前列腺组织雄激素受体的测定方法

建立雄激素受体测定的放射配基结合分析法测得人前列腺组织中胞浆胞核雄激素受体均可被约5x10~(-9)mol/L的双氢睾酮饱和,其最大结合客量(B(-max))及平衡解离常数(Kd)分别为:胞浆129.4x10(-15)mol/mg,0.88x10(-9)mol/L;胞核176.2x10~(-15)mol/mg,3.2x10~(-9)mol/L。人前列腺癌胞浆、胞核雄激素受体均高于正常前列腺(n=3)及前列腺肥大者(n=32)。用融裱法放射自显影证实雄激素受体主要分布在前列腺组织的腺区,尤其是在腺上皮细胞核内。     

人良性增生前列腺中的雄激素受体测定

以~3H-R1881为放射配体,测定良性增生与正常人前列腺中雄激素受体(AR)的含量,胞浆中AR含量分别为9.11±1.77(n=19)和9.01±1.24(n=4)fmol/mg蛋白,胞核提取液中AR含量分别为22.39±2.54(n=12)和24.04±2.08(n=6)fmol/mg蛋白。结果显示人良性增生前列腺胞浆和胞核提取液中AR含量与正常相比均无明显差异(P>0.05)。     

输精管结扎与吻合术后前列腺胞核雄激素受体的变化

日本大耳白雄兔28只,其中7只做为假手术对照组(SOG),7只做为输精管结扎组(VG),14只为输精管吻合组(VAG)。16个月后,检测前列腺胞核雄激素受体的变化。结果是SOG、VG、VAG胞核雄激素受体的Kd值分别为4.81nmol/L,9.36nmol/L,5.67nmol/L;最大结合容量(fmol/mg DNA)为203.66,440.89,232.11,VG胞核雄激素受体Kd值及最大结合容量虽有升高,但VAG与SOG则呈一致的变化。单点分析三组的受体水平无显著差异(P>0.05)。说明,输精管结扎及吻合对前列腺胞核雄激素受体的水平无明显影响。     

人良性前列腺增生症血清睾酮及前列腺雄激素受体研究

为探讨人良性前列腺增生症(BPH)与雄激素及其受体的关系,本文收集良性增生前列腺标本22例,正常前列腺标本6例,测定了前列腺组织中胞核及胞浆中雄激素受体(AR)含量,还测定了20名BPH患者血清中睾酮(T)水平。结果显示在两组前列腺组织中,胞浆和胞核AR含量差异无显著意义。血清T与BPH切除前列腺重量呈正相关(P<0.05)。说明BPH的发生和维持与血清T水平有关,而与前列腺中AR含量无明显关系。     

P物质对幼年大鼠背根神经节神经元胞体膜的去极化作用

实验在大鼠离体背根神经节上进行细胞记录。浴槽滴加10^-7～3×10^-4mol/L P物质,在受检的47个细胞中大多数均可引起明显的膜去极化反应(40/47)。P物质去极化反应具有明显的浓度依赖性，在滴加10^-4mol／L P物质后膜电导由平均2．72×10^-8mho增大约24．63％(n=3)。并随P物质浓度的增加，去极化期向膜电导改变增大。     

输精管结扎大鼠前列腺雄激素受体及血清LH、睾酮的变化

21只雄性Wistar大鼠,随机分为输精管结扎组(VG)10只及假手术组(SOG)11只。术后10个月检测前列腺胞液雌激素受体浓度及血清LH、睾酮水平。结果是,前列腺胞液雄激素受体浓度,VG为7.44±3.09fmol/mg pro.,SOG为8.27±3.38fmol/mg pro.,两组比较无显著差异(P>0.05)。血清LH的结果,VG为2.20±0.38mIU/ml,SOG为2.26±0.16mIU/ml;血清睾酮为2.01±1.07nmol/L(VG)和2.86±0.92nmol/L(SOG),经t检验,均无统计学意义。本实验结果显示,输精管结扎对血中LH、睾酮水平及前列腺雄激素受体均无明显影响。     

23例鼻咽癌雌、孕激素和雄激素受体检测的初步研究

目的 探讨雌孕激素受体和雄激素受体与鼻咽癌的关系。方法 对23例鼻咽癌蜡块标本用免疫组化SP法进行测定，DAB显色，在光镜下计算阳性细胞数。结果 ER阳性率为65．2％(15／23)，PR阳性率为26．1％(6／23)，AR阳性率为56．5％(13／23)。鼻咽癌ER阳性中组织胞核含量高于胞浆11例，胞浆含量高于胞核仅4例；PR阳性中组织胞核含量高于胞浆和胞浆含量高于胞核相同，都是3例；鼻咽癌AB阳性中组织胞核含量高于胞浆10例，胞浆含量高于胞核仅3例。结论 ER鼻咽癌具在高表达性，定位于鼻咽癌组织中的细胞核；ER、PR的阳性情况与年龄、性别无关。     

