噬菌体生物扩增法检测痰中结核分枝杆菌的价值

目的评价噬菌体生物扩增法快速检测痰中结核分枝杆菌的应用价值。方法应用噬菌体生物扩增法快速检测27例痰标本,通过与改良罗氏培养法进行比较,对应用噬菌体生物扩增法检测痰中结核分枝杆菌进行初步的分析和评价。结果对于27例痰标本,噬菌体生物扩增法检测出阳性12例(44.44%),改良罗氏培养法检出阳性9例(33.33%),两种方法均阳性8例(29.63%);噬菌体生物扩增法检测痰中结核分枝杆菌与改良罗氏培养法无显著性差异(2=0.80,p>0.05)。结论噬菌体生物扩增法可简便、快速地检测痰中的结核分枝杆菌,具有很好的临床应用价值。     

噬菌体生物扩增法检测肺结核患者痰标本的临床应用价值

目的探讨噬菌体生物扩增法对肺结核临床诊断的应用价值。方法对298例肺结核患者的痰标本,20例非结核性其他肺部疾病患者痰标本进行噬菌体生物扩增法检测,同份标本同时进行涂片抗酸染色、分枝杆菌罗氏培养。结果 298例痰标本有167例噬菌体生物扩增法检测结果阳性,阳性率56.0%;有78例涂片抗酸染色阳性,阳性率26.2%;有129例罗氏培养阳性,阳性率43.3%。结论噬菌体生物扩增法检测肺结核痰标本中结核分枝杆菌只需2d时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,可作为诊断肺结核的一种检测方法。     

噬菌体生物扩增法检测痰标本中结核分枝杆菌在涂阴肺结核诊断中的应用价值

目的对噬菌体生物扩增法检测痰标本中的结核分枝杆菌在涂阴肺结核诊断中的应用价值进行评价分析,为今后的临床及检验工作提供可靠的理论依据。方法抽取在2009年1月²013年12月间我院收治的临床确诊涂阴肺结核患者200例,对其痰液标本分别展开噬菌体生物扩增法和罗氏培养法进行结核分枝杆菌检测,并对检测结果进行对比分析。结果经对比发现,噬菌体生物扩增法对结核分枝杆菌的检出率较罗氏培养法检出率显著升高(p<0.05)。结论采取噬菌体生物扩增法检测痰标本中的结核分枝杆菌的临床价值显著,可使肺结核诊断率得到显著提高,降低误诊和漏诊发生率。     

用重组温敏分枝杆菌噬菌体快速检测结核分枝杆菌

〔目的〕 利用基因工程技术构建的可表达荧光素酶的结构分枝杆菌噬菌体ｐｈａｇｅ８８，通过检测其发光特性以建立一种特异性强，灵敏度高的致病性分支杆菌的检测及药敏试验方法。〔方法〕 采用生物发光方法检测对结核分枝杆菌特异的可表达荧光素酶的分枝杆菌噬菌体对不同细菌的发光反应和药敏试验结果，并与罗氏培养基方法进行比较，探讨噬菌体生物发光检测方法的灵敏度和行异性。〔结果〕 ｐｈａｇｅ８８特异地对各种分枝杆菌均有发光，对非分枝杆菌发光值很低，两者差异有显著性；不同的分枝杆菌发光值有差异：卡介苗的发光值最高，结核杆菌的发光值最低；在含抗结核药物的培养基中，耐药结核杆菌的发光强度比非耐药结核杆菌强，其强度有明显差异。〔结论〕 可表达荧光素酶的重组温敏噬菌体可特异地检测结核杆菌活力和耐药性，灵敏度高，在７２ｈ内得到结果，是一种快速     

噬菌体生物扩增法与3D培养检测结核分枝杆菌的对比分析

目的探讨噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法对117份肺结核患者痰和体液标本进行噬菌体生物扩增法检测并与3D培养进行对比分析。结果痰噬菌体生物扩增法阳性率为43.9%,3D培养为27.1%;体液噬菌体生物扩增法阳性率为80.0%,3D培养为0。结论噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌明显优于3D培养。     

