牛磺酸对细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡的影响

目的：观察牛磺酸对白细胞介素－1β（IL-β）、肿瘤坏死因子（TNF）和γ－干扰素（IFN－γ）诱导的胰岛细胞凋亡的影响。方法：应用体外单层培养的Wistar大鼠胰岛细胞,分别检测IL－1β、TNF和IFN－以及牛磺酸对胰岛细胞凋亡细胞百分率,培养液中NO含量及NOS活性以及DNA片段的影响。结果：IL－1β、TNF和IFN－γ联合可诱导胰岛细胞凋亡率及DNA片段明显增加,同时NO含量和NOS活性亦明显升高（P＜0．01）;牛磺酸能阻断上述细胞因子的作用（P＜0．01）,且有剂量依赖性。结论：NO可能是介导上述细胞因子引起胰岛细胞凋亡的重要途径之一。牛磺酸能够改善细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡,其机制可能与抑制NOS活性从而减少NO的生成有关。     

牛磺酸抗细胞因子诱导的原代培养胰岛细胞凋亡与抗凋亡蛋白A20的变化

目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF)和γ-干扰素(IFN-γ)引起的原代培养胰岛细胞凋亡与A20蛋白表达变化以及牛磺酸对其影响.方法用体外单层培养的方法,培养Wistar大鼠胰岛细胞,采用流式细胞仪、DNA电泳、放射免疫法及其RT-PCR等分别观察IL-1β、TNF和 IFN-γ对胰岛细胞凋亡细胞百分率、DNA片段、培养液中胰岛素分泌以及A20蛋白表达的影响,并进一步观察牛磺酸的作用.结果流式细胞仪分析显示IL-1β、TNF和 IFN-γ联合可诱导胰岛细胞凋亡率增加(从3.5%增加到30.2%),DNA明显片段化,同时胰岛素分泌明显降低(P<0.01), 而A20蛋白无表达;牛磺酸能阻断上述细胞因子的作用(P<0.01).结论牛磺酸能够改善细胞因子诱导的原代培养胰岛细胞凋亡,其机制可能与促进A20蛋白表达有关.     

一氧化氮和Ca2+介导的细胞因子损伤大鼠胰岛细胞的研究

目的观察-氧化氮和Ca^2＋在白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子（TNF）和1-干扰素（IFN-1）诱导的胰岛细胞凋亡中的作用。方法应用体外单层培养的3-5d的Wistar大鼠胰岛细胞，分别检测IL-1β、TNF和IFN-1对胰岛细胞凋亡细胞百分率、[Ca^2＋]i含量以及培养液中基础和高糖刺激下胰岛素分泌量、NO含量及NOS活性以及DNA片段的影响。结果IL-1β、TNF和IFN-1联合可诱导胰岛细胞凋亡率明显增加及DNA片段化，基础和高糖刺激下胰岛素分泌量降低，同时胰岛细胞[Ca^2＋]i、NO含量和NOS活性亦明显升高（P〈0．01），且有时间和剂量依赖性。结论NO和Ca^2＋，可能是介导上述细胞因子引起胰岛细胞凋亡的重要途径。     

Exendin-4对IL-1β诱导小鼠胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的探讨GLP-1受体激动剂Exendin-4对细胞因子IL-1β诱导的小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡的保护作用。方法体外培养小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞,用不同浓度(5,10,20,40ng/mL)IL-1β作用24h,噻唑兰还原(MTT)法观察不同浓度IL-1β作用后细胞存活率;Hoechst-PI荧光染色法观测细胞凋亡形态;后以Exendin-4(100nmol/L)预处理细胞24h,观察Exendin-4对IL-1β诱导的MIN6细胞凋亡的保护作用。结果 MTT显示IL-1β(5～40ng/mL)作用24h后,MIN6细胞的增殖率明显下降,并呈现一定的量效关系;Hoechst-PI染色荧光显微镜检测证实随着IL-1β浓度的增高,MIN6细胞的凋亡率亦增加。Exendin-4预先处理24h后可以抑制IL-1β诱导的β细胞凋亡。结论 GLP-1受体激动剂Exendin-4可以显著抑制IL-1β诱导MIN6细胞的凋亡,提示Exendin-4对IL-1β诱导的MIN6细胞的凋亡具有保护作用。     

