白细胞对保存血小板的影响

白细胞混入浓缩血小板中,对血小板功能及输注后存活力有不利影响。这些影响被归结为白细胞新陈代谢所致pH的下降,尽管维持pH大于6,血小板保存在气体通透的袋中仍然显示出异常。针对血小板蛋白和功能的变化。进行了保存血小板中控制白细胞数量的研究。作者用了12例单采血小板样本180g离心,使白细胞数达到<2×10~5/ml(其中粒细胞<10％),而后将样品分成二组,移入血小板袋中22℃水平振荡保存。从同一献血员采取全血50ml,通过不连续的Ficoll梯度法浓缩制备的中性粒细胞加入其中一组的血小板保存袋中,使中性粒细胞数最终达1×10~6/ml,分别对二组的血小板作保存3和5天的研究。保存3天无中性粒细胞组,血小板对瑞斯托霉     

输注冰冻血小板浓缩物的治疗作用

本文作者对比观察了新鲜、缓慢控速冰冻和快速冰冻血小板的治疗作用,并在体外观察了冷冻血小板的功能和形态变化。按标准方法制备HLA相同同胞的血小板浓缩物,用ACD抗凝,离心。最终中数浓度为0.71×10~(11)(范围0.55～1.04×10~(11))个血小板/单位。如将血小板浓缩物冻存,可用4单位的血小板浓缩物于室温3,000g离心6分钟。将无血小板的血浆盛入300ml冰袋中,悬浮血小板终容积为50ml。无血小板的血浆-80℃冻存,临用时融化。用二甲亚砜(DMSO)作血小板冻存剂。冻存液为:20％DMSO,20％供体血浆,60％     

在成分血生产过程中制备少白细胞浓缩血小板

用含CPD—1保养液的三联袋采集1单位全血于第一袋中,以2200rpm 离心5分钟,加速时间为1分钟,减速过程为3分钟,此时全血为压缩红细胞(RBCs)和富含血小板血浆(PRP),二部分加压使PRP 通过去除白细胞的滤器(由表面处理过的聚酯微纤维制备)进入血小板收藏袋(第二袋),即得少白细胞PRP.再以3250rpm 离心15分钟,加速时间为1.6分钟,降速时间为3.5分钟,然后将上层少血小板血浆挤入第三袋作为新鲜冰冻血浆使用,在第二袋中留下50—60ml 即为少白细胞浓缩血小板。用此方法共制备15份少白细胞浓缩血小板,平均体积为56.7ml.第5天血小板含量平均为8.6×10~(10)/单位。第5天白细胞含量平均为0.83±0.7×10~4/单位(0.14白细胞/μl),而对照组14例,白细胞平均含量为5.95±2.86×10~7/单位,白细胞去除率99.9%。11例配对比较,样本组血小板为7.3±1.4×10~(10)/单位,而对照组为7.7±1.5×10~(10)/单位,血     

用mafosfamid消除人离体骨髓的原始淋巴细胞白血病的白血病细胞

本文检测了1种新合成的环磷酰胺衍化物——mafosfamid(ASTA Z 7557)在体外消除自体骨髓移植物中急淋白血病细胞的能力。结果发现 mafes-famid 对 DNA 合成的抑制呈剂量依赖性。以 Na-malwa 细胞(1种有很高成斑率的原始淋巴细胞样白血病细胞株)为实验对象,分别以0、10、25、50、75、100μg/ml 浓度的 mafosfamid 处理10~6个这种细胞,其所达到的对数杀灭依次为:0、0.1、2.5、4.5、4.5、4.8。而且这种杀灭与肿瘤靶细胞的浓度无关。当用50—100μg/ml mafosfamid 处理,在急淋细胞与骨髓细胞的比例为1:100的混合细胞中可消除肿瘤细     

上柱前样品萃取与浓缩技术在毛细管电泳法测定微量氨基酸中的应用

目的　建立一种上柱前样品萃取与浓缩技术测定生物样品中微量氨基酸的方法。方法　氨基酸与2 ,4 二硝基氟苯衍生化反应完成后 ,用 10ml叔丁基甲醚抽提 2次 ,每次 5ml,以除去多余衍生化试剂。然后用 6mol/L盐酸 2滴酸化 ,再用 6ml乙酸乙酯萃取两次 ,每次 3ml。最后合并上层萃取液 ,5 0°C水浴吹干 ,剩下含氨基酸的残留物用水和乙腈重组 ,用毛细管电泳法分析定量。结果　本法具有操作简单、萃取效率高的特点 ,平均萃取产率可达 99.3%。若用水和乙腈重组残留物至原来体积的十分之一 ,则柱前浓缩效果可达 10倍。结论　柱前萃取和浓缩技术操作简单 ,是一种可用于提高毛细管电泳法测定微量氨基酸灵敏度的方法     

聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳在寄生虫学上的应用

聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳是1962年由Davis和Ornstein首先命名。盘状电泳分辨能力较高,它采用不连续系统(即不连续的缓冲液、pH、以及凝胶孔径)进行电泳,在电场中形成不连续的电位梯度,使样品浓缩成狭窄的环,并通过电泳过程中三个物理效应(浓缩效应、电荷效应、分子筛效应)来提高样品成份的分辨率。因盘状电泳能使区带变窄,故其分辨能力较其它     

白膜法制备浓缩血小板在无糖晶体保养液中贮存;15天后的血小板质量

白膜法制备的浓缩血小扳(BC-PC_s)混合后,于无糖(葡萄糖)晶体保养液中贮存4到12天后对血小板减少病人是有效的,它同富含血小板血浆法制备的浓缩血小板(PRP-PC_(?))贮存1到3天输注后的血小板增加量相似。本文详细研究和比较了BC-PC_s和传统的PRP-PC_s 及混合PRP-PC_s(P-PRP-PC_s)在15天贮存期间血小板的质量。浓缩血小板在离心和贮存时温度均为22±2℃。BC-PC_3(n=8):450ml 全血在采集后2小时内,5000g 离心5分钟,压出约25ml 白膜,6转/分旋转贮存一夜,混合6份白膜于300ml 无糖晶体保养液内,1000g 离心7分钟,分出上层含有血浆的血小板于1升聚烯烃贮存袋中,置平板振荡仪70转/分贮存.PRP-PC_s(n=8):取60—70mlPRP-PC_s,置300ml 聚烯烃袋中,以6转/分旋转贮存。P-PRP-PC_s(n=3):取4份(30ml/份)PRP-PC_s,贮存一夜后,混合于含300ml 保养液的1升聚烯烃塑料袋中。三种方法制备的浓缩血小板分别于采血后1、7、11     

上柱前样品萃取与浓缩技术在毛细管电泳法测定微量氨基酸中的应用

目的建立一种上柱前样品萃取与浓缩技术测定生物样品中微量氨基酸的方法.方法氨基酸与2,4-二硝基氟苯衍生化反应完成后,用10 ml叔丁基甲醚抽提2次,每次5 ml,以除去多余衍生化试剂.然后用6 mol/L盐酸2滴酸化,再用6 ml乙酸乙酯萃取两次,每次3 ml.最后合并上层萃取液,50°C水浴吹干,剩下含氨基酸的残留物用水和乙腈重组,用毛细管电泳法分析定量.结果本法具有操作简单、萃取效率高的特点,平均萃取产率可达99.3%.若用水和乙腈重组残留物至原来体积的十分之一,则柱前浓缩效果可达10倍.结论柱前萃取和浓缩技术操作简单,是一种可用于提高毛细管电泳法测定微量氨基酸灵敏度的方法.     

上柱前术品萃取与浓缩技术在毛细管电泳法测定微量氨基酸中的应用

目的：建立一种上柱前样品萃取与浓缩技术测定生物样品中微量氨基酸的方法，方法：氨基酸与2，4－硝基氟苯衍生化反应完成后，用10ml叔丁基甲醚抽提2次，每次5ml，以除去多余衍生化试剂，然后用6mol/L盐酸2滴酸化，再用6ml乙酸乙酯萃取两次，每次3ml。最后合并上层萃取液，50℃水浴吹干，剩下含氨基酸的残留物用水和乙腈重组，用毛细管电泳法分析定量，结果，本法具有操作简单，萃取效率高的特点，平均萃取产率可达99．3％，若用水和乙腈重组残留物至原来体积的十分之一，则柱前浓缩效果可达10倍，结论：柱前萃取和浓缩技术操作简单，是一种可用于提高毛细管电泳法测定微量氨基酸灵敏度的方法。     

血小板单采中副产品FFP的制备

背景 为了减少制备单一供者的血小板(SDP)的费用,作者设计一项研究以调查在单采血小板过程中收集的血浆副产品是否符合FFP的质量要求,而且不降低SDP成分的质量。研究设计和方法 采用全自动细胞分离仪,对92名血小板计数每升小于270×10~9的供者进行血小板单采。编程单采机以在收集中含有3×10~(11)PLT的250ml血浆,再另外收集350ml血浆,或者在10个程序中编辑收集含有3×10~(11)PLT的250ml血浆,但不再另外收集血浆制品。对血浆中的FⅤ和FⅧ以及残留的RBC、     

