百可利对鱼藤酮损伤模型小鼠自噬的影响

目的研究百可利对模型小鼠纹状体中自噬的影响。方法小鼠ip给予鱼藤酮建立帕金森病损伤模型,于造模2周开始给予百可利(300 mg·kg-1),实验终点前进行行为学评价。取小鼠纹状体,检测自噬相关蛋白表达情况。结果实验终点时,模型组小鼠在转棒实验中爬行时间较对照组短,运动能力较弱,而给予百可利治疗的小鼠运动时间显著增加;在旷场实验中,模型小鼠自主活动能力下降,运动范围减小,百可利治疗组小鼠运动距离明显增加。模型组小鼠纹状体中α-突触核蛋白表达增高,酪氨酸羟化酶明显减少,而百可利治疗后的模型小鼠纹状体中α-突触核蛋白合成被抑制,多巴胺合成的关键酶酪氨酸羟化酶表达上调。通过检测自噬标志性蛋白发现,随着模型建立时间不断增加,模型小鼠纹状体中LC3BⅡ/LC3BⅠ也随之增加。在给药结束后,百可利治疗组小鼠纹状体中LC3BⅡ/LC3BⅠ降低。同时,模型组调控自噬起始的蛋白ULK1表达增加,用于募集其他自噬相关蛋白的beclin-1表达上调,调控自噬体形成的蛋白ATG5被激活,而百可利能抑制以上过度活化的蛋白。结论百可利对鱼藤酮模型动物的运动障碍具有一定改善作用,可能与其抑制鱼藤酮诱导的自噬过度活化有关。     

类叶升麻苷对MPTP所致帕金森病小鼠模型的神经保护作用

目的研究类叶升麻苷在MPTP诱导的C57小鼠的帕金森病(PD)模型中的神经保护作用及机制。方法通过自主活动实验和滚筒实验研究动物的行为表现,通过高效液相电化学检测方法观察脑纹状体多巴胺的变化,通过脑黑质酪氨酸羟化酶(tyroxinehydroxylase,TH)免疫组化染色观察多巴胺能神经元的损伤程度。并对黑质纹状体进行α-突触核蛋白(α-synuclein)的免疫印迹分析以探讨药物作用机制。结果①经MPTP诱导的C57小鼠,其自主活动次数、滚筒运动潜伏期均低于对照组(P<0·01);纹状体多巴胺含量明显降低(P<0·01);多巴胺能神经元数量明显减少;黑质纹状体α-synuclein蛋白水平下降。②经类叶升麻苷(10、30mg·kg-1)预处理后能明显改善MPTP诱导的C57小鼠的行为学表现,增加脑内多巴胺递质的含量,增加多巴胺能神经元的数量,增加黑质纹状体α-synuclein蛋白水平。结论类叶升麻苷具有神经保护作用,能对抗MPTP诱导的C57小鼠PD模型中的神经损伤。其机制可能与上调α-synuclein蛋白水平有关。     

以α-synuclein为靶点的抗帕金森病药物研究进展

帕金森病(Parkinsons disease,PD)是常见的神经退行性疾病,目前对PD的药物治疗仅限于改善症状,尚缺乏能够延缓疾病进程并具有神经保护作用的药物。α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)是一种位于神经元突触前末端、由140个氨基酸组成的蛋白质,它的突变、聚集和过度积累与包括PD在内的一系列神经退行性疾病密切相关。开发针对α-syn及其相关靶点的药物,可能是控制PD等突触核蛋白病进程的有效途径。该文主要从抑制α-syn表达和聚集、促进其解聚和降解、调节其修饰状态等方面,对以α-syn为靶点的药物研究进展进行综述。     

α-突触核蛋白对帕金森病自我免疫病理的影响

帕金森病(PD)是一种以运动功能障碍为主要症状的神经退行性疾病。近年来研究表明PD也属于一种自身免疫病。PD患者脑内炎症反应的增加和血脑屏障的破坏可以促进中枢神经系统和外周免疫系统之间的相互作用。临床研究发现,患者中枢神经系统HLA-DR阳性反应性小胶质细胞增多,胶质细胞明显激活、T淋巴细胞浸润到中枢神经系统、脑脊液和脑组织中炎症因子显著升高,这些现象与患者体内T细胞对α-突触核蛋白产生的免疫反应密切相关。小胶质细胞摄取胞外的α-突触核蛋白后形成抗原肽-MHCⅡ表达在细胞膜上,通过抗原提呈作用影响活化的T细胞或是效应T细胞,活化的效应T细胞分泌不同的细胞因子作用于神经系统,发挥着致炎或抗炎作用。本文就α-突触核蛋白与小胶质细胞中MHCⅡ表达,以及T细胞的后续分化对PD自身免疫病理的影响进行综述,以期为PD的免疫疗法供更多的理论线索。     

