VEGF-ASODN转染对舌癌Tca8113细胞VEGF表达及生长的抑制作用

目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)-反义寡核苷酸(ASODN)转染舌癌Tca8113细胞对其VEGF表达和生长的抑制作用.方法:人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染舌癌Tca8113细胞,24h后,应用原位杂交及免疫细胞化学法检测细胞VEGF mRNA及蛋白表达,ELISA法检测培养液上清中VEGF蛋白含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用MTT实验检测转染对细胞活性的影响,用细胞生长曲线表示转染对细胞生长的影响.结果与对照组比较,采用SPSS12.0软件包进行统计学分析.结果:VEGF-ASODN能显著降低VEGF mRNA及蛋白水平,降低培养液中VEGF蛋白含量,增加细胞凋亡,抑制细胞活性及生长(P<0.05).结论:VEGF-ASODN转染舌鳞癌Tca8113细胞,能显著抑制VEGF mRNA及蛋白表达,增加细胞凋亡,抑制细胞生长.     

VEGF-ASODN对唾液腺腺样囊性癌的影响

目的:研究血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸(VEGF-ASODN)对裸鼠荷人唾液腺腺样囊性癌的生长抑制作用.方法:20只BALB/c裸鼠随机分为4组,每组5只,实验1～3组建立人唾液腺腺样囊性癌荷瘤裸鼠移植瘤模型,并注射相应试剂.第4组为无荷瘤对照组.VEGF-ASODN组于瘤体及瘤周注射VEGF-ASODN 66μg.错义寡核苷酸组注射错义寡核苷酸66 μg.生理盐水组注射生理盐水.每3d1次,共注射7次.实验结束后2d,处死动物,取血清,测VEGF蛋白,测量肿瘤大小及重量,取肿瘤组织切片,免疫组化分析VEGF、PCNA、CD34表达,计算微血管密度(microvessel density,MVD)和增殖细胞核抗原标记指数(PCNA Label index,PLI),分子原位杂交检测VEGF mRNA表达.采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:VEGF-ASODN组荷瘤裸鼠血清VEGF蛋白水平、肿瘤体积和重量、VEGF mRNA及其蛋白和PCNA、CD34表达均较对照组显著降低.结论:VEGF-ASODN通过抑制VEGF表达,从而抑制唾液腺腺样囊性癌细胞的生长.     

survivin反义寡核苷酸对人涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的影响

目的:探讨survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人腺样囊性癌细胞(ACC-M) 凋亡及survivin基因表达的影响.方法:设计合成针对survivin基因的反义寡核苷酸片段,脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染SACC-M细胞,通过RT-PCR,Western-blotting检测survivin表达的改变,MTT测定细胞增殖抑制,流式细胞术测定细胞凋亡率.结果:转染ASODN组survivin表达下降,细胞凋亡率明显提高,细胞增殖明显受抑制,且与浓度有一定依赖性;SODN组、空白组与对照组无明显差异.结论:survivin ASODN能下调SACC-M细胞系中survivin的表达,在促进凋亡,抑制增殖中发挥重要作用.     

ERK在SACC-LM及SACC-83细胞中表达水平与活性的比较

目的：探讨细胞外信号调节激酶（ERK）在涎腺腺样囊性癌细胞中的活性及表达变化：方法：采用RT—PCR和Western blotting法检测SACC—LM及SACC-83细胞系中ERK蛋白mRNA和蛋白表达，测定ERK酶活力。所得实验数据采用SPSS12．0统计软件进行t检验组间比较。结果：ERK在SACC—LM及SACC-83细胞系中的平均活性分别为54．846pmol·min^-1·μg^-1和40．281pmol·min^-1·μg^-1．SACC—LM细胞中ERK具有较高活性：SACC-LM细胞中ERK有较高表达。结论：ERK蛋白活性变化及蛋白表达与SACC的转移有关。     

嘌呤受体P2Y_2在涎腺腺样囊性癌的表达及ATP对其细胞生长的抑制

目的研究嘌呤受体P2Y2在涎腺腺样囊性癌非高转移细胞株（SACC-83）和高转移细胞株（SACC-LM）的表达,及其激动剂ATP对二者细胞生长的抑制作用。方法采用免疫细胞化学法检测P2Y2受体在SACC-83和SACC-LM细胞株中的表达;采用MTT法检测不同浓度ATP（0.1mM/L、0.2mM/L、0.4mM/L、0.8mM/L和1.6mM/L）在不同作用时间点（24h、48h和72h）对SACC-83和SACC-LM细胞生长的抑制作用。结果 SACC-83和SACC-LM细胞中P2Y2均呈阳性表达,在细胞膜的染色较胞浆深,其表达在两细胞株中无明显差异。ATP对SACC-83和SACC-LM细胞的生长均有明显的抑制作用（P〈0.05）,并且对SACC-LM细胞的抑制作用强于对SACC-83细胞的抑制作用,其抑制作用与药物浓度和作用时间呈正相关。结论不同转移能力的涎腺腺样囊性癌细胞SACC-83和SACC-LM的胞膜和胞浆中均有嘌呤受体P2Y2表达,ATP对二者细胞生长有显著抑制作用。     