脐血干细胞的微生物污染

概 述 标准血液成分有少量细菌(<10CFU/ml)污染,保存温度以及到期的浓缩血小板(22℃,5天),浓缩红细胞(4—6℃达42天),细菌的数量达到>10~5-10~6CFU/ml,一些报道认为该现象具有临床意义。尽管采用严格的抗感染计划,脐血面临被少量细菌污染的危害性更大。相对于标准血液成分,脐血保存温度(-150℃)不适合细菌生长。虽然已经开展脐血移植数量较小(150例),还没有因污染菌引起即发或迟发性污染的不良反应的报道。脐血库采用几种不同的方法将脐血体积缩小至20ml     

白细胞含量对血小板保存条件的影响

为评价浓缩血小板(PC)中白细胞含量对血小板保存条件的影响,作者以CPD为抗凝剂收集了12个单位全血,分别制备成PC后,将其混合,重新分成12份。然后将这12份相同的PC分成4组(Ⅰ-Ⅳ组),每组3份,分别加入不同量的富含白细胞血浆和少白细胞血浆,所有操作在无菌条件下进行。所得PC的血浆体积为58.6±0.6ml,血小板浓度为1.01±0.04×10~9/ml,所含红细胞数小于10~7。Ⅰ-Ⅳ组PC中白细胞的浓度分别为0.14±0.05,1.96±0.09,5.53±0.98和13.00±0.93×10~6/ml。将制备好的上述PC装于普通聚氯乙烯塑料袋内置22℃保存7天,分别于0、2、5、7天时取样测定血小极性质的变     

血清蛋白乙酸纤维素薄膜电泳技术

电泳是指多相系统(如细胞悬液、蛋白质胶体溶液等),在外加电场的作用下,发生分散相(如悬液中的细胞或颗粒物质)对分散介质(如各种溶液)的相对位移。亦即荷电的胶体颗粒在外加电场影响下进行的移动。电泳是分离混合物中离子成分的最有效     

放置8小时后全血制备的浓缩血小板性能

通常认为从全血制备浓缩血小板必须在采血后6小时内完成.为了研究采血后8小时制备的浓缩血小板性能有无改变,作者等在两个实验室(甲及乙)对放置不同时间制备的浓缩血小板进行体外及放射性同位素自身体内性能测定.实验室甲的研究结果发现放置8小时(n=10)制备的富含血小板血浆容量及血小板得率较放置1-2小时(n=10)为高(分别为276±25对249±19ml及76±18×10~9血小板),显然只有富含血小板血浆容量有显著差异(P<0.05).两组的血小板自身体内回收率或存活率无显著差异(分别为54±11对47±9%及167±37对170±25小时).实验室乙也发现放置8小时(n=12)制备的富含血小板血浆容量及血小板得率较放置6小时(n=10)为高(分别为304±31对279±37ml及88±26对77±27×10~9血小板).两组的ADP诱导的血小板形态改变,β-血栓蛋白释放量、乳     

用MCS+作多种成分采集

当今的细胞分离机可从一名供血者采集多种血液成分,采用Haemonetics MCS+,一采程可同时采集红细胞与血小板浓缩物、血小板浓缩物和血浆或血浆和红细胞。作者同时采集一个红细胞浓缩物单位和一个血小板浓缩物单位(程序中含去白细胞膜层)来评价LDPRBC程序。21名健康男性参加本实验,操作时间平均90分钟(68-123分钟)。处理血液容量平均为2,770ml(2,073-3,620ml)。采集耐受良好,无副作用。每单位红细胞平     

促性腺激素释放激素激动剂对子宫内膜基质细胞蜕膜化的影响

目的研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-α)对子宫内膜基质细胞蜕膜化的影响。方法体外原代培养人子宫内膜细胞并构建蜕膜化模型,用不同浓度的GnRH-α处理细胞,Real-Time PCR方法检测标志子宫内膜基质细胞蜕膜化程度的分子催乳素(prolactin,PRL)和胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)mRNA的表达,ELISA法检测其在细胞上清液中的蛋白表达。结果 10~(-8)g/ml浓度,10~(-7)g/ml浓度和10~(-6)g/ml浓度的PRL mRNA表达均增加,10~(-7)g/ml浓度和10~(-6)g/ml IGFBP-1mRNA的表达增加(P0.05,P0.01);蜕膜化72h10~(-6)g/ml浓度基质细胞上清液中PRL蛋白增加,10~(-7)g/ml浓度上清液中IGFBP-1蛋白增加(P0.05)。结论 GnRH-α促进了子宫内膜基质细胞蜕膜化PRL和IGFBP-1mRNA的表达和上清液中PRL和IGFBP-1蛋白的分泌。GnRH-α可以促进对人子宫内膜基质细胞的蜕膜化。     

