N-乙酰半胱氨酸对内质网应激介导的HepG2细胞凋亡的作用

目的 了解N-乙酰半胱氨酸(NAC)对内质网氧化应激介导的肝细胞凋亡的阻抑作用,探讨其治疗肝细胞损伤的作用机制.方法 用过氧化氢(H2O2)诱导HepG2细胞,建立内质网氧化应激凋亡模型,用NAC进行干预.通过四甲基偶氮唑盐、DNA梯度分析,Western blot、流式细胞仪检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)的产生等方法,了解NAC对H2O2诱导HepG2细胞的凋亡率、凋亡信号蛋白的表达以及ROS产生的影响.结果 用不同浓度H2O2(0、1、3,5 mmol/L)诱导HepG2细胞6 h后,发现随着H2O2浓度增加,细胞活力下降,凋亡率增加,分别为0.7%±0.5%、26.4%±1.8%、29.7%±1.2%、51.2%±9.4%;细胞凋亡信号蛋白表达增加,ROS产生增多,分别为14.0%±0.5%、95.2%±0.1%、97.5%±0.25%、98.3%±0.2%;在3 mmol/L时出现典型内质网氧化应激凋亡形态学改变.用NAC(10、20 mmol/L)干预后发现,NAC可明显提高细胞活力、细胞凋亡率由29.7%±1.2%降至23.3%±4.7%和14.3%±1.2%,细胞凋亡过程中凋亡信号蛋白的表达减少、细胞内ROS的产生率由97.5%±0.2%降至52.2%±0.8%和51.2%±2.9%.结论 NAC能对氧自由基反应有直接抑制作用,阻断内质网氧化应激介导的肝细胞凋亡,减轻肝细胞损伤.     

衣霉素诱导胃癌细胞内质网应激介导的细胞凋亡

目的:观察衣霉素(tunicamycin,TM)诱导胃癌BGC-823细胞发生内质网应激介导的细胞凋亡.方法:以浓度为10 mg/L的TM分别处理胃癌BGC-823细胞0、24、36和48 h.Annexin V-PI染色法检测细胞凋亡,应用RT-PCR、Western blot检测CHOP的表达水平.结果:PI染色法检测凋亡细胞且随时间增加凋亡细胞增多,细胞凋亡率分别为0.0%、11.8%、16.3%、20.4%,具有时间依赖性(P<0.01).RT-PCR及Western blot结果显示,CHOP的表达明显高于对照组,随着处理时间的增加表达量呈上调趋势,差异均有统计学意义(P<0.01).结论:TM可诱导胃癌细胞内质网应激介导的细胞凋亡.     

盐酸小檗碱对糖尿病小鼠胰岛β细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨盐酸小檗碱对2型糖尿病db/db小鼠胰岛β细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:选取32只6周龄db/db雄性小鼠和32只db/m雄性小鼠,各分为2组,各选其中一组每日固定时间给予小檗碱(50 mg/kg)灌胃,另一组给予相同体积的生理盐水。连续给药3周后处死小鼠,实时荧光定量PCR和免疫组化法检测胰腺组织Ki-67、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)、Fas和Fas配体(Fas-L)mRNA和蛋白的表达,末端转移酶标记技术(TUNEL法)检测胰腺组织β细胞凋亡数。结果:实验3周后,小檗碱干预db/db组小鼠的血糖、葡萄糖曲线下面积显著降低,胰岛素分泌显著改善(均P0.05);Bcl-2阳性表达率显著升高(P<0.01);Fas及Fas-L阳性率表达水平显著降低(P<0.01,P<0.05);β细胞凋亡率下降(P     

白芨多糖对心肌梗死大鼠PI3K/AKT/GRP78信号通路及心肌细胞内质网应激凋亡的影响

目的 探究白芨多糖对心肌梗死(MI)大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)及葡萄糖调节蛋白(GRP)78信号通路蛋白表达及对心肌细胞内质网(ERS)凋亡的影响.方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、白芨多糖低(100 mg/kg)、中(200 mg/kg)、高(400 mg/kg)剂量组、阳性对照...     

