靶向apollon反义核酸抑制结肠癌细胞增殖并提高化疗药物的敏感性

研究凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族成员apollon反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)作用于结肠癌Lovo细胞,观察其对细胞的增殖抑制作用、致凋亡作用及对某些化疗药物敏感性的影响。将人工合成的apollon ASODN,经脂质体包裹后作用于结肠癌Lovo细胞48 h后,采用WST法与克隆形成抑制实验检测不同浓度的apollon ASODN对Lovo细胞增殖抑制作用;实时荧光定量RT-PCR检测细胞apollon mRNA的表达水平;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;Hoechst 33258染色观察Lovo细胞凋亡的形态学改变;采用apollon ASODN联合5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、盐酸表柔比星(EPI),观察对Lovo细胞增殖抑制作用。实验表明,apollon ASODN转染Lovo细胞48 h,能明显下调apollon mRNA的表达,细胞增殖和克隆形成均被显著抑制(P<0.05),并呈浓度依赖关系。Apollon ASODN组G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,出现明显的S...     

重组人白血病抑制因子体外诱导HL-60细胞凋亡与bcl-2及p53表达的关系

目的 :探讨重组人白血病抑制因子 (rh LIF)诱导HL 6 0细胞凋亡的作用及其可能机制。方法 :不同剂量 (10～ 4 0 0 0U·ml-1)的rh LIF作用HL 6 0细胞 3d后 ,用流式细胞仪观察分析细胞周期变化并检测细胞凋亡率 ,用TUNEL法检测原位细胞凋亡情况 ;分别用免疫组化法和原位杂交法检测rh LIF作用 2、4、6d后P5 3蛋白及p5 3mRNA、bcl 2mRNA表达水平的改变。结果 :rh LIF (10～ 4 0 0 0U·ml-1)作用d 3,细胞凋亡率较对照组显著增加 ,其中以10 0 0U·ml-1组的作用最强 ;rh LIF (80 0U·ml-1)作用 2～ 6d ,P5 3蛋白和p5 3mRNA表达也同步增高 ,而bcl 2mRNA表达显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :rh LIF能诱导HL 6 0细胞凋亡 ,该作用与P5 3蛋白表达增加和bcl 2表达降低有关     

梁金菇多糖促人急性早幼粒细胞白血病细胞系(HL-60)细胞凋亡研究

目的 :观察梁金菇多糖对人类早幼粒细胞白血病细胞系 (HL 6 0 )是否具有凋亡诱导作用 ,并进一步研究半胱天冬酶 3(Caspase 3)基因在此过程中的作用。方法 :四氮唑蓝比色法 (MTT法 )观察梁金菇多糖对HL 6 0细胞的抑制率 ,应用形态学、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生。应用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法检测凋亡相关基因Caspase 3mRNA表达的变化。结果 :梁金菇多糖对HL 6 0细胞的生长有明显的抑制作用 ,并诱导肿瘤细胞发生凋亡 ;在HL 6 0细胞凋亡过程中 ,凋亡相关基因Caspase 3转录水平比用药前增强。结论 :梁金菇多糖促HL 6 0细胞凋亡 ,且与Caspase 3基因表达有关     

LY294002对多药耐药急性白血病细胞株HL60/VCR的凋亡及细胞周期的影响研究

目的:研究磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002对多药耐药急性白血病细胞株HL60/VCR凋亡与细胞周期的影响及可能机制。方法:取耐长春新碱(VCR)的HL60/VCR多药耐药急性白血病细胞株分为未加药的对照组及加入不同浓度的LY294002(其终浓度为1.0、2.5、5.0、10μmol.L-1)组,MTT法检测2种细胞的半数抑制浓度(IC50),流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测抗凋亡蛋白Bcl-2、细胞周期调控分子CyclinD1mRNA表达。结果:与对照组比较,LY294002可明显降低HL60/VCR对VCR的IC50(P<0.05),且与剂量相关;LY294002可显著增加HL60/VCR细胞凋亡率,阻滞细胞于G0/G1期,降低HL60/VCR细胞的Bcl-2、CyclinD1mRNA的表达(P均<0.05)。结论:LY294002可能是通过影响Bcl-2及CyclinD1基因的表达,从而促进HL60/VCR细胞凋亡及抑制细胞增殖。     

蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖与凋亡的影响。方法 qRT-PCR检测9株血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达。利用shRNA干扰HL60细胞内ADRM1表达,将不同浓度的MG132作用于ADRM1干扰前后的HL60细胞24 h,CCK-8法检测各组细胞增殖与活力;Western blot检测各组细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达;流式细胞仪分析不同浓度MG132作用下,HL60、NB4细胞凋亡情况。结果血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达上调。成功构建ADRM1 shRNA与scrambled shRNA HL60细胞株。ADRM1基因干扰及给予MG132后,各实验组细胞增殖抑制,活力下降,此时细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达下调。随着MG132浓度提高,HL60、NB4细胞凋亡增加;MG132对HL60细胞的促凋亡作用强于NB4细胞。结论血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA过表达;ADRM1蛋白下调后,UCH37蛋白亦下调,细胞增殖抑制;MG132通过下调ADRM1、UCH37蛋白表达,诱导AML细胞凋亡,抑制细胞增殖与活力;MG132对不同分型AML细胞的促凋亡作用存在个体差异。     

生存素及bcl-2基因表达在吲哚美辛抗胃癌细胞株 MGC803 增殖、诱导凋亡中的作用

目的:探讨吲哚美辛(IN)对胃癌细胞株MGC803增殖、凋亡的影响及可能的机制.方法:观察不同浓度IN(50,100,200μmoL稬-1)对MGC803细胞增殖、凋亡及抗凋亡基因生存素、bcl-2 mRNA表达的影响,MTT法检测细胞生长抑制率;荧光染色检测细胞凋亡率;流式细胞仪测定细胞周期变化;RT-PCR检测生存索、bcl-2 mRNA的表达.结果:IN对MGC803细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用,并具有浓度、时间依赖性;IN作用于细胞48 h后,细胞周期改变表现为G0/G1期比例增加,S期及G2/M期下降;细胞经200μmoL稬-1IN作用后,生存素mRNA表达逐渐减弱(P<0.05),bcl-2 mRNA表达无明显变化.结论:IN可抑制MGC803细胞增殖、诱导凋亡,干扰细胞增殖周期,生存素mRNA表达下调可能是其作用机制之一.     

泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究泛素蛋白酶体抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:将泛素蛋白酶体抑制剂MG-132加入胃癌细胞SGC7901,用四氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测生存素的表达。结果:MG-132对胃癌细胞有显著的抑制作用,24,48h的IC50分别为80.9,9.1μmol·L-1;MG1325.0μmol·L-1作用胃癌细胞24,48,72,96h后,细胞凋亡率分别为(4.2±s0.6)%,(30±4)%,(47±6)%,(53±6)%,生存素在胃癌细胞中呈高表达,经MG132作用后,表达明显降低。结论:MG132能显著抑制胃癌细胞的增殖、诱导其凋亡,并下调生存素的表达。     

沉默MALAT1基因对蜂毒素诱导HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨沉默HepG2细胞株中MALAT1基因对蜂毒素诱导的细胞增殖抑制和凋亡的影响。方法采用MTT法检测蜂毒素对HepG2细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;qPCR法检测HepG2细胞中MALAT1基因的表达;采用特异性siRNA对HepG2细胞的MALAT1基因进行沉默;比较单独用蜂毒素处理和给予蜂毒素同时沉默MALAT1的细胞增殖抑制率和凋亡率变化。结果蜂毒素明显抑制HepG2细胞的增殖并促进细胞凋亡,呈浓度依赖性;和正常肝细胞株L0-2相比,MALAT1 mRNA在HepG2细胞中存在高表达(P<0.05);蜂毒素可下调细胞中MALAT1的表达,并随着浓度的增加抑制率升高;给予蜂毒素同时沉默MALAT1的研究组中,细胞增殖抑制和凋亡率都明显高于单独给予蜂毒素组(P<0.05)。结论蜂毒素可下调HepG2细胞株中MALAT1的表达,且沉默MALAT1可促进蜂毒素诱导的HepG2细胞增殖抑制和凋亡。     

三氧化二砷对HL-60细胞凋亡及其端粒酶hTERT-mRNA表达影响的实验研究

目的　探讨不同浓度的三氧化二砷 (As2 O3)对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL 60细胞端粒酶亚单位hTERT mRNA表达及其诱导凋亡的作用。方法　不同浓度的As2 O3与HL 60细胞株共培养 48h ,流式细胞术鉴定HL 60细胞凋亡 ;RT PCR法检测HL 60细胞端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达。结果　在 0 1、1 0和 5 0 μmol·L-13种浓度的As2 O3作用下 ,HL 60细胞凋亡率分别为 2 2 8%± 0 40 %、2 5 5 %± 0 2 2 %和 47 5 7%± 2 79% ;端粒酶亚单位hTERT mRNA表达的相对值分别为 73 97%、63 70 %和 2 9 0 4%。细胞凋亡率在 5 0 μmol·L-1与 0 1和 1 0μmol·L-1浓度组间差异有显著性 (P <0 0 1) ;端粒酶亚单位表达的差异也有显著性 (P <0 0 5 )。As2 O3诱导HL 60细胞凋亡效应与其抑制端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达相关。结论　As2 O3对HL 60细胞具有凋亡诱导效应 ,且对其端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达具有抑制作用 ,两者均呈现浓度依赖效应。As2 O3可能通过抑制HL 60细胞端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达而诱导肿瘤细胞凋亡     

