BC047440基因通过NF-κB调节HepG2细胞增殖的初步研究

目的观察Bc047440基因能否通过增强NF—κB的活化而促进HepG2细胞的增殖。方法设计针对BC047440基因的小干扰RNA（siRNA），构建pGenesil-1-BC047440-siRNA真核表达载体，用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenesil-1-Bc047440．siRNA、pGenesil—1—HK—siRNA转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株；实验分为3组：转染siRNA表达载体组、无关质粒组和未处理的亲本HepG2细胞组。采用平板克隆形成实验分析细胞的增殖活性，通过Westernblot检测细胞质p50含量，EMSA检测NF—κB的核转位，荧光素酶试验检测各组细胞的NF—κB活化情况。结果细胞增殖实验显示转染siRNA组细胞增殖能力明显降低，BC047440基因沉默后的HepG2的细胞质p50含量低于野生株HepG2，NF-κB核转位低于野生株HepG2，其荧光素酶和海肾荧光素酶活性比值只有野生株的1／4。结论BC047440基因能促进肝癌细胞的增殖，其调节机制可通过NF—κB信号途径实现，提示BC047440基因可能成为抑制人肝癌细胞生长的有效靶点。     

慢病毒载体介导的人肝癌HepG2细胞BC047440基因沉默

目的构建BC047440基因RNAi慢病毒干扰载体,并检测其对人肝癌细胞系HepG2细胞中BC047440基因的沉默效果。方法针对已经筛选确定的BC047440基因RNAi有效靶序列,合成BC047440基因特异性shRNA序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pFU-GW-iRNA载体连接产生pFU-GW-shBC047440慢病毒载体,PCR、DNA测序鉴定阳性克隆。用脂质体转染法将pFU-GW-shBC047440、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染293T细胞,产生具备感染能力的慢病毒。以293T细胞中绿色荧光蛋白的表达水平测定病毒滴度,并测定其对人肝癌细胞株HepG2细胞最适感染复数(MOI)。以最适MOI感染HepG2细胞,分BC047440-shRNA组、control-shRNA组和HepG2组;RT-PCR和Western blot检测各组细胞BC047440 mRNA及蛋白的表达差异。结果经PCR鉴定,成功构建BC047440基因RNAi慢病毒载体。测定慢病毒滴度为5×108TU/ml,其在HepG2细胞中最适MOI为20;RT-PCR和Wes...     

Mechanism underlying drug resistance of HepG2/ADM cells silently reversed by lentivirus-mediated BC047440 gene during chemotherapy

目的 利用siRNA方法沉默HepG2/ADM细胞系中BC047440基因,观察其受抑制后对细胞多药耐药性的影响及其分子机制.方法 建立BC047440蛋白在HepG2/ADM细胞系siRNA干扰模型,采用Western blot检测BC047440蛋白的表达;实验分3组:BC047440-shRNA组、control-shRNA组和HepG2/ADM组.CCK-8法分析阿霉素对细胞生长抑制率的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布;Western blot检测BC047440沉默后NF-κB蛋白表达的变化;Realtime PCR检测Survivin、CCNL1基因mRNA水平的变化.结果 成功建立BC047440蛋白siRNA干扰模型;NF-κB蛋白表达BC047440-shRNA组约为HepG2/ADM组67.69％,约为control-shRNA组67.39％;细胞毒性实验中24、48 h阿霉素对BC047440-shRNA组细胞毒性作用明显增强;流式细胞仪检测结果显示BC047440-shRNA组细胞凋亡明显增多,细胞周期分布多停留于G1/G0期,S期细胞明显减少.Real-time PCR检测BC047440-shRNA组Survivin基因mRNA表达约为control-shRNA组37％,约为HepG2/ADM组42％;检测BC047440-shRNA组CCNL1基因mRNA表达约为control-shRNA组3.5倍,约为HepG2/ADM组2.4倍.结论 沉默BC047440基因可通过NF-κB信号通路及其下游Survivin、CCNL1信号逆转HepG2/ADM细胞的多药耐药性,提示BC047440基因可能是形成肝癌多药耐药的重要分子之一.     