噬菌体生物扩增法与常规方法在结核分枝杆菌检测中的比较

目的评价噬菌体生物扩增技术在结核分枝杆菌快速检测中的临床应用价值,并与其他两种常规方法进行比较。方法应用噬菌体生物扩增法（PhaB法）、Bactec 960培养法、涂片法同时对135份临床确诊为结核病（包括肺结核、结核性胸膜炎、结核性脑膜炎）的患者的标本（痰、胸腔积液、肺泡灌洗液、脑脊液）以及排除结核病的患者（21例慢性支气管炎、20例支气管扩张病、18例肺癌、8例肺炎）的痰液共计67份进行检测。结果 135份标本应用噬菌体生物扩增法、Bactec 960培养法与涂片法的阳性率为48.2%、44.4%、28.2%。噬菌体生物扩增法的阳性检出率较高于涂片法,差异有统计学意义,阳性符合率为58.5%（38/65）,阴性符合率为95.7%（67/70）,总体符合率为77.8%（105/135）。噬菌体生物扩增法与Bactec 960培养法比较差异有统计学意义,阳性符合率为78.5%（51/65）,阴性符合率为72.9%（51/70）,总体符合率为75.6%（102/135）。在涂片阴性、Bactec 960培养法检测均为阴性的75例标本中,用噬菌体生物扩增法检测出11例阳性,其检出率为14.7%。67份排除结核病的痰标本应用三种方法的阳性率均为0%。结论噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌在诊断结核病中有较好的灵敏度和特异度,是辅助诊断和鉴别诊断结核病的有效手段。     

用Phage88快速检测结核分枝杆菌

目的 建立一种特异性强、灵敏度高的致病性分枝杆菌的检测及药敏试验方法。方法 应用可表达荧光素酶的结核分枝杆菌噬菌体Ｐｈａｇｅ８８,采用生物发光方法对没细菌的发光反应和药敏试验进行检测。结果 Ｐｈａｇｅ８８特异地对各种分枝杆菌发光,对非分枝杆菌的发光值最低;在含抗结核药物的培养基中,耐工 菌的发光强度比非耐药结核杆菌强,其强度有明显差异。结论 用Ｐｈａｇｅ８８噬菌体检测结核分枝杆菌是一 种快速、敏感     

噬菌体裂解法在肺结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨噬菌体裂解法在基层结核病防治机构实验中的应用价值。方法应用噬菌体裂解法、改良罗氏培养法及直接涂片法同时检测250份临床上确诊为肺结核初诊患者的痰标本。结果①250份痰标本用噬菌体裂解法、改良罗氏培养法及直接涂片法检出的阳性率分别为50.1%、43.2%、27.6%。②噬菌体裂解法的阳性检出率远高于涂片法的阳性检出率,两者的差异有统计学意义（χ2=28.23,P〈0.01）;噬菌体裂解法的阳性检出率高于改良罗氏培养法的阳性检出率,但两者的差异无统计学意义（χ2=2.90,P〉0.05）。结论噬菌体裂解法能快速、简便地检测结核分枝杆菌,且检出率较高,可作为结核病诊断的重要方法,且无需特殊设备,在普通微生物实验室中就能开展,适合在基层结核病防治机构实验室中推广应用。     

环介导等温扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌的研究

[目的]寻找1种快速的，且敏感度高，特异性强的结核分枝杆菌的检测方法。[方法]环介导等温扩增基因检测（Loop-mediated isothermal amplification LAMP）是一种便捷、灵敏度高而又特异性强的核酸基因扩增检测技术。木课题组根据结核分枝杆菌gyrB特征性序列设计3对特征性引物对痰液中和培养基中的结核分枝杆菌进行检测。其中1对环状引物结合于特征性序列中环状结构部分，可极大地加快LAMP反应速度，且不干扰内引物在LAMP反应中作用。（结果]实验结果表明：使用环状引物的LAMP反应可在0.5h内完成，总共分析时削不超过1h。LAMP检测技术的灵敏度比经典PCR技术高100倍左右，LAMP检测技术具有与实时PCR（Real-time PCR）技术相同的特异度。另外，由于LAMP检测技术是在恒温的情况下进行，不需要特别昂贵的仪器设备，检测方法简单，结果判定直接。（结论]该方法的特点和优势可以使之在基层实验室及现场监测方面广泛使用，在快速检测方面具有一定的开发潜力。     

