大鼠微粒皮移植创面中角蛋白19及整合素β1的异位表达

目的了解大鼠微粒皮移植后创面角蛋白19、整合素β1表达特征的变化，初步探讨微粒皮移植创面的愈合机制。方法取20只大鼠制成全层皮肤缺损创面模型，分为自体皮组：创面移植占缺损皮肤表皮质量10％的自体微粒皮；混合皮组：创面混合移植自、异体微粒皮，其用量分别为缺损皮肤表皮质量的10％、40％。比较移植后2、3、4周2组大鼠创面的愈合率、收缩率，观察2、4周时角蛋白19、整合素β1的表达与分布特征。结果移植后2、3周，混合皮组大鼠创面愈合率分别为（85±5）％、（84±8）％，明显高于自体皮组的（53±10）％、（65±9）％（P〈0．01）。2组创面收缩率在移植后各时相点差异无统计学意义（P〉0．05）。移植后2、4周，2组大鼠创面新生表皮的颗粒层和棘层均可见角蛋白19、整合素β1阳性细胞；此期间未见角蛋白19在基底层有所表达。移植后2周，2组创面基底层未见整合素β1阳性细胞；4周时，部分创面标本中有整合素β1阳性细胞在基底层间断出现。结论自、异体微粒皮混合移植有助于创面愈合。自体微粒皮和自、异体微粒皮混合移植创面中，均存在角蛋白19和整合素β1阳性细胞的异位表达。     

碱性成纤维细胞生长因子对深Ⅱ°烫伤大鼠创面再上皮化过程中表皮干细胞的生物学作用

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）促进大鼠深Ⅱ°烫伤创面再上皮化作用及对表皮干细胞增殖和迁移的影响。方法66只Wistar大鼠随机分为A组（正常对照组，n=6）、B组（单纯烫伤组，n=30）、C组（bFGF治疗组，n=50）。利用大鼠5％深Ⅱ°烫伤模型，于伤后1、3、7、14和21d采取创面边缘皮肤标本，免疫组织化学染色技术检测创面边缘上皮及深层皮肤附件上皮整合素-β1（integrin-β1）、角蛋白19（K19）和PCNA以及上皮钙依赖性黏附素（E—cadherin）的表达情况。结果正常皮肤中，整合素-β1、角蛋白19、PCNA和E-cadherin表达主要集中在Wistar大鼠表皮层的基底部及毛囊球部。皮肤烫伤初期，以上指标变化不显著。7—14d时，整合素-β1和角蛋白19同时阳性表达的细胞有所增强，PCNA和E—cadherin的表达增强。当局部外用bFGF后，创伤初期（1—3d）组织中的表达差异无统计学意义（P〉0．05），7—14d，阳性表达角质形成细胞出现在创缘的棘层与颗粒层，毛囊根部的阳性标记细胞强于对照组。结论bFGF促进深Ⅱ°烫伤大鼠创面愈合与加速启动创缘表皮基底层的表皮干细胞以及皮肤附件上皮的迁移有关。     