过氧化氢诱导胰岛β细胞凋亡及TIMP-1的保护作用

目的:研究过氧化氢诱导的胰岛β细胞凋亡及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的保护作用和可能机制.方法:过氧化氢诱导大鼠胰岛瘤细胞RINm5F细胞凋亡,实验组予以TIMP-1干预.应用MTT法和Caspase-3活性检测来比较各组间细胞活力和Caspase-3活性的差异,检测超氧化物歧化酶(SOD)活性来反映各组之间抗氧化能力的差异.结果:应用0.1 mmol/L过氧化氢干预1 h,能明显诱导RINm5F细胞凋亡,过氧化氢刺激前TIMP-1(50μg/L)预处理1 h较单独过氧化氢刺激组细胞活力上升约35%,Caspase-3活性下降约21%,SOD活性增加约46%,两组比较差异有显著性意义(P＜0.05).结论:TIMP-1对过氧化氢诱导的RINm5F细胞的凋亡有保护作用,其机制可能是通过诱导SOD酶的活性增加来实现的.     

IL\|1β诱导椎间盘细胞凋亡通路再认识

目的 探讨IL-1β对体外培养的大鼠椎间盘髓核细胞凋亡作用的途径。 方法 原代大鼠腰椎间盘髓核细胞和含不同浓度IL-1β(0,10,20,50 ng/mL)的1%FBS培养基共培养24 h,显微镜下观察细胞形态、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况,检测Fas,Caspase-8,9,3及Bid mRNA的表达水平,检测Caspase-8,9,3的酶活性、线粒体膜电势。 结果 髓核细胞的凋亡率、Caspase-9和Caspase-3 mRNA的表达、Caspase-9和Caspase-3的酶活性、线粒体膜电势均随IL-1β浓度的升高而升高; 50 ng/mL的IL-1β可使Caspase-8及Bid mRNA的表达、Caspase-8的酶活性明显增强。 结论 IL-1β通过双途径诱导椎间盘细胞凋亡,以线粒体途径为主,较高浓度时可以激活膜途径诱发凋亡。     

西洛酰胺对IL-1β诱导损伤的离体胰岛细胞的防护作用及其机制

目的探讨磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)抑制剂对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导损伤的离体雄性Wistar大鼠胰岛细胞的防护作用及其机制。方法采用离体培养的雄性Wistar大鼠胰岛细胞,分别检测IL-1β(30u/mL)及IL-1β与特异性Ⅲ型PDE抑制剂西洛酰胺(cilostamide,CIL)对胰岛细胞亚硝酸盐合成、胰岛素(Ins)分泌、环磷酸腺苷(cAMP)水平及细胞活性(MTT)的影响。结果以IL-1β诱导,离体雄性Wistar大鼠胰岛细胞亚硝酸盐合成显著增加,cAMP水平、Ins分泌及MTT值显著降低(P<0.001),而CIL能阻断这些作用(P<0.01),且具有显著剂量依赖性(r2=0.44,P<0.01)。结论CIL能够保护IL-1β诱导的离体鼠胰岛细胞损伤。     

iNOS激活在过氧化氢诱导胰岛β细胞凋亡中的作用

目的 研究过氧化氢诱导的胰岛β细胞株(RINm5F细胞株)凋亡中iNOS的活性变化趋势.方法 过氧化氢诱导胰岛β细胞凋亡,采用MTT(细胞活性检测)、SRB(活细胞蛋白染色)鉴定细胞凋亡,对凋亡细胞iNOS的活性测定来反应iNOS的激活程度.结果 过氧化氢在0.1mmol/L, 1h能明显诱导胰岛β细胞的凋亡,其细胞活性和活细胞染色均较对照组明显下降,过氧化氢诱导后iNOS活性提高约42%.结论 iNOS的激活可能是过氧化氢诱导的胰岛β细胞凋亡的机制之一.     

咯利普兰对白细胞介素1β诱导损伤的离体胰岛细胞的防护作用及其机制

目的:观察磷酸二酯酶(PDE)抑制剂对白细胞介素1β(IL-1β)诱导损伤的离体雄性Wistar大鼠胰岛细胞的防护作用及其机制。方法:采用离体培养的雄性Wistar大鼠胰岛细胞,分别检测IL-1β(30U/ml)及IL-1β与不同剂量特异性Ⅳ型PDE抑制剂咯利普兰(ROL)对胰岛细胞亚硝酸盐合成、胰岛素(Ins)分泌、环磷酸腺苷(cAMP)水平及细胞活性(MTT)的影响。结果:以IL-1β诱导,离体雄性Wistar大鼠胰岛细胞亚硝酸盐合成显著增加,cAMP水平、Ins分泌及MTT值显著降低(P<0.01),而ROL能阻断这些作用(P<0.01),且具有显著剂量依赖性(r2=0.56,P<0.01)。结论:ROL能够保护IL-1β诱导的鼠离体胰岛细胞损伤。     

