脑损伤大鼠脑组织EB含量与Claudin-5表达的分析

目的研究黄芪对创伤性脑损伤后脑EB含量和紧密连接相关蛋白claudin-5表达的影响。方法采用自由落体致伤原理制成大鼠脑损伤模型,伊文思蓝法检测BBB通透性,Western blot法检测Claudin-5的表达。结果脑损伤模型组及黄芪组BBB通透性于脑损伤后明显增加,同时黄芪组BBB通透性低于脑损伤模型组;Claudin-5的表达在脑损伤模型组和黄芪组于伤后明显减少,黄芪组的表达明显高于脑损伤模型组(P<0.01)。结论调节紧密连接相关蛋白Claudin-5的表达,进而调节BBB的通透性可能是黄芪抑制脑水肿形成的途径之一。     

小牛血清去蛋白注射液对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的影响及机制分析

目的:探讨小牛血清去蛋白注射液(DCSI)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的影响及其可能机制。方法:76只SD大鼠随机分为假手术组(SH)、模型组和DCSI高、低剂量组(DCSI-H、DCSI-L组:60、30mg·kg-1)4组,每组19只,给予相应药物10d后,后3组采用血管内栓线阻断法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。于脑缺血2h再灌注24h后测定各组大鼠脑组织水含量、伊文思蓝(EB)含量,电镜观察血脑屏障超微结构的改变,并用Westernblot法观察大鼠脑组织细胞间黏附分子(ICAM)-1、基质金属蛋白(MMP)-9的蛋白表达情况。结果:与模型组比较,DCSI组脑组织水含量、EB含量、ICAM-1和MMP-9的蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01);血脑屏障的破坏程度明显减轻。结论:DCSI可能通过降低ICAM-1、MMP-9的蛋白表达发挥其血脑屏障的保护作用。     

大鼠放射性脑损伤所致血脑屏障通透性改变与EBA 及 VEGF 表达的相关性研究

摘要： 目的 探究脑皮质内皮屏障抗原 （EBA） 及血管内皮生长因子 （VEGF） 在放射性血脑屏障损害条件下的动态变化规律, 为临床提供参考。方法 使用随机数字表法将 48 只清洁级雄性 SD 大鼠分为对照组和放射性脑损伤后 7、 14 和 28 d 4 组, 每组 12 只。采用 X 线电子计算机断层扫描设备制备大鼠放射性脑损伤模型。大鼠按照 3 mL/kg的剂量尾静脉注射 3%伊文思蓝 （EB）, 开颅并暴露脑皮质血管, 放于微循环显微镜下观察 EB 渗出情况, 并借助微循环显微成像系统评估血脑屏障通透性; 使用免疫组化染色的方法来检测各组大鼠脑皮质 EBA 和 VEGF 的表达。结果 与对照组相比, 损伤组大鼠脑皮质微血管 EB 外渗量和 VEGF 的表达水平于伤后 7、 14、 28 d 均有不同程度升高（均 P＜0.05）, 从伤后 7 d 至 28 d 逐渐降低, 损伤各亚组之间差异均有统计学意义（均 P＜0.05）, 二者呈正相关（r=0.898, P < 0.001）; EBA 表达水平于伤后各个时间点均下降 （均 P＜0.05）, 从伤后 7 d 至 28 d 逐渐升高, 损伤各亚组之间差异均有统计学意义 （均 P＜0.05）, 与 EB 外渗量呈负相关 （r=-0.866, P < 0.001）。结论 大鼠放射性脑损伤后血脑屏障通透性增加与 EBA 表达减少、 VEGF 表达增加具有重要关联性。     

齐墩果酸通过VEGF-Src通路对蛛网膜下腔出血大鼠模型血管内皮紧密连接表达的影响

目的探讨齐墩果酸对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用,阐释其可能的机制。方法 54只成年雄性SD大鼠分成3组(假手术组、SAH模型组、齐墩果酸给药组),每组18只。采用颈内动脉穿刺法建立大鼠SAH模型,造模1 h后给药,24 h后进行神经功能损伤评分;检测脑水含量及脑伊文思蓝浸出;并利用Western blot方法检测脑组织Src、VEGF、ZO-1、Claudin-5、Occludin蛋白的表达量。结果齐墩果酸高剂量给药可有效改善神经功能损伤(P<0.01);降低脑组织含水量和脑血管通透性(P<0.01);增加ZO-1、Claudin-5、Occludin蛋白的表达,降低VEGF水平,抑制Src激活(P<0.05)。结论齐墩果酸对SAH后早期脑损伤有显著的保护作用,可改善脑水肿,其作用机制可能与增加脑组织紧密连接蛋白的表达有关。     

