脂质过氧化损伤的内皮细胞对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究脂质过氧化损伤的内皮细胞(endothelial cell,EC)对血管平滑肌细胞(vessel smooth musclecells,VSMC)凋亡的影响.方法以氢过氧化枯烯为诱发剂引发培养的血管EC的脂质过氧化反应,将制备的内皮细胞条件培养液(endothelial cell conditional medium,     

粉防己碱对血管内皮剥脱后再狭窄的预防作用及其分子机制研究

目的：研究球囊损伤后血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC)凋亡机制及粉防己碱（tetrandrine,Tet)对VSMC凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法：采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法和免疫组化技术检测球囊务内皮后VSMC凋亡及bcl-1,bax蛋白表达的变化。结果：球囊损伤后血管壁增生，血管中膜和内膜出现的细胞凋亡较少，Tet可明显促进VSMC凋亡，降低球囊损伤后内膜及中膜厚度，增加管腔面积（P＜0．05），促进bax蛋白的表达，抑制bcl-2蛋白的表达（P＜0．05），结论：bax,bcl-2参与了球囊损伤内皮后血管平滑肌细胞凋亡的调节，Tet可能通过对bax,bcl-2基因表达的调节，增加VSMC细胞凋亡，防止血管再狭窄。     

血管内皮细胞脂质过氧化对平滑肌细胞和纤维母细胞DNA合成的影响

为探讨血管内皮细胞受脂质过氧化作用后对中膜平滑肌细胞增殖的影响，以氢过氧化枯烯作为引发剂引发培养牛主动脉内皮细胞的过氧化反应，测定其内皮细胞条件培养液对培养的牛主动脉中膜平滑肌细胞和Ｓｗｉｓ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成的影响。结果：氢过氧化枯烯作用后，内皮细胞脂质过氧化物的含量明显增加；各实验组均未见明显的形态改变和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）含量的增加；由氢过氧化枯烯作用后，内皮细胞的条件培养液使平滑肌细胞和Ｓｗｏｓｓ３Ｔ３细胞的〔３Ｈ〕－ＴｄＲ掺入率明显增高。可以认为：脂质过氧化作用使内皮细胞对平滑肌细胞和纤维母细胞的增殖促进活性增强。为阐明脂质过氧化作用促进和加重体内动脉粥样硬化病变形成的机理提供了实验资料。     

大鼠提睾肌神经损伤后Bcl-2、Bax和P_(53)在血管平滑肌细胞和内皮细胞的表达

目的　研究大鼠提睾肌神经损伤后血管平滑肌细胞和内皮细胞的Bcl -2、Bax及P53 表达和意义。方法以免疫组织化学SP法 ,对大鼠提睾肌神经损伤后的血管平滑肌细胞和内皮细胞的Bcl -2、Bax及P53 表达进行研究。结果　支配提睾肌的神经损伤后 ,Bcl-2、Bax和P53 均有表达。在平滑肌细胞中 ,Bcl -2的表达明显强于Bax和P53,而在内皮细胞Bax和P53 的表达强于Bcl-2。结论　大鼠提睾肌损伤后平滑肌细胞有增殖现象 ,而内皮细胞则可能出现过度凋亡 ,上述改变可能对微循环产生不利影响。     

大鼠提睾肌神经损伤后Bcl-2、Bax和P53在血管平滑肌细胞和内皮细胞的表达

目的 研究大鼠提睾肌神经损伤后血管平滑肌细胞和内皮细胞的Bcl-2、Bax及P53表达和意义。方法 以免疫组织化学SP法,对大鼠提睾肌神经损伤后的血管平滑肌细胞和内皮细胞的Bcl-2、Bax及P53表达进行研究。结果 支配提睾肌的神经损伤后,Bcl-2、Bax和P53均有表达。在平滑肌细胞中,Bcl-2的表达明显强于Bax和P53,而在内皮细胞Bax和P53的表达强于Bel-2。结论 大鼠提睾肌损伤后平滑肌细胞有增殖现象,而内皮细胞则可能出现过度凋亡,上述改变可能对微循环产生不利影响。     