白细胞介素-1对大鼠离体胰岛B细胞分泌功能的影响

目的 :观察白细胞介素 1(IL 1)对大鼠胰岛B细胞分泌功能的影响并探讨其机制。方法 :采用胰岛细胞培养的方法 ,观察IL 1对胰岛素分泌和MTT还原的影响 ;通过分子杂交检测c fosmRNA并分析蛋白质合成的变化。结果 :IL 1作用后胰岛素分泌和MTT还原量明显减少 ,且有时间依赖性 ;IL 1诱导c fosmRNA ,从而使细胞蛋白质表达发生变化。结论 :IL 1可能通过改变胰岛细胞内基因表达 ,抑制细胞代谢 ,从而使胰岛素分泌减少     

吡格列酮对炎性因子所致胰岛细胞凋亡的保护作用

目的：探讨Ppar-γ激动剂吡格列酮（PGZ）对炎性因子所诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用，初步研究其作用机制。方法：Western—blotting检测NIT-1细胞的Ppar-γ受体蛋白表达；联合IL-1β及IFN-γ作用于体外培养的胰岛细胞株NIT-1，建立胰岛细胞炎症模型，观察（IL-1β＋IFN-γ）与PGZ预孵育NIT-1细胞的凋亡；MTT法、流式细胞术检测细胞生长抑制率及凋亡率，比色法检测凋亡细胞caspase-3比活性。结果：NIT-1细胞表达Ppat-γ蛋白；（IL—1β＋IFN-γ）组作用24h对NIT-1细胞生长抑制率、凋亡率、caspase-3比活性分别为49．8％、28．0％、3．5，对照组3项指标分别为0％、4．3％、1，两组比较均有十分显著差异（P〈0．01）；PGZ组3项指标分别为2．7％、7．1％、1.3，与对照组比较，均无明显差异（P〉0．05）；（PGZ＋IL-1β＋IFN-γ）组的3项指标分别为18．6％、14．8％、1．5，与（IL-1β＋IFN-γ）组比较均有差异（P〈0．05），与对照组比较分别为P〉0．05，P〈0．05，P〈0．05。结论：NIT-1细胞表达Ppar-γ受体蛋白；联合IL—1β及IFN-γ明显诱导NIT-1细胞凋亡，PGZ显著抑制IL-1β及IFN-γ诱导的NIT-1细胞凋亡，其机制与降低caspase-3活性有关。     

y-氨基丁酸对炎性因子致胰岛细胞凋亡的保护作用

【目的】探讨1-氨基丁酸（gamma-aminobutyricacid,GABA）对炎性因子所诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用,初步研究其作用机制。【方法】将胶原酶v：通过总胆管灌注到大鼠内,分离纯化大鼠胰岛细胞,并通过DTZ染色鉴定胰岛纯度。将新鲜分离的胰岛分为3组：正常对照组、通过白介素-1B（IL-1B）-y干扰素（IFN-7）建立胰岛细胞炎症模型（IL-1β＋IFN-1诱导组）、GABA干预组（GABA＋IL-1β＋IFN-1）。观察（IL-1β＋IFN-1）与GABA预孵育胰岛细胞的凋亡;二醋酸酯荧光素,碘化丙啶染色、流式细胞术及糖刺激实验检测胰岛细胞活性。凋亡率和功能,免疫荧光检测凋亡细胞Caspase-3蛋白表达。【结果】（IL-18＋IFN-7）组作用24h对胰岛细胞活性、凋亡率和糖刺激指数分别为20％、（32．7±5.3）％和（1．62±0．13）,对照组3项指标分别为90％、（5．5±2．8）％和（2．37±0．11）,两组比较差异显著（P〈0．01）;（GABA＋IL-1β＋IFN-y）组3项指标分别为70％、（18．0±6．3）％和（1．97±0．12）,与（IL-1β＋IFN-1）组比较,均有明显差异（P〈0．01）。（IL-1β＋IFN-1）组胰岛的Caspase-3蛋白表达明显增加,而（GABA＋IL-1β＋IFN-1）组胰岛的Caspase-3蛋白表达明显受到抑制。【结论】联合IL-1β及IFN-y明显诱导胰岛细胞凋亡,GABA显著抑制IL-1β及IFN-1诱导的胰岛细胞凋亡,其机制可能与降低Caspase-3蛋白的表达有关。     

