梗阻的发生有关。     

Nesprin-1对小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的影响

目的探讨nesprin-1在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的作用。方法采用悬滴-悬浮-贴壁三步法,5-氮杂胞苷(5-aza)与丹参共同诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞,用Western blot与免疫荧光技术检测nesprin-1蛋白表达水平和在分化成熟过程中的改变。同时利用RNA干扰(RNAi)技术抑制nesprin-1蛋白的表达:Ⅰ组(RNA干扰目的序列AAAGCCAAGCACGCAACTA),Ⅱ组(RNA干扰目的序列GGGAACCAACAGTGAGATT),Ⅲ组(RNA干扰目的序列ACCAGGACATTGCGTACTA),对照组(使用无意义的ShRNA干扰序列),观察对胚胎干细胞分化的影响。结果 Nesprin-1各亚型在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的表达水平有所变化。RNAi后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和对照组心肌细胞分化率分别为(17.78±1.92)%、(36.67±3.34)%、(44.42±5.08)%和(77.78±1.92)%,各干扰组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),且各干扰组分化后心肌组织分化成熟的蛋白标志肌球蛋白(myosin)的表达量减少。结论 Nesprin-1在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中发挥重要作用,不同分子大小的nesprin-1亚型在此分化过程中可能有着不同的功能。