内质网应激凋亡通路中Caspase12激活介导的肝纤维化大鼠肝细胞凋亡

目的:观察内质网应激凋亡通路中关键信号分子Caspase12活性变化,探讨其在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中的可能作用.方法:将Wistar大鼠随机分为正常4 wk组、正常8 wk组、肝纤维化4 wk组和肝纤维化8 wk组.皮下注射40%CCl_4花生油溶液诱导肝纤维化形成,剂量0.3 mL/100 g体质量,2次/wk.肝组织中GRP78、GRP94及Caspase12基因水平的表达通过实时荧光定量PCR技术测定;GRP78、GRP94、Procaspase12及活性Caspase12蛋白的表达采用蛋白质免疫印迹法检测;肝细胞凋亡通过TUNEL法测定.结果:肝纤维化4 wk组大鼠肝组织中GRP78、GRP94及Caspase12 mRNA表达显著高于正常4 wk组大鼠;肝纤维化8 wk时,肝组织中GRP78、GRP94、Caspase12 mRNA的表达较正常8 wk组显著增加.通过Western blot对各指标蛋白水平的检测发现,肝纤维化4 wk时大鼠肝脏中GRP78、GRP94、Procaspase12及活性Caspase12蛋白的表达较正常4 wk组大鼠显著增加;肝纤维化8 wk时,肝脏中GRP78、GRP94、Procaspase12、活性Caspase12蛋白的表达仍保持在高水平,但与肝纤维化4 wk时比较无显著差异.细胞凋亡检测发现,与正常组大鼠比较,肝纤维化4 wk及8 wk组大鼠肝细胞凋亡均明显升高.结论:内质网应激凋亡通路中关键信号分子Caspase12活化可能介导了肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的发生.     

小檗碱诱导体外培养PC3细胞凋亡的作用

目的观察小檗碱对体外培养人前列腺癌PC3细胞凋亡的作用。方法体外培养前列腺癌PC3细胞,分别用10、20和40μmol/L小檗碱处理细胞后,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,20μmol/L小檗碱处理细胞后流式细胞术检测细胞周期,吖啶橙染色法检测细胞凋亡情况,并通过Western印迹法检测Bcl-xL及前列腺特异性抗原(PSA)蛋白表达。结果小檗碱处理后,PC3细胞出现增殖抑制,细胞周期停滞于G2/M期,吖啶橙染色呈黄染,PSA及Bcl-xL蛋白表达明显下调。结论小檗碱可诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡,其作用机制可能与Bcl家族信号通路有关。     

Akt和胞外信号调节激酶通路间的信号交流对内质网应激条件下肝癌细胞周期的调控

目的 研究内质网应激介导的磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt和丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/胞外信号调节激酶(ERK)途径间的信号交流及其对内质网应激条件下肝癌细胞周期的调控作用.方法 采用PI3K抑制剂LY294002、Akt激活型突变载体myr-Akt和MEK抑制剂U0126分别阻断或激活内质网应激介导的Akt和ERK活化,并利用Western blot和流式细胞技术分析内质网应激条件下PI3K/Akt和MEK/ERK途径间的信号交流及其对肝癌细胞株SMMC-7721、Hep3B和HepG2细胞周期的调控作用.数据处理采用Sperman等级相关分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 阻断PI3K/Akt明显促进内质网应激介导的MEK/ERK活化,而过度激活PI3K/Akt则抑制内质网应激介导的MEK/ERK活化.阻断MEK/ERK对内质网应激介导的PI3K/Akt活化无影响.持续活化的Akt突变载体myr-Akt和MEK抑制剂U0126均明显抑制了内质网应激诱导的压力细胞G0/G1期阻滞.结论 PI3K/Akt和MEK/ERK信号途径在内质网应激肝癌细胞中存在信号交流,该信号交流对细胞周期起重要调控作用.     