免疫治疗帕金森病:一种新型治疗策略

针对α-突触核蛋白(α-synuclein)的疫苗是治疗帕金森病(PD)的新方法。由于α-突触核蛋白是一种胞内蛋白,一般认为,异常的α-突触核蛋白无法被疫苗产生的抗体发现,但美国学者用人α-突触核蛋白免疫的小鼠PD模型产生的抗体可识别异常α-突触核蛋白神经元细胞膜,并通过溶酶体降解途径进行破坏。这可能是治疗PD的全新方法。PD是黑质多巴胺能神经元进行性缺失的常见神经变性疾病。目前还只是对症治疗。最近发现,可溶性α-突触核蛋白与不溶性纤维聚合是PD发病的核心。这些纤维聚积在Lewy小体PD病理位点和其他疾病的Lewy小体内。针对β-淀粉…     

004 免疫治疗帕金森病：一种新型治疗策略

针对α-突触核蛋白（α-synuclein）的疫苗是治疗帕金森病（PD）的新方法。由于α-突触核蛋白是一种胞内蛋白，一般认为，异常的α-突触核蛋白无法被疫苗产生的抗体发现，但美国学者用人者突触核蛋白免疫的小鼠PD模型产生的抗体可识别异常α-突触核蛋白神经元细胞膜，并通过溶酶体降解途径进行破坏。这可能是治疗PD的全新方法。     

抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对MPP+处理的SH-SY5Y细胞自噬、凋亡及PD特征蛋白表达的影响

目的 探讨抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP⁺)处理的SH-SY5Y细胞自噬、凋亡及帕金森病(PD)特征蛋白α-突触核蛋白(α-syn)、酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。方法 以MPP⁺、PI3K/Akt激活剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、PI3K/Akt抑制剂LY294002作用于人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,CCK-8检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(AO)染色检测自噬空泡;Western blot检测α-syn、TH、p62、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、p-mTOR、mTOR、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白水平。结果 MPP⁺干预显著降低SH-SY5Y细胞存活率,且呈现剂量依赖性(P<0.05)。MPP⁺和IGF-1处理后SH-SY5Y细胞存活率降低,凋亡率增高(P<0.05);细胞中自噬空泡减少,LC3BⅡ/Ⅰ降低,p62蛋白水平...     

维生素D3对帕金森病小鼠的保护作用及机制研究

目的 探讨维生素D3(VD₃)对帕金森病小鼠黑质-纹状体系统的保护作用及机制。方法 C57BL/6J雄性小鼠随机分为5组：对照组、模型组、VD₃低剂量组、VD₃中剂量组和VD₃高剂量组。通过连续腹腔注射7 d 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)20 mg/kg,制备PD小鼠。VD₃低、中、高剂量组分别腹腔注射VD₃(0.5、1.0、2.0μg/kg)21 d。通过爬杆试验、滚轴试验检测小鼠的行为学;qPCR检测黑质α-突触核蛋白(α-syn)、酪氨酸羟化酶(TH)的mRNA表达水平。Western Blot检测黑质α-syn、TH的表达水平。结果与对照组比较,模型组小鼠停留时间、爬杆时间延长,转轴时间缩短;黑质α-syn升高、TH下降,差异均有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,中、高剂量组小鼠的停留时间、爬杆时间缩短,转杆时间延长;黑质α-syn的m RNA及蛋白表达水平下降、TH的m RNA及蛋白表达水平升高,差异均...     