成骨生长肽1O～14及其结构类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的 探讨成骨生长肽10～14（G36G）及其结构类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖与分化功能的影响。方法 采用无血清培养条件，G36G和G48A各9组：浓度依次为1&#215;10^-2、1&#215;10^-8、1&#215;10^-9、1&#215;10^-10、1&#215;10^-11、1&#215;10^-12、1&#215;10^-13、1&#215;10^-14和1&#215;10^-15mol／L。甲状旁腺激素（PTH）组：培养结束前6h培养液中的PTH浓度为1&#215;10^-8mol／L。对照组：培养液中含1％牛血清白蛋白。分别观察不同浓度G36G及其类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响，免疫组织化学法检测不同处理因素对成骨细胞胰岛素样生长因子（IGF）-1蛋白表达水平的变化。结果 透射电子显微镜下，G36G、G48A和PTH组的成骨细胞形状丰满，核膜清晰，粗面内质网丰富，高尔基器发育良好，胞质内分泌颗粒增多，可见细胞核分裂相；对照组的成骨细胞胞体扁平，胞质内部分细胞器丧失，细胞核分裂相比例降低。G36G、G48A组分别在1&#215;10^-11、1&#215;10^-13mol／L时促进成骨细胞增殖的效应最强。PTH组的ALP活性显著高于对照组（P〈0．05）。G36G组在1&#215;10^-13mol／L时促进ALP活性作用最强，显著高于对照组（P〈0．01）。G48A组在1&#215;10^-15mol／L时促进ALP活性作用最强，显著高于对照组（P〈0．01）。4组间IGF-1蛋白表达水平的差异无统计学意义（P值均〉O．05）。结论 G36G及其类似物G48A在体外能够促进大鼠成骨细胞的增殖及分化。     

冠心病患者妊娠相关血浆蛋白A含量与血管内皮功能关系探讨

 【目的】探讨冠心病患者血循环妊娠相关血浆蛋白A（PAPP—A）水平与内皮功能的关系。【方法】64例冠心病患者，其中稳定型心绞痛组34例，急性冠脉综合征组30例，分别检测其相关内皮功能，包括肱动脉血流介导的血管舒张反应（FMD）和高敏C-反应蛋白（hs—CRP）、内皮素（ET）、一氧化氮（NO）水平，并用酶联免疫法检测血清PAPP—A。【结果】稳定型心绞痛组患者同急性冠脉综合征组相比PAPP—A[（6×10^-3±5×10^-1U／L与（19×10^-3±13×10^-3）U／L，P〈0．05]、hs-CRP[（0．5±0．3）mg／L与（3．6±2．2）mg／L，P〈0．01]、NO[（57±4）μmol／L与（45±5）μmol／L，P〈0．05]和FMD（6．0％±0．8％与3-3％±1．2％，P〈0．05）的差异有统计学意义。逐步选择多重回归分析，按α=0．10水准，发现PAPP—A与hs—CRP和FMD存在直线关系，Lnhs—CRP的偏相关系数为0．333（95％置信区间：0．138-0．527，P〈0．01），FMD的偏相关系数为-0．623（95％CI：-1．144—0．102，P〈0．051，其中常数项为5．570。高PAPP—A（〉11．094×10^-3U／L）患者hs—CRP明显增高[（5．3±4．2）mg／L与（1．3±0．6）mg／L，P〈0．01），FMD则降低（3.3％±2．4％与6．2％±3．6％，P〈0．05）。【结论】PAPP-A可作为间接评估冠心病患者血管内皮功能的指标之一。     

正常骨和骨肿瘤组织雌激素受体分析

用葡聚糖—活性炭Scatchard作图法测定15例不同骨恶性肿瘤组织(其中转移性骨肿瘤3例)及13例正常对照骨组织胞浆的雌激素受体(ER)含量和亲和常数。结果显示,ER平均含量正常对照组(15.12±14.68fmol/mg蛋白)高于骨恶性肿瘤组织(8.04±6.71fmol/mg蛋白)(P<0.05)。ER亲和常数正常对照组(39.91±20.13×10~(-11)mol/L)高于骨恶性肿瘤组织(18.46±27.10×10~(-11)mol/L)(P<0.025)。ER阳性率在正常对照组织(23.1％)和恶性骨肿瘤组织(26.7％)无明显差别(P>0.05)。本研究表明,骨组织中胞浆ER含量及亲和力变化可能与肿瘤的发生有关;骨恶性肿瘤组织胞浆受体含量降低,而亲和力增加,提示该组织甾体激素受体系统功能的改变或损害。     