JAK2/STAT3信号通路介导小鼠骨性关节炎中软骨细胞代谢和抗氧化应激的研究

目的 在小鼠骨性关节炎（OA）模型中观察Janus酪氨酸蛋白激酶2/信号转导子与转录激活子蛋白3（JAK2/STAT3）信号通路对软骨细胞代谢的影响以及线粒体抗氧化应激能力的改变,探讨JAK2/STAT3信号通路在此过程中的作用。方法 将10只C57BL/6小鼠随机分为两组,选择其中一组小鼠建立OA模型,3周后取材,培养软骨细胞作为实验组,其余小鼠正常培养细胞作为对照组。在对照组和实验组中分别加入JAK2/STAT3信号通路激动剂SC-39100,运用蛋白印迹法（Western blotting）检测各组细胞p-JAK2、p-STAT3、B淋巴细胞瘤?2（Bcl-2）蛋白和Bax蛋白的表达,同时检测各组线粒体氧化应激指标琥珀酸脱氢酶（SDH）、细胞色素c氧化酶（COX）、丙二醛（MDA）改变。结果 与对照组相比,OA模型组软骨细胞p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2蛋白的表达偏低（P＜0.05）、Bax蛋白的表达水平偏高（P＜0.05）,且OA模型组软骨细胞SDH和COX的表达水平均偏低（P＜0.05）、MDA的含量偏高（P＜0.05）;当OA模型组加入SC-39100后,p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2表达均较OA模型组升高（P＜0.05）、Bax蛋白表达下降（P＜0.05）,SDH和COX的表达水平均较OA模型组升高（P＜0.05）,MDA的含量较OA模型组降低（P＜0.05）;对照组中加入SC-39100后的各指标与加入SC-39100前比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）;OA模型加入SC-39100组后的各指标与对照组加入SC-39100比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 JAK2/STAT3信号通路和OA中软骨细胞变化密切相关,JAK2/STAT3信号通路激活后可抑制软骨细胞的凋亡;当激活的JAK2/STAT3信号通路活化时会增加软骨细胞线粒体抗氧化应激能力。     

柴胡皂苷A对溃疡性结肠炎大鼠IKK/IKB/NF-κB信号通路及肠上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨柴胡皂苷(SS)A对溃疡性结肠炎(UC)大鼠核因子(NF)-κB抑制物激酶(IKK)/抑制因子κB(IKB)/NF-κB信号通路及肠上皮细胞凋亡的影响。方法 制备UC大鼠模型,造模后随机分为模型组、SSA(低、中、高)剂量组、阳性对照组,每组10只;正常组10只大鼠作为空白对照。常规饲养2 d,第3天时SSA(低、中、高)剂量组分别灌胃(12.5、25.0、50.0)mg/kg SSA,阳性对照组灌胃0.5 g/kg柳氮磺吡啶(SASP),正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续5 d。苏木素-伊红(HE)染色观察肠黏膜组织形态;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;TUNEL染色观察肠上皮细胞凋亡情况;Western印迹检测肠黏膜组织中IKKα、IKB、NF-κB p65、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果 正常组大鼠实验结束后毛色有光泽,大便正常;肠黏膜组织完整,肌层结构正常。模型组大鼠毛色暗淡无光...     