用添加液从汇集白膜中制备血小板浓缩物

本文介绍了一种制备血小板浓缩物的新方法:保存在室温下6～12小时的CPD全血分别经3500rpm10分钟、4000rpm12.5分钟离心制备成两组白膜,一组汇集6单位和另一组汇集4单位白膜。第一组大约42g白膜被挤入子袋,而第二组留存大约55g白膜。第一组白膜在血小板浓缩物(PC)的制备中加入添加液(PAS)250ml,而第二组加入300ml,制备后的PC(第二组)在贮存前,分装成相等的两部分。将贮存1、2、4、7天的PC取4毫升进行     

用前到腺素E_1制备的浓缩血小板在体内的恢复与存活

贮存5-7天的浓缩血小板(PC)在输注后恢复和存活不如新鲜血小板。作者首先在新鲜富血小板血浆(PRP)中加入一种生化激活剂后进行制备,并与常规PC制备法对照。方法:采集至少10天未服药的男性献血者全血,枸橼酸-磷酸-葡萄糖(CPD)抗凝,室温离心(1000g,7分钟)制备PRP。加入用正常盐水稀释的前列腺素E_1(PGE_1)使其最终浓度为1.3×10(~-8)M,然后室温3500g离心7分钟制备PC。PC于22℃±1℃贮存5天后,在使用前2-3小时以自身血浆浸泡血小板,然后弃液体,计数血小板、白细胞,测定pH,按Kunickl法作形态学积分,每个单位浓缩血小板加入250μCi铬酸钠(~(51)Cr)标记,22℃孵育30分钟,以自身血浆洗涤后配成30ml悬液,于输入后1.5、2.0、24、     

电场干预对血管平滑肌细胞血小板衍化生长因子受体分布的影响

目的:观察电场作用下血管平滑肌细胞膜血小板衍化生长因子受体表达的变化及其与细胞迁移生长的关系。方法:①实验于2003-08/2004-08在解放军第三军医大学附属西南医院心内科及烧伤实验室完成。选用健康Wistar大鼠120只。②按常规组织块贴壁法原代培养血管平滑肌细胞。③通过外加电场干预装置(基本结构包括:观测小室和细胞培养室、电极系统、直流电源。细胞培养室的中央部分是对细胞行为进行显微镜下直接观测的地方,即观测小室。是该装置的关键部分。与细胞培养室相连的电极采用琼脂-盐桥电极。电源系统为输出电压0.1～200V,输出电流0.01～10mA,连续可调的电压电流双稳直流电源),对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞直流电场干预,间断显微细胞图像记录和分析,观察不同强度电场、不同作用时间下血管平滑肌细胞迁移和细胞形态的变化;采用免疫荧光染色方法检测电场干预后,与血管平滑肌细胞迁移密切相关的血小板衍化生长因子受体膜表达,观察血小板衍化生长因子受体表达变化与细胞生物行为变化的关系。④两组间差异比较采用t检验。结果:①在施加150mV/mm电场干预后,血小板衍化生长因子受体表达增加(P<0.05～0.01),部分细胞血小板衍化生长因子受体表达呈不对称分布,在细胞向阴极伸展的板状突起中有明显荧光着色。血小板衍化生长因子受体在血管平滑肌细胞的重新分布在电场干预30min后出现,在6h电场干预中仍持续存在。②在150mV/mm电场干预下,培养的血管平滑肌细胞有明显的电场趋化性,细胞向阴极迁移的距离明显长于无电场作用对照组,血管平滑肌细胞在电场作用下迁移速度亦明显加快[(13.84±0.79),(4.32±0.42)μm/h,P<0.01),其电场趋化性与血小板衍化生长因子受体的不对称分布相一致。结论:外加直流电场干预下,大鼠血管平滑肌细胞的血小板衍化生长因子受体表达上调并呈极性不对称分布,这一改变可能与血管平滑肌细胞形状发生改变和向电场阴极面定向迁移有关。     

高效毛细管电泳的临床应用

瑞典Uppsala大学物理化学系Svedberg教授提出,荷电的胶体颗粒在电场中移动的现象为电泳。高效毛细管电泳(HPCE)是在传统电泳基础上,继现代高效液相色谱技术之后发展起来的1种新型高效分离技术,它综合了经典电泳技术和