基于α-突触核蛋白的帕金森病动物模型研究进展

摘要：帕金森病（PD）是第二常见的神经退行性疾病。已有研究表明α-突触核蛋白（α-syn）与PD的发病有着密切的关系。国内外研究者利用α-syn的异位表达、过表达或脑内注射等方法来建立PD动物模型。近年来,α-突触核蛋白预制原纤维（α-syn PFFs）已用于动物模型的构建。α-syn PFFs在研究PD的起源及神经元病变传播中起促进作用。这些模型与传统化学毒素模型相比能够更好地复制PD患者特征性病理改变。本文基于α-syn的PD动物模型的研究进展进行综述。     

雷帕霉素对哮喘小鼠气道重塑的影响

目的利用雷帕霉素探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在支气管哮喘小鼠气道重塑中的作用机制。方法30只♂清洁级BABL/c小鼠,随机数字表法分为3组,每组10只,分别为生理盐水对照组、卵蛋白(OVA)哮喘组、雷帕霉素治疗组。在末次激发24 h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,PAS染色及mTOR免疫组织化学染色。分别用酶联免疫吸附法(ELISA)和Western blot检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5、IL-13含量以及右肺组织mTOR蛋白表达。应用小鼠肺功能仪检测气道阻力的变化。结果哮喘模型组小鼠与对照组相比较BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平增高;肺组织mTOR蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01)。雷帕霉素治疗组与哮喘模型组相比较BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量及肺组织mTOR表达水平均降低,差异具有显著性(P<0.05)。结论雷帕霉素可抑制哮喘小鼠气道重塑的发生,其机制有可能是通过阻断mTOR信号通路而实现的。     

mTOR抑制剂雷帕霉素对肺癌LK2细胞的抑制作用

目的观察mTOR抑制剂雷帕霉素对肺癌LK2细胞生长的影响。方法 LK2细胞在0.25、0.5、1、2、4、8μmol/L不同浓度的雷帕霉素组以及0μmol/L雷帕霉素空白对照组作用下,采用MTT比色法检测细胞生长情况,流式细胞术检测细胞的凋亡改变。结果雷帕霉素能够抑制LK2细胞增殖,且具有时间-剂量效应关系。流式细胞仪检测提示,雷帕霉素各浓度组均可以促进肺癌细胞LK2凋亡,且随着雷帕霉素浓度的升高,LK2细胞凋亡率逐渐增加。结论雷帕霉素对肺癌LK2细胞有抑制作用。     

雷帕霉素下调HIF-1α、VEGF基因表达抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的体外研究

目的 研究雷帕霉素对人胃癌SGC-7901细胞生长影响及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路下游作用靶点缺血诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的影响.方法 采用MTT法检查不同浓度(5、10、20、40、80、160) ng/ml雷帕霉素作用72 h对SGC-7901细胞增殖的影响;采用Western blot法检测雷帕霉素处理前、后SGC-7901细胞对HIF-1α、VEGF蛋白的影响.结果 雷帕霉素作用于SGC-7901细胞后,SGC-7901细胞增殖明显呈剂量依赖性抑制;雷帕霉素10、20、40 ng/ml作用于SGC7901细胞72 h后,HIF-1α和VEGF蛋白表达量均明显呈剂量依赖性下调(P＜0.05).结论 体外应用雷帕霉素可显著抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,这可能与抑制mTOR信号通路下游作用靶点HIF-1α和VEGF蛋白有关.     

雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡和自噬的影响

目的研究雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3细胞凋亡和自噬的影响,并探讨可能的分子机制。方法雷帕霉素及顺铂分别单独或联合作用于卵巢癌细胞株SKOV3细胞后,流式细胞仪检测凋亡率,实时荧光定量PCR检测各处理组的mTOR mRNA表达,Western blot检测自噬蛋白Beclin1、LC3和抗凋亡蛋白bcl-2的表达。结果雷帕霉素联合顺铂组凋亡率为(12.520±1.499)%,较其他处理组凋亡率提高(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的mTORmRNA表达为0.339±0.015,较对照组明显降低(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达均增强(P<0.05),抗凋亡蛋白bcl-2明显降低(P<0.05)。结论雷帕霉素通过特异性阻滞mTOR的表达,可以促进顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡,增强卵巢癌SKOV3细胞自噬性死亡。     