TUDCA缓解小鼠肠炎对内质网应激与双氧化酶2表达的研究

目的探讨特异性内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸(Tauroursodeoxycholate,TUDCA)缓解DSS诱导的小鼠肠炎对内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)蛋白与肠黏膜过氧化氢产生酶双氧化酶2(dual oxidase2,Duox2)表达的研究。方法 7周C57BL/6J雄性小鼠适应喂养1周后随机分为对照组、炎症组、干预组。炎症组和干预组饮用2.5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)溶液诱导小鼠肠炎,干预组再以500 mg/kg的TUDCA灌胃。8 d后处死小鼠,收集结肠作HE和免疫组化染色,Western blotting检测Duox2及ERS相关蛋白Grp78、Atf6、P-Ire1α/Ire1α、Ire1β、P-Perk/Perk的表达。结果 TUDCA明显减轻DSS诱导的小鼠肠炎。Western blotting结果显示炎症组Grp78、P-Perk/Perk蛋白及Duox2表达均升高,干预组这三种蛋白表达恢复到对照组水平,其余ERS相关蛋白表达无变化。免疫组化结果显示Grp78和Duox2三组表达水平与Western blotting结果相一致。结论 TUDCA缓解小鼠肠炎可能与抑制内质网Grp78-Perk通路有关,该通路与Duox2表达相互影响。     

Galectin-3基因调控Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨半乳糖凝集素(Galectin)-3基因对肺癌细胞凋亡的影响及机制。方法将NC-siRNA、Galectin-3-siRNA1和Galectin-3-siRNA2转染人肺癌A549细胞,未转染任何的siRNA作为对照组,转染48 h后提取细胞中的蛋白,Western印迹检测各组细胞中Galectin-3蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹检测酶切含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved caspase)3、β-链蛋白(catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白表达。结果 NC-siRNA组Galectin-3蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),Galectin-3-siRNA1、Galectin-3-siRNA2组Galectin-3蛋白表达均显著低于对照组(P<0.01),Galectin-3-siRNA1组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;与对照组及NC-siRNA组比较,Galectin-3-siRNA组β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论抑制Galectin-3在肺癌细胞中的表达可诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

小檗碱对代谢综合征内质网应激IRE1-XBP1通路的影响

目的:观察小檗碱对代谢综合征合并肾损害患者尿肌醇酶1(IRE1)、X盒结合蛋白1(XBP1)、半胱天冬酶12(caspase-12) mRNA及血、尿IRE1、XBP1、caspase-12蛋白表达的影响,从内质网应激机制探讨小檗碱对代谢综合征合并肾损害的保护作用。方法:选取2016年2月至2017年1月联勤保障部队第九○○医院临床诊断符合代谢综合征合并肾损害患者20例,随机分成对照组、治疗组,每组各10例,对照组给予基础治疗;治疗组在基础治疗同时,加用小檗碱,疗程8周。同时选取在性别、年龄相匹配的健康人10例为健康组。观察各组的治疗疗效。结果:治疗8周后,治疗组BMI、FBG、2hPBG,TG、LDL-C、FINS水平均低于对照组(P0.05)。治疗8周后,治疗组尿IRE1、XBP1、caspase-12 mRNA,尿及血IRE1、XBP1、caspase-12蛋白的表达均低于对照组(P0.05),且随着治疗时间的延长,治疗组尿IRE1、XBP1、caspase-12 mRNA,血及尿IRE1、XBP1、caspase-12蛋白的表达进一步下降(P0.05),而对照组无明显差异(P0.05)。结论:小檗碱可改善代谢综合征合并肾损害患者的胰岛素抵抗,调节糖脂代谢紊乱,并减少尿IRE1、XBP1、caspase-12 mRNA,血及尿IRE1、XBP1、caspase-12蛋白的表达,其机制可能与小檗碱可以抑制代谢综合征合并肾损害患者内质网应激IRE1-XBP1通路的过度激活有关。     

