苦参碱诱导K562细胞凋亡相关基因bcl-6表达上调

0　引言　自 2 0世纪 80年代即发现苦参碱具有抗鼠肿瘤的活性[1 ] .最近 ,有人发现它能抑制人红白血病 K5 6 2细胞增殖 [2 ] ,未见有关引起细胞凋亡及其机制的报道 .我们研究发现 ,苦参碱可诱导 K5 6 2细胞凋亡相关基因 bcl- 6表达上调、增殖细胞核抗原 (PCNA)表达受抑 .1　材料和方法1.1　细胞培养　人红白血病细胞株 K5 6 2接种于含 10 0m L· L- 1胎牛血清的 RPMI16 40培养液中 ,置于 37℃、饱和湿度、5 0 m L·L- 1 CO2 孵箱内培养 ,3d换液、传代 1次 .1.2　药品和试剂　苦参碱 (matrine)购自西安市天其植物化学药品公司 (纯度 >…     

青蒿琥酯对K562细胞bcl-2基因表达的影响

【目的】研究青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡过程中bcl-2表达的改变。【方法】培养K562细胞,倒置光显微镜和荧光显微镜观察青蒿琥酯处理的K562细胞形态,RT-PCR检测bcl-2的表达。【结果】K562细胞经青蒿琥酯处理48h后,倒置光显微镜：细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降,细胞出现发泡现象,细胞内可见多个折光性较强的圆形小泡样结构。荧光显微镜：染色质高度浓缩、边缘化,凝集成明亮的团块。RT-PCR显示青蒿琥酯处理的K562细胞的bcl-2的表达下调。【结论】青蒿琥酯抑制K562细胞生长的机制可能与bcl-2基因的表达下调有关。     

苦参碱诱导K562细胞分化的差异表达基因的研究

目的研究苦参碱诱导人红白血病K562细胞分化的分子机制。方法应用改良的mRNA差异显示逆转技术(DDRT—PCR)筛选苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因；对差异cDNA片段纯化、克隆、测序及Blast分析，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法验证。进一步对其中的未知差异cDNA片段采用Northern杂交确定其转录本的大小及组织分布特性，进而充分利用多种生物信息学资源对差异片段进行结构和功能的预测。结果苦参碱诱导K562细胞前后存在明显的基因表达差异，筛选获得了17条差异条带。其中4个差异显著片段经RT—PCR验证后，在Genbank中分析，有3个为已知基因，1个可能为未知基因，暂命名为KH基因。Northern杂交证实KH基因转录本的大小为1．35kb，分布于正常人体脑组织中。结论苦参碱具有诱导K562细胞基因表达谱发生变化的作用，由苦参碱诱导的K562细胞分化是一个多基因参与的过程；KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的未知基因，可能与细胞癌变有关。     

高三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡中bcl-2家族基因的表达

目的探讨在高三尖杉酯碱(HHT)诱导K562细胞凋亡时,bcl-2家族部分基因在mRNA水平表达的改变.方法细胞形态(光镜和电镜)、DNA凝胶电泳、流式细胞仪等方法证实凋亡,进一步用RT-PCR方法研究凋亡过程中bcl-2家族中部分基因表达的改变. 结果超过一定"阈浓度”HHT可诱导K562细胞凋亡;RT-PCR方法发现bax基因和bfl-1基因在加药6h开始上调,家族其它基因bcl-2、bcl-xL的表达未见明显改变.结论 HHT可诱导K562细胞凋亡;其机制可能与HHT在mRNA水平上调bax基因有关;而bfl-1基因的上调可能是K562细胞抗HHT诱导其进一步凋亡的原因.     

K562细胞的诱导分化与表型

Ｋ＿５６２细胞的诱导分化与表型临床生化教研室泰建平综述蒋纪恺，王霞文审校中图分类号Ｒ７３３．７目前对于白血病的治疗主要是用化疗、骨髓移植等，但疗效都不能令人满意。因此，探讨新的治疗途径显得十分必要而迫切。自从ＬｅｏＳａｃｈｓ于１９７８年报告恶性肿瘤细...     