纳米氧化铝对小鼠血脑屏障通透性的影响

目的探讨纳米氧化铝颗粒对小鼠血脑屏障通透性的影响。方法 3月龄ICR小鼠用滴鼻法染毒,为了比较纳米铝作用的颗粒毒性和化学毒性,将小鼠分为对照组、微米铝组、纳米碳组、纳米铝组和铝离子组;为了比较纳米铝作用的剂量-效应关系,将小鼠分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。每只小鼠每次染毒10μl,3次/d,实验时间为30 d。染毒结束后,用硝酸镧染色法检测血脑屏障通透性;用免疫荧光法检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin蛋白表达;用western blot法检测ZO-1,Claudin-5蛋白表达。结果硝酸镧染色结果表明,对照组的硝酸镧颗粒聚集在毛细血管中央,未见对血管内皮的穿透;微米铝组和纳米碳组有部分高电子密度的硝酸镧颗粒位于毛细血管内壁中央,显示血脑屏障的通透性增高;纳米铝和铝离子组有大量硝酸镧颗粒位于血管内壁中央,形成致密的黑色条带,显示血脑屏障受损和通透性增高。免疫荧光法检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin蛋白表达和western blot法检测ZO-1,Claudin-5蛋白表达结果表明,紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表达在对照组均为高表达,微米铝和纳米碳组表达下调(P<0.0001),纳米铝和铝离子组的表达量最低(P<0.0001)。且这种紧密连接蛋白表达的降低与纳米铝的染毒剂量间有剂量-反应关系(P<0.0001)。结论纳米氧化铝可以降低血脑屏障通透性,这种作用表现为纳米的颗粒作用和铝化学毒性作用的相加。其发生机制与紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表达降低有关。     

卡托普利对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性及MMP-9表达的影响

目的观察血管紧张素转化酶抑制药卡托普利对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,并探讨其机制。方法采用血管内栓线阻断法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,于脑缺血2h、再灌注24h后测定脑组织含水量、伊文斯蓝(EB)含量,放射免疫方法测定血浆中血管紧张素Ⅱ的含量,免疫组织化学方法测定MMP-9表达。结果研究发现,脑缺血2h、再灌注24h,缺血再灌组大鼠脑组织含水量及EB含量明显增加,MMP-9呈现高表达。而卡托普利组脑组织含水量、EB含量及MMP-9表达明显低于脑缺血再灌注组(P<0.05)。结论卡托普利通过减少血管紧张素Ⅱ的生成从而降低脑缺血再灌注大鼠基质金属蛋白酶-9的活性及血脑屏障通透性,发挥对脑缺血再灌注损伤的保护作用。     

槲皮素对缺血性脑卒中大鼠血脑屏障的保护作用

目的探讨槲皮素对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用及相关机制的研究。方法 Wistar大鼠90只,随机等分为5组,每组18只,分别为假手术组、模型组、低剂量槲皮素(10 mg·kg~(-1))治疗组、中剂量槲皮素(10 mg·kg~(-1))治疗组、高剂量槲皮素(100 mg·kg~(-1))治疗组。采用TTC染色法检测各组大鼠脑组织梗死体积、干湿重法比较各组大鼠脑组织含水量、分光光度计法检测各组大鼠脑组织伊文氏蓝含量,并使用免疫印记法分别检测各组大鼠脑组织闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-5(Claudin-5)、闭锁连接蛋白-1(ZO-1)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死体积、含水量、神经功能损伤程度、血脑屏障通透性显著增高(P<0.05);与模型组相比,槲皮素治疗组的脑梗塞体积、神经功能缺损程度、脑含水量、血脑屏障通透性均比对照组明显降低(P<0.05)。免疫印迹结果发现,与假手术组相比,模型组血脑屏障相关蛋白表达显著下降(P<0.05);与模型组相比,槲皮素治疗组的闭合蛋白、紧密连接蛋白-5、ZO-1及HO-1蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论槲皮素能够上调闭合蛋白、紧密连接蛋白-5、ZO-1蛋白的表达,对脑缺血再灌注大鼠的血脑屏障具有保护作用,并且槲皮素可以上调HO-1蛋白的表达,通过氧化应激反应起到保护血脑屏障的作用。     