线性探针检测技术对痰标本中耐药结核分枝杆菌快速检测的应用评价

目的 评价线性探针检测技术(LPAs)直接从痰标本中检测结核分枝杆菌复合群及其对耐多药结核病的快速检测。方法 连续收取193例临床涂片抗酸染色阳性的痰标本,直接用LPAs法从痰标本中进行结核分枝杆菌复合群及其对利福平和异烟肼耐药性的检测,结果与MGIT 960系统药物敏感性试验以及利福平、异烟肼耐药相关基因rpoB、katG、inhA和ahpC的基因测序结果进行比较,评价线性探针检测技术从痰标本中检测耐药结核分枝杆菌的灵敏度、特异度和符合率。统计学分析采用kappa检验。结果 LPAs法对涂阳痰标本结核分枝杆菌复合群检测的灵敏度为100.0%,耐利福平、耐异烟肼和耐多药结核分枝杆菌复合群检测的灵敏度分别为96.0%(48/50)、92.8%(64/69)和90.0%(45/50),特异度分别为99.3%(142/143)、100.0%(124/124)和99.3%(142/143),符合率分别为98.4%(190/193)、97.4%(188/193)和96.9%(187/193)。结论 LPAs法能够直接从涂阳痰标本中检测耐多药结核分枝杆菌,对耐利福平和耐异烟肼菌株具有较高的灵敏度和特异度,与MGIT 960系统药物敏感性试验结果的一致性较好,能够明显缩短从样本接收到得到药物敏感性试验结果的报告周期,为临床准确、快速地诊断耐多药结核病提供可靠的实验室依据,有利于耐药结核病的早期诊断。     

2种核酸扩增荧光方法用于临床痰标本的结核分枝杆菌检测

目的 评价核酸恒温扩增实时荧光法与荧光定量PCR法检测临床痰标本结核分枝杆菌的效果.方法 收集疑似结核病患者的痰标本,分别进行痰标本染色显微镜检查、分离培养菌株鉴定、核酸恒温扩增实时荧光法及荧光定量PCR检测,以培养为金标准获得2种方法的灵敏度和特异性,并比较2种方法的检测效能.结果 收集322例疑似结核病患者样本,经...     

交叉引物扩增技术检测痰样本中结核分枝杆菌的应用价值

目的采用ROC曲线分析法评估交叉引物扩增技术(CPA)直接检测临床痰样本结核分枝杆菌的检测效能,为临床应用提供参考依据。方法选取肺结核患者225例和非肺结核患者82例,采用CPA进行检测,并同时使用涂片抗酸染色、罗氏培养法、荧光定量PCR技术(FQ-PCR)三种最常用的实验室诊断方法作为对照。根据每种方法对样本检测结果的灵敏度和特异度,以受试者工作曲线(ROC)进行分析比较。结果去除非结核分枝杆菌的26个样本,以临床诊断为金标准,涂片抗酸染色、罗氏培养法、FQPCR技术和CPA的灵敏度分别为46.73%(93/199),63.32%(126/199),69.85%(139/199),70.35%(140/199),假阳性率分别为0%(0/82),0%(0/82),1.22%(1/82),1.22%(1/82)。ROC曲线下的面积分别为0.729、0.817、0.841、0.843,均P0.01。结论 ROC曲线分析结果显示,交叉引物扩增技术诊断结核病具有较好的准确性,该方法可作为结核病的实验室诊断方法。     

