表皮生长因子受体单抗诱导人肺癌SPC A1细胞凋亡

目的 观察表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）单克隆抗体是否可诱导人肺癌ＳＰＣ Ａ１细胞凋亡，以进一步说明ＥＧＦＲ单抗所具有的抗肿瘤作用。方法 以不同浓度的ＥＧＦＲ单克隆抗体干预培养人肺腺癌ＳＰＣ Ａ１细胞株７２ｈ，收集癌细胞并提取ＤＮＡ，采用凝民泳法和流式细胞仪分析细胞凋亡现象。结果 凝胶电泳显示，单抗浓度为１．０ｕｍｏｌ／Ｌ时，可见明显的凋亡梯状条带出现。流式细胞仪分析发现，在ＥＧＦＲ单抗干预培养的各     

西妥昔单抗联合放化疗治疗中晚期恶性肿瘤的研究进展

表皮生长因子受体（EGFR）活化所触发的信号传导通路参与肿瘤生长的调控,EGFR在许多实体瘤中均有不同程度的表达,通过抑制EGFR信号传导通路的方法可控制肿瘤的发展。西妥昔单抗属于新型人鼠嵌合型IGg单克隆抗体,可与人的正常细胞及肿瘤细胞的表皮生长受体的胞外激酶特异性结合,竞争性抑制EGFR和其它配体的结合,从而阻断受体相关激酶的磷酸化作用,抑制细胞生长,诱导凋亡,达到控制肿瘤生长的目的。     

EGF对一膜表面稳定表达EGFR细胞系生物学特性的影响

目的探讨表皮生长因子(ep iderm al growth factor,EGF)对一膜表面稳定表达表皮生长因子受体(EGF receptor,EGFR)细胞系CHO-EGFR-GFP1生物学特性的影响。方法采用台盼蓝染色计数活细胞数观察不同浓度EGF刺激48 h后细胞增殖情况;PI染色一步法流式细胞仪检测不同浓度EGF刺激48 h和100 ng/mL EGF刺激不同时间细胞周期改变以及细胞凋亡,Ho-echst 33258染色观察细胞凋亡;流式细胞术测定GFP(green fluorescent prote in,绿色荧光蛋白)平均荧光强度判定EGFR表达水平的变化。结果低浓度的EGF可促进CHO-EGFR-GFP1细胞增殖,而高浓度EGF刺激则引起CHO-EGFR-GFP1细胞失去黏附、细胞周期阻滞、促进细胞凋亡以及抑制细胞增殖;高浓度EGF以一种剂量依赖性方式同时上调EGFR的表达和引起细胞凋亡。结论不同浓度EGF对CHO-EGFR-GFP1细胞生长特性影响不同,高浓度EGF刺激引起肿瘤细胞失去黏附可能是导致肿瘤细胞容易脱落、发生转移的机制之一。     

舌鳞癌细胞对Iressa的敏感性及其表皮生长因子受体突变

目的研究中国人舌鳞癌细胞系对表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Iressa的敏感性及其EGFR突变,初步探讨Iressa在头颈鳞癌治疗中的价值。方法以中国人舌鳞癌细胞系Tscca和Tca8113为研究对象,采用MTT法检测Iressa对其增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;对Tscca和Tca8113进行EGFR外显子18～21测序。结果 Iressa对Tscca、Tca8113均有显著的增殖抑制作用,呈剂量依赖性。细胞周期分析显示,较低浓度Iressa(18.2μmol/L和36.4μmol/L)可使Tscca和Tca8113细胞G0/G1期比例增高;流式细胞仪分析显示高浓度Iressa可诱导Tscca和Tca8113细胞凋亡。测序发现Tscca和Tca8113的EGFR外显子20存在同一静止突变,即2361G-A,Q787Q。结论 Iressa可抑制Tscca和Tca8113的增殖,呈剂量依赖性;较低浓度时诱导细胞周期G0/G1期比例增高,高浓度时诱导凋亡,其抑制作用与EGFR突变未见相关性。     