DHCC受体检测方法的研究

本文采用葡聚糖包裹的活性炭石(DCC)法、羟基磷灰石(HAP)法及等电聚焦电泳(IEF)法,在各种条件下检测了1.25(OH)_2D_3(DHCC)受体的含量。这3种方法得到的表现解离常数(Kd)分别等于4.2×10~(-9)mol/L、2.3×10~(-9)mol/L和6.4×10~(-9)mol/L;该受体蛋白分别在10nmol/L、8nmol/L和30nmol/L浓度的〔~3H〕DHCC处被饱和。该受体对D_3类似物的结合能力依次为1,25(OH)_2D_3>>25(OH)D_3>D_3≈E_2。我们所测佝偻病鸡3种组织中该受体含量依次为肠>输卵管壳腺>>肝。用DCC法,在4℃孵育2～5h,结合最稳定。用KTED缓冲液测得的胞液DHCC受体含量比用TED缓冲液高(P<0.05)。     

良性增生前列腺组织上皮和间质细胞雄激素受体测定

用~3H-Mibolerone为放射性配体,分别测定了正常人(n=8)及良性增生(n=20)前列腺上皮、间质细胞雄激素受体(AR),结果表明,AR含量以fmol/mgDNA表示时,正常前列腺组织上皮、间质部分分别为352.3±150.9和728.7±369.4;良性前列腺增生(BPH)组织上皮、间质部分分别为358.0±161.8和471.9±254.0,经统计学处理,AR在BPH及正常前列腺组织上皮、间质部分之间差异无显著性,表明AR在前列腺组织中的分布和含量与BPH的发病无直接关系。     

4-羟基他莫昔芬对体外培养前列腺平滑肌细胞的作用

目的 研究4-羟基他莫昔芬(OHT)对原代培养的前列腺平滑肌细胞增殖与凋亡以及雌、雄激素受体表达的影响.方法 以不同浓度的雌二醇(E2)、乙烯雌酚(DES)和OHT分别作用于原代培养的前列腺平滑肌细胞,采用流式细胞术检测增殖和凋亡,免疫细胞化学检测雌、雄激素受体表达.结果 DES和E2在一定浓度范围内起促增殖作用(均P<0.05),但未发现明显的浓度相关性(DES:r=-0.101,P=0.328;E2:r=-0.115,P=0.188).OHT浓度在1×10-8moL/L时,前列腺平滑肌细胞增殖率为5.04%±0.65%,随着浓度由1×10-6mol/L升高为1×10-5mol/L,细胞增殖率由2 79%±0 54%下降为0.93%±0.40%.在更高浓度下显示与浓度相关的促凋亡作用(5.83%±0.78%、13.70%±0.71%、19.53%±0.90%),以上作用不能被相同甚至更高浓度的E2所逆转.OHT对雌、雄激素受体表达的影响与雌激素相近.结论 OHT在一定浓度范围内对原代培养的前列腺平滑肌细胞具有明显的抑制增殖和促凋亡作用,且该作用可能不依赖于雌激素受体途径.口服他莫昔芬后OHT血药浓度较低和OHT上调雄激素受体表达可能是他莫昔芬治疗前列腺增生效果不佳的原因.     

雌二醇及孕酮对体外培养的人垂体泌乳素瘤细胞的作用探讨

研究17β-雌二醇(P2)和孕酮(P)对人泌乳素瘤的影响。从11例病人手术切除标本组级织进行体外培养．分为4组，单纯加雌二醇组，单纯加孕酮组；同步加雌二醇和孕酮组，序贯加雌二醇和孕酮组。结果显示。①培养液加10^-10～10^-6mol／L雌二醇，泌乳素(PRL)分泌较赋形剂对照组显增多．在雌二醇10^-9～10^-6mol／L无改变。PRL分泌与雌二醇10^-9～10^-6mol／L呈负相关。其水平在雌二醇10^-16mol／L较10^-9mmol／L低。②加入10^-11至10^-6mol／L的不同浓度孕酮对泌乳素水平无影响，当孕酮浓度10^-5mol／L则水平明显降低。③比较同步加雌二醇和孕酮与单纯加雌二醇时可见泌乳素分泌无差异。④在加雌二醇后序贯给雌二醇和孕嗣显示从雌二醇转换孕酮时，泌乳素分泌较持续给雌二醇减少。     

