热休克预处理抑制过氧化氢所致C2C12肌原细胞释放天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物及细胞凋亡

为探讨热休克预处理对过氧化氢所致C2C12肌原细胞凋亡和第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体释放的影响，采用0.5mmol／L过氧化氢作用于C2C12肌原细胞。Hoechst33258荧光染色，观察细胞形态学改变并计算凋亡百分率，抽提DNA作琼脂糖电泳，以确定细胞凋亡情况。采用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹观察天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9的活化情况。采用免疫荧光及细胞成分分离后蛋白质印迹检测第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体的释放。结果发现，过氧化氢处理1～2h，第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物逐渐从线粒体释放入胞浆；处理4h天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9活性升高，12h达高峰；处理24h细胞明显出现凋亡，凋亡百分率明显升高。热休克预处理可诱导C2C12肌原细胞中热休克蛋白90，热休克蛋白70及αβ-晶状体蛋白的表达增高：抑制第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物释放、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9的活化及细胞凋亡的发生。结果提示，线粒体信号通路在过氧化氢所致的心肌细胞凋亡中发挥重要作用；热休克预处理通过抑制上述通路而减轻过氧化氢所致的细胞凋亡，其机制与其诱导热休克蛋白表达、阻断第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体向胞浆释放、从而抑制天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9的活化有关。     

过氧化氢通过线粒体通路和死亡受体通路诱导心肌细胞凋亡

为探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡的分子机制，采用0．5mmol／L过氧化氢作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞。末端标记发现过氧化氢明显诱导心肌细胞凋亡；Caspase活性定量检测及Western-blot发现Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9同时被激活；而Western-blot及间接免疫荧光发现细胞色素C从线粒体释放入胞浆。以上结果提示，氧化应激通过同时激活线粒体通路与死亡受体通路导致心肌细胞凋亡，从而为临床防治与细胞凋亡相关的心血管疾病提供了新的信息。     

热休克蛋白27抗细胞凋亡的分子机制

热休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)是存在于细胞内的一种主要分子伴侣，在生理和应激条件下均能表达。它们是在结构上拥有高度保守晶体蛋白序列的一组多肽，按分子量可以分为HSP100、HSP90、HsP70、HSP60和分子量为20000～30000的小分子量HSPs(small HSPs，sHSPs)、泛肽等几个亚家族。HSP25／27(啮齿动物25000，     

热休克蛋白70对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的　探讨热休克蛋白 70 (HSP 70 )对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法　体外培养大鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生HSP 70 ,用过氧化氢 (H2 O2 )造成心肌细胞损伤。采用免疫组化 ,DNALadder,流式细胞仪 ,细胞色素C氧化酶比活力的测定 ,电镜观察等作为检测指标。结果　温度诱导后HSP 70在胞浆中大量表达 ,损伤组与保护组凋亡率、细胞色素C氧化酶比活力差异有显著意义 (P <0 .0 1)电镜观察损伤组细胞的细胞膜、细胞器损伤明显 ,并出现凋亡小体。结论　HSP 70可延迟细胞凋亡 ,对心肌细胞具有保护作用     

热休克蛋白70对过氧化氢所致乳鼠心肌细胞核仁损伤的保护作用

为探讨氧化应激时体外培养的新生Wistar大鼠心肌细胞核仁损伤以及热休克蛋白70对损伤核仁的保护作用。用0.5mmol/L过氧化氢处理原代培养的心肌细胞0,30,60min，采用甲苯胺兰染色核仁及电镜技术观察核仁结构的改变；并通过热休克预处理及反义技术诱导或阻断热休克蛋白70的表达，观察其对核仁损伤的保护作用。结果发现，光镜下过氧化氢损伤组心肌细胞核仁染色颗粒数增多，电镜下核仁结构松散，核仁组份分离。热休克预处理导致心肌细胞中热休克蛋白70表达明显增加，并使过氧化氢缺致心肌细胞核仁损伤明显减轻，免疫组织化学显示过氧化氢可引起热休克蛋白70从胞浆到胞核，再到核仁的移位，热休克蛋白70反义寡核苷酸很大程度上能阻断热休克预处理对心肌细胞核仁损伤的保护作用。结果提示，过氧化氢可导致体外培养的新生大鼠心肌细胞核仁结构损伤，热休克蛋白70高表达及其向核仁的移位对上述损伤具有明显保护作用。     

热休克蛋白与心肌保护研究进展

热休克蛋白与心肌保护研究进展上海市东方医院心胸外科陈国涵综述上海第二医科大学附属仁济医院朱洪生审校现代医学认为除了早期恢复冠脉血流外，其它方法几乎不能挽救由于心肌缺血造成的心肌损害［１］。八十年代始应用冠脉内溶栓、冠脉成形术或冠脉搭桥术，使缺血区心肌...     

