Cx43通过Erk1/2促进BMP-2诱导的人牙髓细胞成牙本质分化

目的:探讨骨形态发生蛋白(BMP)-2和连接蛋白(Cx) 43在促进人牙髓细胞(hDPCs)成牙本质分化过程中的联系。方法:在hDPCs中过表达Cx43并施以300 ng/m L BMP-2刺激1 h,qRT-PCR、Western blot和免疫荧光(IF)检测成牙本质分化标记物的表达变化;检测BMP-2介导的Smad1/5/9和Erk1/2通路活性,并施加PD98059(Erk1/2抑制剂)刺激1 h,检测抑制Erk1/2后过表达Cx43对BMP-2诱导的DSPP等的表达变化影响。结果:BMP-2上调hDPCs内osterix、DSPP、DMP-1、ALP和OCN RNA水平以及osterix蛋白表达,增强hDPCs中DSPP的荧光强度。过表达Cx43明显促进BMP-2诱导的hDPCs成牙本质分化。BMP-2激活hDPCs中的Smad1/5/9通路,过表达Cx43上调hDPCs中Erk1/2磷酸化水平。抑制Erk1/2明显减弱过表达Cx43对BMP-2诱导的osterix、DSPP、DMP-1、ALP、OCN mRNA表达以及osterix蛋白水平和DSPP染色强度的增强作用。结论...     

釉基质蛋白对人牙髓细胞成牙本质分化的影响

目的 探讨釉基质蛋白对人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPC)成牙本质分化的影响,为牙本质的组织工程学研究提供有效的生物活性物质.方法 将HDPC接种于6孔板(2×105个/孔)后分为5组,分别加入含1、10、100 mg/L釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMP)(分别为EMP 1、10、100 mg/L组)、10-8 mol/L地塞米松及100 mg/L抗坏血酸(dexamethasone and ascorbic acid,Dex-AA组)、单纯基础培养液(对照组).于培养1、5、10 d分别用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP活性,实时荧光定量反转录聚合酶链反应技术检测成牙本质相关基因牙本质基质蛋白1(dentine matrix protein-1,DMP-1)及牙本质涎磷蛋白(dentine sialophosphoprotein,DSPP)的表达,应用2-△△CT方法得出具体数值并进行单因素方差分析与Post Hoe 检验,用茜素红染色检测并定量分析矿化情况.结果 各组ALP水平呈时间依赖性上调,培养1d后各组ALP活性与对照组相比差异均无统计学意义;5 d后EMP 10、100 mg/L组及Dex-AA组ALP活性显著增高,分别达到7.573±0.267、6.119±0.502、5.846±0.096,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);10 d后10 mg/L EMP组及Dex-AA组ALP活性增高更显著,分别达21.035±0.149、13.223±0.797,与对照组(5.825±0.404)相比差异均有统计学意义(P＜0.01).培养1d后各组DMP-1及DSPP mRNA水平均较对照组显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.01);培养10 d后10 mg/L EMP组DMP-1和DSPP表达水平均显著增高,分别达到14.791±0.164、12.238±0.421.培养10 d后各组均有矿化,10 mg/L EMP组钙离子浓度[(191.8±2.0) μmol/L]显著高于对照组[(81.1±8.1)μmol/L],差异有统计学意义(P＜0.01).结论 适当浓度的EMP对HDPC的成牙本质分化有一定的促进作用.     

脂多糖诱导高迁移率族蛋白B1在人牙髓细胞中转位的研究

目的:观察低浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)中高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1,HMGB1)在细胞中的转位及其hDPCs细胞活性的影响.方法:采用原代组织块培养法,培养人牙髓细胞,...     

人牙髓细胞诱导牙本质再生的实验观察

目的:观察人成体牙髓细胞体内诱导牙髓组织修复反应的能力.方法:在矿化诱导液作用下,将一定数量级的人牙髓细胞与β-TCP生物陶瓷颗粒进行复合,植入免疫缺陷鼠磨牙穿髓孔处,7 d、14 d后分别取材进行组织学观察.对照组采用氢氧化钙(Oycal)和空白对照组.结果:组织学观察表明,盖髓术后7 d,各组均出现了牙髓细胞向穿髓孔处迁移、聚集.术后14 d,牙髓细胞组炎症反应仅局限于穿髓孔处,有明显的修复性牙本质桥形成;Dycal组炎症反应涉及到少量冠髓,有部分矿化的纤维性屏障形成;空白对照组炎症反应涉及了大部分冠髓,仅有弥散的骨样牙本质形成.结论:在矿化诱导液作用下,牙髓细胞具有向成牙本质细胞样细胞定向分化的能力,将牙髓细胞植入鼠磨牙的穿髓孔处,显示其具有良好的维持牙髓活力和诱导修复性牙本质形成的能力.     