参芪扶正注射液对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的观察参芪扶正注射液对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作用。方法雄性SD大鼠30只，用0．1mol／L枸橼酸缓冲液溶解链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)，以60mg／kg给予大鼠腹腔注射制造糖尿病大鼠模型。24只成功的模型分为糖尿病组(n=12)；糖尿病治疗组(n=12)，给予参芪扶正注射液250ml／(kg·d)口服。另选8只为正常组，腹腔注射等量枸橼酸缓冲液。各组不应用降糖药。观察第4周，8周24h尿蛋白定量、平均动脉收缩压、第8周血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾重／体重、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量及肾组织转化生长因子-β(TGF-β1)、原癌基因蛋白c-Fos的表达，并应用计算机图象分析系统测定其表达的灰度值。结果治疗组24h尿蛋白含量4周，8周(24．37±7．83)mg，(27．76±8．62)mg均明显低于糖尿病组(31．02±9．32)mg，(36．10±12．26)mg(P<0．05)；平均动脉收缩压治疗组(114．33±7.63)mmHg(1mmHg=0．133kPa)，(120．00±7．46)mmHg显著低于糖尿病组(132．33±8．52)mmHg，(139．6±9．67)mmHg(P<0．01)；AngⅡ含量治疗组(184．82±61)ng／L明显低于糖尿病组(283．61±78．06)ng／L(P<0．01)；Scr、BUN含量治疗组(75．4±27．1)μmol／L，(9．87±2．97)mmol／L，显著低于糖尿病组(160．75±35．56)μmol／L，(15．29±4．78)mmol／L(P<0．05，P<0．01)；肾重／体重治疗组(9．66±1．78)g/kg明显低于糖尿病组(11．60±1．26)g/kg(P<0．05)；TGF-β1和c-Fos在治疗组肾组织的表达范围和强度均明显高于糖尿病组，其灰度值糖尿病组为(106．48±11．24，80．62±10．06)，治疗组为(136．95±16．39，107．48±6．74)，差异有显著性(P<0．001)。结论参芪扶正注射液可延缓实验大鼠糖尿病肾病的进展，减少尿蛋白排泄，保护肾功能。     

新生大鼠心肌细胞内Ca2+的空间分布及调控的离体研究

采用激光扫描共聚焦显微镜、荧光分光光度计和荧光显微镜,观察培养的大鼠心肌细胞和离体细胞核的Ca2+信号变化.结果:培养的心肌细胞内Ca2+荧光分布不均匀,即核的荧光强度显著高于胞浆;β-受体激动剂异丙肾上腺素(10-6mol/L)使核钙浓度[(Ca2+)n]增加程度显著大于胞浆钙浓度[(Ca2+)c],β-受体阻滞剂心得安(10-3mol/L)浓度显著降低细胞核/胞浆游离钙梯度;P物质(10-6mol/L)作用下,[(Ca2+)n]增加2.17倍,而[(Ca2+)c]仅增加91.45%(P<0.05),[(Ca2+)n]/[(Ca2+)c]大幅度上升.心肌细胞经钙泵抑制剂thapsigargin和EGTA刺激后,可见核膜腔存在钙库.正常心肌细胞存在小幅度的钙震荡,分别加入去甲肾上腺素(10-5mol/L)、AngⅡ(10-6mol/L)和ATP(3×10-3mol/L),均使心肌细胞胞浆Ca2+和核Ca2+震荡幅度明显升高(P<0.01),NO-供体硝普钠(10-5mol/L)和KCI(20mmol/L)使钙的周期性震荡消失.IP3和Ryanodine分别使核Ca2+短暂升高1.68倍和1.93倍(P<0.001),而Thapsigargin预处理心肌细胞核,均能显著的阻断IP3和Ryanodine的致核Ca2+升高作用(P<0.05),荧光染色观察可见IP3受体染色主要位于核内膜,而钙泵和ryanodine受体染色主要位于核外膜.结论:心肌细胞核是细胞内的钙库之一,心肌细胞核也存在Ca2+震荡,并受多种因素影响.心肌细胞核膜上存在Ca2+-ATPase、RyR和IP3受体等核Ca2+摄取和释放系统.核Ca2+释放的前提条件是首先存在核Ca2+摄取.     