PD98059对HL60细胞Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导影响的研究

目的探讨MEK1抑制剂PD98059对HL60细胞Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导以及细胞增殖的影响。方法四唑盐比色试验(MTT)法检测PD98059对HL60细胞增殖的抑制作用,流式细胞术观察PD98059对HL60细胞凋亡和G0/G1期阻滞的影响,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定PD98059对HL60细胞ERK2、p27、Skp2基因表达的影响,免疫组织化学SP法检测ERK2、p27、Skp2蛋白表达的改变情况。结果 PD98059能够抑制HL60细胞的生长,该抑制作用具有浓度及时间依赖性(P<0.05)。PD98059能够促进HL60细胞凋亡,该作用具有浓度及时间依赖性(P<0.05);PD98059作用HL60细胞48h,随着浓度的增加G0/G1期阻滞增强(P<0.05)。PD98059可使HL60细胞ERK2、Skp2的mRNA及蛋白表达量减少,p27的mR-NA及蛋白表达量增加(P<0.05)。结论 PD98059能够抑制HL60细胞的生长,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,促进其凋亡,这可能是通过PD98059阻断Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导,影响了ERK2、Skp2、p27等的表达而实现的。     

The Apoptosome: Emerging Insights and New Potential Targets for Drug Design

Apoptosis plays a crucial role in tissue homeostasis, development and many diseases. The relevance of Apaf1, the molecular core of apoptosome, has been underlined in mitochondria-dependent apoptosis, which according to a growing body of evidence, is involved in various pathologies where the equilibrium of life-and-death is dysregulated, such as heart attack, stroke, liver failure, cancer and autoimmune diseases. Consequently, great interest has emerged in devising therapeutic strategies for regulating the key molecules involved in the life-and-death decision. Here we review recent progress in apoptosis-based pharmacological therapies and, in particular, we point out a possible role of the apoptosome as an emerging and promising pharmacological target. Marcello D’Amelio and Elisa Tino equally contributed to this work.     

神经细胞凋亡与脑缺血疾病

脑缺血疾病是现代人类健康和生命的主要杀手之一。近年研究发现,神经细胞凋亡是脑缺血疾病造成神经系统损伤的重要机制,神经细胞凋亡通路主要包括线粒体通路、死亡受体通路、PARP/AIF通路。基于神经细胞凋亡与脑缺血损伤关系的深入研究,抗凋亡治疗已经成为了治疗脑缺血疾病的重要途径。     

奥美拉唑诱导鼠胃上皮细胞凋亡

奥美拉唑 (ＯＭＥ)属质子泵抑制剂 ,是消化性溃疡治疗的常用药物 ,有良好的安全应用记录。已有研究证实ＯＭＥ在体外能诱导凋亡[1] 。我们进行了鼠在体实验 ,探讨ＯＭＥ在体内对凋亡的影响。1　材料与方法1.1　动物及处理　Ｗｉｓｔａｒ♂大鼠 14只 ,体重 (140～ 15 5 )ｇ ,平均 148ｇ ,由武汉大学医学院实验动物中心提供。大鼠随机分 2组 :①对照组 6只 :1 5ｍｌ生理盐水灌胃 ,1ｄ 1次 ,共7ｄ ;②实验组 8只 :ＯＭＥ(江苏无锡制药有限公司产品 ,商品名 :洛赛克。用量为 40ｍｇ·ｋｇ-1)溶于 1 5ｍｌ生理盐水中灌胃 ,1ｄ 1次 ,共 7ｄ ;其间…     

SOD与细胞凋亡

细胞凋亡参与了机体许多生理及病理过程。近来研究表明 ,自由基与凋亡有着密切的关系。本文着重阐述自由基清除剂———SOD对细胞凋亡的影响 ,以期对SOD作进一步的研究     