雷帕霉素用于治疗神经退行性疾病研究进展

越来越多的研究表明,雷帕霉素作为一种传统的抗生素,表现出很强的抗老化作用,通过阻断哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR),影响了多种基本的细胞周期,细胞的生长和增殖,蛋白质合成和细胞自噬过程,从而为神经退行性疾病模型提供神经保护作用,包括帕金森病、阿尔茨海默病、亨廷顿病等。对近期关于雷帕霉素神经保护作用的研究成果予以综述。     

雷帕霉素抗阿尔兹海默病的机制研究

大环内酯类抗生素雷帕霉素主要作为免疫抑制剂用于器官移植,近年来亦有许多研究表明它可通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶标蛋白(m TOR)、促进自噬等途径发挥神经保护功能。本文就雷帕霉素抗阿尔兹海默病的分子机制研究进展进行综述,主要介绍其在抗衰老、减轻认知损伤、减少β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集、促进Aβ的清除、减少Tau蛋白过度磷酸化、抑制NO大量产生以及抗阿尔兹海默的其他神经保护作用等方面的作用。     

α-突触核蛋白与帕金森病

α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)是一种中枢神经系统突触前表达的可溶性蛋白质,与帕金森病(Parkinsondisease,PD)的发生发展密切相关.α-突触核蛋白在各种因素的影响下异常表达和聚集,这一过程产生的氧化应激等生化反应和寡聚体中间构象等均在帕金森的发病过程中起重要作用.本文综述了近年的研究...     

雷帕霉素对宫颈癌患者HeLa细胞侵袭转移抑制作用的实验

目的:研究雷帕霉素对宫颈癌患者HeLa细胞侵袭转移抑制作用。方法:取宫颈癌患者HeLa细胞标本进行实验,空白组不加雷帕霉素,雷帕霉素组加入雷帕霉素30 nmol/L,分别培养48 h后,采用MTT法检测细胞活力(计算细胞生长抑制率)、Transwell法检测细胞迁移侵袭能力,以及采用Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)和兔抗雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化水平以及兔抗基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、兔抗基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、波形蛋白(Vimentin)与钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平。结果:雷帕霉素组患者宫颈癌HeLa细胞生长抑制率、E-cadherin表达率明显多于对照组(P<0.05),且宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭数量、Akt与mTOR磷酸化水平、MMP-2、MMP-9与Vimentin表达明显少于对照组(P<0.05)。结论:雷帕霉素能抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移,主要是通过Akt/mTOR信号通路发挥作用。     

SIRT3在帕金森病发生中的作用研究进展

黑质致密部多巴胺能神经元退化及胞浆内α-突触核蛋白积聚是帕金森病(PD)的主要病理特征。线粒体在PD发病过程中发挥重要作用,线粒体功能障碍、氧化应激损伤与多巴胺能神经元丢失关系密切,线粒体损伤严重影响轴突形态和功能维持,神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)和鱼藤酮可通过抑制线粒体电子传递链诱导PD症状发生,编码线粒体蛋白基因突变通过影响线粒体功能而引发家族性PD。SIRT3主要定位于线粒体,具有去乙酰化酶活性。越来越多研究报道线粒体蛋白SIRT3在神经相关疾病发生中的作用。SIRT3在神经退行性疾病中的神经保护作用机制主要与其改善线粒体功能、调节氧化应激与能量代谢、活性氧产生减少、ATP生成增加、抑制凋亡及炎性因子表达等相关,阐明SIRT3在这些神经疾病中的分子保护机制,可为SIRT3作为治疗靶点提供足够的证据。近年,SIRT3在PD发生中的作用研究越来越受到研究者关注,本文对相关文献综述后发现,MPTP注射小鼠中脑组织SIRT3表达减少,PD模型小鼠SIRT3基因缺失显著加剧黑质纹状体多巴胺能神经元退化,线粒体抗氧化酶SOD2、谷胱甘肽过氧化物酶表达均显著减少,说明SIRT3通过清除线粒体内自由基在MPTP诱导的神经退化中发挥一定保护作用。此外,SIRT3还通过增强线粒体柠檬酸合酶、异柠檬酸脱氢酶等酶的活性发挥多巴胺能神经元保护作用。SIRT3功能下降可增加PD动物模型黑质多巴胺能神经元线粒体氧化应激及细胞死亡。SIRT3还可通过促进自噬发生抵抗鱼藤酮诱导的神经细胞损伤。临床和实验研究表明,PD患者、PD细胞与动物模型大脑组织过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)表达均下降,过表达PGC-1α可抑制α-突触核蛋白聚集,减轻神经毒性。另有研究发现MPTP诱导的PD细胞模型中SIRT3表达显著减少,过表达SIRT3则抑制细胞凋亡,PGC-1α可促进SIRT3基因转录,通过去乙酰化激活SOD2和ATP合酶β,减少活性氧积聚和ATP消耗量,进而抑制多巴胺能神经元丢失。以上结果提示,线粒体蛋白SIRT3与PD发生具有一定的关系,但关于SIRT3在PD发展中具体作用分子机制的研究,还不够深入,未来可就这方面开展较多研究工作,为SIRT3作为PD病理机制研究与药物干预治疗新靶点提供更多新的科学证据。     