黄芪甲苷在多发性硬化症模型动物中的保护作用及机制研究

摘要：目的:研究黄芪甲苷（ASI）对多发性硬化症（MS）模型实验性自身免疫脑脊髓炎（EAE）动物的保护作用及机制研究。方法:将C57BL/6小鼠随机分为4组：正常对照组、模型组、ASI组(20 mg·kg-1)和阳性对照组(甲泼尼龙琥珀酸钠,20 mg·kg-1),每组10只。采用雌性C57BL小鼠建立EAE模型,观察ASI对EAE小鼠神经行为学评分及体质量变化的影响。用LC-MS/MS液质联用法检测小鼠大脑中ASI含量,实时定量PCR检测紧密连接分子闭锁连接蛋白-1（ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）、密封蛋白-5（Claudin-5）、封闭蛋白-12（Claudin-12）mRNA表达,Western-blot检测紧密连接分子ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达,苏木素-伊红（HE）染色和固蓝（LFB）染色方法对小鼠脊髓组织病理分析。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠神经行为学评分明显升高,体质量明显降低,紧密连接分子ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达明显下调,ASI单次入脑量明显增加（P<0.05或P<0.01）,有脊髓组织炎症浸润和脱髓鞘发生,各紧密连接分子mRNA差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组比较,ASI组能够抑制EAE小鼠神经行为学评分升高和体质量下降,减少脊髓炎症浸润和脱髓鞘发生,提高皮层紧密连接分子ZO-1、Occludin、Claudin-5 mRNA及蛋白表达（P<0.05或P<0.01）,Claudin-12 mRNA差异无统计学意义（P>0.05）。结论:ASI能够抑制多发性硬化症模型EAE动物疾病进程,其作用可能是透过血脑屏障进入脑组织中ASI含量增加,诱导皮层紧密连接分子ZO-1、Occludin、Claudin-5基因表达上调,降低血脑屏障通透性,对中枢神经系统稳定起到保护作用,从而抑制疾病发展。     

天麻素对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用研究

目的 探讨天麻素(Gastrodine,Gas)对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及机制.方法 线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血2h后再灌注.天麻素(5,10,20 mg/kg)再灌注同时腹腔给药,再灌注后24 h,测定大鼠神经功能缺失评分和脑梗死体积,伊文思蓝法观察血脑屏障破坏程度,Western blot检测梗死半暗带皮层组织炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白表达.结果 天麻素(10,20 mg/kg)能改善大鼠脑缺血后神经功能缺失,减小脑梗死体积,降低血脑屏障的通透性.天麻素(20 mg/kg)对梗死半暗带皮层组织TNF-α表达的抑制率为24％,对IL-1β表达的抑制率为34％,对IL-6表达水平的抑制率为38％.结论 天麻素可降低血脑屏障的通透性,其通过减低炎症反应而对局灶性脑缺血损伤发挥保护作用.     

Effect of Nimodipine on Cerebral Edema of Rats with Diffuse Axonal Injury

目的:评价尼莫地平对弥漫性轴索损伤(DAI)大鼠脑水肿的影响.方法:将200只Wistar大鼠随机分为DAI组和治疗组,建立DAI模型后治疗组给予尼奠地平注射液腹腔注射,剂量为0.5 mg/(kg·d),分别于伤前和伤后6h、1d、3d、7d通过检测脑组织含水量反映脑水肿情况,通过观察伊文蓝(EB)含量反映血脑屏障通透性变化.结果:DAI后脑组织含水量和脑组织EB含量峰值分别出现在伤后1d和3d,2组内不同时间点脑组织水含量和脑EB含量差异有统计学意义(均P＜0.001),伤后6h和1d、3d时尼莫地平治疗组脑组织水含量明显低于DAI组(P＜0.05或P＜0.01),伤后6h和1d、3d、7d尼莫地平治疗组脑EB含量明显低于DAI组(均P＜0.01).结论:尼莫地平可以有效控制DAI大鼠的血脑屏障通透性,减轻脑水肿.     