重组蛇毒纤溶因子修饰聚氨酯人工血管的犬颈动脉置换实验

目的通过动物实验评价重组蛇毒纤溶因子（recombinant fibrinolytic enzyme factor II，rF II）修饰聚氨酯（polyurethane，PU）人工血管的植入效果。方法采用浸渍．沥滤法制备口径4mmPU微孔人工血管，扫描电镜观察血管管壁微孔大小和形态，用rF II修饰人工血管内腔。取20只体重（20±1）kg的雄性杂种犬制作颈动脉2cm缺损模型，随机分为3组：rF II修饰PU组（n=8）、无rF II修饰PU组（n=6）和膨体聚四氟乙烯（expanded polytetrafluoroethlyene，ePTFE）组（n=6），植入相应人工血管以修复缺损。记录术后动物一般情况；计算术后30d和60d的血管通畅率；测量术后60d人工血管内径，并进行组织学检查和扫描电镜观察。结果制得的PU微孔人工血管内径（3．74±0．06）mm，壁厚0．4～0．6mm，密度0．25g／cm^3，孔隙率79．8％，径向动态顺应性为8．57％／100mmHg。人工血管管壁内，微孔分布均匀，呈开孔结构。外层孔径为（140±41）Ima，内层孔径为（100±3）μm，外层／内层的厚度比约2：1，内腔表面孔径为（40±16）μm。术后颈部切口愈合良好，动物均存活，无并发症发生。术后30d及60d血管通畅率：rF II修饰PU组分别为100％及66．7％，无rF II PU组为66．7％及33．3％，ePTFE组为66．7％及0，堵塞的人工血管在吻合处发现血栓。rFII修饰PU组、无rF II修饰PU组及ePTFE组植入前血管内径分别为（3．74±0．06）、（3．74±0．06）、（4．00±0．03）mm；术后60d内径分别为（4．51±0．05）、（4.31±0．24）、（4．43±0．12）mm；3组间植入前后比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。rF II修饰PU组组织学观察，植入15d有血浆蛋白在内腔表面沉积；30d后有少量细胞黏附；60d后新内膜形成。新内膜厚度随植入时间增加而变厚；植入后60 d rF II修饰PU组人工血管近端、中点及远端的新内膜厚度分别为（560±22）、（78±5）、（323±31）μm（P〈0．05）。扫描电镜观察，rF II修饰PU组新内膜表面由扁长形细胞组成，其长轴顺着血流方向排列，与正常颈动脉内腔表面形貌相似。结论rF II修饰PU血管内腔可提高纤溶活性，减少血栓栓塞的发生，有利于提高植入血管的通畅率。     

替普瑞酮对大鼠梗阻性肾病间质纤维化的影响

目的探讨替普瑞酮（GGA）对大鼠梗阻性肾病模型（UUO）肾间质纤维化的影响和可能机制。方法15只SD大鼠随机分成3组：假手术组、UUO模型组和GGA治疗组，每组5只。从建立UUO模型前1d开始，GGA治疗组和模型组分别给予400mg／kgGGA和溶媒（0．05％阿拉伯树胶＋0．008％维生素E）灌胃，每天1次，术后第7天处死大鼠。常规染色观察肾脏组织病理改变。间接免疫荧光和Western印迹检测肾脏E-钙黏蛋白（E—cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的水平。TUNEL染色和PCNA免疫组织化学染色分别观察肾小管上皮细胞的凋亡和增生情况。结果GGA能诱导肾脏特异性高表达热休克蛋白72（HSP72）。与UUO模型组相比，GGA治疗组肾小管损伤和肾问质纤维化的程度明显减轻『肾小管损害百分比（48．7％±1．3％比65．8％±7．3％）；肾间质损害分值（0．40±0．08比1．36±0．50），P均〈0．05】；E—cadherin蛋白水平增加，α-SMA蛋白水平降低（P均〈0．05）；每高倍视野中TUNEL阳性和PCNA染色阳性的细胞数显著减少（分别为6．78±1．25比2．81±0．63，57．61±5．42比17．66±1．38，P均〈0．05）。结论GGA可能通过抑制肾小管上皮细胞的凋亡，延缓大鼠梗阻性肾病肾间质纤维化的进程。     

全身麻醉对剖宫产产妇分娩新生儿的影响

目的探讨剖宫产产妇实施全身麻醉对新生儿的影响。方法选择全身麻醉或硬膜外阻滞下行择期剖宫产产妇各30例，分别组成全身麻醉组和硬膜外阻滞组。全身麻醉组产妇先后静脉注射异丙酚2mg／kg、琥珀胆碱1．5mg／kg、并给予气管插管。麻醉维持：40％笑气＋60％氧气＋0．5MAC异氟醚，及维库溴铵0．08mg／kg，硬膜外阻滞组产妇应用1．73％碳酸利多卡因4ml＋5ml＋5ml（含1：200000肾上腺素）椎管内注入。两组分别于胎儿娩出后立即抽取新生儿脐动脉血进行血气分析，并记录两组新生儿出生后1d～5d的新生儿神经行为评分（NBNA）：新生儿行为能力、被动肌张力、主动肌张力、原始反射、一般状态。结果①血气分析：全身麻醉组新生儿pH值、二氧化碳分压（PaCO2）、氧分压（PO2）、动脉氧饱和度（SaO2）及碳酸氢根（HCO3^-）分别为7．21±0．08、（56．1±16．5）mmHg、（23．1±11．0）mmHg、（29．9±20．6）％、（19．1±3．4）（mmoL／L）。硬膜外阻滞组新生儿分别为7．37±0．06、（51．3±9．7）mmHg、（17．5±6．9）mmHg、（21．8±12．7）％、（21．6±3．3）（mmoL／L）。②NBNA：全身麻醉组第1d，2d，3d，5d的NBNA分别为（36．1±2．8）、（37．0±5．1）、（38．3±2．3）、（38．7±2．3）分。硬膜外阻滞组分别为（37．2±2．5）、（38．7±1．9）、（39．1±4．5）、（39．2±5．1）分。两组各项评分比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论剖宫产产妇采用常规剂量药物实施全身麻醉对新生儿安全无明显影响。     