尿酸激活Nrf2-ARE信号通路对帕金森病小鼠的保护作用

目的 探讨尿酸对帕金森病(PD)小鼠的神经保护作用以及对核因子E2相关因子2(Nrf2)的调控作用。方法 雄性C57BL/6J小鼠(6~8周、20~25 g)30只,采用随机数字表法分为三组:对照组(生理盐水)、1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)组、尿酸组(尿酸+MPTP),每组各10只。MPTP组小鼠经腹腔注射MPTP(20 mg/kg),每天1次,连续7 d。尿酸组于MPTP给药之前2 h腹腔注射尿酸(250 mg/kg),共13 d(MPTP注射前3 d,MPTP注射同时的7 d,MPTP结束后3 d)。对照组接受0.9%生理盐水代替MPTP和尿酸。在第14天测量各组小鼠的行为和认知功能,处死小鼠获取脑组织,免疫荧光染色测定黑质酪氨酸羟化酶(TH)的表达。实时荧光定量PCR检测Nrf2及下游基因mRNA的表达。免疫组化检测海马白细胞介素-1β(IL-1β)表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和海马IL-1β、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果 尿酸能改善PD小鼠的行为学和认知功能,增加黑质TH阳性多巴胺能神经元数目和纹状体多巴胺含量。尿酸增加Nrf2和Nrf2下游基因mRNA的表达,包括γ-GCLC、HO-1和NQO1。尿酸显著提高MPTP处理小鼠黑质区SOD、CAT、GSH含量,降低MDA含量。尿酸抑制海马组织IL-1β蛋白的表达,并降低血清和海马中IL-1β、IL-6和TNF-α水平。结论 尿酸对PD小鼠多巴胺能神经元显示神经保护特性,其机制可能与尿酸通过激活Nrf2-ARE通路及调节神经炎症和氧化应激有关。     

雷帕霉素新衍生物FIM-X7通过促进自噬影响N2a-APP695细胞表达β淀粉样蛋白的研究#br#

目的 mTOR信号通路在Aβ诱导的神经退行性病变中起重要作用，mTOR抑制剂雷帕霉素具有潜在治疗作用。研究含噻唑侧链的雷帕霉素新衍生物FIM-X7对N2a-APP695细胞表达Aβ的影响，探讨FIM-X7在阿尔茨海默症的应用前景。方法 ELISA方法检测FIM-X7对N2a-APP695细胞表达Aβ40和Aβ42的影响，Western-blot检测FIM-X7对N2a-APP695细胞表达自噬相关蛋白和mTOR信号通路的影响，淋巴细胞转化实验测定FIM-X7的免疫抑制活性，MTT法检测FIM-X7对N2a-APP695细胞增殖的影响，流式细胞术分析FIM-X7对N2a-APP695细胞凋亡的作用。结果 FIM-X7通过抑制mTOR信号通路、降低自噬相关蛋白ULK1的磷酸化，促进细胞自噬进而降低N2a-APP695表达Aβ的水平；其对N2a-APP695细胞内Aβ40和Aβ42的作用效果与雷帕霉素相当。此外，FIM-X7几乎没有细胞毒性，对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的抑制活性仅为雷帕霉素的1/5000。结论 雷帕霉素新衍生物FIM-X7具有降低N2a-APP695细胞表达Aβ40和Aβ42的作用，且具有比雷帕霉素更低的细胞毒性和免疫抑制活性，因此可能在阿尔茨海默症的治疗上具有进一步研究的价值。