动脉粥样硬化斑块中细胞凋亡对斑块稳定性的影响*

目前对动脉粥样硬化（AS）斑块的发生发展过程及其形态学的变化已基本清楚，主要有内皮细胞损伤、血浆脂质沉积、单核细胞浸润、血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和向内膜下迁移、泡沫细胞的形成以及细胞的凋亡。其中细胞凋亡是不同于细胞坏死的一种死亡形式，指细胞受到某些生理或病理信号刺激后，调控凋亡的一系列基因程序性表达，最终合成或激活内源性的核酸内切酶，     

平滑肌细胞凋亡对血管球囊损伤后内膜增殖的影响

目的：探讨血管球囊损伤后内膜增殖的机制。方法：采用电镜、末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学技术检测球囊损伤后血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）凋亡及新生内膜面积的变化。结果：球囊损伤后血管壁增生,球囊损伤后第３天,血管中层出现凋亡的平滑肌细胞（ＳＭＣ）;损伤后第７天,新生内膜形成内膜面积的变化。结果：球囊损伤后血管壁增生,球囊损伤后第３天,血管中层出现凋亡     

血管内皮细胞脂质过氧化对平滑肌细胞和纤维母细胞DNA…

为探讨血管内皮细胞受脂质过氧化作用后对中膜平滑肌细胞增殖的影响，以氢过氧化枯烯作为引发剂引发培养牛主动脉内皮细胞的过氧化瓜在，测定其内皮细胞条件培养液对培养的牛主动脉中膜平滑肌细胞和Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成的影响。结果：氢过氧化枯烯作用后，内皮细胞脂质过氧化物的含量明显增加；各实验组均未见明显的形态改变和乳酸脱氢酶含量的增加；由氢过氧化枯烯作用后，内皮细胞的条件培养使平滑肌细胞和Ｓｗｉｓｓ３     

脂质过氧化物与抗氧化剂对内皮细胞前列环素合成的影响

以氢过氧化枯烯作为引发剂、激发和促进培养人血管内皮细胞的脂质过氧化反应;并以硒、维生素E、超氧化物歧化酶作为抗氧化剂,测定细胞脂质过氧化物的含量与培养液中6-酮-前列腺素F_1α的含量。结果表明:氢过氧化枯烯能增加细胞的脂质过氧化物蓄积,并减少内皮细胞的前列环素合成,而各种抗氧化剂的添加,通过减少细胞的脂质过氧化物蓄积,可阻止其对内皮细胞前列环素合成的抑制作用。     

血管球囊损伤后血管紧张素Ⅱ1型受体与凋亡相关基因表达的变化

目的：探讨球囊损伤后血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的机制。方法：采用免疫组织化学技术检测血管球囊损伤后血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）及凋亡相关基因bcl-2、bax表达的变化。结果：球囊损伤后第3d,血管中层AT1R表达比假手术组显著增多（P＜0．05）,以后无显著改变;损伤后第7d内膜层AT1R为中层的近2倍;至损伤后第28d,内膜层AT1R表达最高。球囊损伤后第3d,血管中层Bax、Bcl-2表达比假手术组显著增加（P＜0．01）;损伤后第7d血管中Bax表达最高,是假手术组的3倍,以后表达减少。球囊损伤后Bcl-2表达逐渐增多,至第28d表达最高。Bax/Bcl-2也有损伤后第7d达最高,至第28d降至基础水平以下。AT1R拮抗剂Irbesartan使Bax表达增高,Bcl-2表达降低,使Bax/Bcl-2也是升高。结论：血管球囊损伤后,AT1R上调,AngⅡ通过与AT1R结合抑制Bax、促进Bcl－2表达,从而抑制VSMC凋亡。     

血管内皮和平滑肌细胞联合培养构建组织工程化血管的方法

目的：探讨组织工程血管种子细胞原代培养、传代扩增、鉴定的方法，为组织工程血管的构建提供理想的种子细胞。方法：无菌条件下取正常产妇分娩的脐带动静脉，ROSS法（即组织贴块法）原代培养混合血管细胞。倒置相差显微镜、免疫组化法对细胞进行鉴定。结果：倒置显微镜显示原代细胞及经传代培养后的细胞，呈现内皮样细胞、平滑肌样细胞混合生长的特征。免疫组化法检测示内皮细胞Ⅷ因子、平滑肌细胞α-肌动蛋白呈阳性反应。细胞经3次～5次传代，数量可增殖达到8×10^6—10×10^6。结论：使用组织贴块法原代培养可获得内皮细胞、平滑肌细胞混合体，细胞经体外联合培养、传代可以达到组织工程血管种子细胞所需的数量。     