皮肤源祖细胞-透明质酸复合物对糖尿病大鼠创面愈合的影响

目的研究皮肤源祖细胞（SKP）-透明质酸（HA）复合物的构建方法，观察其对糖尿病（DM）大鼠创面愈合的影响。方法分离培养SD大鼠SKP，以HA为载体构建复合物，观察复合物中SKP的分化特性。选取60只SD大鼠腹腔注射链脲菌素诱导成DM模型．背部对称制作2个直径1cm全层皮肤缺损创面，随机分为SKP-HA组，创面涂布100μl SKP-HA；HA组，创面涂布100μl HA；对照组，创面涂布DMEM／F12培养基。每组20只。各组大鼠于伤后1、2、3、4周检测创面愈合率，留取创面组织标本检测羟脯氨酸（Hyp）含量，并观察SKP在创面愈合过程中的迁移。结果大鼠SKP与HA共培养后生长良好，复合物中的SKP可保持其特性：向神经元细胞、神经胶质细胞、脂肪细胞分化。伤后2周SKP-HA组、HA组的创面愈合率分别为（72．1±2．8）％、（53．7±2．9）％，均明显高于对照组的（42．5±1．5）％（P＜0．05）；伤后3周SKP—HA组高于HA组及对照组（P＜0．05或0．01）；伤后4周SKP—HA组、HA组创面完全愈合，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0．01）。伤后1周各组Hyp含量差异无统计学意义（P＞0．05）；伤后2～4周，SKP-HA组、HA组Hyp含量均高于对照组（P＜0．01）；伤后3、4周SKP-HA组高于HA组（P＜0．01）。SKP在创面得以成活并随时间的延长逐渐向真皮层迁移。结论SKP-HA复合物可促进DM大鼠创面愈合。     

奥美拉唑对大鼠减体积肝移植后肝再生的影响

目的观察奥美拉唑对大鼠减体积肝移植肝细胞再生的影响。方法建立大鼠减体积肝移植模型，实验组移植后即时给予奥美拉唑，对照组予生理盐水。两组分别于肝移植术后分为5组（n=8），观察术后3、5、7、10、14d血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶值、移植肝重／供肝减体积前全肝重比值、移植肝细胞有丝分裂指数（MI）、增殖细胞核抗原（PCNA）表达指数、溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入指数及血清胃泌素值。结果大鼠减体积肝移植术后5d肝细胞再生达高峰，实验组的再生活性显著高于对照组，MI为（2．54±0．24）％和（1．71±0．16）％（P〈0．01）、PC—NA指数为（26．96±2．09）％和（18．73±1．94）％（P〈0．01）、BrdU指数为（10．24±1．11）％和（5．75±0．88）％（P〈0．01）。术后7d，实验组和对照组移植肝重／全肝重比值分别为（76．3±1．6）％和（71．2±1．0）％（P〈0．05），血清胃泌素水平分别为（441．9±25．9）ng／L和（292．9±14．2）ng／L（P〈0．05）。术后14d，实验组和对照组移植肝重／全肝重比值分别为（94．5±1．7）％和（86．9±1．5）％（P〈0．01），血清胃泌素水平分别为（487．8±29．4）ng／L和（291．7±21．6）ng／L（P〈0．01）。实验组和对照组血清ALT、AST值差异无统计学意义。结论奥美拉唑能促进减体积肝移植术后的肝细胞再生，其作用可能与胃泌素分泌增高有关。     