VEGF表达在涎腺腺样囊性癌中的意义

目的：研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在涎腺腺样囊性癌中的表达,探讨其与临床病理因素的关系。方法：采用SABC免疫组织化学染色方法检测32例涎腺腺样囊性癌（salivary ade-noid eystic carcinoma,SACC）中VEGF的表达和病灶微血管密度（microvessel density,MVD）记数,采用SPSS13.0软件行统计分析。结果：62.5%SACC组织呈VEGF阳性表达。VEGF表达阳性的SACC组织MVD显著高于VEGF表达阴性者（P〈0.05）。VEGF表达与肿瘤病理类型、淋巴结转移、肿瘤部位及临床分期密切相关。结论：VEGF是SACC主要的新生血管诱导因子之一,可促进SACC的血管生成,VEGF可做为SACC预后的一个有效指标,用于识别高危转移和不良预后者。     

多西紫杉醇对腺样囊性癌SACC-83细胞增殖的影响

目的 :研究多西紫杉醇对涎腺腺样囊性癌SACC 83细胞增殖能力的影响。方法 :用细胞计数法、软琼脂克隆形成法、流式细胞术等研究药物对细胞增殖的抑制作用。结果 :多西紫杉醇对SACC 83细胞具有浓度依赖性和时间依赖性生长抑制作用 ,药物作用 2 4、48、72h的IC3 0 (nmol/L)分别为 1.3 9、1.2 6、0 .47,IC50(nmol/L)分别为 13 .0 2、3 .3 4、1.2 6,相对抗肿瘤活性 (RAA)值分别为 3 3 0、12 98、3 42 6;药物作用于细胞 72h后 ,对照组G1、S、G2 期细胞 ( % )为 73 .8、19.8和 6.4,IC3 0 组为 65 .0、2 9.5和 5 .5 ,IC50 组为 5 7.6、42 .4和 0 ;对照组、IC3 0 组、IC50 组克隆形成率 ( % )分别为 3 6.0± 0 .5、8.3± 2 .5和 0 .5± 0 .3。结论 :多西紫杉醇对腺样囊性癌ACC细胞增殖有明显的抑制作用。     

TIP30蛋白在ACC-M细胞中的表达鉴定及作用

目的 :筛选含有TIP3 0的涎腺腺样囊性癌高转移细胞 ,检测TIP3 0蛋白在涎腺腺样囊性癌高转移细胞中的表达 ,检测携带外源性TIP3 0细胞的细胞周期分布变化。方法 :应用脂质体转染方法将TIP3 0导入ACC M细胞中 ,G418筛选阳性克隆 ,用免疫印记杂交法 (Westernblot)检测转染细胞中TIP3 0蛋白的表达 ;流式细胞仪测定细胞周期分布。结果 :筛选 14d后 ,含有TIP3 0的ACC M克隆形成 ,TIP3 0蛋白在ACC M中表达稳定 ;携带外源性TIP3 0的细胞G0 G1期比例增高 ,G2 M、S期细胞比例降低。结论 :ACC M细胞能稳定表达外源基因TIP3 0 ,携带外源性TIP3 0的细胞G0 G1期细胞比例增高 ,G2 M、S期细胞比例降低 ,从而影响ACC M细胞的生长 ,是TIP3 0抑制涎腺腺样囊性癌细胞生长的可能机制之一。     

Genistein对涎腺腺样囊性癌细胞生长及Survivin表达的影响

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC- 83细胞增殖及Survivin表达的影响。方法以不同浓度Genistein作用于SACC- 83细胞不同时间后,用MTT法分析细胞的生长增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Western印迹分析及电泳凝胶成像分析软件定量检测Survivin的表达。结果Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用,且当其作用到一定时间达到一定的浓度后,该作用与浓度及时间呈依赖关系;SACC- 83细胞经220 μmol/L Genistein作用3 d其生长明显受到抑制,并显著诱导细胞凋亡（P<0.01）,同时伴有抗凋亡蛋白Survivin的表达下调。结论Genistein能明显抑制人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC- 83细胞生长并诱导凋亡;Survivin的表达减少可能是Genistein诱导凋亡的机制之一。     

涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞C-erbB2、PTEN基因表达的研究

目的 检测涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞中C-erbB2基因和PTEN基因的表达,并探讨其相关性。方法 培养SACC-83细胞,采用RT-PCR、免疫组化技术分别检测C-erbB2基因和PTEN基因的mRNA、蛋白产物在涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞和正常腺体细胞中的表达情况。结果 C-erbB2基因mRNA及蛋白水平在SACC-83细胞中的表达明显高于正常腺体细胞,差异有显著性;PTEN基因在SACC-83细胞及正常腺体细胞中的表达无明显差异。结论 C-erbB2基因在涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞中过表达,可能与涎腺腺样囊性癌的发生有关。     

人涎腺腺样囊性癌中表皮生长因子受体的表达及意义

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)在人涎腺腺样囊性癌组织和细胞系中的表达及其临床病理学意义。方法:采用免疫组化S-P法对86例不同亚型的人涎腺腺样囊性癌组织病理切片、20例正常腮腺组织切片及ACC-2细胞爬片进行EGFR的检测;激光共聚焦显微镜对ACC-2细胞中EGFR的表达情况进行检测。结果:在涎腺腺样囊性癌组织中EGFR呈过度表达,其阳性率要明显高于正常腮腺组织(P<0.05);EGFR的表达在腺样囊性癌的恶性程度相关(P<0.05);ACC-2细胞中也检测到了EGFR的过度表达。结论:EGFR表达与腺样囊性癌恶性度及预后密切相关。     

DNApolβ启动子和CMV启动子调控的p53基因在涎腺腺样囊性癌细胞中表达的比较

目的检测DNA polβ启动子在涎腺腺样囊性癌细胞中的活性，探讨DNA polβ启动子对外源性野生型p53基因表达的影响。方法荧光素酶法测定DNA polβ启动子在涎腺腺样囊性癌细胞中的活性。构建携带人野生型p53基因的真核表达载体，以脂质体法转染涎腺腺样囊性癌SACC- 83细胞，逆转录聚合酶链反应（RT- PCR）检测p53基因mRNA的表达。博莱霉素、H2O2及紫外线刺激转染细胞，采用RT- PCR及Western blot法比较DNA损伤下DNA polβ启动子和CMV启动子调控的p53基因及P53蛋白的表达。结果荧光素酶活性分析显示，涎腺腺样囊性癌细胞中DNApolβ启动子活性增高。p53基因的导入使其在涎腺腺样囊性癌细胞中表达增强，DNA polβ启动子组较CMV启动子组更为明显。DNA损伤后，DNA polβ启动子组的p53基因和P53蛋白的表达较CMV启动子组增强（P<0.05）。结论在涎腺腺样囊性癌SACC- 83细胞中，DNA polβ启动子的活性增高，DNA polβ启动子能够增强外源性野生型p53基因在涎腺腺样囊性癌细胞中的表达。     

涎腺腺样囊性癌神经内分泌性探讨

目的 探讨涎腺腺样囊性癌具有神经内分泌性的可能性,方法 采用神经内分泌细胞及肿瘤细胞所特有及相关的抗体Ｓ－１００蛋白,神经特异性烯醇酶,嗜铬素Ａ和突触素４种标记物对其在该肿瘤的表达进行免疫组织化学研究。结果 ５０例涎腺腺样囊癌中Ｓ－１００蛋白阳性表达４２例（８４％）神经特异性烯醇酶阳性表达３２例（６４％）。嗜铬素Ａ阳性表达８例（１６％）,突触素阳性表达７例（１４％）,结论：涎腺腺样囊性癌部分细胞具     

涎腺腺样囊性癌组织中ILK和E-cadherin的表达及意义

目的:探讨整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)在涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测ILK和E-cadherin在SACC及正常涎腺组织中的表达。结果:ILK在SACC中表达,ILK的表达与SACC临床病理分型不相关(P>0.05),与TNM分期有关,在发生神经侵犯及远处转移的病例中,ILK的表达明显增加(P<0.05);与正常涎腺组织相比,E-cadherin在SACC中表达下降,差异有统计学意义(P<0.05),E-cadherin表达与不同组织病理学类型有关,且在实体型、发生神经侵犯及远处转移的病例中,E-cadherin表达下降更明显(P<0.05);ILK与E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.768,P<0.001)。结论:SACC组织中ILK表达上调而E-cadherin表达降低,有望成为临床判断涎腺腺样囊性癌恶性程度、评估预后的潜在指标。     