高压氧对急性坏死性胰腺炎胰腺腺泡细胞NF-κB活性与血液炎症细胞因子影响的研究

目的探讨高压氧对ANP胰腺腺泡细胞核转录因子NF-κB活性的影响。方法采用5%牛磺胆酸钠胰管逆行注射制备ANP动物模型。SD雄性大鼠40只,按随机分配原则分为ANP高压氧治疗组和ANP空白对照组。采用EMSA法检测胰腺腺泡细胞胞核NF-κB活性、Western-blot法检测胰腺腺泡细胞胞质IκBa活性及ELISA法检测血液IL-2、IL-6、IL-10、TNF-a及ICAM-1含量。结果高压氧在1、3、5及7h均可显著抑制ANP胰腺腺泡细胞胞核NF-κB活性[(24.47±5.39)μmol/Lvs(31.36±5.72)μmol/L、(28.58±4.51)μmol/Lvs(39.44±6.31)μmol/L、(26.47±4.13)μmol/Lvs(33.80±5.96)μmol/L及(20.38±3.79)μmol/Lvs(25.69±4.91)μmol/L](P<0.01);显著增强ANP胰腺腺泡细胞胞质IκBa活性[(8.94±1.43)μmol/Lvs(6.37±1.19)μmol/L、(7.83±1.72)μmol/Lvs(5.91±1.65)μmol/L、(8.31±1.54)μmol/Lvs(6.85±1.37)μmol/L及(8.62±1.12)μmol/Lvs(6.97±0.86)μmol/L](P<0.01);显著抑制血液中炎症细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、TNF-a及ICAM-1活性(P<0.05)。结论高压氧可通过显著抑制ANP胰腺腺泡细胞NF-κB活性,增加胰腺腺泡细胞胞质IκBa活性的能力,减少血液中炎症细胞因子活性,从而抑制ANP引起的过度炎症反应。     

多巴胺受体对大鼠DRG神经元ATP受体的调制作用

目的 研究多巴胺(DA)对ATP-激活电流(IATP)的调制作用。方法 在大鼠新鲜分离的DRG神经元标本上应用全细胞膜片钳技术，记录DA对IATP的影响。结果 大部分受检细胞(89．5％，77／86)对ATP敏感，10^-6～10^-3mol／L ATP可引起剂量依赖性呈明显去敏感的内向电流。在此77个细胞中，预加DA对IATP的影响如下：在50．6％(39／77)的细胞产生抑制作用，28．6％(22／77)的细胞产生增强作用，其余的无明显作用(20．8％，16／77)。在浓度10^-7～10^-3mol／L范围DA对IATP的抑制或增强作用依赖于多巴胺的浓度。胞内透析GDP-β-s，上述抑制或增强作用可完全被取消。结论 DA对IATP的抑制作用可能是由于多巴胺受体激活后经G蛋白耦联使ATP(P2X)受体磷酸化所致。     

人前列腺不同生长发育期雄激素受体表达变化

目的检测雄激素受体(AR)在人前列腺不同生长发育时期表达的变化,探讨它们变化的病理意义。方法采用免疫组化两步法检测10例胎儿前列腺(EP)、10例正常前列腺(NP)、20例前列腺增生(BPH)、20例雄激素依赖性前列腺癌(ADPC)和15例激素非依赖性前列腺癌(AIPC)组织的AR表达。结果 EP细胞浆和细胞核均有AR表达,且间质细胞AR表达先于腺上皮AR表达。NP组织的AR表达主要集中在上皮细胞核,与EP相比,基底细胞和间质细胞AR表达明显减少,而BPH组织的腺上皮细胞和间质细胞均有AR的较强表达。AR在前列腺癌(Pca)的表达位于癌细胞核,AIPC的AR表达比ADPC明显增强。结论 AR表达的变化与人前列腺不同生长发育时期和前列腺癌的发生发展密切相关。     

人胎盘微绒毛膜的制备及其转铁蛋白受体研究

作者分别用差速离心法及蔗糖梯度离心法制备胎盘微绒毛膜(PMM),用受体放射分析法研究了PMM的转铁蛋白受体(TfB),结果表明:两种方法制备的PMM均可用于受体分析,但差速离心法更为简便。测定60例产妇PMM的TfR,其数目为3.53±1.98×10~(12)个位点/mg膜蛋白,最大结合容量为6.33±4.21×10~(-12)mol/mg膜蛋白,Kd值为4.95±3.39×10~(-9)mol/L。受体结合反应体系最适实验条件为,膜蛋白浓度每管50μg,标记物浓度每管50 000cpm,孵育30分钟,B/F分离的聚乙二醇浓度为12％(W/V)。对TfR的特性研究表明:TfR与转铁蛋白的结合具有高度亲和力、高度特异性及可饱和性。