糖尿病大鼠表皮干细胞及其增殖分化相关蛋白的研究

目的表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)能主动参与创面修复,促进创面再上皮化。建立糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠模型,观察DM大鼠皮肤中ESCs增殖分化相关蛋白——角蛋白19(keratin19,K19)、β1整合素(β1-integrin)、β-连环素(β-catenin)及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,探讨DM大鼠皮肤创面难愈合的潜在机制。方法20只雄性SD大鼠,体重250～300g,随机分为DM组和正常对照组,每组10只。DM组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ,65mg/kg)制备DM大鼠模型,正常对照组不作处理。给药后4周取两组大鼠胰腺组织,HE染色观察胰岛组织学变化。取两组动物背部全层皮肤,分离培养ESCs,取第2代ESCs行免疫细胞化学染色鉴定K19、β1-integrin、β-catenin和PCNA阳性表达,流式细胞仪检测细胞周期,细胞接种1周后检测两组细胞克隆形成率。结果DM大鼠造模成功率为90%。DM组胰腺HE染色可见胰岛细胞数明显减少,出现变性坏死;正常对照组胰岛细胞结构清楚,无变性坏死。DM组大鼠ESCs的K19、β1-integrin、β-catenin及PCNA阳性表达分别为82.63±14.77、21.59±4.71、76.49±6.58、90.77±12.44,均低于正常对照组的151.24±42.83、54.48±17.43、116.39±9.26、110.62±20.67,差异均有统计学意义(P0.01)。DM组ESCs克隆形成率为6.43%±1.01%,明显低于正常对照组的11.37%±1.62%,差异有统计学意义(P0.01)。流式细胞仪分析显示DM组88.89%细胞处于G0/G1期,凋亡细胞数为3.98%;正常对照组91.50%细胞处于G0/G1期,无凋亡细胞。结论通过腹腔一次性注射65mg/kgSTZ可有效建立DM大鼠模型。DM大鼠ESCs数量少、增殖分化能力低可能是DM创面难愈合的重要机制之一。     

烧伤残余创面的序贯性治疗

目的寻找烧伤残余创面序贯性治疗的有效方法。方法选择烧伤残余创面患者25例，采取自身对照，分别以凡士林油纱（A组）、组织工程全层皮肤（HTAS，B组）覆盖创面，用含氧液冲洗、负压引流后覆盖HTAS（C组）。取创面标本检测细菌量、肿瘤坏死因子（TNF）α含量及基质金属蛋白酶（MMP）13mRNA表达水平，计算创面愈合率。结果治疗后第3、6、9、12天，患者C组创面细菌量分别为（5．30±1．60）、（1．30±0．80）、（1．70±0．60）和（0．60±0.10）集落形成单位（CFU）／ml，显著低于A、B组（P＜0．01）。C组创面经治疗后6d，TNF-α．含量和MMP-13mRNA表达水平分别为（0．650±0．040）ng／mg、0．210±0．010，明显低于A组[（1．550±0．370）ng／mg、1．040±0．050，P＜0．01]和B组[（0．810±0，080）ng／mg、0．640±0．030，P＜0．01]；B组肉芽组织TNF-α含量和MMP-13mRNA表达量显著低于A组（P＜0．01）。治疗后15、30d，C组创面愈合率明显高于A、B组（P＜0．01）。结论应用含氧液冲洗、负压引流后覆盖HTAS，可显著促进创面愈合，是一种有效的烧伤残余创面序贯性治疗方法。     

膀胱出口部分梗阻大鼠逼尿肌胆碱能和肾上腺素能受体变化的研究

目的观察大鼠膀胱出口部分梗阻后不同时间逼尿肌胆碱能（M）、肾上腺素能β及α1受体的变化。方法40只大鼠分为对照组、假手术组、梗阻2周组和梗阻5周组,每组10只。放射配基法测定逼尿肌M、β及α1受体密度和平衡解离常数。离体逼尿肌条拉力实验观察梗阻2周和5周后逼尿肌对氯化氨甲酰胆碱和异丙肾上腺素产生的收缩和舒张反应。结果4组M受体密度分别为（121．87±15．32）、（122．34±26．56）、（138．66±24．16）和（131．54±23．09）fmol／mg,β受体密度分别为（83．18±7．51）、（82．20±6．24）、（92．21±6．53）和（86．32±5．02）fmol／mg。梗阻组M受体和β受体密度与对照组及假手术组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）,梗阻5周组较2周组降低（P〈 0．05）。4组α1受体密度分别为（30．08±3．51）、（31．07±2．99）、（29．56±3．21）和（28．31±1．16） fmol／mg,梗阻组与对照组及假手术组相比,差异无统计学意义（P〉0．05）。对照组M、β、α1受体平衡解离常数分别为（2．18±0．13）、（5．63±0．44）、（4．68±0．34）mmol／L,假手术组分别为（2．54±0．96）、（5．74±0．41）、（4．79±0．42）mmol／L,梗阻2周组分别为（2．22±0．36）、（5．66±0．32）、（4．56±0．33）mmol／L,梗阻5周组分别为（2．32±0．25）、（5．56±0．19）、（4．55±0．18）mmol／L,组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。氯化氨甲酰胆碱和异丙肾上腺素引起逼尿肌条的收缩和舒张均呈浓度依赖性反应（P〈0．05）。结论大鼠膀胱出口部分梗阻后可能引起逼尿肌M、β及α1受体的改变,导致膀胱功能变化。     

