刺五加注射液对大鼠肝微粒体四种CYP450亚型酶活性的影响

目的:研究刺五加注射液在大鼠体外肝微粒体中对CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4活性的影响,为临床合理联合用药提供参考。方法:在大鼠体外肝微粒体中分别加入四种亚型酶的探针药物甲苯磺丁脲(TB)、右美沙芬(DM)、氯唑沙宗(CLZ)、睾酮(TS)和低、中、高剂量的刺五加注射液,温孵后用HPLC法测定各空白对照组和不同剂量刺五加注射液给药组中各探针药物代谢产物的浓度并比较代谢率的差异,以评价刺五加注射液对各亚型酶活性的影响;中剂量组活性显著降低的亚型酶进一步考察抑制作用的强弱(即IC50和Ki值)。结果:与空白对照组比较,刺五加注射液低、中、高剂量给药组对CYP3A4活性的影响均有统计学意义(P<0.01),抑制率分别为10.22%、19.00%、30.29%,其IC50和Ki值分别为3.96%和2.74%(V/V);低、中、高剂量给药组对CYP2D6活性的影响均无统计学差异(P>0.05);低剂量给药组对CYP2C9、CYP2E1活性的影响无统计学差异(P>0.05),中、高剂量给药组对两个亚型的抑制作用有统计学差异(P<0.05),但中剂量给药组抑制率均小于8.50%,高剂量给药组抑制率均小于12.00%。结论:刺五加注射液对大鼠体外肝微粒体CYP3A4有抑制作用,且符合混合型抑制模型;对CYP2C9、CYP2E1抑制作用较弱;对CYP2D6活性无影响。     

丹红注射液对大鼠肝微粒体5种CYP亚型酶活性的影响

摘要目的研究丹红注射液对5种细胞色素P450亚型酶活性的影响,为临床合理用药提供参考。方法采用大鼠体外肝微粒体孵育法,分别以非那西丁、甲苯磺丁脲、右美沙芬、氯唑沙宗、睾酮为CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的探针药物,在大鼠肝微粒体孵育体系中孵育,用高效液相色谱（HPLC）法测定相应的代谢产物,比较空白对照组和丹红注射液低、中、高剂量组之间探针药物代谢率的差异,评价丹红注射液对各亚型酶活性的影响。结果在体外肝微粒体孵育体系中,丹红注射液低剂量组中CYP1A2 和CYP2C9活性与空白对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）;中和高剂量组中CYP1A2和CYP2C9活性与空白对照组相比降低,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）;丹红注射液低、中、高剂量组中CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的活性与空白对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。丹红注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性的半数抑制浓度（IC50）和抑制常数（Ki）分别为0.54%和0.226%。结论丹红注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性有抑制作用,且为混合型抑制;对CYP2C9有弱抑制作用;对CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4酶活性无明显影响。     

豆腐果苷对人肝微粒体CYP450酶体外抑制作用研究

目的:通过评价豆腐果苷在体外对人肝微粒体CYP450酶的7种亚型酶活性的影响,预测服用豆腐果苷可能出现的食物-药物及药物-药物代谢的影响。方法:将豆腐果苷与CYP450酶7种亚型的特异性探针底物咖啡因(CYP1A2)、右美沙芬(CYP2D6)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、S-美芬妥因(CYP2C19)、氯唑沙宗(CYP2E1)、香豆素(CYP2A6)及咪达唑仑(CYP3A4)与人肝微粒体进行孵育反应,采用HPLC和LC-MS/MS法测定对应的7种代谢产物(1,7-二甲基黄嘌呤、去甲右美沙芬、4-羟基甲苯磺丁脲、4-羟基美芬妥因、6-羟基氯唑沙宗、7-羟基香豆素和1-羟基咪达唑仑)的浓度,与对照组比较,确定豆腐果苷对以上7种亚酶活性的影响。结果:豆腐果苷在1～100μmol.L-1时对7种酶的抑制作用均无明显统计学意义(P>0.05)。结论:豆腐果苷可能不会引起有临床意义的CYP450酶抑制现象的发生。     