内毒素对重组人成骨蛋白-1诱导人牙髓细胞活性的影响

目的：研究具核梭杆菌的内毒素（ＬＰＳ）对重组人成骨蛋白－１（ｒｈＯＰ－１）诱导牙髓细胞增殖、分化的影响。方法：采用噻唑盐比色测定（ＭＴＴ）、酶动力学方法和放射免疫技术。结果：在较低浓度ＬＰＳ作用时,可协同增加ｒｈＯＰ－１对牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶（ＡＬＰａｓｅ）活性,但对骨钙素（ＢＧＰ）无明显影响,而高浓度ＬＰＳ则起抑制作用。结论：提示适度的ＬＰＳ在牙髓对龋病的防御反应过程中起着一定调节作用。     

内毒素脂多糖促进人牙髓成纤维细胞凋亡及其对caspase-3活性的影响

目的观察内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对体外培养的人牙髓成纤维细胞的致凋亡作用及其对凋亡相关的半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性的影响。方法不同浓度(0μg、100μg、200μg、400μg/mL)的LPS作用细胞,采用噻唑蓝比色法检测LPS对细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;化学比色法检测细胞凋亡过程中caspase-3活性的变化。结果不同浓度LPS组细胞的生长与对照组相比均受到显著的抑制(P<0.01),细胞增殖抑制率呈剂量依赖关系;Hoechst33258荧光染色显示,给药组部分细胞呈典型的凋亡表现;流式细胞术检测结果显示,不同浓度的LPS作用细胞48h,细胞的凋亡率分别为9.2%,23.8%,31.4%;caspase-3活性检测显示,其活性呈剂量依赖性增高,LPS浓度达到400μg/mL时,其活性为对照组的3.4倍。结论LPS可显著地抑制人牙髓成纤维细胞增殖、诱导细胞凋亡、升高caspase-3活性,并呈明显的量效关系。     

细胞外基质磷酸化糖蛋白在人牙髓细胞成牙本质分化中的表达

义(P<0.05).蛋白质印迹法检测显示各矿化标记的蛋白表达均较对照组上调.结论 在hDPC诱导成牙本质分化的过程中,MEPE与DSPP、DSP、BSP、Ⅰ型胶原呈现相似的表达变化趋势,提示MEPE与hDPC的成牙本质分化有关,可作为hDPC向成牙本质样细胞分化的标志.     

MEPE基因沉默对人牙髓细胞增殖与成牙本质分化的作用研究

目的：研究细胞外基质磷酸化糖蛋白（Matrix Extracellular Phosphoglycoprotein,MEPE）基因沉默对人牙髓细胞（Human Dental Pulp Cells,hDPCs）增殖和成牙本质分化能力的影响,探讨其在牙髓损伤修复中的功能.方法：酶消化组织块法分离培养hDPCs,以lipo2000介导siRNA-hMEPE转染hDPCs,以阴性对照组和未转染组设为对照,l、3、5、7d后,CCK-8法检测细胞增殖情况;转染hDPCs后以矿化诱导液培养5、7、10d后,实时荧光定量RT-PCR检测骨涎蛋白（bone sialoprotein,BSP）、牙本质涎磷蛋白（Dentin Sialophos-phoprotein,DSPP）、骨钙蛋白（osteocalcin,OCN）、Collagen I mRNA表达水平.结果：CCK-8结果显示Si-h-MEPE转染hDPCsld后OD值下降,3d时到达最低值,且均低于未转染组与阴性对照组,3d时差异有统计学差异（P＜0.05）,未转染组与阴性对照组中,OD值持续升高,7d时到达峰值,与各自组内其他时间点比较有统计学差异（P＜0.05）;ALP活性检测结果显示,Si-h-MEPE转染hDPCs3d细胞OD值最低,且明显低于未转染组与阴性对照组（P＜0.05）,未转染组与阴性对照组hDPCsOD值呈现逐渐升高趋势,在7d时达到最大值（P＜0.05）.Si-h-MEPE转染hDPCs3d时BSP、DSPP、OCN、Collagen Ⅰ mRNA的表达量均较未转染组与阴性对照组下调（P＜0.05）.在未转染组中,BSP、DSPP、OCN、Collagen Ⅰ mRNA水平持续升高,在7d时达最高值,与3d比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：MEPE基因瞬时沉默抑制hDPCs增殖、使BSP、DSPP、OCN、Collagen Ⅰ基因表达下调,ALP活性降低,与未转染组与阴性对照组比较结果提示MEPE可能通过调控hDPCs的增殖和成牙本质分化能力,在牙髓损伤修复中发挥重要作用.     