胰淀素对胰岛细胞损伤作用的初步研究

目的观察胰淀素对体外培养胰岛细胞活力的影响,探讨胰淀素在２型糖尿病发病中的作用。方法应用体外单 层培养新生乳鼠胰岛细胞,采用噻唑蓝法测定在不同浓度胰淀素作用不同时间后细胞的活力变化。结果１０ μｍｏｌ／Ｌ以 上胰淀素能引起胰岛细胞活力降低（Ｐ＜０．０１）,１０ μｍｏｌ／Ｌ胰淀素时间梯度组细胞活力呈进行性下降,在 ２ ｈ时与对照组 相比差异非常显著。相差显微镜下可见部分细胞胞体缩小,胞质发生空泡变性,少数细胞核固缩、裂解,胞膜突起呈出胞 状。结论　胰淀素对胰岛细胞有直接损伤作用,这种损伤程度与胰淀素浓度及作用时间呈正相关。     

内毒素对大鼠胰岛细胞凋亡及其意义的研究

目的：探讨内毒素对大鼠胰岛细胞凋亡作用的意义。方法：采用单细胞凝胶电泳和DNA凝胶电泳技术,分析外源NO供体（硝普钠）和LPS对离体胰岛细胞的凋亡及胰岛素合成与分泌的影响。结果：体外试验显示,外源NO明显引起胰岛细胞DNA断裂,出现慧星尾和凋亡梯状带,并呈剂量依赖关系,高浓度NO（60mmol/L,SNP)可引起胰岛细胞DNA随机降解,外源NO强裂抑制葡萄糖刺激β－细胞的胰岛素合成与分泌,LPS离体条件下,对胰岛细胞凋亡作用不明显。结论：LIPS通过整体作用诱导炎症细胞和胰岛细胞iNOS表达,产生NO介导胰岛细胞凋亡,从而抑制胰岛素合成与分泌。     

Experimental Study on Apoptosis Induced by Ursolic Acid Isolated from Asparagusin HL-60 Cells

Experimental Study on Apoptosis Induced by Ursolic Acid Isolated from Asparagusin HL-60 Cells@黄镜@孙燕@陆士新@苏涛@焦顺昌     

原代人胎胰岛细胞凋亡相关因子的检测及其意义

目的探讨TGFβ、P21ras、cfos与原代人胎胰岛细胞凋亡的关系。方法半定量RTPCR和免疫组化染色(SABC法)检测不同生长时期原代人胎胰岛细胞TGFβ、P21ras、cfos的表达,设原代人成纤维细胞为对照。结果P21ras在原代人胎胰岛细胞各期均弱表达,其中潜伏期、指数生长期显著弱于原代人成纤维细胞(P<0.01);cfos仅在原代人成纤维细胞、原代人胎胰岛细胞停滞期可检出;TGFβ1在原代人胎胰岛细胞停滞期表达最强,潜伏期其次,指数生长期最弱,但均强于原代人成纤维细胞。结论原代人胎胰岛细胞的增殖和凋亡可能是非P21ras依赖的;cfos蛋白的表达对原代人胎胰岛细胞凋亡启动可能是必须的;TGFβ1在原代人胎胰岛细胞增殖中可能发挥负性调节作用。     

铁超负荷诱导胰岛细胞凋亡机制的研究

目的观察铁超负荷对Wistar大鼠胰岛细胞凋亡影响。方法雄性Wistar大鼠65只随机分为四组:A组(铁干预组)、B组(次氮三乙酸二钠对照组)、C组(铁干预加去铁组)和D组(空白对照组)。于实验开始、第10周时行腹腔注射葡萄糖耐量试验;10周后采血测血清铁、血清铁蛋白;针对NF-κB、PPAR-γ、Caspase-3作免疫组织化学染色及核酸原位杂交。结果 A组胰岛中NF-κB、Caspase-3蛋白、NF-κB和Caspase-3 mRNA较其它三组明显增加(P<0.05);A组胰岛中PPAR-γ蛋白和mRNA较B组和D组明显减低(P<0.05);A组胰岛细胞凋亡高于其他三组(P<0.05)。结论多种因素共同参与了铁超负荷引起胰岛细胞凋亡过程;去铁措施对胰岛细胞具有保护作用。