消癌平注射液等4种抗肿瘤中药注射剂对人肝微粒体中CYP450酶7种亚型的体外抑制作用研究

目的：考察消癌平注射液等4种抗肿瘤中药注射剂对人肝微粒体CYP450酶7种亚型CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4／5的体外抑制作用。方法：消癌平注射液等4种抗肿瘤中药注射剂分别与7种CYP450酶亚型对应的混合探针药物在人肝微粒体中共同孵育,采用液相色谱-串联质谱（LC—MS／MS）法同时测定这7种探针药物的代谢产物：对乙酰氨基酚、羟基安非他酮、去甲阿莫地喹、4-羟基双氯芬酸、4-羟基美芬妥英、右啡烷和1-羟基咪达唑仑的浓度,分别代表CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4／5的活性,其对CYP450酶亚型的抑制程度以IC50值表示。结果：在体外人肝微粒体孵育体系中,消癌平注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4／5的IC50值分别为0．51％、1．34％、1．42％、0．939／6、1．09％和0．75％,艾迪注射液对CYP2C8的IC50值为0．21％;消癌平注射液对CYP2D6的IC10值为2．58％,艾迪注射液对CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4／5的IC50值分别为13．24％、16．31％、4．27％和3．73％,华蟾素注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8和CYP2D6的IC50值分别为3．50％、28．01％、20．32％和32．59％,康艾注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2D6和CYP3A4／5的IC50值分别为2．55％、15．32％、1．44％、1．72％和3．99％,均高于各自的日用药量浓度;在测定浓度范围内,艾迪注射液对CYP1A2和CYP2D6,华蟾素注射液对CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4／5,康艾注射液对CYP2C9和CYP2C19的活性抑制率均小于50％。结论：在体外,正常剂量下,消癌平注射液对人CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4／5,艾迪注射液体对人CYP2C8均有明显抑制作用;消癌平注射液对CYP2D6,艾迪注射液对CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4／5,华蟾素注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8和CYP2D6,康艾注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2D6和CYP3A4／5,均无明显抑制作用;艾迪注射液对CYP1A2和CYP2D6,华蟾素注射液对CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4／5,康艾注射液对CYP2C9和CYP2C19,均无抑制作用。     

灯盏细辛注射液对大鼠肝微粒体CYP3A的抑制作用

目的：研究灯盏细辛注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性的抑制作用。方法：在体外大鼠肝微粒体孵育体系中加入底物睾酮和不同体积的灯盏细辛注射液,用高效液相色谱法测定睾酮的羟化代谢产物6β-羟基睾酮的生成量反映CYP3A酶的活性。酮康唑用作阳性对照药。结果：在体外孵育体系中,灯盏细辛注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性有抑制作用,IC50和Ki值分别为0.40%和0.24%（V/V）。结论：体外给药灯盏细辛注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性有抑制作用,符合混合型抑制模型。     

"Cocktail"探针药物法评价苦碟子注射液对大鼠CYP450酶活性的影响

目的 探究苦碟子注射液对大鼠细胞色素P450酶亚型CYP3A4和CYP2E1酶活性的影响.方法 将SD 雄性大鼠随机分成4组(n=8),分苦碟子注射液高剂量组,临床等效剂量组,阳性药组(苯巴比妥钠),生理盐水组,给药2周后,在第15天早上尾静脉注射给予氯唑沙宗(10mg·kg-1)和氨苯砜(10mg·kg-1).用HPLC法测定大鼠血浆探针药物浓度,获得各探针药物的药代动力学参数评价苦蝶子注射液对大鼠CYP3A4、CY P2E1活性的影响.结果 持续腹腔注射苦碟子注射液14d后,和空白组比较,氨苯砜的血药浓度及药动学参数变化无统计学差异(P>0.05),药物对大鼠CYP3A4的活性水平影响较小;氯唑沙宗的AUC0-t和AUC0-∞减小,t1/2降低,CL增大,差异均有统计学意义(P<0.05).苦碟子注射液临床给药剂量组和高剂量组大鼠CYP2E1的活性水平均高于对照组,差异有统计学意义(W TBXP<0.05).结论 苦碟子注射液能较强的诱导大鼠肝药酶CYP2E1活性,而对CYP3A4活性影响不大,但与阳性药(苯巴比妥)的诱导强度相比较弱.     