牙本质黏结剂诱导人牙髓细胞凋亡的体外研究

目的:比较不同固化时间牙本质黏结剂对牙髓细胞凋亡的诱导作用。方法:体外培养人牙髓细胞,与黏结剂模型共同孵育24h,经PI染色,采用流式细胞记数仪检测凋亡细胞数目。结果:经t检验,与对照组比较,光照0s、10s和20s对牙髓细胞凋亡都有不同程度的影响(P<0.05),光照时间延长可减少对牙髓细胞凋亡的诱导。结论:牙本质黏结剂可诱导牙髓细胞凋亡,适当延长固化时间可以减轻黏结剂对牙髓的刺激。     

p38β在矿化诱导液诱导的人牙髓细胞成牙本质向分化中的作用

目的研究p38β丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)对矿化诱导液诱导的人牙髓细胞(h DPC)成牙本质向分化的影响。方法体外培养hDPC,Western blot检测hDPC矿化诱导0、3、7、14 d后p38β蛋白表达情况;构建3条慢病毒载体p38β鄄shRNA并分别转染hDPC,Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测p38β蛋白及基因表达;设立空白对照组、矿化诱导(OM)组、OM+空载体(NC)组、OM+sh鄄p38β组共4组。成牙本质向矿化诱导1、7、14 d,实时荧光定量PCR检测成牙本质向分化指标牙本质涎磷蛋白(DSPP)、碱性磷酸酶(ALP)的基因表达;Western blot检测成牙本质向分化指标DSPP蛋白的表达;成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节的形成情况。结果 Western blot结果表明正常牙髓组织中存在p38β蛋白;成功构建p38β稳定低表达的hDPCs(实时荧光定量PCR显示三条序列干扰效率分别为55.4%、68.3%、54.2%);实时荧光定量PCR显示沉默p38β的hDPCs经矿化诱导后,成牙本质向分化指标DSPP、ALP基因表达水平显著降低,Western blot结果显示成牙本质向分化指标DSPP蛋白表达水平显著降低;茜素红染色结果显示,矿化诱导+sh鄄p38β组与空白对照组较另外两组的矿化结节数量明显减少。结论 p38β在OM诱导的h DPC成牙本质向分化中发挥作用。     

牙髓干细胞分化为成牙本质细胞相关标记物的研究进展

体外诱导牙髓干细胞分化为成牙夺贡细胞，检测牙本质涎磷蛋白、碱性磷酸酶活性等相关标记物的变化，从而鉴定其分化能力，是近年来在牙髓干细胞领域中研究的热点。本文就上述标记物的研究进展进行综述。     

脂多糖诱导牙髓细胞DNA双链断裂的研究

目的:探讨低剂量条件下脂多糖诱导牙髓细胞DNA损伤方法,为研究脂多糖诱导牙髓细胞DNA双链断裂及DNA修复提供实验模型。方法:10 μg/L脂多糖连续刺激牙髓细胞1、3、6次后,采取MTT及TUNEL分别检测其对牙髓细胞增殖及凋亡的作用;采用q-PCR及免疫印迹检测γ-H2A.X的mRNA及蛋白水平的表达;使用免疫荧光及免疫组化法观测γ-H2A.X在体内、外牙髓细胞的表达。结果:与对照组相比,10 μg/L脂多糖连续刺激对牙髓细胞增殖及凋亡均无显著性差异;脂多糖连续刺激6次后细胞免疫荧光显示在细胞核检测到γ-H2A.X的阳性表达,且蛋白及mRNA水平的表达较对照组有显著性增加(P<0.05);免疫组化结果表明在脂多糖诱导4、6、8 d后,γ-H2A.X在大鼠牙髓组织较对照组表达水平显著升高(P<0.05)。结论:低剂量脂多糖连续刺激可诱导牙髓细胞产生DNA双链断裂。     

人牙髓细胞向成牙本质细胞分化的蛋白质组学研究

目的 采用蛋白质组学方法分析人牙髓细胞向成牙本质细胞分化过程中细胞蛋白表达谱的改变,揭示特征蛋白在分化过程中所起的作用.方法对人牙髓细胞进行矿化诱导,提取诱导前后细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质,DeCyder V6.0软件确定差异蛋白点,质谱鉴定差异蛋白质.结果双向电泳确认46个差异蛋白质斑点,质谱鉴定20个蛋白斑点,差异蛋白质涉及细胞周期调节、能量代谢、信号传导等细胞生物学过程.结论蛋白质组学技术可高通量筛选与人牙髓细胞向成牙本质细胞分化相关的功能蛋白.     