西妥昔单抗致皮疹6例的护理体会

西妥昔单抗是免疫学技术与细胞生物学原理成功结合的产物，是针对表皮生长因子受体（EGFR）的IgG1人-鼠嵌合单克隆抗体，能阻止EGFR与其天然配体结合，打断细胞自泌性无限增殖的恶性循环，抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡，抑制内皮细胞增生和新生血管形成，抑制癌细胞侵袭、转移，增强细胞毒药物、电离辐射的抗癌作用。2006年8月，在我国正式上市，主要用于转移性直肠癌的治疗。     

西妥昔单抗联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌(FLEX):一项开放性随机对照Ⅲ期临床试验

西妥昔单抗(Cetuximab)是针对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)的单克隆抗体,有可能延长晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的生存期.     

联合应用三苯氧胺和吉非替尼对ＮＳＣＬＣ细胞的抗增殖效应

目的:探讨雌激素受体拮抗剂三苯氧胺联合表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼对人小细胞肺癌(NSCLC)细胞株增殖和凋亡的影响及相关的分子机制,为联合分子靶向和激素治疗NSCLC提供理论依据.方法:以吉非替尼及三苯氧胺单独或联合处理NSCLC细胞株,MTF法比较细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡.应用荧光定量PCR及Western blot检测三种肺癌细胞株中表皮生长因子受体(EGFR)及雌激素受体β(Erβ)的表达情况,并分别检测雌二醇.三苯氧胺(TAM)对细胞中EGFR,以及表皮生长因子(EGF)和吉非替尼对Erβ表达的影响,同时还检测了雌二醇对EGFR的磷酸化作用.结果:联合吉非替尼和三苯氧胺增强对EGFR,Erβ阳性的A549,H1650细胞的抑制作用,促进凋亡,但对EGFR,Erβ阴性的H520细胞无明显改变.雌二醇可促进细胞EGFR磷酸化,却也抑制其表达,而三苯氧胺则上调EGFR的表达.同时,EGF及吉非替尼对Erβ的表达也有类似的相反的调控作用.结论:联合吉非替尼和三苯氧胺能够增强对EGFR,Erβ均阳性的肺癌细胞的抗增殖作用,这可能与细胞内EGFR信号转导途径和雌激素信号通路的交叉有关.因此,结合针对EGFR的分子靶向治疗与激素治疗可能为肺癌的治疗提供新的途径.     

白花蛇舌草提取液诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡的实验研究

目的:探讨中药白花蛇舌草提取液(HDE)诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡的作用及初步作用机制。方法:MTT法检测HDE对人肺癌SPC-A-1细胞生长的影响;采用倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态变化;用DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂的情况(DNA梯状条带);用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用免疫组化分析bcl-2基因在SPC-A-1细胞中的表达。结果:HDE抑制SPC-A-1细胞的生长,其效果与白花蛇舌草的浓度和作用时间相关;倒置、荧光镜下SPC-A-1细胞出现细胞凋亡早期形态学改变;琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“ladder”;流式检测到凋亡峰,且凋亡率呈浓度依赖性;免疫组化结果提示HDE能使SPC-A-1细胞bcl-2蛋白表达降低。结论:一定浓度的HDE对SPC-A-1细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与相关基因bcl-2的调控有关。     

4HPR对人宫颈癌细胞凋亡的影响

目的 研究Ｎ-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺（4HPR）对人宫颈癌细胞凋亡的影响。方法 应用光学显微镜、激光共聚焦显微镜、电子显微镜、荧光显微镜从细胞形态学方面观察4HPR对人宫颈癌细胞凋亡的影响;应用流式细胞仪、细胞DNA琼脂糖凝胶电泳法分析4HPR诱导人宫颈癌细胞凋亡的细胞特征、生物化学特征及凋亡细胞百分率。结果 电子显微镜和激光共聚焦显微镜镜下可见细胞固缩,核膜扭曲,核染色体聚集成块并靠近核膜等凋亡细胞特征;光学显微镜和荧光显微镜下可见凋亡小体;细胞DNA被降解,在琼脂糖凝胶电泳中呈现典型的“阶梯状”图谱;流式细胞仪检测结果显示二倍体核型的特征,在DNA直方图上,G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型;凋亡百分率结果显示4HPR可诱导宫颈癌细胞凋亡,且呈时间和浓度依赖性（P＜0.01）。结论 4HPR可诱导人宫颈癌细胞凋亡, 且呈时间和浓度依赖性。     