磷酸肌酸钠对慢病毒介导Calumenin蛋白沉默阿霉素损伤心肌细胞内质网应激信号通路的作用

目的:探讨磷酸肌酸钠对网腔钙结合蛋白(Calumenin)沉默阿霉素损伤心肌细胞内质网应激信号通路作用。方法:培养乳鼠心肌细胞,构建稳定的慢病毒——Calumenin质粒,转染乳鼠培养心肌细胞,实验分为4组:对照组(正常细胞+3mg/L阿霉素)、模型组(慢病毒感染细胞+3mg/L阿霉素)、磷酸肌酸钠1组(正常细胞+阿霉素+磷酸肌酸钠)、磷酸肌酸钠2组(转染细胞+阿霉素+磷酸肌酸钠)。采用Western blotting技术检测各组心肌细胞Calumenin蛋白、内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子PERK、PATF-4PERK、eIF2ɑ、ATF-4、IRE1、CHOP表达。结果:1与对照组比较,模型组及磷酸肌酸钠2组心肌细胞Calumenin蛋白表达明显减少(P0.01)。2与对照组相比,模型组内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子PPERK、eIF2ɑ、ATF-4、IRE1、CHOP表达明显增多(P0.01)。3与模型组相比较,磷酸肌酸钠1组及磷酸肌酸钠2组内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子P-PERK、eIF2ɑ、ATF-4、IRE1、CHOP表达减少(P0.01)。结论:阿霉素损伤可能诱发ERS,并通过ERS凋亡信号通路PERK→P-PERK→eIF2a→ATF-4→CHOP/IRE1→CHOP引起心肌细胞凋亡;磷酸肌酸钠可抑制阿霉素损伤所诱导内质网应激介导的心肌细胞凋亡,这一作用机制可能是通过Calumenin蛋白抑制ERS及其凋亡信号通路PERK→P-PERK→eIF2a→ATF-4→CHOP/IRE1→CHOP实现的。     

白藜芦醇对急性心肌梗死大鼠心肌保护及Akt/JNK3/caspase-3信号通路的影响

目的探究白藜芦醇(Res)对急性心肌梗死(AMI)大鼠氧化应激及对p-Akt、p-JNK3、caspase-3的影响。方法将大鼠分为假手术组、模型组、法舒地尔组、Res低剂量组、Res中剂量组、Res高剂量组;检测血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(TnI)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的活性及白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;TTC染色检测心肌梗死面积;HE染色检测心脏组织病理学变化;采用TUNEL检测心肌细胞凋亡;蛋白免疫印迹检测心肌组织中p-Akt、p-JNK3、caspase-3表达情况。结果HE染色结果表明,模型组心肌细胞排列紊乱,心肌纤维肿胀、断裂;与模型组相比,法舒地尔组和Res组心肌细胞和肌纤维排列相对整齐,炎性细胞浸润情况减轻,且心肌梗死面积和细胞凋亡指数显著低于模型组(P0.05);与模型组相比,法舒地尔组和Res组SOD的活性显著增高(P0.05),血清中CK、CK-MB、TnI、MDA的活性及IL-1β、IL-6、TNF-α的含量显著低于模型组(P0.05),且法舒地尔组和Res组心脏组织中p-Akt表达水平显著高于模型组(P0.05),p-JNK3、caspase-3表达水平显著低于模型组(P0.05);与法舒地尔组相比,Res高剂量组血清中CK、CK-MB、TnI、MDA的活性,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,心肌梗死面积和细胞凋亡指数,以及心肌组织中p-Akt、p-JNK3、caspase-3表达水平等,差异均无统计学意义(P0.05)。结论 Res对AMI大鼠心肌具有保护作用,推测这一作用是通过调控Akt/JNK3/caspase-3信号通路从而抑制心肌细胞凋亡。     