裸鼠高致瘤性K562—n细胞系细胞骨架相关基因的表达变化研究

目的 探索K562和K562－n细胞在裸鼠体内致瘤性不同的分子生物学机制。方法 应用基因芯片技术，检测K562细胞和K562－n细胞的差异表达基因。结果 一系列与细胞骨架有关的基因在K562－n细胞中表达上调，包括编码calaizzarin、ADP糖基化蛋白2、巨噬细胞肌动蛋白基因、硫酸乙酰肝素蛋白多糖核心蛋白基因。结论 K562－n细胞的裸鼠高致瘤特性与一些细胞骨架相关基因的表达上调有关。     

维生素K2对K562细胞生长抑制作用的实验研究

目的:研究维生素K2(VK2)对慢性粒细胞白血病急性变细胞株K562细胞的生长抑制作用及其机制。方法:采用形态学检测VK2作用后的细胞形态改变,MTT方法检测VK2对K562细胞的生长抑制作用,流式细胞仪Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡,PI染色分析细胞周期变化,RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、促凋亡基因bax的表达。结果:经VK2作用后细胞出现明显的形态学改变:细胞变小,核固缩,核染色质聚集边挤于核膜内侧呈新月形以及典型凋亡小体形成等;MTT结果显示VK2对K562细胞有明显的抑制作用,作用72 h半数抑制浓度为25.1μmol.L-1;流式细胞仪检测结果显示随着VK2浓度的增加凋亡率逐渐增高(P<0.05),随着作用时间的延长凋亡率也逐渐增高(P<0.05);VK2作用72 h,S期细胞逐渐减少(r=-0.99,P<0.05),G0/G1期细胞逐渐增加(r=1.00),细胞被阻滞在G0/G1期;随着VK2浓度的增高抗凋亡基因bcl-2表达明显下调,而促凋亡基因bax表达无明显差异。结论:VK2通过诱导K562细胞凋亡抑制其增殖,并呈浓度和时间依赖性;抗凋亡基因bcl-2下调可能是VK2诱导K562细胞发生凋亡的机制之一。     

cDNA表达点阵研究苦参碱诱导K562细胞凋亡基因表达的改变

1　材料和方法1.1　材料　 Atlas Human Apotosis Array kit (Clontech产品 )由美国加州希望城国家医学中心 Dr. L i惠赠 ,[α- 32 P]d ATP购自北京亚辉公司 ,苦参碱购自陕西天奇植物化学有限公司 ,K5 6 2细胞购自本校免疫学教研室 .1.2　方法　将生长状态良好细胞分为实验组和对照组 ,实验组用 0 .2 g· L- 1 苦参碱溶液处理 ,对照组细胞不做任何处理 ,3d换液 1次 .分别收集对照组及苦参碱作用 7d实验组细胞 ,提取总 RNA,紫外分光光度仪检测纯度、RNA甲醛变性凝胶电泳检测完整性后 ,冻存于 - 70℃备用 .按说明书富集两组总 RNA中…     

VP16对人类白血病细胞系K562细胞诱导分化作用的研究

目的 研究足叶乙甙（VP16）对K562细胞分化的诱导作用。方法 K562细胞在含0．4μg/mlVIP16的培养液中培养72h，观察K562细胞NBT还原能力和吞墨功能，以及细胞化学和超微结构的变化。结果 0．4μg/mlVP16可使K562细胞NBT还原能力和吞墨功能增强，细胞内过氧化物酶、糖原和α-萘酚酯酶含量增加，电镜下可见细胞体积变小，微绒毛和线粒体减少，核异染色质增加。结论 VP16诱导K562细胞向粒单细胞系分化。     

索拉非尼诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的：观察索拉非尼对BCR-ABL阳性细胞株K562的增殖、凋亡作用,探索多靶点抗肿瘤药物索拉非尼诱导K562细胞凋亡可能机制。方法： CCK-8法观察索拉非尼作用48小时后K562细胞增殖活力变化;AnnexinV/PI双染法索拉非尼对K562细胞株的早期凋亡诱导作用;PI单染法观察索拉非尼对K562细胞株晚期凋亡诱导作用。Hochest33342染色法观察索拉非尼所致K562细胞凋亡形态学变化。免疫印迹法（Western blotting）检测凋亡相关蛋白PARP变化。结果：索拉非尼以浓度依赖的方式抑制K562细胞株增殖、诱导细胞凋亡,凋亡相关蛋白PARP剪切。结论：PARP剪切为执行凋亡功能的casepase途径活化的一个标记,提示索拉非尼诱导K562细胞凋亡的机制同caspase级联反应活化有关,多靶点抗肿瘤药物索拉非尼用于治疗CML及伊马替尼耐药的CML具有潜在的应用前景。     