创面愈合过程中创缘表皮干细胞的异位

目的观察创缘表皮干细胞在全层皮肤创面愈合过程中的分布特征,初步探讨其在创面愈合过程中的作用.方法将已行BrdU活体标记的 20只Wistar大鼠背部制备4个为2.54 cm2的全层皮肤创面,分别于伤后3、7、14和21 d(n=5)行组织学检查,动态观察创面愈合情况,并行β1整合素、角蛋白19(K19)与BrdU免疫组织化学法检测表皮干细胞在创面愈合过程中的分布情况.结果创面愈合率为83.75%(61/80).所有创面肉芽组织于各时相点均未见β1整合素、K19阳性细胞出现,但于创缘表皮的棘层或颗粒层均出现散在的β1整合素、K19和BrdU阳性细胞.且越接近创面阳性细胞越密集,组织学上与基底层的阳性细胞无直接联系;其数量随创面的缩小逐渐增加,直至创面愈合.创面上皮化后,阳性细胞逐渐减少,并随愈合创面表皮脚的出现而消失.而感染创面的阳性细胞数量明显少于未感染创面.结论表皮干细胞能主动参与创面的修复,创缘的表皮干细胞异位的主要功能可能是促进创面再上皮化.     

透明质酸外敷膜对大鼠手术切口愈合

目的　探讨透明质酸外敷膜对手术切口愈合的影响。方法　选用纯系SD大鼠 4 8只 ,随机分为 8组 ,每组 6只。采用背部两侧切口 ,左侧外敷透明质酸膜 ,为实验组 ;右侧外敷生理盐水纱条作为对照。分别对术后 1～ 2 8d切口愈合情况进行组织学观察。结果　实验组炎症反应轻 ,表皮愈合快 ,成纤维细胞发生退行样变化 ,胶原纤维较纤细 ,排列较疏松。结论　透明质酸外敷膜在切口愈合早期 ,有较强的透皮作用 ;并可促进表皮层愈合、延缓角化层形成。     

不同来源的表皮干细胞促进皮肤创面愈合的研究

目的 观察表皮干细胞(ESCs)及去分化来源的表皮干细胞(DESCs)对皮肤创面愈合的促进作用及其异同.方法 由新鲜人包皮标本以贴壁法分离ESCs,随机分为3组,第1组作为原代ESCs:第2组传代培养至第6代时可见细胞成熟呈表皮细胞(ECs)形态,由原来的大克隆生长的小圆细胞形态变为较为肥大的不规则型细胞,无法形成克隆样增殖;其细胞表型也由β1整合素、CK19强阳性、CK10阴性变为β1整合素、CK19阴性,而CK10强阳性,予以100μg/L的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)培养48 h进行去分化诱导,48 h后ECs周边开始出现小圆细胞并呈克隆样生长,β1整合素、CK19、CK10等细胞表型也趋于与ESCs一致,即DESCs;第3组传代培养至第6代获得ECs.3组细胞皆以D-Hanks液重悬调其终质量浓度为2×106个/ml.将12只裸鼠每只背部左右各制备1个直径6 mm创面,共24个创面.将全部创面随机等分为4组,每组6个,分别以ESCs、DESCs、Ecs及生理盐水(NS)各0.2 ml进行创面注射.于术后0、3、7 d测量创面面积进行统计学分析,并于术后7 d行创面取材苏木素-伊红(HE)染色.结果 ESCs组与DESCs组在术后3 d时创面面积分别为(11.758±2.544)、(11.515±1.351)mm2,7 d时创面面积分别为(1.795±1.063)、(2.043±1.138)mm2,修复速度要明显快于ECs组与NS组[3 d时创面面积分别为(17.857±1.722)、(16.192±2.256)mm2,7 d时创面面积分别为(5.367±1.219)、(5.070±1.357)mm2,P＜0.01];而ESCs与DESCs组之间创面修复速度比较差异无统计学意义(P＞0.05);ECs组与NS组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).HE染色提示ESCs组与DESCs组的创面愈合质量优于ECs组与NS组,可见有皮肤附属腺的再生且纤维瘢痕组织较少.结论 ESCs与DESCs皆有促进创面愈合的作用,相互之间无明显差异.