苦参碱对宫颈癌Hela细胞的作用

目的:观察不同浓度的苦参碱对宫颈癌Hela细胞的作用。方法:浓度分别为0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml的苦参碱体外培养Hela细胞24h、48h、72h后,分别用MTT法观察苦参碱对Hela细胞的生长抑制作用、AnnexinV-PI双标染色用流式细胞仪检测苦参碱对Hela细胞凋亡的影响。结果:不同浓度的苦参碱具有抑制宫颈癌Hela细胞增殖的作用,呈明显的时间、剂量依赖性。各浓度和时间之间比较具有显著差异性(P<0.01)。FCM检测结果显示苦参碱作用后,细胞的凋亡率增加,呈现随时间和剂量依赖性。各浓度和时间之间比较也具有显著差异性(P<0.01)。结论:苦参碱对人宫颈癌Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用,能诱导肿瘤细胞的凋亡。     

凋亡抑制蛋白家族与肿瘤治疗的研究进展

1前言　　目前认为肿瘤治疗失败的主要原因是癌细胞对化疗、放疗及细胞毒T细胞和自然杀伤细胞介导的免疫疗法不敏感,事实上,这些看似不同的治疗方法是通过相同的生物学的机制即细胞凋亡的方式来消除肿瘤的.     

Autophagy is involved in cytotoxic effects of crotoxin in human breast cancer cell line MCF-7 cells

AIM: To investigate the role of crotoxin (CrTX)-induced autophagy in the death of MCF-7 cells, a caspase-3-deficient, human breast cancer cell line. METHODS: Cultured MCF-7 cells were treated with various doses of CrTX, a phospholipase A2 (PLA2) isolated from the venom of the South American rattlesnake, Crotalus durissus terrificus. The cytotoxicity of CrTX in the presence and absence of caspase inhibitors was measured with methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) and lactate dehydrogenase (LDH) leakage assays. The activation of autophagy was determined with transmission electron microscope and monodansylcadaverin (MDC) labeling. The upregulation of lysosomal enzymes, the release of cytochrome c (cyto-c), and the nuclear translocation of the apoptosis inducing factor (AIF) were examined by immunoblotting and immunofluorescence. RESULTS: CrTX inhibited the viability of MCF-7 cells in a dose- and time-dependent manner. CrTX-activated autophagy was revealed by punctuate MDC labeling, and an increase in the formation of autophagosomes as well as apoptosis, as evidenced by nuclear condensation and fragmentation. The activation of cathepsin B, D, and L, in addition to the release of cytochrome c and the relocation of AIF into nuclei, were observed after CrTX treatment. Autophagy inhibitors 3-methyladenine (3-MA), NH4Cl, and the pan-caspase inhibitor, Z-Val-Ala-Asp-fluoromethylketone (Z-Vad-fmk), attenuated CrTX-induced cell death. CONCLUSION: An autophagic mechanism contributes to the apoptosis of MCF-7 cells induced by CrTX.     

Involvement of extrinsic and intrinsic apoptotic pathways together with endoplasmic reticulum stress in cell death induced by naphthylchalcones in a leukemic cell line: Advantages of multi-target action

Chalcones, naturally occurring open-chain flavonoids abundant in plants, have demonstrated anticancer activity in multiple tumor cells. In a previous work, the potential anticancer activity of three naphthylchalcones named R7, R13 and R15 was shown. In this study, the mechanism of actions of these chalcones was originally shown. The chalcones presented concentration and time-dependent cytotoxicity. To determine the type of cell death induced by chalcones, we assessed a series of assays including measurements of the caspase-8, -9 and -12 activities, expression of important apoptosis-related genes and proteins, changes in the cell calcium concentration and cytochrome c release. The activities of caspase-8, -9 and -12 increased after the treatment of L1210 cells with the three compounds. Chalcones R7 and R13 induced an increase of pro-apoptotic proteins Bax, Bid and Bak (only chalcone R13), as well as a decrease in anti-apoptotic Bcl-2 expression. These chalcones also induced an increase in Fas and a decrease in p21 and p53 expression. Chalcone R15 seems to act by a different mechanism to promote cell death, as it did not change the mitochondrion-related proteins, nor did it induce the cytochrome c release. All compounds induced an increase in cell calcium concentration and an increase in CHOP expression, which together with an increase in caspase-12 activity, suggest that chalcones could induce an endoplasmic reticulum (ER) stress. Taken together, these results suggest that chalcones induce apoptosis by different pathways, being an interesting strategy to suggest for cancer therapy.     

Apoptosis: A New Pharmacodynamic Endpoint

Pharmaceutical Research -