瓜蒌皮注射液对人肝微粒体CYP450酶4种亚型的影响

目的研究瓜蒌皮注射液对人肝细胞色素P450(CYP450)酶4种亚型CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9和CYP2D6的体外抑制作用。方法瓜蒌皮注射液8个不同浓度(2%、1%、0.2%、0.05%、0.01%、0.005%、0.002%、0.000 5%)的工作液分别与4种CYP450酶亚型的探针底物混合,即非那西丁(CYP1A2)、安非他酮(CYP2B6)、双氯芬酸(CYP2C9)、右美沙芬(CYP2D6),用维拉帕米作为内标,在人肝微粒体中孵育,采用高效液相色谱法检测4种探针底物的剩余浓度,计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果瓜蒌皮注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9和CYP2D6的IC_(50)值均大于临床常用量。结论正常用量下,瓜蒌皮注射液对人CYP450酶的4亚型无明显影响。     

醒脑静注射液对人肝微粒体P450酶5种亚型体外抑制作用

目的研究醒脑静注射液对人肝微粒体P450酶5种亚型的体外抑制作用,以预测其潜在的代谢性药物相互作用。方法人肝微粒体、醒脑静注射液与5种探针底物奥美拉唑、右美沙芬、睾酮、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲在烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸还原酶的作用下,于37℃水浴下共同孵育。通过液相色谱-质谱分析方法,测定探针底物的代谢产物生成量,评价醒脑静注射液对这5种酶亚型活性的影响。结果在人肝微粒体体外孵育反应体系中,醒脑静注射液对CYP2C19有较强的抑制作用,其IC_(50)值为0.36%;而对CYP2D6、CYP3A4、CYP2E1和CYP2C9的抑制作用相对较弱,其IC_(50)值为分别为7.37%、3.62%、2.50%和7.03%。结论醒脑静注射液可抑制CYP2C19酶亚型的活性,在临床使用过程中应注意潜在的代谢性药物相互作用。     

血塞通注射液对鼠肝CYP3A体外抑制作用研究

目的：研究血塞通注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性的体外抑制作用。方法：在大鼠肝微粒体体外孵育体系中加入CYP3A酶的底物睾酮和不同体积的血塞通注射液,用高效液相色谱法测定睾酮的羟化代谢产物6β-羟基睾酮的生成量反映CYP3A酶的活性。酮康唑为阳性对照药。结果：在大鼠肝微粒体体外孵育体系中,血塞通注射液对CYP3A酶的IC50和Ki值分别为血塞通注射液原液的0．87％和0．43％。结论：血塞通注射液在体外对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性有抑制作用,符合混合型抑制模型。     

UPLC-MS/MS测定地西泮对大鼠CYP450酶活力的影响

目的 基于UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中的5种探针药物（安非他酮、美托洛尔、咪达唑仑、非那西丁和甲苯磺丁脲）,5种探针药物分别是细胞色素P450同工酶CYP2B6,CYP2D6,CYP3A4,CYP1A2和CYP2C9底物,评价地西泮对大鼠细胞色素P450酶活性影响。方法 将大鼠随机分成地西泮低剂量组（1 mg·kg^-1）、高剂量组（5 mg·kg^-1）和对照组。地西泮低剂量组、高剂量组腹腔注射地西泮10 d,对照组腹腔注射生理盐水10 d。5种探针药物通过灌胃给予大鼠,用UPLC-MS/MS测定血浆药物浓度。结果 与对照组相比,地西泮组安非他酮、美托洛尔和非那西丁药动学参数均有统计差异。地西泮组安非他酮、非那西丁的AUC比对照组高,但美托洛尔AUC比对照组低。结论 地西泮可能会抑制大鼠CYP2B6酶活性,抑制CYP1A2酶活性,诱导大鼠CYP2D6酶活性,而对大鼠CYP3A4、CYP2C9酶活性无影响。     