抗体催化水的氧化对大鼠血管平滑肌细胞过氧化损伤作用

目的 通过观察抗体催化水的氧化作用对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的过氧化损伤,探讨其在动脉粥样硬化致病过程中的作用和机制。方法 体外分离培养大鼠VSMCs,随机分为4组：空白组、中性粒细胞(Neu)+IgG组、Neu+PMA组、Neu+PMA+IgG组。以佛波酯(PMA)激活大鼠中性粒细胞产生单线态氧(¹O₂),促进抗体发挥催化水的氧化作用;采用台盼蓝法检测VSMCs的死亡率,CCK-8法检测VSMCs的增殖能力,实时荧光定量PCR及免疫组化法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平,丙二醛(MDA)法检测细胞内脂质过氧化产物。结果 VSMCs在培养过程中,当与中性粒细胞和PMA共同孵育时,细胞的死亡率、增殖能力、细胞内PCNA的表达水平及胞内脂质过氧化产物均显著增高,但增加大鼠IgG共同孵育后,其增高水平得到更进一步增强。结论 抗体催化水的氧化可能参与了血管平滑肌细胞的过氧化损伤作用。     

二步酶消化法分离大鼠主动脉血管平滑肌细胞及活性鉴定

目的:建立一种有效、方便的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的酶解分离方法.方法:采用二步酶消化法分离VSM-Cs,显微镜下观察细胞形态,锥虫蓝染色观察细胞成活率,荧光显微镜检测细胞内钙荧光强度(FI)在KCl激下的变化,全细胞膜片钳记录电压-依赖性钾电流.结果:分离的VSMCs镜下呈典型的梭状或长条状,成活率达68.0％;VSMCs内钙FI在KCl刺激下可增高;并可记录到稳定的电压-依赖性钾电流.结论:本法可获得大量形态和结构良好的VSMCs,且胞膜离子通道功能良好.     

维生素E抑制同型半胱氨酸介导的血管平滑肌细胞增殖

目的 探讨在同型半胱氨酸诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中,活性氧(ROS)的作用和维生素E的影响.方法 [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷掺人法测定细胞DNA合成率,锥虫蓝染色计数细胞数量,DCF-DA荧光探针测定细胞内ROS.结果 (1)同型半胱氨酸诱导VSMC的DNA合成增加,促进细胞增殖和ROS水平升高;尽管半胱氨酸诱导VSMC内ROS水平升高,但是对细胞DNA合成和增殖无影响.(2)过氧化氢酶抑制同型半胱氨酸介导的VSMC内ROS升高,而对VSMC增殖无影响.(3)α-生育酚、β-生育酚均可抑制同型半胱氨酸诱导VSNC内ROS水平升高,但是只有α-生育酚显著抑制VSMC增殖.结论 ROS升高不是同型半胱氨酸诱导的VSMC增殖的原因之一.维生素E降低同型半胱氨酸诱导的VSMC增殖可能与抑制蛋白激酶C活性有关,而与它的抗氧化性无关.     

维生素E对内皮细胞脂质过氧化诱导的单核细胞粘附的影响

用联胺作用于培养人内皮细胞，激发并促进脂质过氧化，使单核细胞对其粘附增加，主要粘附于内皮细胞表面和间隙。本研究探讨维生素Ｅ对内皮细胞脂质过氧化诱导的单核细胞粘附的影响。结果，维生素Ｅ能显著降低联胺引起的过氧化脂质升高，减轻内皮细胞的形态变化，减少单核细胞粘附。结果提示，脂质过氧化活化的内皮细胞在动脉粥样硬化发生中起重要作用。维生素Ｅ通过其抗氧化作用减少单核细胞在内皮细胞上的粘附，从而在动脉粥样硬化发生和防治中发挥作用。     

他汀类药物对血管平滑肌细胞的影响及机制

心血管疾病尤其是冠状动脉硬化性心脏病具有很高的死亡率和发病率,对这些冠脉疾病的病因分析,认为动脉粥样硬化是主要原因。动脉壁脂质沉积和血管平滑肌细胞的异常迁移与增殖是动脉粥样硬化形成的两个关键步骤。目前抗动脉粥样硬化以调脂药物如三羟基三甲基戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶抑制剂（即他汀类药物）为主,临床实验和基础研究表明：他汀类药物不仅具有调控血浆胆固醇的主要作用,而且还涉及其非调脂的抗动脉粥样硬化作用,如抗炎症反应、抑制血小板聚集、抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移、促进血管平滑肌细胞凋亡和改善内皮功能等。本文主要就他汀类药物对血管平滑肌细胞增殖、迁移、凋亡的影响及其机制做如下综述。     