热诱导延迟损伤大鼠心肌细胞凋亡机理的探讨

目的探讨热诱导延迟过氧化氢(H2O2)造成大鼠心肌细胞凋亡机理。方法体外培养大鼠乳鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生热休克蛋白70(HSP70)，用H2O2造成心肌细胞损伤。采用Western Blottmg、流式细胞仪、Bcl-2原位杂交、免疫组化检测Caspase-3等作为检测指标，观察心肌细胞损伤，以及HSP70对心肌细胞的保护作用。结果温度诱导后HSP70在胞浆中大量表达，保护组凋亡率显著低于损伤组，Bcl-2和Caspase-3在损伤组大量表达。结论HSP70可延迟细胞凋亡，对心肌细胞具有保护作用。     

热休克蛋白70抑制c-Jun氨基末端激酶通路对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的观察热休克蛋白70(HSP70)对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法培养大鼠心肌细胞,随机分为5组:对照组、H_2O_2组、热休克组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂组、热休克 JNK抑制剂组。生化法测定各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)活性和丙二醛(MDA)水平,流式细胞仪分析心肌细胞凋亡,噻唑蓝(MTr)法测定心肌细胞相对活力,Western blot法检测JNK的表达。结果H_2O_2组LDH、MDA水平和CK活性明显高于其他组(P<0.01),而SOD活性则明显低于其他组(P<0.01)。细胞凋亡率H_2O_2组明显高于其他各组(P<0.01)。细胞活力H_2O_2组明显低于对照组(P<0.01),而热休克组、JNK抑制剂组、热休克 JNK抑制剂组的细胞活力明显高于H_2O_2组(P<0.01)。JNK只在H_2O_2组有表达。结论HSP70对H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制可能是HSP70大量表达后抑制了JNK信号的转导。     

热休克蛋白20的心血管保护作用

小分子量热休克蛋白是热休克蛋白家族中的一个亚组,不仅仅在机体应激状态,而且在生理状态下也都发挥着重要的生物学作用。热休克蛋白作为其中的一员,在抑制血小板聚集、舒张血管平滑肌、抗细胞凋亡等方面都发挥着重要的作用,从多方面对心血管系统提供保护作用。     

脑缺血再灌注后热休克蛋白70的表达及与细胞凋亡关系的实验研究

目的　研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后热休克蛋白70(Hsp70)的表达及与细胞凋亡的关系。方法　用线栓法制备MCAO模型,用免疫组化法测定Hsp70阳性细胞及用TUNEL法测定凋亡细胞。结果　缺血2h即有Hsp70阳性细胞,6～24h明显,3d消失。TUNEL阳性细胞于再灌注后2h出现,24～48h达高峰,72h减弱。结论　脑缺血再灌注后早期即有Hsp70表达及细胞凋亡发生。     

热休克蛋白70对氧化应激所致核仁素裂解的影响

为探讨热休克蛋白70对氧化应激(0．5mmol／L过氧化氢)所致核仁素裂解的影响及其机制，采用免疫印迹技术检测氧化应激诱导核仁素的裂解；通过热休克反应和构建热休克蛋白70转基因细胞观察热休克反应与热休克蛋白70对核仁素裂解的影响，同时采用免疫共沉淀技术检测热休克蛋白70与核仁素之间的相互作用。结果发现，0．5mmol／L过氧化氢可导致多种细胞的核仁素发生裂解(有80kDa裂解片断出现)，而且最早出现裂解片段的时间都在过氧化氢处理30min到lh左右；热休克预处理及转热休克蛋白70后均引起热休克蛋白70的表达明显增加，同时显著抑制抑制氧化应激所致核仁素裂解片段的出现，免疫共沉淀结果显示在氧化应激时热休克蛋白70与核仁素直接结合，形成复合物。以上结果提示，热休克反应与热休克蛋白70可以显著抑制氧化应激所致核仁素的裂解，其机理与氧化应激时热休克蛋白70与核仁素直接结合有关。     

血管内皮生长因子对过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡的影响及其机制

目的研究血管内皮生长因子对过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡的影响,同时检测凋亡相关基因Bcl-2 mRNA与Fas mRNA表达的变化。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,随机分成对照组、过氧化氢组和过氧化氢 血管内皮生长因子组,12 h后,采用原位末端标记法和流式细胞仪分别观察各组细胞的凋亡数和凋亡率,通过逆转录聚合酶链反应观察各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA与Fas mRNA表达的变化。结果过氧化氢组凋亡细胞数(27.83±2.14)明显高于对照组(2.50±1.05)(P<0.01)和过氧化氢 血管内皮生长因子组(13.00±2.10)(P<0.01)。过氧化氢组细胞凋亡率(14.17%±0.45%)明显高于对照组(1.55%±0.87%)(P<0.01)和过氧化氢 血管内皮生长因子组(5.69%±0.38%)(P<0.01)。与过氧化氢组比较,过氧化氢 血管内皮生长因子组Fas mRNA表达明显减少(40.67%±2.16%比94.50%±3.45%,P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达明显增加(60.33%±1.75%比23.17%±1.17%,P<0.01)。结论血管内皮生长因子能拮抗过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2 mRNA表达与下调Fas mRNA表达有关。