β1整合素及纤维粘连蛋白与肺癌细胞凋亡关系的实验研究

目的 研究β1整台素及纤维粘连蛋白与人肺癌细胞凋亡之间的关系．方法 体外无血清培养条件下，以培养在包被纤维粘连蛋白底物上的人肺腺癌SPC-A-1细胞为靶细胞、用不同浓度抗β1，整台素单克隆抗体阻断β1整合素与纤维粘连蛋白相互作用，采用苏木素-伊红(HF)染色．吖啶橙荧光染色，DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况，并计算凋亡指数。结果 抗β1整合素单克隆抗体列SPC-A-1细胞凋亡有明显的促进作用，在一定的范围内，呈时间、剂量依赖性。结论 肺癌细胞凋亡与β1整合素受体有密切关系，且β1整台素受体与其特异配体纤维粘连蛋白的相互作用能促进细胞生存，当二者作用阴断导致肺癌细胞凋亡。     

昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变

目的 为探讨昆明山海棠总生物碱(alkaloidsfrom Tripterygium Hypoglaucum Hutch,THHa)抗肺癌机制,研究THHa诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变的关系.方法 应用形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测分析肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期改变.结果 THHa能够诱导肺腺癌A549细胞凋亡并主要作用于细胞周期S期(S期细胞增多).结论 THHa可能通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来肺癌治疗方案的合理设计.     

全人源化PD-L1单抗功能活性及其对人肺腺癌HCC827细胞毒性作用的研究

目的 初步探索自行研制的全人源化PD-L1单抗的功能活性及其对人肺腺癌HCC827细胞毒性作用的影响.方法 利用十二烷基硫酸钠聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定阿特朱单抗及自研PD-L1单抗的纯度;以阿特朱单抗为阳性对照,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测该自研PD-L1单抗的结合活性和竞争性阻断活性;细胞阻断试验分别测定两抗体的细胞阻断活性;流式细胞术(FACS)测定人肺腺癌 HCC827细胞表面PD-L1的表达;检测两抗体的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)效应.结果 SDS-PAGE鉴定出高纯度阿特朱单抗及自研PD-L1单抗;ELISA法检测结果显示自研PD-L1单抗、阿特朱单抗均可与人PD-L1结合并且阻断PD-L1与PD-1结合;自研PD-L1单抗及阿特朱单抗均可以阻断两细胞表面分子PD-L1与PD-1的结合,其EC50分别为0. 208 5,0. 154 8 μg/ml,在一定浓度上两者差异无统计学意义;FACS结果显示人肺腺癌HCC827细胞高表达PD-L1分子;细胞毒性实验结果表明当效应细胞与靶细胞比值一定时,自研PD-L1单抗与阿特朱单抗对人肺腺癌HCC827细胞都有强的毒性作用.结论 该自研全人源化PD-L1单抗有一定的功能活性,可通过阻断细胞表面的PD-L1与PD-1的结合而减弱T细胞受体信号,并可通过ADCC效应发挥一定的抗肿瘤作用.     