DFMG 调节 TLR-4抑制损伤内皮细胞对平滑肌细胞增殖和迁移促进作用

目的：观察7-二氟亚甲基-5,4-二甲氧基异黄酮（DFMG）是否能干预损伤内皮细胞对平滑肌细胞增殖和迁移的促进作用,且其干预过程是否与 TLR4信号通路相关。方法：采用 CCK-8法和 Transwell 迁移法测定LPC 诱导的内皮细胞的损伤对平滑肌细胞的增殖和迁移的影响。采用 Western blot 和荧光定量 PCR 测定损伤共培养体系中的内皮细胞 TLR4在蛋白水平和基因水平的表达。运用 TLR4特异性激动剂（LPS）和特异性的抑制剂（CLI095）,采用 CCK8法和 Transwell 迁移法测定损伤共培养体系中平滑肌细胞的增殖能力和迁移能力。结果：①随着 LPC 浓度的增加,LPC 诱导的内皮细胞损伤引起平滑肌细胞的增殖和迁移的效应增强,并且选取30μM 的LPC 作用于内皮细胞并与平滑肌细胞共培养作为实验的损伤共培养模型。②经光密度值分析,LPC 组的内皮细胞TLR4的表达量是对照组的2倍;经荧光定量 PCR 分析,LPC 组的内皮细胞 TLR4的表达量是对照组的2.414倍。③相比,损伤组和 LPS 组的平滑肌细胞的增殖和迁移能力较对照组更强;相比,CLI095组和 DFMG 组的平滑肌细胞的增殖和迁移能力较损伤组更弱。结论：LPC 诱导的内皮细胞的损伤可以引起平滑肌细胞的增殖和迁移,而DFMG 可能是通过抑制 TLR4信号阻碍损伤的内皮细胞对平滑肌细胞增殖和迁移的促进作用。     

兔血管内皮细胞与平滑肌细胞体外增殖的相互影响

目的　研究在体外培养条件下血管内皮细胞条件培养基（ECCM）、内皮素-1（ET-1）、内皮素转化酶抑制剂phosphoramidon对血管平滑肌细胞（SMC）增殖的影响,同时研究了血管平滑肌细胞条件培养基（SMCCM）对血管内皮细胞（EC）增殖方面的影响. 方法　EC和SMC均来源于兔主动脉,在获得了EC和SMC的条件培养基（CM）后,分别用两者以及ET-1进行实验,细胞的增殖率通过3H掺入法进行测定. 结果　ECCM和ET-1可明显促进SMC的增殖,并呈现剂量依赖性. 其最大效应分别为(190±11)% (100% ECCM)和(166±9)% (100 ng*L-1 ET-1). 而phosphoramidon存在条件下的ECCM使其分裂作用降低了(33±2)%. SMCCM抑制EC的增殖,这种抑制作用并非剂量依赖性,其最大的抑制效应为基本水平的(78±3)%. 结论　ECCM和ET-1可促进SMC的增殖作用. phosphoramidon可明显地抑制ECCM对SMC的增殖作用.同时SMCCM对EC的增殖起抑制作用.     

姜黄素对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察姜黄素对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响及其机制.方法:采用组织块法体外培养大鼠VSMCs,MTT法测定姜黄素对VSMCs增殖的抑制作用.流式细胞术分析细胞凋亡,Western Blot印迹法检测VSMCsP21,P53,Bcl-2蛋白表达的变化.结果:MIT显示不同浓度姜黄素(7.5～120 μmol/L)在24～72 h范围内,浓度和时间依赖性抑制VSMCs增殖;流式细胞术显示30,60 μmoL/L姜黄素作用VSMCs 24 h后,凋亡率较对照组明显升高;30 μmol/L姜黄素在不同时间点可上调VSMCs P21蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,对P53蛋白表达没有影响.结论:姜黄素具有明确的抑制VSMCs增殖,并能诱导血管平滑肌细胞凋亡,与上调VSMCa P21蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达有关.