双环醇在大鼠和人肝微粒体的代谢

目的研究参与双环醇代谢的主要药物代谢酶及代谢动力学参数，分离鉴定双环醇代谢产物。方法双环醇与大鼠和人肝微粒体进行温孵，以高效液相色谱、质谱、核磁共振技术检测并分离鉴定双环醇及其代谢产物。结果双环醇在地塞米松诱导大鼠肝微粒体中的代谢速率显著高于正常大鼠肝微粒体，酮康唑可显著抑制双环醇的代谢。双环醇主要代谢产物为:4-羟基-4′-甲氧基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯和4-甲氧基-4′-羟基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯。结论双环醇在大鼠和人肝微粒体的主要代谢产物为4-羟基-4′-甲氧基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯和4-甲氧基-4′-羟基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯，细胞色素P450 3A主要参与双环醇代谢。     

无梗五加果实提取物对大鼠CYP450活性的影响

目的研究无梗五加果实提取物对大鼠CYP450亚型CYP1A2、CYP2C19、CYP2E1、CYP3A4活性的影响。方法以咖啡因、奥美拉唑、氯唑沙宗和咪达唑仑作为CYP1A2、CYP2C19、CYP2E1和CYP3A4特异性探针药物,配制cocktail混合探针溶液,建立同时测定4种探针药物血药浓度的高效液相色谱法。将SD大鼠随机分为无梗五加果实70%乙醇提取物组、水提取物组和对照组,每天分别ig无梗五加果实70%乙醇提取物溶液、水提取物溶液和溶剂10 mL/kg,连续给药1周,于第8天ip混合探针药物10 mL/kg,分别在给药0、0.083、0.25、0.417、0.583、0.833、1、2、3、5、8、11、12 h于大鼠眼眶静脉丛采血,采用HPLC法对血浆样品进行分析,对给药组和对照组探针药物的药动学参数生物半衰期(t_(1/2))进行比较。结果与对照组比较,无梗五加果实水提取物组和70%乙醇提取物组咖啡因、咪达唑仑的t_(1/2)显著降低,奥美拉唑、氯唑沙宗的t_(1/2)显著增加,差异均具有统计学意义(P0.05、0.01)。结论无梗五加果实70%乙醇提取物和水提取物对大鼠的CYP2C19、CYP2E1有抑制作用,对大鼠的CYP1A2、CYP3A4有诱导作用。     

Inhibitory effects of limonin on six human cytochrome P450 enzymes and P-glycoprotein in vitro

Among the various possible causes for drug interactions, pharmacokinetic factors such as inhibition of drug-metabolizing enzymes and transporters, especially cytochrome P450 (CYP) isoenzymes and P-glycoprotein (P-gp), are regarded as the most frequent and clinically important. Limonin is a widely used dietary supplement and one of the most prevalent citrus limonoids, which are known to have inhibitory effects on CYPs and P-gp. In this study, the in vitro inhibitory effects of limonin on the major human CYP isoenzymes (CYP1A2, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, and CYP3A4) activities in human liver microsomes were examined using liquid chromatography–tandem mass spectrometry. The inhibitory effects of limonin on P-gp activity in a human metastatic malignant melanoma cell line WM-266-4 were examined using a calcein-AM fluorometry screening assay. It demonstrates that limonin has negligible inhibitory effects on human CYP1A2, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, and P-gp. However, potent inhibition of CYP3A4 by limonin is observed with IC₅₀ values of 6.20 μM (CYP3A4/testosterone) and 19.10 μM (CYP3A4/midazolam). This finding has important implications with regard to food–drug interactions between limonin and several narrow therapeutic index drugs that are metabolized by CYP3A4.     

Effects of two novel sugar drug candidates on CYP450 isoforms in different sexed Chinese human liver microsome in vitro

The sex-based differences between the effects of two novel sugar-based drug candidates,a sulfated polymannuroguluronate(SPMG-911)and an acidic oligosaccharide sugar chain compound(AOSC-971),on the enzymes CYP 1A2,CYP2E1 and CYP3A4 of Chinese human liver microsome were investigated.The results showed that neither SPMG-911 nor AOSC-971 have any effect on CYP3A4,AOSC-971 induced the CYP 2E1 in men but have no effect on CYP1A2,SPMG-911 inhibit the CYP1A2 also in men but have no effect on CYP2E1.The results are useful for their safety evaluation,as well as for the prediction of inter-drug interactions associated with the two drugs.     