人肺腺癌细胞基因表型与尼妥珠单抗疗效的关系

目的 分子靶向治疗是目前肺腺癌治疗的热点,靶向于表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的单抗可提高化疗效果,但肺癌基因表型与疗效的关系尚不明确.文中研究尼妥珠单抗联合化疗的疗效与人肺腺癌细胞表面EGFR表达强度,以及EGFR、KRAS和PI3KCA基因突变的关系.方法 免疫组化法测定A549、SPC-A1和SPC-A1/DTX肺腺癌细胞表面EGFR的表达强度,突变富集-液相芯片法及测序法检测3种细胞EGFR、KRAS和PI3KCA基因的突变情况,绘制细胞生长曲线测定细胞倍增时间.流式细胞仪检测尼妥珠单抗对细胞周期的影响,MTT法检测尼妥珠单抗联合补体依存性细胞毒性(complement-dependent cytotoxicity,CDC)作用,与顺铂/多西紫杉醇的联合指数(combination index,CI).结果 EGFR表达强度:A549( - ),SPC-A1( + ),SPC-A1/DTX(3+ );基因突变:A549的KRAS基因13号密码子和PI3KCA基因的外显子9及20位点突变,SPC-A1/DTX的PI3KCA基因外显子20突变,其余均无突变;SPC-A1/DTX倍增时间最长,为(35.0±2.1)h.尼妥珠单抗(10μg/ml)作用24h后,进入G0/G1期细胞均增多,但SPC-A1细胞(P=0.018)和SPC-A1/DTX细胞(P=0.0002)差异有统计学意义,A549细胞差异无统计学意义(P=0.24).低剂量尼妥珠单抗(10μg/ml)联合补体的CDC效应与细胞表面EGFR的表达强度和作用时间呈正相关.尼妥珠单抗(100μg/ml)与顺铂或多西紫杉醇联合时,A549细胞均为相加作用,SPC-A1均为协同作用,SPC-A1/DTX中,多西紫杉醇与尼妥珠单抗为协同作用(CI=0.40),而顺铂与尼妥珠单抗为相加作用(CI=0.93).结论 尼妥珠单抗单药对于EGFR表达阴性,KRAS和PI3KCA基因突变的A549细胞无明显细胞毒性作用和CDC作用,与化疗无协同作用.尼妥珠单抗单药作用于EGFR表达阳性的细胞有G0/G1期阻滞效应和CDC效应,EGFR表达强度越大,化疗增敏作用越强,而与PI3KCA基因突变的影响不显著.     

新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡

目的研究新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝法检测LGN抑制人肺腺癌细胞株A549增殖的情况,利用Giemsa染色、Hoechst染色、流式细胞仪、DNA ladder检测LGN诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的情况,利用反转录-聚合酶链反应检测凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、原癌基因bcl-2、促凋亡基因bax、p53等。结果 LGN对A549细胞有良好的抑制活性,半数抑制率明显优于阳性对照药依托泊苷,差异有统计学意义(P<0.05)。LGN可诱导A549细胞产生显著凋亡,并可增加A549细胞中p53、caspase-3及bax的mRNA表达,同时降低bcl-2的mRNA表达,并有良好的量效关系。结论鬼臼毒素新衍生物LGN可以诱导A549细胞发生凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因表达有关。     

多西他赛和吉非替尼不同时序用药对人肺腺癌细胞株PC-9的作用机制研究

目的：观察吉非替尼与化疗药物多西他赛按不同时序用药对表皮生长因子受体（EGFR）突变的肺腺癌细胞株的作用,探索最佳时序用药模式。方法：人肺腺癌EGFR基因19号外显子天然缺失的PC-9细胞株,分别经吉非替尼和多西他赛单独或不同时序联合处理,采用CCK-8法测定各组细胞增殖抑制,FCM法检测细胞凋亡,免疫印迹法检测EGFR下游信号通路蛋白磷酸化EGFR（pEGFR）、磷酸化氨酸/苏氨酸激酶（pAkt）表达。结果：多西他赛作用24 h序贯吉非替尼作用48 h组的肿瘤细胞凋亡明显,Sub-G1期DNA达到34%±2%,同其他各组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：该序贯用药模式存在增效作用,促细胞凋亡的同时对信号通路中的pEGFR、pAkt有抑制作用。     

人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及其生物学特征

目的 建立人肺腺癌多药耐药细胞系。方法 以顺铂为诱导药物,人肺腺癌细胞系SPC-A-1为诱导对象,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A-1/CDDP;MTT法测定药物敏感性,透射和扫描电镜观察形态变化,常规染色体检测分析染色体变化。结果 用192d建成人肺腺癌多药耐药细胞系SPC-A-1/CDDP,它对顺铂的耐药指数为11.2,对顺铂、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、长春新碱和足叶乙甙等药物有不同程度的耐药性,但对羧基喜树碱无耐药性,电镜观察可见SPC0-A-1/CDDP细胞胞核不规则,较大,有丰富的微绒毛。结论 本研究建立了稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系（SPC-A-1/CDDP）,可应用于下游实验。     