K562细胞红系诱导分化方法的实验研究

目的建立一种高效K562细胞红系诱导分化方法。方法比较不同方法对K562细胞红系诱导分化的效果,优化诱导剂成分组合和剂量组合,建立一种高效的红系诱导,鉴定指标选用细胞形态学、联苯胺染色阳性率计数及RT-PCR测定红系细胞标志物膜带3蛋白(band3)的表达。结果多因素协同诱导K562细胞红系分化120 h后,显微镜下观察细胞形态呈红系中、晚期特征,联苯胺染色阳性率可达(52.7±8.2)%,红系标志物band3在mRNA水平明显高于对照组(P<0.01)。结论多条信号途径协同参与K562细胞红系分化的过程,多因素共同诱导可显著提高K562细胞的红系分化。     

核糖体蛋白L6在K562/A02和K562细胞株中的表达差异

目的探讨核糖体蛋白L6（ribosomal proteinL6，RPL6）在急性髓细胞性白血病耐药细胞系K562／A02和敏感细胞系K562中的差异表达。方法分别从K562／A02和K562细胞中提取总RNA，以内参对照RT—PCR检测fuPL6基因表达。结果RPL6在飚62／A02细胞中的表达较K562高（P〈0．001）。结论在耐药细胞系K562／A02高表达RPL6可能与白血病耐药有关。     

苦参碱对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

目的：观察苦参碱对K562细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法：以K562细胞为实验对象,采用体外培养技术,通过细胞生长曲线、细胞形态、乳酸脱氢酶（LDH）活性测定方法观察苦参碱的作用。结果：浓度为0．2－0．3mg/ml的苦参碱对K562细胞有明显的增殖抑制与诱导分化作用,实验组细胞的数量,形态和生化代谢都发生了变化。结论：这一结果将对白血病的诱导分化治疗提供有力的实验依据。     

氢醌对 K562细胞着色性干皮病基因 D转录及表达的影响

目的：探讨苯代谢物氢醌（ HQ）对人白血病细胞株K562细胞中着色性干皮病基因D（ XPD）mRNA转录及蛋白表达的影响。方法：分别用终浓度为0、15、30、60μmol/L HQ溶液处理K562细胞48 h后,单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤效应,Taqman探针实时荧光定量PCR法检测XPD基因mRNA转录水平,蛋白印迹法分析XPD基因蛋白表达水平,观察荧光显微镜下细胞的尾矩,计算mRNA及蛋白的相对表达量。结果：不同浓度HQ处理后,各组细胞尾矩与0μmol/L HQ组比较,差异有统计学意义（ P＜0.05）;不同浓度HQ处理后, K562细胞中XPD基因mRNA和蛋白相对表达量与0μmol/L HQ组比较,差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论：HQ处理K562细胞48 h后,细胞中DNA有明显的损伤效应,但XPD基因mRNA及蛋白无变化。     

5,7-0-异丙亚基-对甲基哥纳香醇甲诱导白血病K562细胞凋亡

目的：研究5，7－0－异丙亚基－对甲基哥纳香醇甲对白血病细胞凋亡的影响。方法：体外培养白血病细胞K562，应用MTT法测定IC50，Hoechst33342/PI双荧光染色观察细胞核形态，透射电镜观察细胞凋亡情况。结果：5，7－0－异丙亚基－对甲基歌纳香醇甲处理K562细胞24h IC50约为10^-5mol/L，可观察到明显核固缩，凝集等细胞凋亡表现，透射电镜下观察到染色质凝集等改变。结论：5，7－0－异丙亚基－对甲基哥纳香醇甲可诱导K562细胞凋亡。     

甘草次酸对白血病细胞株K562增殖及其分化的影响

目的探讨甘草次酸（GA）对白血病细胞株K562增殖和分化的作用。方法采用液体培养实验、MTT法、集落培养实验观察GA对K562细胞增殖的影响；采用联苯胺染色法观察细胞内血红蛋白含量变化，采用流式细胞术检测CD71分化抗原评价GA对K562细胞的诱导分化作用。结果GA可明显抑制K562细胞生长、MTT值、集落生长，并呈浓度依赖性；GA可升高细胞内血红蛋白含量，同时上调K562细胞膜CD71分化抗原的表达量。结论GA具有抑制K562细胞增殖和诱导其分化的作用。     