盐酸小檗碱对老年大鼠心肌细胞抗氧化及相关凋亡蛋白表达的影响

目的探讨盐酸小檗碱对老龄大鼠心肌细胞抗氧化及抗凋亡蛋白表达的作用。方法选择30只SD老龄大鼠随机平均分为老年组、100 mg小檗碱用药(100 mg)组及200 mg小檗碱用药(200 mg)组,设10只SD大鼠为青年组。用药组每日灌小檗碱共4 w。电镜下观察各组心肌超微结构的变化及检测心肌线粒体内丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的活性、呼吸链酶复合体(Co)Ⅳ活性及其蛋白表达的变化。免疫印迹法检测相关凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Bcl-2关联X蛋白(Bax)的蛋白表达水平。使用TUNEL染色法检测各组心肌细胞凋亡情况。结果与老年组比较,青年组及用药组大鼠线粒体及内质网的形态结构相对完好;小檗碱可提高老龄大鼠线粒体Mn-SOD与CoⅣ的活性,降低CoⅣ蛋白的表达(P0.05),降低MDA的含量(P0.05);同时用药组心肌细胞凋亡率、Bax蛋白含量均显著降低(P0.05),而Bcl-2表达水平显著升高(P0.05)。结论盐酸小檗碱能提高衰老的心肌细胞抗氧化能力及抗凋亡作用。     

二甲双胍对肝癌细胞凋亡及PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响

目的观察二甲双胍对肝癌细胞凋亡的影响,并探讨该作用与PI3K/AKT/m TOR信号通路的关系。方法体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,分别加入5、10、20、40、80 mmol/L二甲双胍,另设对照组,加入同体积的培养基培养24、48 h,MTT法检测各组细胞增殖情况,计算细胞存活率和半数抑制浓度(IC50),筛选出适合的药物浓度(5、10、20 mmol/L)和作用时间(48 h)进行后续实验。将SMMC-7721细胞分为二甲双胍组和对照组,二甲双胍组分别加入5、10、20 mmol/L二甲双胍处理48 h,对照组加入同体积的培养基。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及PI3K/AKT/m TOR信号通路相关蛋白p-AKT、p-mTOR表达。结果 5、10、20、40、80 mmol/L二甲双胍组处理24 h和48 h后,细胞存活率均低于对照组(P <0.05或P <0.01);二甲双胍能够抑制细胞增殖,24 h和48 h的IC50分别为36.05、25.76 mmol/L,后续选择5、10、2...     

NIRF基因通过PI3K/Akt信号通路诱导人肺癌细胞凋亡

目的探究NIRF基因对人肺癌细胞凋亡的影响以及机制研究。方法使用重组质粒siRNANIRF(siRNA-NIRF组)和空载体(siRNA-NC组)转染人肺癌细胞A549,以未转染细胞为对照(Control组),免疫印迹试验(Western blot)检测转染效果;噻唑蓝(MTT)检测转染细胞增殖情况,使用流式细胞术检测转染细胞凋亡状况,蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)蛋白的表达量。结果转染重组质粒siRNA-NIRF后,细胞中NIRF蛋白的表达量显著低于对照组(P0.05);与对照组相比,siRNA-NIRF组细胞的存活率显著降低(P0.05),凋亡率显著增高(P0.05),siRNA-NC组无明显差异(P0.05);与对照组相比,siRNA-NIRF组和siRNA-NC细胞中Akt、PI3K蛋白的含量无明显变化(P0.05),但siRNA-NIRF组细胞中p-Akt和p-PI3K的含量显著低于对照组(P0.05)。结论干扰NIRF基因可抑制肺癌细胞A549增殖,促进其凋亡,其作用机制是影响PI3K/Akt信号通路的关键因子的表达量。     

YAP调控Wnt信号通路影响肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨Yes相关蛋白(Yes associated protein,YAP)对肝癌细胞凋亡的影响。方法 Western blotting方法检测人肝癌细胞Hu H-7、Hep G2、SNU-449和人正常肝细胞7702中YAP的表达水平。在肝癌细胞中转染YAP小干扰RNA1(YAP siRNA1组)和YAP小干扰RNA2(YAP siRNA2组),同时转染对照siRNA(siRNA-NC组),未转染组只加入转染试剂,培养48 h后,Western blotting检测细胞中YAP水平,筛选出干扰效率较高的YAP siRNA2继续研究。MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,激光扫描共聚焦显微镜法检测活性氧(ROS)水平,Western blotting检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt信号通路下游靶基因(C-myc)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果人肝癌细胞Hu H-7、Hep G2、SNU-449中YAP表达水平均高于人正常肝细胞7702,且在Hep G2细胞中YAP的表达水平最高。YAP siRNA1、YAP siRNA2能够成功干扰肝癌细胞中YAP的表达水平,且YAP siRNA2的干扰效率最高。YAP siRNA2组细胞存活率和细胞中β-catenin、C-myc水平均低于未转染组,凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3、ROS水平均高于未转染组(P0.01)。结论干扰YAP表达后能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,Wnt信号通路是其可能的作用机制之一。     