半枝莲提取物诱导白血病K562细胞凋亡

目的 :探讨中药半枝莲诱导人类慢性髓性白血病K5 6 2细胞株的凋亡作用。方法 :采用MTT法检测半枝莲乙醇提取物对K5 6 2细胞的增殖抑制作用 ;HT荧光染色观察细胞形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳测定凋亡细胞DNA的片段化 ;caspase 3单克隆抗体检测半枝莲提取物作用后K5 6 2细胞内caspase 3的表达。结果 :半枝莲提取物能明显抑制K5 6 2细胞增殖 ,使K5 6 2细胞出现凋亡所具有的形态学及生物化学特征 ,同时对K5 6 2细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用具有一定的浓度依赖性 ,经半枝莲提取物作用后的K5 6 2细胞内caspase 3表达增加。结论 :中药半枝莲提取物能诱导K5 6 2细胞凋亡 ,抑制肿瘤细胞增殖呈一定的浓度依赖关系 ,其作用机制可能与caspase 3的表达升高和活化有关。     

拓扑替康体外对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的 探讨拓扑替康(topotecan，TPT)对肝癌细胞增殖和凋亡的生物学效应及机制。方法 采用HE染色、MTT实验、克隆形成试验、流式细胞仪、DNA电泳、透射电镜观察等方法，对TPT在HepG2细胞株的作用进行体外研究。结果 TPT对HepG2细胞产生明显的生长抑制作用，并可诱导HepG2细胞凋亡，与细胞周期被阻滞于S期有关。结论 TPT对肝癌细胞具有显著的体外生长抑制及凋亡诱导作用，提示TPT是治疗肝癌潜在的分子药物。     

Na~ /H~ 交换蛋白-1基因的反义寡聚脱氧核糖核苷酸片段诱导人肺癌细胞的凋亡

目的观察Ｎａ＋／Ｈ＋交换蛋白－１（ＮＨＥ－１）基因在肿瘤细胞增殖／凋亡调控中的作用,探索新的抗癌策略。方法采用活细胞计数、原位细胞死亡检测和显微镜观察与ＮＨＥ－１基因的反义寡聚脱氧核糖核苷酸片段（ｓａＯＤＮ）共孵育后诱导的人肺鳞癌细胞系ＳＰＣ细胞的增殖抑制、凋亡及其形态学改变。结果ｓａＯＤＮ能显著抑制ＳＰＣ细胞的增殖并导致死亡。原位细胞死亡检测和电镜观察发现大量ＳＰＣ细胞经历了凋亡。结论反义抑制ＮＨＥ－１基因的表达能诱导肿瘤细胞的凋亡,ＮＨＥ－１基因可能在肿瘤细胞增殖／凋亡的调控中起重要作用。     

呼吸道合胞病毒M2-1基因表达对人肺腺癌PAa细胞生物学特性的影响

目的观察呼吸道合胞病毒(RSV)M2-1基因的表达对人肺腺癌PAa细胞生物学特性的影响。方法①采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长曲线和不同浓度丝裂霉素(MMC)作用下细胞的存活率;②采用流式细胞仪(FCM)、DNA凝胶电泳、透射电镜技术观察细胞凋亡。结果PAa/M2-1、PAa细胞的倍增时间分别为2.79和3.24d,PAa/M2-1细胞较PAa细胞生长速度快。不同浓度MMC作用下,转染后PAa/M2-1细胞的存活率均明显低于PAa细胞;PAa细胞和PAa/M2-1细胞的凋亡发生率分别为0.58%和5.6%;DNA凝胶电泳PAa/M2-1细胞可见清晰的DNA梯状条带;透射电镜观察到PAa/M2-1有凋亡细胞。结论M2-1基因的表达可促进PAa细胞生长,对不同浓度丝裂霉素表现为敏感性增加,并有自发性凋亡发生,以上结果为进一步研究RSV与肺癌的关系提供了有力证据。