蟾蜍灵对K562细胞凋亡诱导作用及bcl-2基因表达的影响

目的探讨中药蟾酥有效成分蟾蜍灵（bufalin）对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡及bcl-2基因表达的影响。方法MTT实验测定K562细胞对蟾蜍灵的敏感性;原位缺口末端标记法（TUNEL）观察细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂情况;半定量RT—PCR技术检测bcl-2mRNA表达。结果蟾蜍灵对K562细胞生长具有明显的抑制作用,MTT实验显示,蟾蜍灵对K562细胞的IC50值为0．013μmol·L^-1,统计学分析表明差异具有显著性（P〈0．01）;蟾蜍灵可明显诱导K562细胞调亡（P〈0．01）,药物作用6h、12h和24hK562细胞的凋亡率分别为20．36％、34．35％和48．16％;经琼脂糖电泳,蟾蜍灵作用细胞可见到DNA梯形条带;bcl-2mRNA表达3h开始下降,6～12h持续下调,与对照组相比具有显著差异（P〈0．01）。结论蟾蜍灵对K562的增殖抑制作用可能是因为它的凋亡诱导作用,而K562细胞凋亡可能是由于bcl-2基因表达改变。     

转染p53抑癌基因体外抑制K562细胞克隆的形成

目的：构建ｐ５３表达质粒，研究ｐ５３基因对白血病细胞Ｋ５６２细胞生长的抑制作用。方法：以Ｔ４连接酶把２１６０ｂｐ的ｐ５３ｃＤＮＡ片段插入ｐＲｃ／ＣＭＶ质粒，重组构建ｐＲｃ／ｐ５３表达质粒，以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导ｐＲｃ／ｐ５３质粒转染Ｋ５６２细胞，以甲基纤维素半固体培养方法作Ｋ５６２细胞体外克隆培养，观察转染ｐ５３基因后Ｋ５６２细胞克隆形成改变。结果：ｐ５３ｃＤＮＡ质粒转染的Ｋ５６２细胞，体外培养克隆形成能力明显减低。在接种１×１０４细胞时，未转染的空白对照组及空质粒对照组白血病细胞集落数分别是２７９７±２６４和２７２５±２６１；而ｐ５３质粒转染组细胞集落数是１０６１±１６０；与空质粒转染组及未转染的Ｋ５６２细胞组比较有非常显著性差异（Ｐ＜０００１，ｎ＝１０）。结论：转染ｐ５３基因能抑制Ｋ５６２细胞的生长。     

氨茶碱对K562细胞增殖与凋亡的影响

目的 为探讨磷酸二酯酶抑制剂在慢性粒细胞白血病细胞系增殖与凋亡中的作用,研究了非选择性磷酸二酯酶抑制剂氨茶碱对K562细胞系的影响.方法 采用MTT检测观察细胞增殖变化,膜联蛋白V染色观察细胞凋亡率.结果 MTT显示氨茶碱对K562细胞系增殖呈浓度依赖性抑制作用,膜联蛋白V染色显示氨茶碱诱导细胞凋亡率增加.结论 氨茶碱可诱导K562细胞凋亡.     

大麻受体激动剂WIN对白血病K562细胞增殖和诱导凋亡作用的研究

目的探讨大麻受体激动剂W／N-55,212-2（WIN）对白血病K562细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法将细胞分成对照组和不同剂量大麻受体激动剂wIN用药组。CCK-8测定WIN对K562细胞增殖的影响;DAPI染色观察细胞核形态变化;JC-1分析线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化;Western印迹法分析Bax、Bcl-2及C-myc蛋白的表达。结果与对照组相比较,5、10、20μmol／L的WIN处理K562细胞24、48h后,增殖抑制作用明显且具有剂量依赖性,差异有统计学意义（P〈0．05）。DAPI染色和线粒体膜电位检测结果显示,K562细胞发生凋亡。流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率升高。WIN处理24h后,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性均增加（P〈0．05）。Western印迹法显示,Bax蛋白表达增加,C-myc、Bcl-2蛋白表达下降。结论大麻受体激动剂WIN能抑制白血病K562细胞增殖,并诱导凋亡,其机制可能通过上调Bax蛋白表达,下调C-myc、Bcl-2蛋白表达,以及促使线粒体跨膜电位下降。激活Caspase．3、Caspase-8、Caspase-9蛋白而实现。