慢病毒介导BC047440基因沉默逆转HepG2/ADM细胞化疗耐药性机制的探讨

目的利用siRNA方法沉默HepG2/ADM细胞系中BC047440基因,观察其受抑制后对细胞多药耐药性的影响及其分子机制。方法建立BC047440蛋白在HepG2/ADM细胞系siRNA干扰模型,采用Western blot检测BC047440蛋白的表达;实验分3组:BC047440-shRNA组、control-shRNA组和HepG2/ADM组。CCK-8法分析阿霉素对细胞生长抑制率的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布;Western blot检测BC047440沉默后NF-κB蛋白表达的变化;Real-time PCR检测Survivin、CCNL1基因mRNA水平的变化。结果成功建立BC047440蛋白siRNA干扰模型;NF-κB蛋白表达BC047440-shRNA组约为HepG2/ADM组67.69%,约为control-shRNA组67.39%;细胞毒性实验中24、48 h阿霉素对BC047440-shRNA组细胞毒性作用明显增强;流式细胞仪检测结果显示BC047440-shRNA组细胞凋亡明显增多,细胞周期分布多停留于G1/G0期,S期细胞明显减少。Real-time PCR检测BC047440-shRNA组Survivin基因mRNA表达约为con-trol-shRNA组37%,约为HepG2/ADM组42%;检测BC047440-shRNA组CCNL1基因mRNA表达约为control-shRNA组3.5倍,约为HepG2/ADM组2.4倍。结论沉默BC047440基因可通过NF-κB信号通路及其下游Survivin、CCNL1信号逆转HepG2/ADM细胞的多药耐药性,提示BC047440基因可能是形成肝癌多药耐药的重要分子之一。     

RNAi技术抑制HepG2细胞中DcR3的表达

目的探讨特异性DcR3-siRNA对人肝细胞癌细胞系HepG2的DcR3基因表达的影响。方法设计并合成带FAM荧光标记的针对DcR3的siRNA4条和非特异性siRNA1条,用脂质体转染HepG2细胞,应用荧光显微镜和流式细胞仪判断转染效果;应用半定量RT-PCR和免疫细胞化学检测特异性DcR3-siRNA的对HepG2细胞中DcR3表达的抑制作用。结果各特异性DcR3-siRNA均能抑制DcR3 mRNA表达(P<0.05),其中以siRNA4的作用更明显,干扰作用达62.9%;将siRNA4转染HepG2细胞,免疫细胞化学结果显示,siRNA4能明显抑制HepG2细胞中DcR3蛋白的表达(P<0.01)。结论特异性DcR3-siRNA在体外实验能抑制目的基因的表达。     

RNA干扰MRP2表达逆转结肠癌细胞对长春新碱的耐药性

目的 构建MRP2基因的真核表达载体pGenSil-1-MRP2-siRNA,并观察其转染人结肠癌耐长春新碱细胞株HCT-8/V前后MRP2基因和ABCC2蛋白表达变化以及对化疗药物敏感性变化.方法 设计MRP2特异性siRNA的序列,克隆至pGenSil-1质粒中,测序鉴定后,用脂质体将重组质粒转染至HCT-8/V细胞中,用定量RT-PCR和Western blot检测MRP2的表达,MTT实验测定pGenSil-1-MRP2-siRNA和长春新碱对HCT-8/V细胞增殖抑制作用.结果 在结肠癌耐药细胞HCT-8/V中,RNAi明显抑制了MRP2 mRNA及蛋白的表达,在相同浓度化疗药物的作用下,RNA干扰组细胞凋亡比例显著高于对照组(P<0 01),表明细胞耐药性显著下降,对药物敏感性显著增高.结论 成功构建了MRP2的siRNA真核表达载体,并且对结肠癌耐药细胞MRP2的表达有明显抑制作用,取得良好的逆转耐药效果.     