EZH2和P130在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的:研究EZH2和P130在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义。方法:应用SP免疫组化法检测EZH2、P130蛋白在唾液腺腺样囊性癌中的表达。结果:EZH2在腺样囊性癌中的阳性表达率为67.86%,在正常腮腺组织中均为阴性表达,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。P130在腺样囊性癌中的阳性表达率为25.00%,在正常腮腺组织中的阳性表达率为90.0%,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。EZH2、P130在腺样囊性癌中的表达呈负相关。结论:EZH2与P130的异常表达可能在唾液腺腺样囊性癌的发生与发展过程中起重要作用。     

iNOS 、VEGF和CD34在人涎腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的：研究诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxidesynthase，iNOS）、血管内皮生长因子（vascular endo-thelial growth factOr，VEGF）及微血管密度（Microvessel density，MVD）在人涎腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma，ACC）中的表达及相关性，探讨它们与ACC血管生成和临床生物学行为的关系。方法：应用免疫组化SABC法，检测15例ACC、10例腮腺多形性腺瘤（plemorphic adenoma，PA）及10例正常腮腺组织（normal salivary gland，SG）中iNOS和VEGF的表达和微血管密度MVD（CD34标记）计数，并对上述指标应用SPSSl3．0统计软件进行统计学分析。结果：PA、SG、ACC中的iNOS和VEGF的阳性表达率及MVD计数依次增加，各组之间有显著性差异（P〈0．05）；MVD在ACC中的计数均随着iNOS和VEGF表达的增强而升高；iNOS和VEGF两者在腺样囊性癌之间也具有相关性。结论：iNOS、VEGF和CD34的表达与ACC的血管生成及发生发展密切相关。     

口腔涎腺腺样囊性癌组织中RKIP和NPRL2的表达及其意义

目的:探讨抑癌基因RKIP和NPRL2在口腔涎腺腺样囊性癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学方法检测RKIP蛋白和NPRL2蛋白在52例口腔涎腺腺样囊性癌组织、26例癌旁腺样囊性癌组织及15例正常涎腺组织中的表达,并分析RKIP和NPRL2的表达与腺样囊性癌临床病理学特征的关系。结果:免疫组化结果显示腺样囊性癌组织、癌旁及正常涎腺组织中RKIP和NPRL2的阳性率分别为48.08%、76.92%、93.33%和46.15%、80.77%、93.33%;腺样囊性癌组织中RKIP和NPRL2的表达显著低于癌旁及正常涎腺组织,差异有统计学意义(P<0.05),而腺样囊性癌组织和癌旁组织中两者蛋白的表达均呈显著正相关(P=0.000,P=0.005)。结论:RKIP和NPRL2表达的减少或缺失与腺样囊性癌的发生发展、侵袭转移密切相关。     

MMP-9、CD147在涎腺腺样囊性癌中的表达及临床意义

目的:联合检测人涎腺腺样囊性癌组织中MMP-9、CD147的表达并分析其相关性,探讨其与临床病理参数间的关系,为腺样囊性癌的临床治疗和预后判断提供理论依据。方法:选择山西医科大学第一医院病理科存档的腺样囊性癌组织标本21例(癌组),正常涎腺组织6例(对照组)。21例腺样囊性癌分别依据临床分期、有无侵犯神经进行分组。运用免疫组织化学PV-9000二步法检测MMP-9、CD147,结果用SPSS 13.0软件分析。结果:MMP-9及CD147在腺样囊性癌组中的阳性表达率(分别为76.2%和81.0%)明显高于在对照组中的阳性表达率(分别为16.7%和16.7%),差异有统计学意义(分别为P<0.05和P<0.01)。Ⅲ+Ⅳ期腺样囊性癌病例MMP-9及CD147的阳性表达率(均为100.0%),明显高于Ⅰ+Ⅱ期病例(分别为44.4%和55.6%),差异有统计学意义(分别为P<0.01和P<0.05)。有无侵犯神经的病例组间比较,MMP-9及CD147的表达差异没有统计学意义(P>0.05)。MMP-9和CD147在腺样囊性癌组织中均呈阴性、弱阳性、阳性、强阳性表达者分别为4、5、7和3例,表达一致率为90.5%,Kappa值为0.870。结论:MMP-9和CD147均可作为反映腺样囊性癌细胞生物学行为的客观参考指标,其表达与临床分期密切相关,且二者之间的表达有正相关。     

Survivin及P53在唾液腺腺样囊性癌中表达的研究

目的：研究Survivin及P53在唾液腺腺样囊性癌（Salivary adenoid cystic carcinoma,SACC）中的表达,探讨其与临床病理因素的关系及两者的相关性。方法：采用SP免疫组织化学染色方法检测36例SACC及10例癌旁正常涎腺组织标本中Survivin及P53的表达,采用SPSS13.0软件行统计分析。结果：SACC组织中Survivin及P53阳性表达率分别为66.67%、69.44%。两者的表达与临床分期密切相关;P53还与淋巴转移、肿瘤病理类型相关,癌旁正常腮腺组织未见两者表达。结论：Survivin及P53可能与SACC的发生、发展有关。