噬菌体生物扩增法检测结核杆菌在糖尿病合并结核感染快速诊断中的应用

[目的]探讨噬菌体生物扩增法检测结核杆菌在糖尿病合并结核感染快速诊断中的应用价值。[方法]收集本院结核病区及门诊糖尿病患者的痰、支气管镜镜抽取液标本共89份,应用噬菌体生物扩增法检测结核分支杆菌,同时作抗酸染色、并用VersaTREKTM细菌培养仪做分支杆菌培养。噬菌体生物扩增法和/或培养阳性的菌株32株做分支杆菌菌种鉴定。[结果]噬菌体生物扩增法检测的阳性率31.4%(28/89)显著高于涂片法19.1%(17/89)(P﹤0.01),与VersaTREKTM培养法阳性率28.1%(25/89)相比,差异无统计学意义(P﹥0.05)。21株VersaTREKTM培养法与噬菌体生物扩增法同时阳性的菌株和7株噬菌体生物扩增法阳性菌株均鉴定为结核分支杆菌;4株VersaTREKTM培养法阳性菌株鉴定为非结核分支杆菌。[结论]噬菌体生物扩增法检测结核分支杆菌快速、特异、敏感,在糖尿病合并结核感染的快速诊断中有重要价值。     

以多表位融合抗原检测结核分枝杆菌抗体、TB-SA抗体检测和噬菌体裂解法快速检测在结核病诊断中应用价值研究

目的:评价以融合抗原检测结核分枝杆菌抗体、TB-SA抗体检测和噬菌体裂解法快速检测在结核病诊断中应用价值。方法:选择结核组病例134例与非结核组265例按说明书方法进行检测。结果:噬菌体裂解法灵敏度72.39%,特异度91.7%;TB-SA抗体灵敏度75.37%,特异度77.7%;融合抗原检测抗体灵敏度85.8%,特异度92.1%。结论:融合抗原检测抗体与噬菌体裂解法和TB-SA抗体试验相比敏感度更高,值得在各级医疗单位使用。     

硝酸盐还原试验快速检测分离株和痰标本结核分枝杆菌的耐药性

目的建立一种快速结核分枝杆菌耐药性试验方法。方法以绝对浓度法为“金标准”,对已知耐药浓度的耐药结核分枝杆菌菌株及敏感株采用硝酸盐还原试验检测其对利福平和异烟肼的耐药性。同时用抗酸染色阳性的痰标本经常规处理后进行硝酸盐还原试验。结果结核分枝杆菌分离株两种方法可比性好,与绝对浓度法比较,硝酸盐还原试验敏感性为96．5％以上,特异性100％;该方法比传统绝对浓度法平均提前3周有结果;硝酸盐还原法的平行试验表明,试验重复性好,符合率为100％。痰标本硝酸盐还原试验在第10-20天能有结果,与痰标本罗氏培养后的分离株的绝对浓度法比较,硝酸盐还原试验敏感性为66．7％以上,特异性100％。结论硝酸盐还原试验可作为快速结核分枝杆菌耐药性试验方法。     

免疫荧光法检测痰标本结核分枝杆菌的研究

目的探讨特异性免疫荧光法在痰标本结核分枝杆菌检查上应用的可行性。方法制备高效价结核分枝杆菌免疫血清和单克隆抗体,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记,痰标本涂片、固定,加荧光抗体结合,荧光显微镜下检查。结果60份临床疑似肺结核病人痰标本,用抗酸染色法、结核分枝杆菌免疫血清和单克隆抗体免疫荧光法三种方法检测,阳性率分别为:36.7%(22/60)、58.3%(35/60)和56.7%(34/60),其中,抗酸染色阳性22份标本,两种免疫荧光法检查均为阳性,吻合率100%。结论免疫荧光法检查痰标本结核分枝杆菌阳性率大大高于抗酸染色,进一步完善后可尝试用于痰标本的结核分枝杆菌检查。     