人牙髓干细胞向成牙本质细胞分化的诱导及鉴定

牙髓干细胞向成牙本质细胞的分化受多种细胞分化信号的调控。其中 ,骨形成蛋白、β-甘油磷酸钠、抗坏血酸、多种生长因子被认为在诱导其分化中起关键作用 ;而碱性磷酸酶、牙本质涎磷蛋白和牙本质基质蛋白 - 1常被用作鉴定其分化的特异性指标     

矿化液诱导人前磨牙牙髓干细胞向成骨细胞样细胞的分化

目的:探讨矿化液诱导人前磨牙牙髓干细胞(HDPSCs)向成骨细胞样细胞分化的潜力.方法:矿化液诱导前磨牙HDPSCs 28d,于诱导的第7、28天时,应用酶化学染色检测碱性磷酸酶(ALP)表达;第14、21、28天时,应用茜素红染色观察细胞矿化情况;于诱导的第0、3、5、7、14、21、28天时,采用RT-PCR法检测其ALP、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨涎蛋白(BSP)和骨钙素(OCN)的基因表达;Western印迹分析、免疫细胞化学染色检测BSP及OCN蛋白的表达.结果:经矿化液诱导后,前磨牙HDPSCs ALP染色阳性,形成钙结节.诱导第3天,细胞ALP mRNA呈高表达;DSPP始终不表达;BSP、OCN mRNA于第5天开始表达,并随时间延长而表达增高;BSP蛋白表达趋势与其RT-PCR结果一致;第5天时OCN染色阳性.结论:前磨牙牙髓干细胞具有向成骨细胞样细胞分化的潜能,有望成为骨组织工程的种子细胞.     

牙髓干细胞分化为成牙本质细胞相关标记物的研究进展

体外诱导牙髓干细胞分化为成牙本质细胞,检测牙本质涎磷蛋白、碱性磷酸酶活性等相关标记物的变化,从而鉴定其分化能力,是近年来在牙髓干细胞领域中研究的热点。本文就上述标记物的研究进展进行综述。     

牙本质粘结剂对人牙髓细胞毒性的体外研究

目的：评价全酸蚀牙本质粘结剂和自酸蚀牙本质粘结剂对人牙髓细胞的毒性作用.方法：用人牙髓细胞为实验细胞,采用MTT比色分析法,对4 种牙本质粘结剂（Prime ＆ Bond NT,Single Bond,Xeno Ⅲ,iBond）进行体外细胞毒性研究.结果：不同浓度的粘结剂稀释液均可使人牙髓细胞的形态有所改变.4 种牙本质粘结剂的细胞毒性有显著性差异,且作用时间和浓度的改变对其细胞毒性有影响.全酸蚀粘结剂比自酸蚀粘结剂的细胞毒性强.结论：4 种牙本质粘结剂在体外对人牙髓细胞均有一定程度的细胞毒性,其中Single Bond的毒性较强,临床使用粘结剂时应合理选择粘结剂和掌握固化时间.     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓细胞生物学活性的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对体外培养的人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPCs)生物学活性的影响.方法:常规组织块培养法获得HDPCs,采用四唑盐比色(MTT)法、ALP活性检测法观察不同浓度bFGF(0.1、1、10、100 μg/L)对体外培养的HDPC粘附性、伸展性以及ALP活性的影响.结果:不同浓度bFGF均可提高HDPCs粘附性和伸展性,与对照组相比P＜0.05;不同浓度bFGF与HDPCs共同培养一定时间后,均能显著抑制其ALP活性(P＜0.05);并且浓度越高,抑制作用出现的时间越早,100 μg/L组在培养第1天时与对照组相比P＜0.05.结论:0.1 ～ 100 μg/L范围内不同浓度bFGF均能促进HDPCs的粘附性和伸展性,并可抑制HDPCs的ALP活性.