尼莫地平对弥散性轴索损伤大鼠血脑屏障通透性的影响研究

目的:研究尼莫地平对弥散性轴索损伤(DAI)大鼠血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法:取大鼠随机分为DAI组和尼莫地平组,每组40只,2组大鼠建立DAI后,尼莫地平组腹腔注射给药0.5mg·kg-1·d-1,分别于建模前和建模后0.25、1、3、7d检测脑组织含水量和伊文蓝(EB)含量以考察脑水肿情况和BBB通透性变化。结果:DAI后,2组大鼠脑组织含水量和EB含量均呈先升高后降低的趋势,峰值分别出现在建模后1d和3d;与DAI组比较,尼莫地平组脑组织含水量和EB含量的峰值均明显降低(P<0.05)。结论:尼莫地平可以有效减轻DAI后脑水肿情况,降低BBB的通透性。     

EMP-induced alterations of tight junction protein expression and disruption of the blood–brain barrier

The blood–brain barrier (BBB) is critical to maintain cerebral homeostasis. In this study, we examined the effects of exposure to electromagnetic pulse (EMP) on the functional integrity of BBB and, on the localization and expression of tight junction (TJ) proteins (occludin and ZO-1) in rats. Animals were sham or whole-body exposed to EMP at 200 kV/m for 400 pulses. The permeability of BBB in rat cerebral cortex was examined by using Evans Blue (EB) and lanthanum nitrate as vascular tracers. The localization and expression of TJ proteins were assessed by western blot and immunofluorescence analysis, respectively. The data indicated that EMP exposure caused: (i) increased permeability of BBB, and (ii) altered localization as well as decreased levels of TJ protein ZO-1. These results suggested that the alteration of ZO-1 may play an important role in the disruption of tight junctions, which may lead to dysfunction of BBB after EMP exposure.     

己美舒利对大鼠脑损伤后脑水肿及髓过氧化物酶、金属蛋白酶-2的影响

目的阐明环氧化酶-2（cox-2）抑制剂尼美舒利对大鼠创伤性脑损伤的影响与机制。方法健康雄性SD大鼠40只,随机分为4组：对照组、尼美舒利组【6mg／（kg·d）1、创伤组、创伤＋尼美舒利组f6mg／（kg·d）1。利用300g,／m的自由落体重力打击装置创建SD大鼠创伤性脑损伤模型,创伤后24h进行神经功能评分,随后处死动物并断头取脑组织。脑水肿及血脑屏障通透性分别以干湿重称重法及伊文思蓝染色测定,测量脑组织中髓过氧化物酶（MPO）及金属蛋白酶-2（MMP-2）的含量以及病理组织形态学观察。结果创伤组脑组织含水量及EB含量比对照组明显增加（P〈0．05）,创伤＋尼美舒利组脑组织含水量及EB含量比创伤组明显减少（P〈0．01）。创伤＋尼美舒利组脑组织MMP-2、MPO表达比创伤组减少,MPO蛋白表达与MMP-2蛋白表达呈正相关。结论在创伤性脑损伤大鼠模型中,尼美舒利通过保持血脑屏障完整性,抑制MPO、MMP-2的过度表达（可能通过其抗炎能力）而发挥其神经保护作用。     

尼莫地平对弥漫性轴索损伤大鼠脑水肿的影响

【摘要】 目的：评价尼莫地平对弥漫性轴索损伤（DAI）大鼠脑水肿的影响。 方法：将100只Wistar大鼠随机分为DAI组和治疗组,治疗组于造模后给予尼莫地平注射液腹腔注射,剂量为0.5mg/kg体重/d,分别于伤前和伤后6h、1d、3d、7d通过检测脑组织含水量反应脑水肿情况,通过观察伊文蓝（EB）含量反应BBB通透性变化。结果：DAI后脑组织含水量和脑组织EB含量呈先升高后下降的趋势,峰值分别出现在伤后1d和3d,DAI组和尼莫地平治疗组不同时间的变化趋势比较差异有统计学意义（P<0.05),2组峰值比较差异有统计学意义（P<0.05),尼莫地平治疗组较低。结论：使用尼莫地平可以有效控制弥漫性轴索损伤大鼠的血脑屏障通透性,减轻脑水肿。     