丝裂霉素C在体外和体内对大鼠肝脏CYP2D1/2,CYP2C11和CYP1A2活性的影响

目的研究丝裂霉素C(MMC)在体外和体内对大鼠肝脏CYP2D1/2,CYP2C11和CYP1A2活性的影响。方法用诱导剂和抑制剂分别在体内和体外调节大鼠肝脏P450同工酶活性，并用HPLC检测3种同工酶各自底物的特定代谢产物，以计算同工酶活性。结果在体外, MMC可以使地塞米松诱导的大鼠肝脏微粒体CYP2D1/2,CYP2C11和CYP1A2活性分别抑制(19±6)%(P<0.05),(85±10)％(P<0.01)和(36±6)%(P<0.05)，并使β-萘黄酮诱导的CYP1A2活性降低(58±6)%(P<0.01)。在体内，以20% LD₅₀的剂量连续3 d或6 d腹腔注射MMC 对大鼠肝脏CYP2D1/2，CYP2C11和CYP1A2活性的影响无统计学差异。结论在体外MMC可以抑制大鼠肝微粒体CYP2D1/2，CYP2C11和CYP1A2的活性，但在体内对这3种细胞色素P450同工酶活性的影响无统计学差异。     

注射用益气复脉(冻干)对人肝微粒体CYP450各亚型酶活性的影响

目的 研究注射用益气复脉（冻干,YQFM）对人肝微粒体的细胞色素P450亚型酶CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4活性的影响。方法 差速离心法制备人肝微粒体,体外人肝微粒体、YQFM （6.5、32.5、65.0、325.0、650.0、3 250.0和6 500.0 μg/mL）和7种底物探针在还原型辅酶β-NADPH的作用下,37℃水浴孵育30 min,同时设置阴性对照（空白缓冲液）和阳性对照（各亚酶的选择性抑制剂）组;应用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法测定探针底物的代谢产物生成量,酶活性以相对阴性对照的百分比表示。结果 与阴性对照组比较,32.5、65.0、325.0、650.0、3 250.0浓度的YQFM对CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4活性均不发挥抑制作用;半数抑制浓度（IC₅₀）均大于6 500 μg/mL。结论 YQFM在临床使用过程中发生药物相互作用的概率较小。     

UHPLC-MS/MS同时检测大鼠血浆中5种CYP450探针药物

目的 采用UHPLC-MS/MS同时检测大鼠血浆中非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、美托洛尔、咪达唑仑的血药浓度。方法 血浆样品经乙腈沉淀,采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C₁₈色谱柱（2.1 mm×50 mm,1.8 μm）;流动相为乙腈-含0.1%甲酸的水,梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^-1。检测采用电喷雾离子源,多反应监测。非那西丁：[M+H]⁺,m/z 180.1→109.9;甲苯磺丁脲：[M+H]⁺,m/z 271.1→91.0;奥美拉唑：[M+H]⁺,m/z 346.1→135.9;美托洛尔：[M+H]⁺,m/z 268.2→115.0;咪达唑仑：[M+H]⁺,m/z 326.1→290.8;内标卡马西平：[M+H]⁺,m/z 237.1→194.0。6只♂ SD大鼠,单剂量口服灌胃10 mg·kg^-1非那西丁,1 mg·kg^-1甲苯磺丁脲,10 mg·kg^-1奥美拉唑,10 mg·kg^-1美托洛尔和10 mg·kg^-1咪达唑仑,分别在给药后多点尾静脉采血。用DAS计算药动学参数。结果 血浆中非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、美托洛尔和咪达唑仑在各自浓度范围内线性关系良好。日内及日间RSD均<15%,提取回收率>75%,稳定性考察结果良好。非那西丁的AUC_0-t为（5 868.30±2 062.87）ng·mL^-1·h;甲苯磺丁脲的AUC_0-t为（58 056.34±15 569.16）ng·mL^-1·h;奥美拉唑的AUC_0-t为（14 181.67±4 085.40）ng·mL^-1·h;美托洛尔的AUC_0-t为（1 123.67±180.469）ng·mL^-1·h;咪达唑仑的AUC_0-t为（946.91±322.03）ng·mL^-1·h。结论 该方法灵敏度高、操作方便、结果准确,可作为CYP450酶活性及相关研究的测定方法。