Abstract：

Objective To investigate the enhancing effect of epithelial stem cells (ESCs) and dedifferentiation derived epithelial stem cells (DESCs) in the healing of epidermal wound. Methods ESCs were isolated from the fresh circumcised foreskins by using adherence method and randomly divided into three cohorts: ESCs cohort, DESCs cohort and epithelial cells (ECs) cohort. The final cell density was adjusted to 2 × 106/ml with D-Hanks in each group. The model of BALB/C mice full-thickness skin loss wounds was established. Two circular 6 mm-diameter skin loss wounds were cut on every BALB/C mouse back. Twenty-four wounds of 12 BALB/C mice were divided equally and randomly into 4 groups:DESCs, ESCs, ECs and NS. The cell suspensions of DESCs, ESCs and ECs were injected respectively into the wound edges with the density of 2 × 106/ml. And the volme was 0. 2 ml per treatment wound. The same volume of normal saline was injected in NS group. On the postoperative day 0, 3, 7, all of the wound areas were measured and analyzed statistically. On the postoperative 7 day, the sections were made and observed by using hematoxylin and eosin (HE) staining. Results The wound areas in DESCs group and ESCs group were ( 11. 758 ± 2. 544) and ( 11.515 ± 1.351 ) mm2 on the 3rd day postoperatively, and ( 1. 795 ±1. 063) and (2. 043 ± 1. 138) mm2 on the 7th day postoperatively, respectively. The wound areas in ECs group and NS group were ( 17. 857 ± 1. 722) and ( 16. 192 ±2. 256) mm2 on the 3rd day postoperatively,and ( 1. 795 ± 1. 063) and (2. 043 ± 1. 138) mm2 on the 7th day postoperatively, respectively. There was statistically significant difference in wound area between ESCs or DESCs group and ECs, NS groups on the 3rd, 7th day postoperatively ( P ＜ 0. 01 ), but there was no statistically significant difference between DESCs and ESCs groups ( P ＞ 0. 05 ). HE staining showed the repairing quality of treatment wounds was superior to that in the control wounds, and regenerating glands and less fibrous connective tissues were seen in ESCs and EDSCs groups. Conclusion Both ESCs and DESCs could promote the wound repair.     

蛆虫分泌物对糖尿病大鼠溃疡组织bFGF和结缔组织生长因子表达的影响及抗茵作用研究

目的 探讨蛆虫分泌物对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠溃疡组织bFGF和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响及预防细菌感染的作用.方法 取3月龄雄性SD大鼠40只,体重300～350 g,制备DM大鼠溃疡创面模型.随机分为2组(n=20),实验组创面涂以丝光绿蝇蛆虫的分泌物,对照组不予处理.术后1～21 d观察创面大体情况,7、14、21 d分别记录两组溃疡面积;术后14 d取两组溃疡组织,制备组织切片,行HE染色观察;3、7、14 d取溃疡表面分泌物行常规细菌培养,检测细菌感染情况;术后7、14、21 d用免疫组织化学法处理切片,显微镜下对bFGF、CTGF阳性表达细胞进行计数分析.结果 实验组创面清洁,新鲜肉芽生长,无脓性分泌物,愈合情况良好,无金色葡萄球菌感染;对照组创面渗出、糜烂严重,创面不断加大加深,愈合情况不良,金色葡萄球菌感染率为60%.术后7、14、21 d实验组溃疡面积分别为(1.83±0.23)、(0.39±0.08)cm2和0,对照组分别为(2.18±0.67)、(3.57±0.53)、(3.94±0.67)cm2;两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).14 d组织学观察示实验组上皮组织新生,创缘炎性坏死物减少,纤维瘢痕形成;对照组大量炎性细胞浸润,坏死组织较多.术后7、14 d,实验组bFGF阳性表达数分别为23.76±3.34、52.76±4.84,对照组为18.88±2.16、46.04±4.00;实验组CTGF阳性表达数分别为18.76±3.24、46.52±4.07,对照组为12.52±3.03、40.52±3.96;两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)21 d,两组bFGF及CTGF阳性表达数差异无统计学意义(P＞0.05).结论 蛆虫分泌物能提高DM溃疡组织bFGF、CTGF的表达,有效促进创面愈合,预防组织细菌感染.     