益艾康胶囊对IFN-γ损伤肠黏膜屏障的紧密连接及相关蛋白Claudin-1、Claudin-5表达的影响

目的：通过研究益艾康胶囊对IFN-γ损伤肠黏膜屏障模型的紧密连接结构及紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-5表达的影响，揭示益艾康胶囊对HIV/AIDS肠黏膜屏障损伤的保护作用机制。方法：利用人结肠癌细胞株Caco-2联合Transwell技术构建肠黏膜屏障模型，IFN-γ刺激肠黏膜屏障模型模拟体内HIV损伤肠黏膜的病理过程。本实验设置空白对照组（空白鼠血清）、模型组（IFN-γ组）、益艾康胶囊组（IFN-γ+益艾康胶囊含药血清）、姜黄素组（IFN-γ+姜黄素），检测24 h、48 h、72 h跨细胞膜电阻抗值、荧光素钠透过率、紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-5mRNA及蛋白的变化情况。结果：与空白对照组相比，模型组的跨膜电阻值，降低明显（P<0.05），随干预时间呈下降趋势。与模型组相比，益艾康胶囊组在不同时间点均能提高Caco-2细胞单层电阻值，且数值高于同等条件下的姜黄素组；在模型组中，荧光素钠的渗漏量随干预时间增加而增加，48 h后明显降低。与模型组相比，益艾康胶囊组与姜黄素组荧光素钠的渗漏量均明显降低（P<0.05），但2组之间不存在统计学差异；与空白对照组相比，IFN-γ诱导Caco-2细胞单层Claudin-1、Claudin-5mRNA及蛋白表达下降（P<0.05），与模型组相比益艾康胶囊组Claudin-1、Claudin-5 mRNA及蛋白的表达上调（P<0.05）。结论：益艾康胶囊能降低IFN-γ引起的肠黏膜屏障的通透性，维持肠黏膜屏障的完整性，其机制与抑制紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-5的表达下降从而维持正常的紧密连接相关。     

法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响

目的：观察法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响,探讨其抗炎机制。方法：大脑中动脉线栓法（MCAO）制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血1.5h再灌注24h。法舒地尔术前腹腔注射给药15mg/kg,术后12h再次给药。术后对大鼠神经功能进行评分,TTC染色观察脑梗死体积;用干湿重法测定脑含水量;分光光度法测定髓过氧化物酶（MPO）活性;伊文思兰法（EB）测定血脑屏障的损伤程度;免疫组化检测大鼠脑缺血区细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）、NF-κB p65的表达;ELISA法检测IL-8的含量;Western blot法检测单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和核抽提物中NF-κBp65蛋白的表达;RT-PCR检测NF-κB p65mRNA的表达。结果：法舒地尔能明显改善脑缺血再灌注损伤大鼠神经缺陷症状,缩小脑梗死体积,明显降低缺血侧脑组织的含水量、EB含量及MPO活性;显著抑制ICAM-1、VCAM-1、IL-8和MCP-1蛋白的表达;降低NF-κB p65mRNA和蛋白的表达;减少脑组织核抽提物中NF-κB p65的蛋白量（P〈0.05vsMCAO组）。结论：法舒地尔通过抑制NF-κBp65的活化,进而抑制黏附分子及趋化因子的表达,减轻脑缺血再灌注损伤的炎症反应。     

全颅常规外照射对大鼠血脑屏障通透性的影响及相关机制研究

目的探讨全颅常规外照射增加大鼠血脑屏障药物通透性的产生机制,为临床对颅内肿瘤寻找合适的化疗时机提供理论依据。方法 60只正常成年Wistar大鼠随机分为5组,分别采用0、10、20、30、40Gy,^60Coγ射线进行全脑常规分割外照射,2Gy/次、1野/次,5次/周。各组完成照射计划后16h经尾静脉注射氨甲喋呤（MTX）25mg/kg,2h后采集脑脊液,用RP-HPLC法检测其中的MTX浓度。之后所有大鼠均断头取脑,40g/L中性甲醛固定24h,石蜡包埋,采用免疫组化法检测各组大鼠血脑屏障上P-gp的表达情况。结果对照组P-gp阳性表达最强,10Gy组与对照组,20Gy与30Gy组,40Gy组分别与20Gy、30Gy组比较无统计学意义（P〉0.05）,其余各组比较均有统计学意义（P〈0.05）。各组大鼠脑脊液中的MTX平均浓度分别为：0.06、0.08、0.19、0.24、0.23mg/L。经方差分析及秩和检验,10Gy组与对照组,20Gy与30Gy组,40Gy组分别与20Gy、30Gy组比较无统计学意义（P〉0.05）,其余各组比较均有统计学意义（P〈0.05）。结论一定剂量的放射线可能通过降低血脑屏障上P-gp的表达,增加其对药物的通透性,并且在放射剂量达到20Gy的时候化疗效果最好。