氟调控成骨细胞内质网应激信号通路对细胞增殖凋亡分化的影响

目的探讨氟调控成骨细胞内质网应激信号通路对细胞增殖凋亡分化的影响。方法培养成骨细胞MC3T3-E1,0、1、2、4、8、16、32、64 mg F-/L组9个不同的氟浓度处理成骨细胞MC3T3-E1 2、7、14 d后,每个时间段设置对照组,CCK8检测细胞的增殖;2、8、20 mg F-/L处理细胞,流式细胞仪检测不同浓度氟对成骨细胞MC3T3-E1凋亡的影响;qRT-PCR检测细胞中与分化相关的基因的表达;Western blot检测内质网应激信号通路相关蛋白的表达。结果低浓度氟(2、4mg F-/L)和中浓度氟(8 mg F-/L)显著增强细胞的增殖(P0.05),高浓度氟(16 mg F-/L)显著降低细胞的增殖(P0.05);2、8、20 mg F-/L处理成骨细胞MC3T3-E1,细胞凋亡率显著高于0 mg F-/L(P0.01),且随着浓度的增加凋亡率变大;2 mg F-/L促进细胞内ALP、OCN、Runx2和Osterix的mRNA表达,20 mg F-/L则抑制上述因子的mRNA表达(P0.01);2、8、20 mg F-/L处理MC3T3-E1细胞中Xbp1、AFT4、Bip和PERK的蛋白表达量都高于0 mg F-/L,其中2 mg F-/L处理细胞中Xbp1和AFT4蛋白表达最多(P0.01),8 mg F-/L处理细胞中PERK的蛋白表达量最多(P0.01),20 mg F-/L处理细胞中Bip蛋白表达量最多(P0.01)。结论低浓度氟促进成骨细胞MC3T3-E1增殖和分化,高浓度则抑制,细胞凋亡率随氟浓度增加而增加,不同氟浓度处理促进成骨细胞中内质网应激信号通路相关蛋白的表达。     

辛伐他汀对高脂血症大鼠心肌细胞内质网应激相关凋亡的影响

目的 探讨辛伐他汀对高脂血症大鼠内质网应激(ERS)相关心肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 清洁级雄性Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组(n=8,普通饲料饲养),高脂血症组(n=8,高脂饲料饲养),辛伐他汀组(n=8,高脂饲料+辛伐他汀10 mg·kg-1·d-1灌胃饲养).12 w后,全自动化生化仪检测血清甘油三酯(TG)及胆固醇(TC)水平;HE染色观察心肌组织的病理学变化;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;免疫组化法及RT-PCR技术检测心肌细胞ERS信号通路分子--葡萄糖调节蛋白(GRP)78的表达.结果 与正常对照组相比,高脂血症组血清TG和TC水平、心肌细胞凋亡程度和GRP78表达水平均显著升高(P＜0.01或P＜0.05),且心肌组织结构异常;与高脂血症组比较,辛伐他汀组血清TG和TC水平、心肌细胞凋亡和GRP78表达水平均显著降低但仍高于正常对照组(P＜0.05)且心肌组织结构异常得到明显改善.结论 高脂血症可以通过激活ERS途径诱导心肌细胞凋亡并导致心肌组织结构异常,辛伐他汀可能通过干预ERS途径抑制高脂血症诱导的心肌细胞凋亡并逆转其心肌组织的结构异常,从而发挥心脏保护作用.