重组BC047440蛋白的表达及其对人肝癌细胞系HepG2增殖的影响

目的 构建原核表达载体,制备重组BC047440蛋白并观察不同浓度的重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响.方法 提取肝癌组织总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增BC047440 cDNA,克隆入质粒pMD19-T,转化E.coli DH5α,酶切目的 基因片段,插入质粒pET-28a(+),转化E.coli BL21,IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物,提取重组BC047440蛋白,MTT法和流式细胞术检测不同浓度重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响,Western blot检测重组蛋白作用后HepG2细胞表达Ki67蛋白的变化.结果 克隆、鉴定BC047440基因,构建其原核表达载体,成功制备并纯化BC047440重组蛋白.1.0、10.0、20.0 μg/ml浓度重组BC047440蛋白分别作用HepG2细胞48 h后,细胞增殖率分别为124.0%、136.1%、126.6%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞术结果提示,对照组的细胞增殖常数(PI)为26.1, 重组蛋白处理组PI为48.6,二者差异具有统计学意义(P<0.05).重组BC047440蛋白作用HepG2细胞后,Ki67蛋白的相对表达量为(0.317±0.062),对照组的相对表达量为(0.177±0.037),二者差异具有统计学意义(P<0.05).结论 制备的重组BC047440蛋白具有直接促进HepG2细胞增殖和促进其表达Ki67蛋白的作用,可能是一种新的促进肝癌增殖蛋白.     

ErbB-3结合蛋白Ebp1基因过表达对人肝癌HepG2细胞生长增殖的影响

[目的]探讨ErbB-3结合蛋白Ebp1基因对肝癌细胞生长增殖的影响.[方法]利用脂质体法将pEGFPC1-Ebp1融合质粒转染到人肝癌细胞HepG2中,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白融合基因的表达并建立稳定表达Ebp1基因细胞系,应用Western blot检测转染后目的蛋白的表达,利用平板克隆集落形成观察细胞生长增殖能力的改变.[结果]在荧光显微镜下可见绿色荧光,Ebp1融合蛋白主要表达于胞质,转染pEGFPC1-Ebp1质粒后HepG2细胞中蛋白明显呈高表达;克隆集落形成实验结果表明,pEGFPC1空载体转染组和未转染细胞组相比较,Ebp1过表达细胞克隆集落形成显著增多.[结论]Ebp1过表达可增强人肝癌HepG2细胞增殖.     

特异性ILK-siRNA对膀胱癌EJ细胞侵袭和迁移的影响

目的设计合成有效的ILK-siRNA,并检测其对EJ细胞侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体pGenSil-1 siRNA1、pGensil-1 siRNA2和1个阴性对照载体pGenSil-1 siRNA3。稳定转染膀胱癌EJ细胞后,通过RT-PCR检测EJ细胞中ILK mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫荧光检测ILK蛋白水平的表达;观察EJ细胞形态变化;检测EJ细胞迁移、黏附和侵袭能力及基质金属蛋白酶的变化。结果重组质粒构建成功。干扰组细胞ILK mRNA及蛋白的表达分别较3个对照组(未转染组、转空质粒组和转阴性对照质粒组)比较,呈显著性下降(P<0.05);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染干扰质粒的2个实验组细胞的黏附能力相对于对照组分别增加87%和76%,黏附能力显著升高,迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05);与3个对照组比较,转染pGenSil-1 siRNA1与pGensil-1 siRNA2质粒到EJ细胞后,MMP-2及MMP-9的表达水平明显降低(P<0.05)。结论成功构建的干扰质粒能抑制ILK基因及蛋白水平的表达,显著抑制细胞的生长、侵袭及迁移能力。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

颅咽管瘤切除术后并发症的处理

目的　讨论颅咽管瘤切除术后并发症的处理原则。方法　分析 36例颅咽管瘤切除术后并发症的临床资料。结果　术后并发尿崩症者 14例、高热 11例、电解质紊乱 8例、消化道出血 3例、癫痫 5例 ,死亡2例。结论　颅咽管瘤术后并发症较多 ,加强早期监测和处理 ,可进一步提高该病的治愈率     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。     

碱量法测定壳多糖脱乙酰度的方法探讨

目的：评价壳多糖脱乙酰度测定的减量法的影响因素。方法：通过实验评价碱量法的精准度及样本含潮量等因素对测定结果的影响,并对汪氏推荐计算公式和本文作者提出的改良公式作出评价。结果：碱量法测定壳多糖脱乙酰度受样本性状、含潮率、反应体系中酸量的影响。改良公式更能反映样本实际脱乙酰度。结论：碱量法简便易行,评价指标在可接受范围,可用于壳多糖研制中的质量评价。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。