Effect of substance P released from peripheral nerve ending on endogenous expression of epidermal growth factor and its receptor in wound healing

Objective: To explore the relationship between substance P (SP) released from peripheral nerve endings and the expression of epidermal growth factor (EGF) and epidermal growth factor receptor (EGFR) during wound bealing. Methods: Fifty Wistar rats were randomly divided into 2 groups, injury group and capsaicin group. In the injury group, a full-thickness skin wound on the back of the rat was taken. The wound edge and granulation tissues were taken on the 1st, 3rd, 6th, 9th, 12th days after injury, respectively. In the capsaicin group, capsaicin was injected subcutaneously on the back of the rats to destroy the sensory nerve to prevent the secretion of SP, then a wound and sample was made in the same way.Immunohistochemistry and in situ hybridization were employed to detect the expression of SP, EGF/EGFR, and EGF mRNA/EGFR mRNA in the granulation tissues.Results: In the injury group,immunohistochemical stain of SP and EGF/EGFR was located on the hair follicles and sebaceous glands at the 1st day. And the stain of SP was obvious at the 3rd day in the granulation tissues, then decreased gradually. EGF/EGFR was at low level at the 3rd day, then increased gradually and reached the peak at the 9th day, then declined. In the capsaicin group, the stain of SP and EGF/EGFR was faint and without obvious change during the wound healing process. The tendency of the EGF mRNA/EGFR mRNA expression was similar to that of EGF/EGFR. Conclusions: During wound healing, SP may promote the healing process by affecting the expression of EGF/EGFR in the erunuation tissues.     

Topical embryonic stem cells enhance wound healing in diabetic rats

The effects of embryonic stem cells (ESCs) on diabetic wound healing were investigated using an excisional skin wound model in 110 diabetes‐induced rats. We transplanted a clonal population of ESCs (5 × 10⁶) by topical injection into full thickness skin wounds. Four study groups were used; nondiabetic rats as a control, non‐insulin controlled diabetic rats not treated with ESCs, insulin controlled diabetic rats not treated with ESCs, and insulin controlled diabetic rats treated with ESCs. Five rats in each experimental group were sacrificed on days 1, 5, 10, 15, and 20 after wounding. Wounds images were acquired daily and wound sizes were calculated. We measured the mRNA levels of epidermal growth factor (EGF) and vascular endothelial growth factor (VEGF), and fibronectin levels in extracellular matrix, and assessed wound healing by assessing histological parameters of epidermal regeneration, granulation tissue thickness, and angiogenesis. In the ESC‐treated group, wound sizes were significantly smaller than in the insulin controlled diabetic group not treated with ESCs on days 5 and 10 (p < 0.05), and EGF and VEGF levels were markedly higher on days 5 and 10, fibronectin levels on day 5 after injection. All histological scores in the ESC‐treated group were significantly higher than those of the insulin controlled diabetic group on day 5 (p < 0.05). Our results shows that topical ESCs enhance diabetic wound healing during the early stage, and suggest that ESCs transplantation offers a novel therapeutic modality for the treatment of diabetic wounds. © 2011 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J Orthop Res 29: 1554–1562, 2011     