GenoType MTBDRplus VER 2.0试剂盒检测痰标本中结核分枝杆菌复合群的效果评价

目的评价GenoType? MTBDRplus VER 2.0试剂盒检测痰标本中结核分枝杆菌复合群(MTBC)的检测效能。方法对177例疑似肺结核患者的痰标本同时进行涂片,MGIT液体培养和GenoType? MTBDRplusVER 2.0检测。对培养阳性菌株进行菌种鉴定。使用SPSS 22.0统计软件对结果进行统计学分析,计数资料的一致性比较使用Kappa检验。K值≥0.75认为一致性很好。对MTBC检测的效能比较分析用敏感度、特异度进行效果评估。结果以MGIT液体培养结果为判断标准,GenoType? MTBDRplusVER 2.0检测痰标本中MTBC的敏感度为91.67%,特异度为95.58%,阳性预测值为91.67%,阴性预测值为95.58%,总符合率为94.22%。对两种方法进行一致性Kappa检验,K=0.872(P<0.001)。结论GenoType? MTBDRplus VER 2.0试剂盒检测痰标本中MTBC具有较高的敏感度和特异度,对于结核病的早期诊断有很好的应用价值。     

结核分枝杆菌异烟肼耐突变快速检测技术建立及应用

目的：初步建立KatG、inhA基因快速、特异、高效、简单筛查新技术,为结核病的预防、诊断和治疗提供可靠依据并探讨其理化性质。方法：利用NCBI数据库对KatG、inhA测序基因进行身份验证,针对野生型KatG、inhA基因序列设计引物,利用临床分离敏感结核菌株基因组DNA为模板进行PCR扩增并测序,将测序结果与标准菌株序列进行比对分析,利用ExpasY软件系统模拟预测其基因表达蛋白理化性质和功能。结果：KatG基因序列号为kp746928.1,inhA基因序列号为u02492.1,经鉴定临床分离菌均为结核分枝杆菌,与M.tb H37Rv标准株进行基因序列比较分析,没有发现新突变序列,KatG基因表达蛋白为201个氨基酸组成,分子量24418.7,inhA基因表达蛋白由136个氨基酸组成,分子量15456.5。结论：初步建立了结核分枝杆菌异烟肼耐突变快速检测方法,预测了相应基因的理化性质。     

rRNA扩增直接检测艾滋和结核共感染的结核分枝杆菌的初步研究

目的 建立一种快速、准确、简便的检测结核分枝杆菌的方法.方法 应用间接转录扩增技术,以结核分枝杆菌特异性rRNA为扩增目标,扩增片段被特异性DNA探针结合（杂交）,再经杂交保护分析法筛选,最后以化学发光仪检测被标记的rRNA.用该法检测62例临床标本.结果 62 例艾滋合并结核患者痰标本检出阳性9例.结论 rRNA扩增直接检测结核分枝杆菌方法作为结核病诊断的一项新的分子生物学检测方法,具有重要的临床应用价值.     

噬菌体展示技术筛选结核分枝杆菌PPE17蛋白的特异性结合肽

目的运用噬菌体展示技术,对结核分枝杆菌PPE17蛋白特异性结合肽进行了初步筛选。方法从结核分枝杆菌基因组中扩增PPE17基因,克隆到pET28a中,在大肠杆菌BL21中表达,Ni2+柱纯化,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定。将纯化的PPE17蛋白包被到ELISA板中,用噬菌体7肽库进行筛选,经4轮淘选后,随机选取噬菌斑进行测序,并用DNAMAN对阳性克隆所编码的多肽氨基酸序列进行分析比较。结果成功构建并表达了PPE17抗原,获得分子量约为37kD的可溶性蛋白。从第4轮的洗脱物中,随机挑选20个噬菌斑。测序结果可翻译成8种多肽分子,其中重复6次的多肽序列为LKWGHVY。结论通过噬菌体展示技术筛选到PPE17蛋白的特异性结合肽,有望成为鉴定该抗原的小分子诊断制剂。