左旋精氨酸对糖尿病大鼠烧伤创面血管形成的影响

目的　观察左旋 (L)精氨酸对糖尿病大鼠烧伤创面修复过程中血管形成的影响。 方法雄性SD大鼠 ,设烫伤对照 (A)组、糖尿病烫伤 (B)组、甘氨酸对照 (C)组和L 精氨酸干预 (D)组 ,每组各 2 5只。B、C、D组大鼠通过腹腔注射链脲佐菌素 (STZ)建立糖尿病模型 ,C、D组分别管饲甘氨酸和L 精氨酸 2 0 0mg·kg-1·d-1。8周后取各组大鼠 (每组 5只 )背部皮肤组织测定糖含量。之后各组大鼠给予 2 0 %TBSA深Ⅱ度烫伤 ,于伤后 3、7、14、2 1d测量创面面积 ,计算创面愈合率 ;采用CD34免疫组织化学染色计算微血管密度 (MVD);检测创面组织释放一氧化氮 (NO)、血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子 (TGF)β1含量。　结果　与B组相比 ,D组大鼠创面愈合率从伤后第 7天起显著增加为 [( 4 4.10± 3.5 0 ) % ,P <0 0 5 ],创面MVD值在伤后各时相点均显著增加 ( P <0 0 5 ),创面组织中释放NO、VEGF和TGF β1量增加 ,皮肤组织糖含量降低为 ( 1.380± 0 .12 0 )mg/g。　 结论L 精氨酸可通过增加NO、VEGF和TGF β1的合成与释放 ,降低皮肤组织糖含量 ,增加糖尿病大鼠烧伤创面的血管形成 ,并促进创面愈合     

去分化来源表皮干细胞与在体表皮干细胞之间的差异分析

目的：比较去分化来源的表皮于细胞与在体表皮干细胞之间的异同点。方法：采用碱性成纤维细胞诱导因子（bFGF）诱导表皮细胞去分化形成表皮干细胞;由人包皮分离、培养在体表皮干细胞。采用免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、细胞染色体核型检测技术及逆转录-聚合酶链式反应法（RT-PCR）观察去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞之间细胞表面标志蛋白表达、细胞亚群及染色体核型等方面的差异。结果：免疫细胞化学染色结果表明,去分化来源的表皮干细胞能够表达表皮干细胞及其亚群特异性的表面标志蛋白,如融整合素、角蛋白19（CK19）、CK14等,而CK10的表达为阴性。流式细胞技术检测结果显示去分化来源的表皮干细胞及在体表皮干细胞中α6^＋CD71^-、α6^＋CD71^＋及CD71表达阳性的细胞亚群分别占被检测细胞总数的22．8％、68．14％、0及45．39％、33．11％、0．02％。细胞染色体核型检测分析结果显示去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞的染色体均为23对、46条,核型正常。此外,RT-PCR检测结果表明去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞中融整合素、CK19、CK14及CK10的mRNA表达水平差异无显著性。结论：去分化来源的表皮干细胞和在体表皮干细胞之间存在着细胞亚群的分布差异,提示其具有更强的增殖能力;二者在细胞核型和表面标志蛋白表达等方面具有相似性。去分化来源的表皮干细胞可以作为表皮干细胞的替代细胞应用于皮肤重建与再生的相关研究。     

热休克蛋白90促进糖尿病创面愈合的作用研究

目的：研究HSP90在糖尿病性难愈创面中的作用。方法：在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠背部做d=2cm的全层皮肤缺损模型,并随机分为四组：空白组（B组）、HSP90组（C组）、胰岛素组（D组）及HSP90与胰岛素联合用药组（E组）。另设一组正常大鼠同样在背部做d=2cm全层皮肤缺损模型作为对照组（A组）,每组n=（5n1＋n2）=20只,共100只大鼠,在创面形成后即时给予难愈创面药物治疗持续2天,A组则不治疗。于创面形成后第3天、第5天、第7天、第10天、第14天及第21天进行大体观察及活体取材做常规病理学观察,各时间点标本采用免疫组化ABC法观察HSP90,并计算其平均密度值及积分光密度值,观察其表达规律。结果：大体观察下,在计算第21天的创面愈合率后我们发现,C组（85.9%）、D组（86.8%）及E组（96.8%）相较于B组（79.7%）创面愈合率均有显著提高（P〈0.05）,其中E组疗效更加突出;而在镜下观察中,我们发现E组创面表皮增厚,上皮化活跃,表皮细胞排列规则,且HSP90在各时期的表达水平显著增高（P〈0.05）,C组与D组虽也有类似改变但不如E组显著。结论：HSP90能够提高糖尿病难愈性创面21天的愈合率,同时我们发现将HSP90与胰岛素联合应用后会取得更好效果,进一步提高创面21天时的愈合率。